BAB I

PENDAHULUAN

1.1 LATAR BELAKANG

Biofarmasetika adalah ilmu yang mempelajari hubungan sifat fisikokimia formulasi

obat terhadap bioavailabilitas obat. Bioavailabilitas menyatakan bahwa kecepatan dan jumlah

obat aktif yang mencapai sirkulasi sistemik. Oleh karena bioavailabilitas suatu obat

mempengaruhi gaya terapetik, aktivitas klinik, dan aktivitas toksik obat, maka mempelajari

biofarmasetika menjadi sangat penting. Biofarmasetika bertujuan untuk mengatur pengobatan

yang optimal pada kondisi klinik tertentu (Shargel, 1988).

Absorpsi sistematis suatu obat dari tempat ekstravaskular dipengaruhi oleh sifat-sifat

anatomi dan fisiologik tempat absorpsi serta sifat-sifat fisikokimia atau produk obat.

Biofarmasetika berusaha mengendalikan variabel-variabel tersebut melalui rancangan suatu

produk obat dengan tujuan terapik tertentu. Dengan memilih secara teliti rute pemberian obat

dan rancangan secara tepat produk obat, maka bioavailabilitas obat aktif dapat diubah dari

absorpsi yang sangat cepat dan lengkap menjadi lambat, kecepatan absorpsi yang diperlambat

atau bahkan sampai tidak terjadi absorpsi sama sekali. Sewaktu obat mengalami absorpsi

sistemik berbagai proses fisiologik normal yang berkaitan dengan distribusi dan eliminasi

biasanya tidak dipengaruhi oleh formulasi obat. Oleh karena faktor-faktor tersebut terlibat di

dalam bioavailabilitas obat, khususnya pada absorpsi dalam saluran cerna, maka kadar obat

sesudah pemakaian entral lebih bervariasi dibandingkan kadar obat sesudah memakai

parenteral (Shargel, 1988).

Studi bioavaibilitas dilakukan terhadap bahan obat aktif yang telah disetujui maupun

terhadap bahan obat dengan efek terapetik yang belum disetujui oleh FDA (Food Drug

Administration) untuk dipasarkan. Formula baru dari bahan obat aktif atau bahan terapetik

sebelum dipasarkan harus disetujui oleh FDA. FDA dalam menyetujui suatu obat untuk

dipasarkan harus yakin bahwa obat tersebut aman dan efektif sesuai label indikasi

penggunaan. Selain itu produk obat harus memenuhi seluruh standar yang digunakan dalam

identitas, kekuatan, kualitas, dan kemurnian. Untuk menyatakan bahwa standar tersebut telah

dipenuhi, FDA menghendaki studi bioavaibilitas dan bila perlu persyaratan bioekivalensi

untuk semua produk (Shargel, 1988).

Adanya perbedaan bioavaibilitas dari setiap sediaan yang sama yang ada dipasaran

inilah yang melatarbelakangi dilakukan percobaan evaluasi sediaan yang ada dipasaran.

Dalam hal ini yang diuji adalah sedian Lasix dan Furosemid (Syukri, 2002).

Istilah ketersediaan hayati zat aktif suatu obat timbul sejak adanya ketidaksetaraan

terapetik diantara sediaan bermerek dagang yang mengandung zat aktif yang sama dan dalam

bentuk sediaan yang sama, serta diberikan dengan dosis yang sama. Berbagai kejadian (zat

aktif menjadi tidak aktif atau menjadi toksik) dapat menyebabkan ketidaksetaraan tersebut.

Studi biofarmasetika menyatakan bahwa metode fabrikasi dan formulasi akan mempengaruhi

ketersediaan hayati suatu obat (Syukri, 2002).

Ketersediaan hayati merupakan kecepatan dan jumlah obat yang mencapai sistem

sirkulasi sistemik dan menunjukkan kinetik perbandingan zat aktif yang mencapai peredaran

darah terhadap jumlah obat yang diberikan. Ketersediaan hayati obat yang diformulasi

menjadi sediaan farmasi merupakan salah satu tujuan dalam merancang suatu bentuk sediaan

dan keefektifan obat tersebut. Pengkajian terhadap ketersediaan hayati ini tergantung pada

absorpsi obat ke dalam sirkulasi sistemik serta pengukuran dari obat yang terabsorpsi tersebut

(Syukri, 2002).

1.2 TUJUAN PERCOBAAN

Melakukan eksperimen untuk menyelidiki pengaruh rute pemberian obat (IV dan

peroral) sediaan sulfadiazin dan furosemid terhadap parameter farmakokinetika

menggunakan data konsentrasi obat dalam darah.

1.3 MANFAAT PENELITIAN

Dengan melakukan percobaan ini, praktikan dapat mengetahui rute-rute pemberian

obat, juga dapat mengetahui cara pengambilan sampel darah dari hewan percobaan, dan dapat

mengetahui konsentrasi obat serta ketersediaan hayatinya didalam darah.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Ketersediaan Hayati (Bioavailabilitas)

Efek terapi suatu obat biasanya baru terlihat sesudah zat aktifnya melalui sistem

pembuluh aorta lalu masuk ke ahti dan kembali masuk peredaran darah dan didistribusikan ke

seluruh jaringan badan. Ketersediaan hayati merupakan kecepatan dan jumlah obat yang

mencapai sistem sirkulasi sistemik dan menunjukkan kinetik perbandingan zat aktif yang

mencapai peredaran darah terhadap jumlah obat yang diberikan. Ketersediaan hayati obat

yang diformulasi menjadi sediaan farmasi merupakan salah satu tujuan dalam merancang

suatu bentuk sediaan dan keefektifan obat tersebut. Pengkajian terhadap ketersediaan hayati

ini tergantung pada absorpsi obat ke dalam sirkulasi sistemik serta pengukuran dari obat yang

terabsorpsi tersebut (Syukri, 2002).

Ketersediaan hayati suatu obat dapat diukur pada keadaan pasien yang bersangkutan

(secara in vivo) dengan menentukan kadar obat dalam plasma darah dan setelah mencapai

keseimbangan antara serum cairan tubuh (keadaan tunak). Ada korelasi yang baik antara

kadar obat dalam plasma dengan efek terapi. Sekarang telah dicoba untuk menetukan kadar

obat di dalam air liur. Penentuan tersebut ternyata lebih mudah dibandingkan dengan

penentuan obat dalam plasma. Di samping itu terdapat hubungan antara kadar obat dalam air

liur dan kadar obat dalam plasma. Sebagai contoh pada fenitoin terdapat perbandingan kira-

kira 1:10, bila contoh air liur diambil pagi hari sebelum menelan obat (Anief, 2000).

Ketersediaan farmasetik ditentukan secara invitro dengan mengukur kecepatan

disolusi zat aktif dalam waktu tertentu. Tidak ada korelasi positif antara pengukuran kadar

obat in vivo (dalam plasma) dengan pengukuran kadar obat secara in vitro. Pengertian

ketersediaan hayati lebih banyak digunakan daripada pengertian ketersediaan farmasetik

(Anief, 2000).

Ketersediaan hayati digunakan untuk memberi gambaran mengenai keadaan dan

kecepatan obat diabsorpsi dari bentuk sediaan dan digambarkan dengan kurva kadar waktu

setelah obat diminum dan berada pada jaringan biologik atau larutan seperti darah dan urin

(Anief, 2000).

Absorpsi sistemik suatu obat dari tempat ekstravaskular dipengaruhi oleh sifat-sifat

anatomik dan fisiologik tempat absorpsi serta sifat-sifat fisikokimia produk obat.

Biofarmasetika berusaha mengendalikan variabel-variabel tersebut melalui rancangan suatu

produk obat dengan tujuan terapetik tertentu. Dengan memilih secara teliti rute pemberian

obat dan rancangan secara tepat produk obat, maka bioavailabilitas obat aktif dapat diubah

dari absorpsi yang sangat cepat dan lengkap menjadi lambat, kecepatan absorpsi yang

diperlambat atau bahkan sampai tidak terjadi absorpsi sama sekali (Shargel, 1988).

Sewaktu obat mengalami absorpsi sistemik berbagai proses fisiologik normal yang

berkaitan dengan distribusi dan eliminasi biasanya tidak dipengaruhi oleh formulasi obat.

Oleh karena faktor-faktor tersebut terlibat di dalam bioavailabilitas obat, khususnya pada

absorpsi dalam saluran cerna, maka kadar obat sesudah pemakaian enteral dapat lebih

bervariasi dibandingkan kadar obat sesudah pemakaian parenteral (Shargel, 1988).

Banyak obat yang jika diberikan secara oral akan mengalami efek lintasan pertama

yang nyata, akibatnya ketersediaan hayati obat akan berkurang, jika dibandingkan secara

intra otot atau intra vena. Pada umumnya besarnya ketersediaan hayati suatu obat mengikuti

saluran pemberiannya yaitu oral – intra otot – intra vena (Shargel, 1988).

Suatu obat dapat diberikan dalam berbagai rute dan tetap menghasilkan aktivitas yang

ekivalen, tetapi lama dan mula kerja mungkin sangat berbeda karena perubahan

farmakokinetik yang disebabkan oleh rute pemberian. Sebelum suatu obat dibuat untuk suatu

rute pemberian tertentu adalah penting untuk mempertimbangkan perubahan fisiologik dan

fisikokimia yang disebabkan oleh perubahan bentuk sediaan (Shargel, 1988).

2.2 Ketersediaan Hayati Sulfadiazin

Sulfadiazin diberikan peroral diabsorpsi dan diekskresi secara cepat pada GIT.

Konsentrasi puncak dalam darah dicapai pada waktu 3-6 jam setelah pemberian single dose.

Jika diberikan oral dose sebanyak 3 gram, konsentrasi puncak dalam darah adalah 50 mg/ml.

50 % diikat dalam protein plasma pada konsentrasi 100 mg/ml dari plasma protein normal

(Goodman, 1958).

Konsentrasi terapeutik pada cairan serebrospinal pada 4 jam adalah 60 mg/kg. Pada

awalnya sulfadiazin diekskresikan secara cepat oleh ginjal dalam bentuk asetilat tapi pada

jam ke-2-3 menjadi lambat. Pada menit ke-30 diekskresikan sekitar 15-40 %. Bentuk asetilat

diekskresi lebih cepat daripada bebas (Goodman, 1958).

Data ketersediaan hayati sulfadiazin dalam sediaan oral adalah sebagai berikut:

Availabilitas : -100

Ekskresi melalui urine : 57 + 14 %

Ikatan dengan plasma : 54 + 4

Klirens : 0,55 + 0,17 ml/min.kg

Volume distribusi : 0,29 + 0,04 L/kg

T1/2 : 9,9 + 4,3 jam (Goodman, 1958).

2.3 Ketersediaan Hayati Furosemid

Mulai kerjanya pesat, oral dalam 0,5-1 jam dan bertahan 4-6 jam, intravena dalam

beberapa menit dan 2,5 jam lamanya. Resorpsinya dari usus hanya lebih kurang 50%, PP-nya

ca 97%, plasma t-1/2 nya 30-60 menit; ekskresinya melalui kemih secara utuh, pada dosis

tinggi juga lewat empedu (Tjay & Kirana, 2002).

Bioavalabilitas furosemida adalah 65%. Diuretic kuat terikat pada protein plasma

secara ekstensif, sehingga tidak difiltrasi di glomerulus tetapi cepat sekali disekresi melalui

sistem transport asam organik di tubuli proksimal. Dengan cara ini obat terakumulasi di

cairan tubuli dan mungkin sekali di tempat kerja di daerah yang lebih distal lagi. Probenesid

dapat menghambat sekresi furosemid, dan interaksi antara keduanya ini hanya terbatas pada

tingkat sekresi tubuli, dan tidak pada tempat kerja diuretic. Sebagian furosemida yang

diberikan secara iv diekskresi melalui ginjal dalam bentuk utuh dan dalam konjugasi dengan

senyawa sulfhidril terutama sistein dan N-asetil sistein. Sebagian lagi diekskresi melalui hati.

Sebagian kecil diekskresi dalam bentuk glukuronat (Ganiswara, 1995).

Bioavalabilitas adalah persentase obat yang diresorpsi tubuh dari suatu dosis yang

diberikan dan tersedia, untuk melakukan efek terapeutisnya. Di beberapa Negara,

bioavalabilitas juga mencakup pula kecepatan dengan mana obat muncul di sirkulasi darah.

Biasanya, efek obat baru mulai nampak sesudah obat melalui sistem pembuluh darah porta

serta hati dan kemudian tiba di peredaran darah besar yang mendistribusikannya ke seluruh

jaringan (Tjay & Kirana, 2002).

Bioavalabilitas dapat diukur in vivo (pada keadaan sesungguhnya) dengan

menentukan kadar plasma obat sesudah tercapai steady state. Pada keadaan ini terjadi

kesetimbangan antara kadar obat di semua jaringan tubuh, dan kadar darah praktis konstan

karena jumlah zat yang diserap dan yang dieliminasi adalah sama. Antara kadar plasma dan

efek terapeutik pada umumnya terdapat suatu korelasi yang baik (Tjay & Kirana, 2002).

Bioavalabilitas menunjukkan fraksi dari dosis obat yang mencapai peredaran darah

sistemik dalam bentuk aktif. Bila obat dalam bentuk aktif diberikan secara iv maka F=1,

tetapi bila disuntikkan dalam bentuk derivate yang perlu dikonversi dalam tubuh, maka F=

fraksi yang dikonversi menjadi bentuk aktif, misalnya kloramfenikol etilsuksinat,

hidrokortison Na-suksinat, klindamisin fosfat (Ganiswara, 1995).

Bila obat diberikan per oral maka F biasanya kurang dari 1 dan besarnya bergantung

pada jumlah obat yang dapat menembus dinding saluran cerna (jumlah obat yang diabsorpsi).

Ini terjadi karena, untuk obat-obat tertentu, tidak semua yang diabsorbsi dari tempat

pemberian akan mencapai sirkulasi sistemik. Sebagian akan dimetabolisme oleh enzim di

dinding usus pada pemberian oral dan/ atau di hati pada lintasan pertamanya melalui organ-

organ tersebut. Metabolism ini disebut metabolisme atau eliminasi lintas pertama (first pass

metabolism or elimination) atau eliminasi prasistemik. Obat demikian mempunyai

bioavalabilitas oral yang tidak begitu tinggi meskipun absorpsi oralnya mungkin hampir

sempurna. Jadi istilah bioavalabilitas menggambarkan kecepatan dan kelengkapan absorbsi

sekaligus metabolisme obat sebelum mencapai sirkulasi sistemik. Eliminasi lintas pertama ini

dapat dihindari atau dikurangi dengan cara pemberian parenteral (misalnya lidokain),

sublingual (misalnya nitrogliserin), rectal, atau memberikannya bersama makanan

(Ganiswara, 1995).

Besarnya bioavalabilitas suatu obat oral digambarkan oleh AUC (area under curve)

atau luas daerah di bawah kurva kadar obat dalam plasma terhadap waktu, dari obat oral

tersebut dibandingkan dengan AUC-nya pada pemberian iv. Ini disebut bioavalabilitas oral,

dan merupakan bioavalabilitas absolut dari obat oral tersebut.

Bioavalabilitas oral = Bioavalabilitas absolut =

F=AUCoral

AUC IV

×Dose IV

Doseoral

Bioavalabilitas suatu sediaan obat (preparat dagang) disebut bioavalabilitas produk

yang bersangkutan. Ini ditentukan selain oleh bahan baku obatnya, juga oleh formulasi

produk tersebut; besarnya dibandingkan dengan bioavalabilitas produk penemunya, sehingga

merupakan Bioavalabilitas relatif dari produk tersebut.

Bioavalabilitas suatu produk = Bioavalabilitas relatif = f = AUC suatu produkAUC produk standar

(Ganiswara, 1995).

Penelitian bioavailabilitas perlu dilakukan dalam hal berikut :

1) Obat-obat yang batas keamanannya sempit

2) Obat-obat yang absorpsinya berfluktuasi

3) Obat-obat yang variasi individunya besar dalam kadar plasma pada dosis biasa

4) Diperlukan untuk mempertahankan MEC/MIC obat dalam cairan hayati selama terapi

5) Obat-obat baru.

2.4 Bioekuivalensi

Ekuivalensi kimia-kesetaraan jumlah obat dalam sediaan- belum tentu menghasilkan

kadar obat yang sama dalam darah dan jaringan yaitu yang disebut ekuivalensi biologic atau

bioekuivalensi. Dua sediaan obat yang berekuivalensi kimia tetapi tidak berekuivalensi

biologic dikatakan memperlihatkan bioinekuivalensi. Ini terutama terjadi pada obat-obat yang

absorbsinya lambat karena sukar larut dalam cairan saluran cerna, misalnya digoksin dan

difenilhidantoin, dan pada obat yang mengalami metabolisme selama absorpsinya, misalnya

eritromisin dan levodopa. Perbedaan bioavalabilitas sampai dengan 10% umumnya tidak

menimbulkan perbedaan berarti dalam efek kliniknya artinya memperlihatkan ekuivalensi

terapi. Bioinekuivalensi lebih dari 10% dapat menimbulkan inekuivalensi terapi, terutama

untuk obat-obat yang indeks terapinya sempit, misalnya digoksin, difenilhidantoin, teofilin

(Ganiswara, 1995).

Dua produk obat mempunyai ekivalensi terapeutik jika keduanya mempunyai

ekivalensi farmaseutik atau merupakan alternatif farmaseutik dan pada pemberian dengan

dosis molar yang sama akan menghasilkan efikasi klinik dan keamanan yang sebanding.

Dengan demikian, ekivalensi/inekivalensi terapeutik seharusnya ditunjukkan dengan uji

klinik. Akan tetapi, untuk produk obat yang bekerja sistemik, uji klinik mempunyai kendala

berikut :

- pada penyakit ringan tidak terlihat, pada penyakit berat tidak etis

- endpoint yang diukur seringkali kurang akurat sehingga variabilitasnya besar

- sekali, dengan akibat dibutuhkan sampel yang besar

- sebagai uji klinik untuk menunjukkan ekivalensi dibutuhkan sampel yang besar sekali

Oleh karena itu, sebagai alternatif dilakukan uji bioekivalensi yang endpointnya

sangat akurat (yakni kadar obat dalam plasma) sehingga variabilitasnya rendah, dan dengan

demikian sampel yang dibutuhkan jauh lebih kecil. Jika terdapat perbedaan yang bermakna

secara klinik dalam bioavailabilitasnya, maka kedua produk obat tersebut dinyatakan

inekivalen secara terapeutik (inekivalensi terapeutik)

(http://www.pom-obat.go.id/archive/guideline.pdf).

2.5 Parameter Farmakokinetika

2.5.1 Tetapan Laju Eliminasi

Laju eliminasi untuk sebagian besar obat merupakan suatu proses order ke satu.

Tetapan laju eliminasi ,K, adalah suatu tetapan laju eliminasi order kesatu dengan satuan

waktu-1. Pada umumnya hanya obat induk atau obat yang aktif yang ditentukan dalam

kompartemen vaskular. Pemindahan atau eliminasi obat secara total dari kompartemen ini

dipengaruhi oleh proses metabolisme (biotransformasi) dan ekskresi. (Shargel, 1988).

2.5.2 Volume Distribusi

Volume distribusi menyatakan suatu faktor yang harus diperhitungkan dalam

memperkirakan jumlah obat dalam tubuh dari konsentrasi obat yang ditemukan dalam

kompartemen cuplikan. Volume distribusi juga dapat dianggap sebagai (Vd) di mana obat

terlarut (Shargel, 1988).

2.5.3 Area di bawah Kurva (Area Under Curve)

Area di bawah kurva kadar obat dalam plasma-waktu adalah suatu ukuran dari jumlah

bioavailabilitas suatu obat. AUC mencerminkan jumlah total obat aktif yang mencapai

sirkulasi sistemik. AUC adalah area di bawah kurva kadar obat dalam plasma-waktu dari t =

0 sampai t = , dan sama dengan jumlah obat tidak berubah yang mencapai sirkulasi umum

dibagi klirens (Aiache, 1993).

Parameter ini dapat menggambarkan persentase jumlah obat yang diabsorpsi dari

dosis yang diberikan dengan membandingkan dengan AUC obat yang diberikan secara

intravena. Hasil yang didapat sama dengan nilai ketersediaan hayati absolut (F). Nilai AUC

dapat menggambarkan lama dan intensitas obat berada dalam sirkulasi.

2.5.4 t maks

Waktu konsentrasi plasma mencapai puncak dapat disamakan dengan waktu yang

diperlukan untuk mencapai konsentrasi obat maksimum setelah pemberian obat. Pada t maks

absorpsi obat adalah terbesar, dan laju absorpsi obat sama dengan laju eliminasi obat. Satuan

t maks adalah satuan waktu (misal: jam, menit) (Aiache, 1993).

2.5.5 Cp maks

Konsentrasi plasma puncak menunjukkan konsentrasi obat maksimum dalam plasma

setelah pemberian obat secara oral. Cp maks memberi suatu petunjuk bahwa obat cukup

diabsorpsi secara sistemik dan untuk memberi suatu respon terapetik dan petunjuk dari

kemungkinan adanya kadar toksik obat. Satuan Cp maks adalah satuan konsentrasi (misal,

mg/ml) (Aiache, 1993).

2.5.6 Waktu Paruh

Waktu paruh (t ½ ) menyatakan waktu yang diperlukan oleh sejumlah obat atau

konsentrasi obat untuk berkurang menjadi separuhnya. Harga t ½ untuk reaksi order ke satu

dapat diperoleh dari persamaan berikut:

t 12=0 , 693

K

Dari pesamaan itu tampak bahwa untuk reksi order ke satu, t ½ adalah konstan. Tanpa

perlu diperhatikan berapa jumlah atau konsentrasi obat pada keadaan awal. Satuan t ½ adalah

waktu -1 (Aiache, 1993).

2.5.7 Fraksi Dosis Terabsorpsi (F)

F adalah fraksi dosis terabsorpsi; setelah pemberian IV, F sama dengan satu, karena

seluruh dosis terdapat dalam sirkulasi sistemik dengan segera. Oleh karena itu, obat dianggap

tersedia sempurna setelah pemberian IV. Setelah pemberian obat secara oral F dapat berbeda

mulai dari harga F sama dengan nol (tidak ada absorpsi obat) sampai F sama dengan satu

(absorpsi obat sempurna) (Aiache, 1993).

Alasan utama dilakukannya studi bioekivalensi adalah karena produk obat yang

dianggap ekivalen farmasetik tidak memberi efek terapetik yang sebanding dengan penderita.

Rancangan dan evaluasi studi bioekivalensi yang dikendalikan dengan baik memerlukan

kerja sama antara ahli farmakokinetik, statistik, farmakologi klinik, bioanalitik kimia dan ahli

yang lain. Pada studi bioavailabiltas dan bioekivalen, peneliti hendaknya meneliti

kepustakaan untuk mendapatkan informasi lebih lanjut. Prinsip dasar petunjuk studi

bioavailabilitas in vivo adalah tidak ada penelitian pada manusia yang tidak diperlukan.

Dalam studi bioekivalensi, satu formulasi obat dipilih sebagai standar pembanding

dari formulasi obat yang lain. Standar pembanding hendaknya mengandung obat aktif

terapetik dalam formulasi yang paling banyak berada dalam sistemik (yakni larutan atau

suspensi) dan dalam jumlah sama seperti formulasi lain yang dibandingkan. Pembanding

hendaknya diberikan dengan rute yang sama seperti formulasi yang dibandingkan kecuali

kalau suatu rute lain atau rute tambahan diperlukan untuk menjawab masalah

farmakokinetika tertentu. Produk obat pembanding hendaknya merupakan produk yang

diterima oleh profesi kesehatan, disebut juga dengan produk inovator atau produk dari pabrik

yang pertama memproduksi obat tersebut (Shargel, 1988).

BAB III

METODELOGI PERCOBAAN

3.1 ALAT

Peralatan yang digunakan adalah sentrifuge, spektrofotometer uv- visible, vortex

mixer, spuit 1 ml dan 3 ml, anomal box, stopwatch, silet goal, tabung sentrifuse, alat-alat

gelas, vial, pinset, penyangga mulut kelinci, dan wadah es.

3.2 BAHAN

Bahan-bahan yang digunakan adalah aqua bebas CO2, Heparin 100 IU, Asam tri kloro

asetat 10%, NaOH 1 N, NaOH 0,2 N, NaCl 0,9%, Bratton Marshal 0,5%, Amonium sulfamat

0,5%, NaNO2 0,5%, HCl 0,1 N, Sulfadazid kapasul, tablet dan intravena, furosemid, alkohol

dan es batu.

3.3 HEWAN PERCOBAAN

Kelinci Jantan dengan berat 1,5 – 2 Kg.

3.4 PROSEDUR

3.4.1 Pembuatan Kurva Kalibrasi In Vivo Sulfadiazin

Ditimbang 250 mg sulfadiazin. Dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml. Kemudian

ditambah HCl 1 N sampai larut dan dicukupkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda. Dari

larutan dipipet 0,5 ml, dipindahkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan diencerkan dengan HCl

0,1 N. Dari larutan tersebut di pipet 1; 1,5; 2; 2,5; dan 3 ml dimasukkan dalam labu takar 100

ml. Ditambahkan 1 ml natrium nitrit dan didiamkan selama 3 menit. Ditambahkan 1,5 ml

ammonium sulfamat dan didiamkan selama 2 menit. Ditambahkan 2,5 ml pereaksi Bratton

Marshall dan diencerkan dengan HCl 0,1 N sampai garis tanda. Larutan diukur serapan

dengan alat spektrofotometer visibel pada panjang gelombang maksimum.

3.4.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi In Vivo Furosemid

Ditimbang 50 mg furosemida. Dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml,

ditambahkan NaOH 1 N sampai larut. Kemudian dicukupkan dengan cairan lambung buatan

PH 1,2 sampai garis tanda. Dari larutan tersebut di pipet 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 1,2; 1,4; 1,6;

1,8 dan 2,0 ml diencerkan dengan air sampai 50 ml. Dari masing-masing larutan kalibrasi

dipipet 0,5 ml, dipindahkan ke dalam labu tentukur 10 ml. Ditambahkan 1 ml natrium nitrit

dan didiamkan selama 3 menit. Ditambahkan 2 tetes ammonium sulfamat dan didiamkan

selama 2 menit. Ditambahkan 1 ml pereaksi Bratton Marshall dan diencerkan dengan air

sampai 10 ml. Larutan diukur serapan dengan alat spektrofotometer UV pada panjang

gelombang maksimum.

3.4.3 Cara Pengambilan Darah Hewan

Ditimbang berat badan kelinci. Rambut telinga kelinci dicukur, kemudian diolesi

vaselin putih secukupnya. Vena telinga marginal kelinci dibocorkan dengan pipa kapiler yang

terawat heparin, lalu ditampung darah pada daun telinga dan diambil darah dengan

menggunakan spuit yang terawat 0,5 ml heparin dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi

yang telah berisi 2 ml asam trikloroasetat 10%.

3.4.4 Uji In Vivo Melalui Pemberian Oral (Tablet, Kapsul, atau Sediaan Lepas Lambat)

Diambil darah lebih kurang 1,0 ml melalui vena telinga marginal kelinci dan

digunakan sebagai blanko. Kemudian diberikan secara oral (tablet, kapsul atau sediaan lepas

lambat) sulfadiazin dan furosemida kepada kelinci dengan menggunakan plastik pembuka

mulut. darah lebih kurang 1 ml melalui vena telinga marginal dengan spuit terisi 0,5 ml

heparin pada waktu 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90, 120 dan 150 menit setelah pemberian obat

dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang telah berisi 2 ml asam trikloroasetat 10%.

Dianalisis konsentrasi sulfadiazin dan furosemid bebas di dalam semua sampel darah dengan

metode Bratton Marshall, termasuk blanko.

3.4.5 Uji In Vivo Melalui Pemberian Intravena

Diambil darah lebih kurang 1,0 ml melalui vena telinga marginal kelinci dan

digunakan sebagai blanko. Dihitung volume injeksi sulfadiazin, furosemid, sulfadiazin kapsul

dan sulfadiazin tablet yang diperlukan (dosis 40 mg). Diberikan melalui vena telinga

marginal. Diambil darah lebih kurang 1 ml melalui vena telinga marginal dengan spuit terisi

0,5 ml heparin pada waktu 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90, 120 dan 150 menit setelah

pemberian obat dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang telah berisi 2 ml asam

trikloroasetat 10%. Digunakan telinga kiri jika pemberian injeksi melalui telinga kanan atau

sebaliknya. Dianalisis konsentrasi obat bebas di dalam semua sampel darah dengan metode

Bratton Marshall, termasuk blanko.

3.4.6 Analisis Obat Bebas dalam Darah

Sampel darah dihomogenkan dengan alat vortex, kemudian dimasukkan ke dalam alat

sentrifuge, dan disentrifuge dengan kecepatan Diendapkan campuran selama 10 menit.

Diambil 0,5 ml cairan supernatan yang jernih, dimasukkan ke dalam tabung. Ditambahkan 1

ml larutan natrium nitrit 0,5%, dihomogenkan dan didiamkan selama 3 menit. Ditambahkan

1,5 ml larutan ammonium sulfamat 0,5%, dihomogenkan campuran dan didiamkan selama 2

menit. Ditambahkan 2,5 ml larutan reagen Bratton Marshall 0,5% lalu diencerkan dengan

HCl 0,1 N sampai garis tanda. Setelah dihomogenkan, diukur absorben campuran dengan alat

spektrofotometer visibel pada panjang gelombang 500-580 nm.

DAFTAR PUSTAKA

Aiache, J. M. (1993). Farmasetik 2 : Biofarmasi. Edisi Kedua. Penerjemah: Dr. Widji Soeratri. Penerbit Airlangga University Press. Surabaya, Halaman 108.

Anief, M. (2000). Farmasetika. Cetakan Kedua. Gajah Mada University Press. Yogyakarta. Halaman: 29, 31-32, 37-39

Ganiswarna, G.S. (1995). Farmakologi dan Terapi. Edisi IV. Bagian Farmakologi FKUI. Jakarta. Halaman 3 – 6

Goodman,Louis S and Gilman, Alfred.(1958).The Pharmacological Basic and Therapeutik, third edition.New York: The Macmilan Company. Pages: 297

Shargel, L. (1988). Biofarmasetika dan Farmakokinetika Terapan. Penerjemah: Fasich dan Sjamsiah. Edisi Kedua. Penerbit Airlangga University Press. Surabaya. Halaman: 31-32, 85, 100-102

Syukri, Y. (2002). Biofarmasetika. UII Press. Yogyakarta. Hal.31, 35-37.

Tjay, T. H. & Rahardja, K. (2002). Obat-Obat Penting. Edisi Kelima. PT. Elex Media Komputindo. Jakarta. Hal.130, 136, 492.

http:// astaqauliyah.com/2006/05/08/jangan-ragu-mengonsumsi-obat-generik/

(http://www.pom-obat.go.id/archive/guideline.pdf)

http://www.kalbe.co.id/files/cdk/files/11_BioavailabilitasObat.pdf/11_BioavailabilitasObat.html