laporan ddmba kel 1.docx
TRANSCRIPT
PRAKTIKUM DASAR-DASAR MIKROBIOLOGI AKUATIK
LAPORAN RESMI
Disusun Oleh :
Kelompok 1
DIAN MOLINDA 26010213120001WINARTI 26010213120023ABDULLOH SU’AIDI 26010213120043AGUSTIN PUTRI KUSUMA 26010213130089ISTIAJI ADHINUGROHO 26010213130074STYA LARASATI 26010213140093REKA KURNIA WATI 26010213140115DINI ISLAMIYAH 26010213140127
FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTANUNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG2014
LEMBAR PENGESAHAN
Laporan resmi Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik 2014 ini
telah disetujui dan disahkan pada:
hari :
tanggal :
tempat :
Menyetujui,
KoordinatorAsisten Asisten Pendamping
Diana Chilmawati, S. P i, M.Si M. Nur Sihabuddin NIP. NIM.
Menyetujui,Koordinator Praktikum
Dr. Ir. Suminto, M . Sc NIP. 19570621 198602 1 001
KATA PENGANTAR
Puji syukur penyusun panjatkan kepada Tuhan atas berkat rahmat dan
hidayah-Nya sehingga penyusun dapat menyelesaikan penyusunan Laporan
Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik ini.
Adapun dalam pelaksanaandan penyusunan Laporan Praktikum Dasar-
Dasar Mikrobiologi Akuatik ini tidak lepas dari bantuan berbagai pihak. Oleh
karena itu, dalam kesempatan ini saya mengucapkan terima kasih kepada :
1. Dr. Ir. Suminto, MSc. Selaku dosen pengampu dan koordinator mata kuliah
Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik;
2. Dr.Ir. Diana Rachmawati, M.Si, Diana Chilmawati, S.Pi, Dr.Ir. Desrina, M.Sc,
selaku dosen pengampu mata kuliah Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik;
3. Tim Asisten Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik 2014;
Penyusun menyadari bahwa terdapat banyak keterbatasan dan kekurangan
dalam menyusun Laporan Praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik ini. Oleh
karena itu, saran dan kritik yang membangun dalam penyusunan Laporan Resmi
Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik sangat penyusun butuhkan. Semoga laporan
ini dapat bermanfaat untuk semua pihak pada umumnya dan untuk penyusun pada
khususnya.
Semarang, November 2014
Penyusun
DAFTAR ISI
HalamanHALAMAN JUDUL .................................................................................
HALAMAN PENGESAHAN ..................................................................
KATA PENGANTAR ..............................................................................
DAFTAR ISI .............................................................................................
DAFTAR TABEL ....................................................................................
DAFTAR GAMBAR ................................................................................
I. PENDAHULUAN ...........................................................................1.1. Latar Belakang..........................................................................1.2. Pendekatan Masalah..................................................................1.3. Tujuan .....................................................................................1.4. Waktu dan Tempat ...................................................................
II. TINJAUAN PUSTAKA ...............................................................2.1. Sterilisasi Alat dan Pembuatan Antiseptik................................2.2. Pengambilan Air Sampel...........................................................2.3. Media NA..................................................................................
(pembuatan, penanaman, dan penghitungan koloni)...............2.4. Media TCBS.............................................................................
(pembuatan, penanaman, dan penghitungan koloni)...............2.5. Media NB .................................................................................
(pembuatan, penanaman, dan penghitungan sel)2.6. Tes Gram ..................................................................................2.7. Pewarnaan Gram.......................................................................2.8. Tes Motilitas.............................................................................2.9. Tes OF.......................................................................................2.10. Penghitungan Koloni dan sel Bakteri.......................................
III. MATERI DAN METODE ..............................................................3.1. Materi .......................................................................................3.2. Metode .....................................................................................
3.2.1. Sterilisasi alat dan pembuatan antiseptik..........................3.2.2. Pengambilan air sampel...........................................................3.2.3. Media NA (Nutrient Agar)
(pembuatan, penanaman, dan penghitungan koloni)...............3.2.4. Media TCBS (Tiosulfat Citrat Bile Salt Agar) ................
(pembuatan, penanaman, dan penghitungan koloni)...............3.2.5. Media NB (Nutrient Broth)............................................
(pembuatan, penanaman, dan penghitungan sel).....................3.2.6. Tes gram ..........................................................................3.2.7. Pewarnaan gram...............................................................3.2.8. Tes motilitas.....................................................................3.2.9. Tes OF..............................................................................3.2.10. Penghitungan koloni dan sel bakteri..............................
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................4.1. Hasil .........................................................................................
4.1.1. Penghitungan koloni bakteri ........................................a. penghitungan koloni bakteri pada media NA............b. penghitungan koloni bakteri pada media TCBS ......
4.1.2. Penghitungan sel bakteri ..............................................a. penghitungan sel bakteri pada media .......................b. penghitungan sel bakteri pada media .......................
4.1.3. Tes gram .......................................................................4.1.4. Pewarnaan gram ...........................................................4.1.5. Tes motilitas..................................................................4.1.6. Tes OF ..........................................................................
4.2. Pembahasan ..............................................................................4.2.1. Penghitungan koloni ....................................................4.2.2. Penghitungan sel bakteri ..............................................4.2.3. Tes gram .......................................................................4.2.4. Pewarnaan gram ...........................................................4.2.5. Tes motilitas..................................................................4.2.6. Tes OF ..........................................................................
V. KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................5.1. Kesimpulan ..............................................................................5.2. Saran ........................................................................................
DAFTAR PUSTAKA
LAMPIRAN
DAFTAR TABEL
Tabel 1. Alat yang digunakan dalam praktikum Mikrobiologi Akuatik
.................................................................................................................
Tabel 2. Bahan yang digunakan dalam praktikum Mikrobiologi Akuatik
.................................................................................................................
Tabel 3. Hasil Perhitungan Koloni Bakteri pada Media NA..................
Tabel 4. Hasil Perhitungan Koloni Bakteri pada Media TCBS.............
Tabel 5. Hasil Perhitungan Sel Bakteri pada Media NB........................
Tabel 6. Hasil Tes Gram.........................................................................
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1: Pembuatan Larutan ...............................................................
Gambar 2: Proses Sterilisasi Antiseptik..................................................
Gambar 3: Perebusan dan Penyaringan Air Laut....................................
Gambar 4: Proses Pengenceran .............................................................
Gambar 5: Proses Pemanasan Pada Hot Plate.........................................
Gambar 6: Proses Penuangan Media NA................................................
Gambar 7: Proses Pemanasan pada Autoclave
Gambar 8: Proses Penuangan Media TCBS............................................
Gambar 9: Media TCBS..........................................................................
Gambar 10: Media NB............................................................................
Gambar 11: Penghitungan Koloni NA....................................................
Gambar 12: Penghitungan koloni TCBS.................................................
Gambar 13: Metode streak......................................................................
Gambar 14: Metode spread.....................................................................
Gambar 15: Proses forteks......................................................................
Gambar 16: Hasil pertumbuhan Bakteri pada media Streak...................
Gambar 17: Hasil Pertumbuhan Bakteri Pada Media Spread.................
Gambar 18: Suasana Praktikum Malam..................................................
I. PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
Mikrobiologi Akuatik merupakan ilmu yang mempelajari mikroorganisme di
dalam perairan, baik menyangkut stuktur maupun peranannya di dalam perairan.
Mikroorganisme sendiri memiliki peranan yang penting dan dominan di dalam
perairan karena jumlah dan kemampuannya untuk mensintesis senyawa kimia.
Prasetyo,(2009) menyatakan bahwa mikroorganisme perairan mempunyai
kemampuan untuk menghancurkan bentuk bahan-bahan organik di dalam perairan
dan tanah dasar perairan secara tepat mengubahnya menjadi bahan-bahan
anorganik dalam bentuk nutrien yang pada siklus bahan disebut terjadinya bentuk
organik baru dalam bentuk hidup (tumbuhan hijau dalam air), sedangkan
mikrobiologi akutik itu sendiri adalah ilmu yang mempelajari secara umum
tentang struktur dan kehidupan mikroorganisme di dalam sumber daya air seperti
sungai, danau, rawa, air payau dan lautan termasuk perannya di dalam siklus
elemen dalam air maupun sedimen. Hal tersebut termasuk juga yang berkaitan
dengan hubungan-hubungan antara mikroorganisme dan tumbuhan maupun
hewan air serta tingkah laku dari bentuk-bentuk daratan di dalam lingkungan
perairan.
Semua tumbuhan dan hewan yang bersifat mikroskopis atau kecil dapat
digolongkan sebagai mikroorganisme, seperti bakteri, jamur, mikroalgae,
protozoa, metazo kecil, dan virus. Mikroorganisme perairan ini memainkan peran
dominan di dalam aktivitas kehidupan perairan. Misalnya bakteri dan jamur,
merupakan konsisten pada perombakan bahan organik dan menjamin
pengembalian persediaan nutrien anorganik di dalam siklus pembentukan bahan
organik baru.
Pengetahuan mengenai Mikrobiologi Akuatik ini dapat didapati
mahasiswa dari bangku perkuliahan maupun dari berbagai media misalnya buku
dan internet. Materi yang sudah didapat tersebut, digunakan sebagai acuan untuk
melakukan praktikum, sehingga mahasiswa dapat memahami materi secara
keseluruhan. Mempelajari ilmu tidak terbatas pada pemahaman akan teori saja,
tetapi perlu adanya suatu praktikum yang dapat mengimplementasikan semua
teori-teorinya yang diperoleh di bangku kuliah. Hal inilah yang mendasari
diadakannya praktikum Mikrobiologi Akuatik, sehingga mahasiswa diharapkan
mampu mengkaitkan pengetahuannya dan permasalahan tentang mikrobiologi
akuatik.
1.2. Pendekatan Masalah
Ilmu mikrobiologi akuatik pada dasarnya digunakan untuk mengetahui
keadaan suatu perairan. Keadaan tersebut diantaranya dapat dipelajari dengan
mengetahui karakteristik mikroba yang hidup di dalamnya, tidak terkecuali
bakteri. Lebih lanjut dengan mengetahui karakteristik bakteri yang hidup di
dalamnya akan dapat dipelajari pula bagaimana menangani dan bahkan
memanfaatkan bakteri tersebut dalam kehidupan sehari-hari. Kajian terhadap
pengetahuan tersebut meliputi meliputi sifat-sifat bakteri yang didapatkan dan
kaitannya terhadap lingkungan sehingga penanganan atau pemanfaatannya dapat
lebih efektif.
Lingkungan yang sesuai diperlukan bakteri untuk kelangsungan hidup,
pertumbuhan dan perkembang biakannya. Pengetahuan tersebut dapat diperoleh
dengan melakukan kultur pada media yang mendukung sehingga pola dan
kebiasaan hidup bakteri dapat diketahui.
1.3. Tujuan
Tujuan dari Praktikum Dasar-dasar Mikrobiologi Akuatik adalah sebagai berikut :
1. Melatih cara-cara mengggunakan alat-alat kultur bakteri;
2. Melatih cara mengenal bentuk-bentuk koloni bakteri dan menghitung jumlah
dan menghitung jumlah koloni bekteri dengan benar;
3. Mengetahui cara pembuatan antiseptik sebelum melakukan kultur bakteri;
4. Melatih cara membuat media perkembangbiakan bakteri;
6. Melatih cara mendapatkan sampel air dengan baik dan benar;
7. Melatih cara membuat media kultur bakteri dengan media agar NA dan
TCBS;
8. Melatih menumbuhkan bakteri dalam media kultur;
9. Melatih cara mengenal bentuk-bentuk koloni bakteri dan menghitung jumlah
koloni bakteri dengtan benar.
1.4. Waktu dan Tempat
Praktikum Dasar-dasar Mikrobiologi Akuatik dilaksanakan padatanggal 9 –
17 November 2014. Praktikum ini bertempat di Laboraturium Kering Budidaya
Perairan Kampus Perikanan, Universitas Diponegoro, Semarang.
II . TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Sterilisasi Alat dan Pembuatan Antiseptik
Aturan umum teknik aseptis menurut Suhardi (2008) adalah sebagai berikut :
1. Meja kerja sebaiknya jauh dari sesuatu yang dapat menciptakan aliran udara,
misalnya tidak ada jendela yang terbuka, tidak dekat dengan pintu yang selalu
dibuka-tutup dan jauh dari lalu-lintas orang. Penggunaan kabinet biosafety
dapat menjaga dan mengatur aliran udara tetapi ini bukan merupakan suatu
jaminan mutlak dari resiko terkontaminasi;
2. Pastikan meja kerja bersih dari kotoran dan benda-benda yang tidak akan
digunakan. Kultur tua atau pipet bekas seharusnya tidak berada di meja kerja.
Kotoran seringkali sulit dibersihkan pada sudut-sudut ruang;
3. Usap meja kerja dengan antiseptik atau senyawa pembersih lain sebelum
digunakan. Di sebagian besar laboratorium umumnya menggunakan etanol
70% untuk membersihkannya. Sediakan etanol pada posisi selalu dekat dengan
meja. Jika telah selesai bekerja, sebaiknya meja kerja dikosongkan dari
peralatan dan bersihkan lagi;
4. Semua peralatan (pipet, cawan dll.) yang digunakan harus steril. Sebaiknya
semua peralatan yang telah disterilisasi diberi label. Jika menemukan alat yang
sepertinya telah disterilisai tapi masih ragu terhadap sterilitasnya maka
sebaiknya jangan digunakan. Bungkus peralatan baik alat steril sekali pakai
atau bukan (pipet, syringe dll.)diperiksa terlebih dahulu apakah terdapat
kebocoran atau tersobek;
5. Atur peralatan di meja kerja sedemikian rupa sehingga meminimalisir
pergerakan tangan. Alat-alat yang biasanya digunakan dengan tangan kanan
(jarum inokulum, filler, pipet dll.) letakkan disebelah kanan begitu juga
sebaliknya (rak tabung, cawan petri, erlenmeyer dll.) terkecuali untuk tangan
kidal. Di bagian tengah meja kerja disediakan ruang lapang untuk bekerja;
6. Membakar mulut atau bagian tepi dari suatu alat dapat membunuh
mikroorganisme yang menempel;
7. Telah siap dengan segala peralatan dan bahan yang dibutuhkan. Semua bahan
dan alat untuk prosedur tertentu telah dipersiapkan di meja kerja. Jangan
sampai meninggalkan meja kerja untuk mengambil sesuatu yang terlupa atau
tertinggal. Perhitungkan semua yang diperlukan beserta cadangannya;
8. Pakai sarung tangan lateks dan ganti secara berkala. Sarung tangan membantu
melindungi dari tumpahan biakan atau bahan kimia berbahaya. Tidak
menggunakan sarung tangan dirasa tidak bermasalah jika materi dan bakteri
yang diteliti dipastikan tidak berbahaya;
9. Cuci tangan sebelum dan sesudah bekerja. Cuci tangan dengan desinfektan atau
sabun bila tidak ada desinfektan. Cuci tangan dapat membilas mikroorganisme
yang ada di tangan;
10.Minimalisasi gerak artinya pergerakan tangan dapat menciptakan aliran udara .
semakin cepat pergerakannya semakin cepat aliran udara yang ditimbulkan.
Pergerakan lengan sebaiknya dilakukan seperlu mungkin dan bergerak secara
lembut;
11.Minimalisasi jarak: jarak antar peralatan diatur seefektif dan seefisien
mungikn, antar peralatan jangan diletakkan terlalu jauh;
12.Minimalisasi keterpaparan artinya semakin sering menggerakkan sesuatu
(misalya: cawan berisi media) melewati udara maka semakin besar partikel
udara untuk masuk. Semakin lama tutup erlenmeyer terbuka juga semakin
besar terkontaminasi.
Menurut Shindy (2011), metode sterilisasi yang sering digunakan adalah
metode fisik yang meliputi pemanasan, pengeringan dan radiasi. Umumnya
sterilisasi itu menggunakan pemanasan. Pemanasan(lembab) biasanya
menggunakan autoklaf yang memanfaatkan panas dan tekanan dalam suatu
ruangan, dengan temperature mencapai 121 oC, tekanan 1 atm dala waktu 60
menit. Namun, sterilisasi menggunakan autoklaf ini memiliki kekurangan, salah
satunya adalah menimbulkan kerusakan sifat kimia bahan pembawa dan
menghasilkan unsur racun.
Antiseptik merupakan suatu zat kimia yang berfungsi untuk menghambat
bahkan menghancurkan mikroorganisme pada suatu jaringan hidup msalnya pada
permukaan kulit tatau membran mukosa bahan kimia yang biasa digunakan dalam
pembuatan antiseptiuk adalah campuran dari etaniol dan alkohol.
2.2. Pengambilan Air Sampel
Daerah limgkungan air tawar, payau dan asin, air merupakan media yang
mengandung berjuta juta makhluk hidup terutama mkroorganisme. Pengambilan
air sampel dilakukan pada pagi hari dimana kondisi lingkungan perairan
mendukung untuk dilakukan pengambilan sampel bakteri yang akan dikultur.
Lingkunagn yang akan dilakukan pengambilan air sampel harus
memperrhitungkan interaksi antara faktor biotis dan abiotis sehingga menggunkan
pendekatan ekologis. anilisis mikrobiologi dilakukan dengan scara sampling air
dan serlanjutnya di lakukan pengkulturan bakteri untuk mengetahui jenis dan
bentuk koloni bakteri.
Prosedur pengambilan sampel menurut Alifah (2009), pengambilan air
harus dilakukan dengan memperhatikan prosedur sebagai berikut:
1. Mencuci wadah dengan air yang akan diambil dan isi penuh wadah dengan
air;
2. Pada air mengalir, ambil sampel dari arah hulu;
3. Pada keran, biarkan air mengalir selama 1 menit, baru sampel diambil.
2.3. Media NA
Media padat diperoleh dengan cara menambahkan agar. Agar berasal dari
ganggang/alga yang berfungsi sebagai bahan pemadat. Alga digunakan karena
bahan ini tidak diuraikan oleh mikroorganisme, dan dapat membeku pada suhu di
atas 450 C. Apabila ke dalam media ditambahkan antara 10-15 g, tepung agar per
1.000 mL media, jumlah tepung agar yang ditambahkan tergantung kepada jenis
atau kelompok bakteri yang dipelihara. Ada juga yang memerlukan kadar air
tinggi sehingga jumlah tepung agar harus rendah, tetapi ada pula yang
memerlukan kandungan air rendah sehingga penambahan tepung agar harus
sedikit (Hadiutomo, 1985).
Media padat lebih banyak dipergunakan dalam pembiakan bakteri daripada
media lain, dalam metode ini makanan harus dicampur dengan gelatin atau agar-
agar, atau bahan seperti perekat yang dihasilkan oleh ganggang merah, kemudian
diaduk dalam air rebus guna membentuk campuran cairan pekat. Campuran ini
kadang-kadang dicurahkan ke dalam piring ceper yang disebut piring petri. Piring
ini dilengkapi dengan penutup yang memasukkan udara tetapi juga mencegah
masuknya debu dan bakteri dari atmosfer, agar tetap steril. Campuran ini
terkadang dimasukkan ke dalam termos gelas atau jenis wadah lain. Wadah ini
disterilkan selama 15 sampai 30 menit di bawah tekanan untuk membunuhkan
setiap bakteri yang mungkin terjatuh pada campuran atau wadah itu selama
mempersiapkan medium bakteri. Wadah kemudian dipindahkan dari pensterilan
dan dibiarkan mendingin. (Fuller, 1999).
Bakteri ditempatkan di permukaan medium padat dengan memakai jarum
ose yang telah steril. Bakteri didapat dari berbagai macam sumber, antara lain
yaitu biakan lama, tanah, makanan, jaringan tumbuhan atau jaringan hewan yang
sakit, dan sebagainya, bakteri asing yang tidak dikehendaki kadang-kadang
memasuki suatu biakan, dalam hal ini Situasi biakan menjadi tidak berguna
karena tidak murni lagi dan harus dimusnahkan. Jenis bakteri yang berbeda
memerlukan perlakuan biakan yang berbeda pula. Misalnya, bakteri anaerobik
harus ditumbuhkan pada tempat yang oksigennya dapat dipisahkan. Sebagian
bakteri memerlukan selulosa pada medium pertumbuhannya, yang lain-lain
memerlukan protein darah; yang lain lagi memerlukan asam amino, vitamin, dan
senyawa organik lain. Bakteri tertentu tumbuh di dalam larutan cairan zat
makanan dan bukannya pada media setengah padat dari jenis gelatin.
2.4. Media TCBS
Pembuatan media ini dilakukan dengan mencampur air laut dengan NaOH
1 N atau HCl 1 N serta bubuk TCBS yang setelah dicampur akan menghasilkan
warna biru kehijauan. Cara pada metode TCBS yaitu dengan mensterilkan
medium, didinginkan, lalu dituangkan pada cawan Petri yang sudah steril dan
dibiarkan sampai padat. Kemudian dengan kawat gelang penginokulasi yang
penuh biakan campuran dilakukan goresan di permukaan agar. Jika goresan akhir
dilakukan dengan sempurna maka akan meninggalkan bakteri individual yang
cukup terpisah, jadi setelah tumbuh koloni maka dapat dipindahkan ke medium
steril dan akan tumbuh biakan murni (Volk dan Wheeler, 1993).
Metode piringan atau cawan petri adalah salah satu metode yang tepat
untuk menumbuhkan bakteri. Sebelum bakteri ditanam maka perlu dilakukan
sterilisasi pada alat-alat yang akan digunakan, dengan cara inkubasi. Selain itu
juga perlu mempersiapkan media untuk kultur bakteri. Media agar TCBS
(Tripepsin Cytrate Bile Sucrose) adalah salah satu media yang digunakan untuk
menumbuhkan bakteri vibrio sp (Finegold dan Martin, 1982).
Agar TCBS setelah ditimbang dicampur dengan air laut, kemudian
dimasukkan dalam labu erlenmeyer diaduk hingga tercampur rata. Kemudian
setelah itu mengukur pH hingga mencapai antara 7,6 sampai 7,8. Jika pH lebih
maka ditambah dengan HCl dan jika kurang ditambah dengan NaOH. Setelah ini
dimasukkan dalam labu erlenmeyer dan tutup menggunakan aluminium foil,
masukkan dalam autoclave selama 15-20 menit. Media agar yang telah siap
dituang pada cawan petri, kemudian ditutup dan masukkan ke dalam clean banch
selama 30 menit. Setelah beku, ambil cawan petri yang berisi agar lalu dibalik
supaya uap panasnya hilang. Setelah media siap maka bakteri siap ditanam pada
media (Finegold dan Martin, 1982).
2.5.Media NB
Natrium Broth digunakan untuk berbagai macam varietas mikroorganisme.
Natrium Broth digunakan untuk penumbuhan secara umum jenis-jenis
mikroorganisme non-fastidious. Natrium Broth berupa media cair, dibuat
berdasarkan formula dari APHA dan AOAC serta digunakan untuk mendukung
pertumbuhan varietas terbaik dari microorganisme yang not very particular in
nutritional needs.
Menurut Prawira (2013), Nutrien Brothmerupakan media untuk organisme
yang berbentuk cair. Pertumbuhan media Nutrien Brothyaitu dengan melarutkan
1,3 gram nutrien broth dengan 100 ml aquades kedalam erlenmeyer . Wadah
kemudian ditutup alumunium foil hingga melakukan pembiakan bakteri dan di
inkubasi selama 24 jan dengan suhu 37o C.
2.6. Tes KOH
Tes KOH bertujuan untuk mengetahui apakah bakteri termasuk gram
positif atau negatif. Medium padat merupakan medium dari kaldu yang dicampur
dengan sedikit agar-agar. Setelah medium disterilkan, dan dibiarkan mendingin,
maka kita peroleh medium padat. Sebagai bahan pengentalnya adalah gelatin.
Agar-agar baru mencair pada suhu 950C, sedangkan gelatin sudah mencair pada
suhu 230C. Cara memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang
baru dibutuhkan ruangan tempat inokulasi yang kecil, bersih, dan bebas angin.
Saat akan mengadakan inokulasi, baik sekali jika meja tempat inokulasi itu
didasari dengan kain basah. Pekerjaan inokulasi dapat dilakukan juga dalam suatu
kotak kaca.
Ujung kawat inokulasi sebaiknya dari platina atau dari nikron.Ujung itu
boleh lurus, boleh juga berupa kolongan yang berdiameter 1-3 mm. Lebih dulu
kawat ini dipijarkan, setelah dingin kembali, ujung kawat itu disentuhkan suatu
koloni. Mulut tabung tempat pemiaraan itu dipanasi juga setelah sumbatnya
diambil. Setelah pengambilan inokulum selesai, kemudian meneteskan KOH 3%
pada slide lalu bakteri yang telah diambil tersebut diratakan. Jika setelah diratakan
dan ternyata menjadi elastis maka bakteri tersebut adalah bakteri gram negatif,
sedangkan jika setelah diratakan ternyata tidask elastis maka bakteri tersebut
meupakan bakteri gram positif.
2.7. Tes Pewarnaan Gram
Pewarnaan gram merupakan salah satu teknik pewarnaan diferensial yang
paling penting dan sering digunakan untuk bakteri. Dalam proses ini olesan
bakteri yang terfiksasi dikenai larutan-larutan berikut : ungu kristal, larutan
yodium, alkohol, dan safranin atau pewarna tandingan lain yang sesuai. Salah satu
tehnik pewarnaan diferensial yang paling penting dan paling luas digunakan untuk
bakteri ialah pewarnaan gram. Morfologi bakteri dapat diamati dengan pewarnaan
Gram dibawah mikroskop (1000x). Dengan pewarnaan Gram dapat membedakan
gram positif dan gram negatif, yaitu gram positif berwarna biru dan gram negatif
berwarna merah. Setiap bakteri terbagi dalam bakteri berbentuk bulat dan batang.
Bakteri berbentuk batang terbagi menjadi batang pendek, batang berbentuk koma,
dan batang panjang. Bakteri Gram positif bulat terdiri dari bulat membentuk
rantai, dan bulat membentuk berkelompok (Djauhari,2006).
Pewarnaan gram bertujuan untuk menentukan apakah bakteri tersebut
termasuk di dalam kelompok bakteri gram positif atau kelompok bakteri gram
negatif. Cara kerja dari pewarnaan gram yaitu suspensikan bakteri dengan ose,
kemudian letakkan pada obyek dan difiksasi, tetesi dengan larutan gram A yang
mengandung kristal violet, kemudian tetesi dengan larutan gram B yang
mengandung lugol, tetesi dengan larutan gram C yang mengandung alkohol, dan
yang terakhir tetesi dengan larutan gram D yang mengandung safranin.
Lamanya waktu masing-masing zat pewarna yang dibiarkan pada olesan
tidaklah terlalu menentukan, dan banyak laboratorium yang telah menyesuaikan
prosedur ini sehingga masing-masing zat pewarna dapat tetap berhubungan
dengan organisme yang difiksasi untuk hanya beberapa detik. Banyak orang
memilih memakai campuran 50 : 50 aseton dan alkohol sebagai langkah
menghilangkan warna, karena larutan ini lebih cepat bereaksi daripada larutan
alkohol 96% saja. Zat pewarna lembayung dan iodium membentuk senyawa
kompleks. Beberapa marga bakteri melepaskan zat pewarna dengan mudah
apabila dicuci, pada bakteri lain, zat pewarna tetap bertahan walau dicuci dengan
alkohol 96%. Organisme yang tidak dapat menahan zat pewarna setelah dicuci
dengan alkohol 96% disebut organisme gram negatif; sedangkan yang dapat
menahan zat pewarna disebut gram positif.
2.8. Tes Motilitas
Sangat sedikit sekali bakteri yang berbentuk kokus, sebagian besar yang
berbentuk basil dan semua spirochaetes adalah bergerak.Organisme yang bergerak
mempunyai flagel sama seperti organel yang dipunyai oleh beberapa banyak
protozoa yang mempunyai ukuran lebih besar daripada bakteri. Flagel sangat
kompleks dan terdiri dari multi elemen.
Menurut Djauhari (2006), menyatakan bahwa pengamatan motilitas
bakteri dengan menggunakan mikroskop (metode “Wet Mount”), yaitu dengan
cara meneteskan setetes akudes pada kaca preparat, lalu menginokulsikan
beberapa koloni bakteri pada air dan campurkan. Selanjutnya meletakkan kaca
penutup pada larutan bakteri tersebut dan mengamati motilitas (pergerakan)
bakteri dengan mikroskop pada pembesaran 400x.
Karena ada bukti-bukti bahwa bakteri yang amfitrik itu sebenarnya adalah
bakteri yang sedang membelah diri , maka timbullah pendapat baru yang
mengadakan dua klasifikasi saja mengenai kedudukn flagel, yaitu flagel terminal
yang terdapat pada ujung saja seperti Vibrio, Spirillum dan Pseudomonas, dan
flagel lateral seperti halnya pada Escherichia coli, Proteus vulgaris serta pada
beberapa Basilus dan Clostridium yang dapat bergerak.
Menurut Edward Alcamo (1984), pada umumnya diameter flagel itu kurang
dari 0,1µ dan hanya dapat dilihat dengan mikroskop elektron atau dengan
pewarnaan yng khusus. Mikroskop elektron menunjukan bahwa flagel itu benar-
benar protoplasma yang berpangkal pada titik-titik tepat di bawah membran sel,
pangkal itu disebut rizoblast. Flagel terdiri atas suatu protein yang disebut
flagelin, yaitu semacam myosin.
Flagel itu selalu berlekuk, apalagi jika bakteri sedang bergerak. Dalam sediaan
yang diwarnai seringkali kita lihat adanya flagel yang terlepas dari sel. Bakteri
bergerak dengan menggelombangkan flagelnya. Di dalam medium yang cair,
Vibrio penyebab kolera dapat mencapai kecepatan renang 20 cm per jam. Ini
merupakan prestasi yang luar biasa, sebab kecepatan itu sama dengan kecepatan
lari seseorang yang menempuh 0,3 km per menit. Gerakan flagel menyebabkan
bakteri terdorong ke depan, jadi flagel mempunyai fungsi seperti baling-baling
pada kapal laut .
2.9. Tes OF
Fermentatif adalah proses produksi energi dalam sel dalam keadaan
anaerobik (tanpa oksigen). Secara umum, fermentasi adalah salah satu bentuk
respirasi anaerobik akan tetapi, terdapat definisi yang lebih jelas yang
mendefinisikan fermentasi sebagai respirasi dalam lingkungan anaerobik dengan
tanpa akseptor elektron eksternal.
Beberapa mikrobe dapat hidup tanpa menggunakan oksigen bebas, bahkan
ada mikrobe yang mati jika terkena udara bebas, meskipun gas ini tersedia
baginya, contohnya adalah Streptococcus lactis. Mikroba ini tidak dapat
memanfaatkan oksigen bebas karena tidak mempunyai enzim untuk mereduksi
oksigen tersebut. Pernapasan intramolekul juga dikenal dengan nama fermentasi,
contoh lain adalah laktasi yang dilakukan oleh sel-sel dari genus Lactobacillus.
Bakteri ini mengubah glukusa menjadi asam susu dan energi, menurut reaksi
kimia sebagai berikut :
C6H12O6 2 CH3CHOHCOOH + energi
Sebenarnya ada beberapa spesies bakteri dapat hidup secara aerob atau
anaerob. Namu hidup aerob lebih menguntungkan karena pernapasan
menggunakan oksigen bebas menghasilkan energi yang lebih besar. Kejadian ini
dikenal dengan efek Pasteur.O-F (Oxidatif-Fermentative) digunakan untuk
mengetahui apakah asam dari karbohidrat memerlukan udara (oksidatif) atau tidak
memerlukan udara (Fermentative) (Waluyo, 2004).
2.10. Penghitungan Koloni dan Sel Bakteri
Analisis mikrobiologi dilakukan untuk mengetahui dan menghitung jumlah
jasad renik pada suspensi atau bahan. Ada beberapa cara yang dapat digunakan
untuk menghitung atau mengukur jumlah jasad renik yang imim digunakan dalam
uji mikrobiologi, yaitu hitungan mikroskopik (direct Microscopis Counts),
hitungan cawan (Total Plate Counts), dan MPN (Most Probable Number). Ketiga
cara perhitungan jumlah jasad renik tersebut masing- masing memiliki
kekurangan dan kelebihan. Pada penelitian ini menggunakan metode hitung
cawan (Total Plate Counts).
Prinsip dan metoda hitungan cawan adalah jika sel jasad renik yang masih
hidup ditumbuhkan pada media agar, maka sel jasad renik tersebut akan
berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsungdan dihitung
dengan mata tanpa menggunakan mikroskop. Metode hitung cawan merupakan
metode yang paling sensitif untuk menentukan jumlah jasad renik karena
beberapa hal yaitu, hanya sel yang masih hidup yang dihitung, beberapa jasad
renik dapat dihitung sekaligus, dan dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi
jasad renik karena koloni yang terbentuk mungkin berasal dari satu jasad renik
yang mempunyai penampakan pertumbuhan spesifik. Pertumbuhan mikroba
diambil dengan ose steril dan diinokulasi ke dalammedium oksidasi dan
fermentasi secara tusukan, kemudian diinkubasi selama 7x24 jam pada suhu 370C,
lalun permukaannya ditetesi dengan parafin. Uji positif ditandai dengan
perubahan warna hijau menjadi biru (Naid et al, 2013).
Metode hitung cawan ini mempunyai kelemahan-kelemahanjuga, dalam
metode hitung cawan diperkirakan mengandung 300 sel jasad renik permili atau
pergram atau per cm, jika pengambilan contoh dilakukan pada permukaan,
memerlukan pengenceran sebelum ditumbuhkan pada medium agar di dalam
cawan petri. Setelah inkubasi akan terbentuk koloni pada cawan tersebut dalam
jumlah yang dapat dihitung dimana jumlah yang terbaik adalah diantara 30 sampai
300 koloni. Pengenceran biasanya dilakukan secara desimal, yaitu 1:10, 1:100,
1:1.000, atau 1:100, 1:10.000, 1:1.000.000, dan seterusnya.
III. MATERI DAN METODE
3.1. Materi
3.1.1. Alat
Alat yang digunakan dalam praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik
adalah:
Tabel 1. Alat yang digunakan dalam praktikum Mikrobiologi AkuatikNo Nama Alat Ketelitian Fungsi
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
Botol sample
Pipet tetes
Petridish
Slide glass
Autoclave
Inkubator
Cleanbanch
Tabung erlenmeyer
Beaker glass
Tabung reaksi
Sprayer
Stirer
Timbangan elektrik
Mikropipet
Bunsen
Spreader
Lup
Hand Counter
Mikroskop
Haemocytometer
Sebagai tempat sampel
Mengambil larutan sampel
Tempat tumbuhnya bakteri
Memetakan objekyang diamati
Sterilisasi bahan
Tempat inkubasi bakteri
Tempat pensterilan
Tempat melarutkan sampel
Tempat mencampur larutan
Tempat mengkultur bakteri
Antiseptik
Pengaduk larutan
Menimbang bahan
Mengambil larutan dengan
ketelitian mikro
Memanaskan tabung reaksi
Memanaskan alat
Alat untuk meratakan bakteri
Alat penghitung manual
Alat pengamatan bakteri
Alat penghitung bakteri
21.
22.
23.
24.
25.
Cover glass
Pinset
Stopwatch
Tissue
Refraktometer
Alat penutup haemocytometer
Alat untuk memegang slide
Alat untuk menghitung waktu
Pembersih alat
Mengukur salinitas
3.1.2. Bahan
Bahan yang digunakan dalam praktikum Dasar-Dasar Mikrobiologi
Akuatik adalah:
Tabel 2. Bahan yang digunakan dalam praktikum Mikrobiologi AkuatikNo Bahan Keterangan
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
Air sampel
Air laut
Aquadest
Alkohol
Alumunium foil
Etanol
Media TCBS
Media NA
Media NB
Media agar OF
Minyak parafin
Gram A (Crystal violet)
Gram B (I2 + KI )
Gram C (Etanol/ alcohol acetat)
Sulframine
Sebagai air uji
Sebagai pengencer air sampel
Bahan untuk kalibrasi
Bahan antiseptik dan sterilisasi
Pembungkus alat praktikum
Bahan antiseptik
Media pertumbuhan bakteri
Media pertumbuhan bakteri
Media pertumbuhan bakteri
Media pertumbuhan bakteri
Sebagai penutup media OF
Bahan pada tes gram
Bahan pada tes gram
Bahan pada tes gram
Pemberi warna merah pada tes gram
3.2. Metode
Lanjutan Tabel 1. Alat yang digunakan dalam praktikum Mikrobiologi Akuatik
3.2.1. Sterilisasi alat dan pembuatan larutan antiseptik
Metode teknik sterilisasi alat dan bahan yang digunakan pada praktikum
ini adalah:
1. Pipet, tabung Erlenmayer, tabug reaksi, beaker glass dan gelas ukur dicuci
dengan sabun dan dibilas dengan air setelah itu dikeringkan dengan tissue
kemudian disumbat dengan kapas dan dibungkus rapat dengan ketas bekas dan
disimpan;
2. Petridish, cup dicuci dengan sabun dan dibilas air setelah itu dikeringkan
dengan tissue setelah itu dibungkus dengan kertas bekas dan disimpan;
3. Slide glass dicuci dengan sabun dan dibilas dengan air kemudian setelah itu
direndam dalam alkohol 90% sampai akan digunakan.
3.2.2.Pengambilan air sampel
Metode pengenalan alat yang digunakan pada praktikum ini adalah:
1. Memasukkan botol ke dalam perairan dengan tangan mengarah ke depan,
menghadang aliran air;
2. Menutup botol dan segera memasukan ke dalam lemari pendingin;
3. Mengkultur air sampel dalam kurun waktu 6 – 12 jam.
3.2.3. Media NA(Nutrient Agar)
Metode pembuatan media NA yang digunakan pada praktikum ini adalah:
1. NA yang sudah ditimbang sebanyak 3,6 gr dimasukan ke dalam tabung
Erlenmayer yang telah berisi 500 mL air laut yang sudah disaring, kemudian
diaduk dengan menggunakan batu stirer;
2. Memasukan tabung erlenmayer tersebut ke dalam autoclave yang sebelumnya
telah di strerilisasi selama kurang lebih 15-20 menit;
3. Memasukan tabunng Erlenmayer yang telah berisi larutan NA ke dalam clean
banch;
4. Menyiapkan petri dish yang sebelumnya dimasukan ke dalam clean banch
untuk sterilisasi;
5. Mencuci tangan dengan larutan antiseptik dan menuangkan media agar ke
dalam petri dishsebanyak 2/3 bagian dan kemudian ditutup;
6. Memasukan petri dish yang telah berisi media, ke dalam clean banch selama
30 menit atau sampai mengeras;
7. Setelah membeku, petri dish dibalik agar uap air yang telah menempel pada
tutup hilang.
Metode yang dilakukan dalam menumbuhkan bakteri pada media NA
adalah :
1. Menyiapkan mikropipet dengan volume 0,1 mL dengan cup yang steril;
2. Mengambil air sampel dari tabung I, II, III dengan mikropipet 0,1 mL;
a. Sebelum tabung dibuka, mulut tabung dipanaskan oleh api
b. Posisi mikropipet tepat dalam clean banch agar tetap steril
c. Menutup tabung kembali kemudian dipanaskan
3. Air yang terambil dengan mikropipet kemudian dituangkan ke dalam media
agar TCBS yang berada dalam petridish;
4. Memanaskan spreader yang sebelumnya sudah dicelupkan dalam alkohol
70%, kemudian tunggu hingga dingin;
5. Meratakan air sampel pada media agar dengan spreader yang telah
dipanaskan dengan perlahan-lahan, kemudian meletakan kembali lope yang
telah digunakan ke dalam alkohol;
6. Menutup petridish dan memberi isolasi serta label;
7. Memasukan petridish ke dalam clean sampai tumbuh koloni bakteri;
Metode perhitungan koloni bakteri pada media padat yang digunakan pada
praktikum ini adalah:
1. Mengambil petrdidis yang berisi media NA dan TCBS yang telah ditumbuhi
bakteri dari clean banch dan memeriksa dibawah lup;
2. Mengamati dan menghitung koloni bakteri dengan hand counter dan
kalkulator;
3. Untuk memudahkan perhitungan koloni, maka dibuat garis garis silang pada
petridish sebagai pembatas dalam perhitungan;
4. Setiap koloni yang sudah diitung siberi tanda titik di atas permukaan petri
dish dengan spidol agar tidak terjadi pengulangan dalam perhitungan.
3.2.4. Pembuatan media TCBS(Tiosulfat Citrat Bile Salt Sucrose)
Metode pembuatan media TCBS yang digunakan pada praktikum ini
Mengaduk dengan menggunakan batu stirer;
1. Memasukan tabunng Erlenmayer yang telah berisi larutan TCBS ke dalam
clean banch;
2. Mencuci tangan dengan larutan antiseptik dan menuangkan media agar ke
dalam petri dishsebanyak 2/3 bagian dan kemudian ditutup;
3. Memasukan petri dish yang telah berisi media, ke dalam clean banch selama
30 menit atau sampai mengeras;
4. Setelah mengeras, petri dish dibalik agar uap air yang telah menempel pada
tutup hilang.
Metode menumbuhkan bakteri dalam media agar TCBS yang digunakan pada
praktikum ini adalah:
1. Menyiapkan tabung reaksi yang berisi media cair NB
2. Memanaskan jarum ose yang sebelumnya sudah dicelupkan dalam alkohol
70%, kemudian tunggu hingga dingin.
3. Mengambil koloni bakteri dengan jarum oose dalam media kultur NA atau
TCBS
4. Lalu mencelupkan jarum oose kedalam media cair NB
Metode perhitungan koloni bakteri pada media padat yang digunakan pada
praktikum ini adalah:
1. Mengambil petridish yang berisi media NA dan TCBS yang telah ditumbuhi
bakteri dari clean banch dan memeriksa dibawah lup;
2. Mengamati dan menghitung koloni bakteri dengan hand counter dan
kalkulator;
3. Untuk memudahkan perhitungan koloni, maka dibuat garis garis silang pada
petridish sebagai pembatas dalam perhitungan;
4. Setiap koloni yang sudah diitung siberi tanda titik di atas permukaan petri
dish dengan spidol agar tidak terjadi pengulangan dalam perhitungan.
3.2.5. Pembuatan media NB(Natrium Broth)
Metode pembuatan NB yang digunakan pada praktikum ini adalah:
1. NB yang sudah ditimbang sebanyak 4,2 gr dimasukan ke dalam tabung
Erlenmayer yang telah berisi 500 mL air laut yang sudah disaring, kemudian
diaduk dengan menggunakan batu stirer;
2. Memasukan tabung erlenmayer tersebut ke dalam autoclave yang sebelumnya
telah di strerilisasi selama kurang lebih 15-20 menit;
3. Memasukan tabunng Erlenmayer yang telah berisi larutan NB ke dalam clean
banch;
4. Memasukan larutan pada Erlenmayer ke dalam tabung reaksi, masing masing
sebanyak 10 mL, kemudian ditutup dengan silicon foam;
5. Memasukan kembali tebung reaksi yang telah berisi media cair ke dalam
clean banch sampai digunakan.
Metode yang dilakukan dalam penanaman bakteri pada praktikum ini
adalah :
1. Menyiapkan tabung reaksi yang berisi media cair NB;
2. Memanaskan jarum ose yang sebelumnya sudah dicelupkan dalam alkohol
70%, kemudian tunggu hingga dingin;
3. Mengambil koloni bakteri dengan jarum oose dalam media kultur NA atau
TCBS;
4. Lalu mencelupkan jarum oose kedalam media cair NB.
Metode penghitungan koloni yang dilakukan pada praktikum ini adalah :
3.2.6. Tes gram
Metode yang dilakukan dalam Tes Gram pada praktikum ini adalah :
KOH 3 % ditetesi pada slide kemudian mengambil bakteri dari kultur dengan lope
yang sudah dipanaskan, kemudian meratakannya. Jika elastis berarti gram (-) dan
jika tidak elastik berarti gram (+).
3.2.7. Pewarnaan gram
Metode yang dilakukan dalam pewarnaan gram pada praktikum ini adalah :
1. Meneteskan aquadest di atas slide glass, suspensikan koloni bakteri kedalam
aquadest steril pada objek glass;
2. Keringanginkan atau fiksatif diatas bunsen;
3. Meneteskan gram A pada slide selama 1 menit;
4. Mencuci dengan aquadest selama 5 detik;
5. Meneteskan gram B pada slide selama 1 menit;
6. Mencuci dengan aquadest selama 5 detik;
7. Meneteskan gram C pada slide selama 30 detik;
8. Mencuci dengan aquadest selama 5 detik;
9. Meneteskan gram D pada slide selama 2 menit;
10. Mencuci dengan aquadest selama 5 detik;
11. Mengamati dengan mikroskop mulai pembesaran 40x.
3.2.8. Uji motilitas
Metode uji miotilitas yang digunakan pada praktikum ini adalah:
1. Meneteskan sampel bakteri kedalam slide glass;
2. Meneteteskan dengan aquades dan kemudian diamati dibawah mikroskop.
3.2.9. Uji O-F
Metode uji OF yang digunakan pada praktikum ini adalah:
1. Siapkan 2 medium OF;
2. Ambil bakteri yang akan diuji dengan jarum ose lurus kemudian tusukkan
tegak lurus ditengah masing-masing medium OF;
3. Salah satu tabung medium diberi paraffin cair setebal 0,5 cm;.
4. Inkubasikan pada suhu kamar (37 ° C) selama 24-28 jam kemudian amati;
5. Jika kedua medium berubah warnanya dari hijau menjadi kuning dan timbul
gelembung-gelembung pada medium yang diberi parrafin cair, maka bakteri
tersebut bersifat fermentative;
6. Bila yang berubah warna menjadi kuning hanya yang tanpa parrafin cair maka
bakteri tersebut bersifat oksidatif.
3.2.10. Perhitungan koloni dan sel bakteri
Metode perhitungan koloni bakteri pada media cair yang digunakan pada
praktikum ini adalah:
1. Menyiapkan media kultur Nutrient Broth;
2. Setelah koloni bakteri dalam petridish dihitung kemudian dengan jarum oose
yang sebelumnya telah dioanaskan, koloni bakteri yang berada dalam
petridish diambil sedikit dan dimasukan ke dalam media kultur cair yang
berada dalam abng reaksi. Kemudian dimasukan kembali ke dalam clean
banch;
3. Mengambil air yang mengandung bakteri dari media kultur cair Nutrient
Brouth yang telah dicampur dengan koloni bakteri, dengan pipet yang
sebelumnya dipanaskan dan telah disterilkan terlebih dahulu;
4. Meletakan air dari media kultur cair tersebut pada haemocytometer dan
ditetesi formalin untuk membunuh bakeri yang akan dihitung kepadatanya,
kemudia haemocytometer ditutup dengan cover glass dan diamati dibawah
mikroskop dengan hand caounter sebanyak 3 kali ulangan dan dirata-rata;
5. Perhitungan sel bakteri ini dilakukan setiap 2 jam sekali selama 24 jam.
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil
4.1.1. Penghitungan koloni bakteri
Data hasil yang didapat dari pengamatan penghitungan koloni bakteri pada
media NA dan TCBS adalah sebagai berikut:
a. penghitungankolonibakteripadamedia NA
Tabel 3. Hasil Perhitungan Koloni Bakteri pada Media NA
PengenceranAir sampel yang
ditanam (μL)
Jumlah koloni xN (CFU/mL)
1 2 3 4
10-2 - 167 1147 467 0 1175 0
b. perhitungan koloni bakteri pada media TCBS
Tabel 4. Hasil Perhitungan Koloni Bakteri pada Media TCBS
PengenceranAir sampel yang
ditanam (μL)
Jumlah koloni xN (CFU/mL)
1 2 3 4
10-3 - 1 0 0 0 1 0
4.1.2. Penghitungan sel bakteri
Data hasil yang didapat dari pengamatan penghitungan sel bakteri adalah
sebagai berikut:
a. penghitungan sel bakteri pada media NB
Tabel 5. Hasil Perhitungan Sel Bakteri pada Media NBNo Waktu Jumlah Koloni
1. 16.00 120.000 x 10-4
2. 18.00 410.000 x 10-4
3. 20.00 26 x 10-4
4. 22.00 14 x 10-4
5. 00.00 15 x 10-4
6. 02.00 41 x 10-4
7. 04.00 13 x 10-4
8. 06.00 59 x 10-4
9. 08.00 36 x 10-4
Lanjutan Tabel 5. Hasil Penghitungan bekteri pada media NB
10. 10.00 23 x 10-4
11. 12.00 49 x 10-4
12. 14.00 33 x 10-4
4.1.3. Tes gram
Data hasil pengamatan test gram yang diambil dari media NA adalah
sebagai berikut:
Tabel 6. Hasil Tes GramMedia asal Hasil pengamatan Keterangan
NA Kental Bakteri gram positif
4.1.3 Tes Pewarnaan Gram
Hasil yang didapatkan pada tes pewarnaan gram adalah sebagai berikut:
Nomor Sampel Hasil Keterangan
A + Biru
4.1.4 Tes Motility
Hasil yang didapatkan pada tes motility adalah sebagai berikut:
Nomor Sampel Hasil Keterangan
A - Bakteri tidak Bergerak (Non Motil
4.1.5 Tes OF
Hasil yang didapatkan pada tes OF adalah sebagai berikut:
Nomor Sampel
Hasil Pengamatan
Tabung Tanpa Parafin
Keterangan Tabung Dengan
Keterangan
Parafin
A + Kuning + Kuning
4.2. Pembahasan
1.2.1. Penghitungan koloni
Perhitungan koloni bakteri dilakukan setelah bakteri ditumbuhkan pada
media NA (Natrium Agar) selama 24 jam. Bakteri yang ditumbuhkan untuk
perhitungan koloni ini sebelumnya telah ditumbuhkan pada media yang sama
yakni TCBS, kemudian bakteri dipindahkan ke media cair NB (Natrium Broth).
Media yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri adalah media NA dan TCBS,
hal ini dikarenakan bakteri yang ditumbuhkan berasal dari perairan laut yaitu
Pantai Marina Semarang.
Perhitungan jumlah koloni dilakukan pada media NA dengan pengenceran
10-2atau 1/100. Jumlahkoloni bakteri pada media NA dengan pengenceran 1/100
adalah 1175 kolonibakteri. Jumlahkoloni bakteri pada media
TCBSdenganpengenceran 1/1000 adalah 1 kolonibakteri.
Berdasarkan hasil tersebut dapat dilihat bahwa jumlah koloni pada
pengenceran 1-2 tidak bisa untuk dihitung (TBUD) karena jumlahnya lebih dari
300 koloni bakteri. Menurut Waluyo (2004) dalam Panjaitan et al. (2014)
menyatakan bahwa metode hitungan cawan dilakukan dengan mengenceran
sampel suspensi bakteri ke dalam media nutrient agar (NA). Koloni yang
terbentuk pada cawan tersebut dalam jumlah yang dapat dihitung. Dimana jumlah
terbaik adalah antara 30-300 sel mikroba per rotari. Prinsip pengenceran adalah
menurunkan jumlah sehingga semakin banyak jumlah pengenceran yang
dilakukan, semakin sedikit jumlah mikroba, dimana suatu saat didapat hanya satu
mikroba pada satu tabung.
4.2.2. Penghitungan sel bakteri
Penghitungan jumlah sel bakteri pada media cair dilakukan bertujuan untuk
mengetahui fase pertumbuhan pada bakteri dimana waktu bakteri ini berkembang
biak dengan baik dan waktu dimana bakteri ini mati (jumlahnya berkurang).
Menurut Januar et al. (2013) bahwa tiap koloni bakteri yang tumbuh di inokulasi
kedalam media pertumbuhan baru menggunakan metode gores (streak plate).
Inokulasi dilakukan berdasarkan berbedaan ciri morfologi yang tampak meliputi
bentuk, tepian, elevasi dan warna koloni sehingga diperoleh isolate murni.
1.3.3. Tes gram
Test gram bertujuan untuk menentukan apakah bakteri termasuk dalam
kelompok gram positif atau bakteri gram negatif. Pengujian dilakukan dengan
meneteskan KOH 3% pada slide lalu bakteri yang telah diambil dengan jarum ose
diratakan diatasnya. Jika setelah diratakan dan ternyata menjadi cair maka bakteri
tersebut adalah bakteri gram negatif. Sedangkan jika setelah diratakan ternyata
menjadi kental maka bakteri tersebut yang merupakan bakteri gram positif.
Berdasarkan hasil pengamatan, untuk sampel air yang berasal dari Pantai
Marina Semarang pada media NA bakterinya adalah bakteri gram positif. Hal ini
ditunjukkan dengan pengujian menggunakan KOH 3% didapatkan hasil kental.
Hal ini menunjukkan bahwa bakteri menunjukkan gram (+), bakteri yang bersifat
gram positif (+) dapat ditunjukan dengan warna ungu setelah pewarnaan gram. Sel
gram negatif (-) mempunyai kandungan lipid yang lebih tinggi daripada dinding
selnya dan lipid yang larut pada alkohol. Hal ini diperkuat oleh Purwohadi
santoso et al. (2009) bahwa tidak terbentuknya lender pada bakteri gram positif
karena dinding sel bakteri gram positif lebih resisten terhadap KOH sehingga
dinding sel tidak pecah. Kuatnya dinding sel ini yang membuat DNA tetap berada
dalam sel. Menurut Shivasdan Beasley (2005) dalam Purwohadi santoso et al.
(2009) dinding sel bakteri gram negative lebih sensitive dan tidak memiliki
ketahanan terhadap penghambatan basa seperti larutan KOH. Sehingga apabila sel
bakteri gram negative direaksikan dengan larutan KOH akan menyebabkan
dinding sel bakteri pecah dan terjadi lisis dan DNA dibebaskan. DNA bersifat
sangat kental dalam air, maka terbentuklah benang lendir.
4.2.3 Tes Pewarnaan Gram
Hasil kegiatan praktikum memberikan informasi bahwa, pada saat uji tes
pewarnaan gram menghasilkan warna biru yang artinya bahwa bakteri bersifat
gram positif. Sedangkan bersifat gram negatif apabila menghasilkan warna merah.
Hal tersebut diperkuat oleh Tantu et al., (2013) bahwa hasil yang diperoleh adalah
bakteri negatihal ini ditandai dengan warna merah muda pada struktur dinding sel
yang diamati dengan menggunakan mikroskop pada pembesaran 100 kal. Bakteri
gram negatif adalah bakteri yang tidak dapat mempertahankan warna kristal violet
sewaktu proses pewarnaan gram sehingga akan bewarna merah bila diamati
dengan mikroskop.
4.2.3 Tes Motility
Hasil kegiatan praktikum memberikan informasi bahwa, pada saat uji
motility menghasilkan bakteri yang non motil artinya tidak bergerak pada saat
diamati. Menurut Fardiaz (2002) dalam Tantu et al., (2013) menyatakan bahwa
sifat mobilitas bakteri dapat dilihat dengan pertumbuhan yang menyebar
disekeliling tempat permukaan kultur.
4.2.3 Uji OF
Hasil kegiatan praktikum memberikan informasi bahwa, pada saat uji OF
menghasilkan warna kuning pada tabung reaksi dengan minyak parafin dan juga
tabung reaksi tanpa minyak parafin, tetapi warna kuning yang dihasilkan oleh
tabung dengan minyak parafin lebih pekat, sehingga bakteri yang diamati bersifat
anaerob fakultatif. Menurut Tantu et al., (2013) bahwa uji OF bertujuan untuk
menentukan apakah bakteri mampu memfermentasikan karbohidrat pada kondisi
aerob setelah diinkubas selama 24 jam di media OF (yang ditambah glukosa)
diamati dimana salah satu tabung tertutup parafin cair. Jika media yang ditutup
parafi cair berubah warna dari hijau menjadi kuning, maka bakteri mampu
memanfaatkan karbohidrat dalam kondisi anaerob.
V. KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan
Berdasrkan hasil pengamatan yang telah dilakukan dalam praktikum
Dasar-dasar Mikrobiologi Akuatik, dapat disimpulkan bahwa:
1. Alat-alat yang digunakan dalam kultur bakteri antara lain, yaitu botol sampel,
pipet tetes, petri dish, slide glass, autoclave, clean banch, tabung erlenmeyer,
beaker glass, tabung reaksi, sprayer, alumunium foil, stirer, timbangan elektrik,
mikropipet, bunsen, speader, parafilm, kertas label, lup, hand counter,
mikroskop, haemocytometer, cover glass, pinset, stopwatch, tissue, dan
refraktometer. Adapun fungsi pada masing-masing alat dapat dilihat pada bab
sebelumnya.
2. Teknik sterilisasi alat-alat dan bahan dapat dilakukan dengan menggunakan
uap bertekanan tinggi berupa autoclave, dan untuk menjaga sterilisasi bahan
dapat diletakkan pada clean banch sehingga terhindar dari kontaminasi.
3. Antiseptik yang digunakan pada praktikum ini tidak perlu dilakukan
pengenceran lagi dikarenakan bahan antiseptik yang digunakan konsentrasinya
sudah 70% .
4. Pembuatan media kultur bakteri meliputi, media agar NA (Nutrien Agar),
media agar TCBS (Tiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose), dan media cair NB
(Natrium Broth).
5. Cara pengambilan sampel yang baik dan benar yaitu dengan cara measukkan
botol ke dalam perairan denga posisi menghadang aliran air, lalu menutup
botol dan segera memasukkan ke dalam lemari pendingin, dan setelah itu
mengkultur air sampel dalam kurun waktu 6-12 jam.
6. Cara membuat media kultur bakteri (NA maupun TCBS) yaitu, menimbang
terlebih dahulu NA lalu memasukkannya ke dalam erlenmeyer dan diaduk
dengan batu stirer. Measukkan ke dalam erlenmeyer autoclave lalu pindahkan
ke dalam clean banch. Siapkan petridish yang sudah disterilisasi. Cuci tangan
dengan sntiseptik lalu tuangkan media agar ke petridish sebanyak 2/3 bagian.
Setelah itu masukkan petridish kembali ke dalam clean banch dan biarkan
sampai beku, lalu dibalik agar uap pada tutup hilang. Sedangkan cara untuk
menumbuhkan bakteri dalam media kultur bakteri (NA maupun TCBS) yaitu,
mengambil air sampel dengan mikropipet, mulut tabung dipanaskan untuk
menghindari kontaminasi, lalu tuang dalam media, panaskan kawat Lope yang
sudah dicelup alkohol, tunggu sampai dingin. Ratakan air sampel pada media,
letakkan kembali kawat Lope. Tutup petridish dan beri label serta isolasi
bening, lalu masukkan dalam clean banch.
7. Bentuk bakteri ada berbagai macam, antara lain coccus, batang, lengkung, dll.
Adapun cara penghitungan bakteri yaitu dengan mengamati di bawah
mikroskop elektron. Sampel air diteteskan pada haemocytometer kemudian
ditutup dengan slide glass dan diamati bentuknya serta dihitung jumlah
keseluruhan bakteri pada lokasi yang telah ditentukan. Penghitungan dilakukan
2 x 24 jam. Total jumlah keseluruhan koloni bakteri dibagi dengan 5.
5.2. Saran
Saran yang dapat disampaikan dalam praktikum Dasar-dasar Mikrobiologi
Akuatik, yaitu:
1. Sebaiknya, pembuatan media yang digunakan pada kultur bakteri ditambah lagi
tidak hanya NA, TCBS, dan NB.
2. Sebaiknya, pengambilan sampel air untuk tiap kelompok dilakukan dengan
menggunaakan kedua jenis air, yaitu air tawar dan air laut.
DAFTAR PUSTAKA
Djauhari, Ricky. 2006. Identifikasi Potensi Bakteri Patogen pada Budidaya Ikan
Betok (Anabas testudineus Bloch). UNPAR. Jurnal of Tropical
Fisheries. 1 (1): 71-79.
Edward Alcamo. 1984. Microbiology. Wesley Publishing Company. Sidney.
Ijung, Frans G. 2011. Laju Reduksi Merkuri oleh Pseudomonas Diisolasi dari
Perairan Pantai Teluk Manado. Jurnal Perikanan dan Kelautan Tropis.
VII(2).
Januar, W., S. Khotimahdan A. Mulyadi. 2013. Kemampuan Isolat Bakteri
Pendegradasi Lipid dari Instalasi Pengolahan Limbah Cair PPKS-XIII
Ngabang Kabupaten Landak. Protobiont; 2 (3) : 136-140.
Naid, Tadjuddin; Syaharuddin Kasim; Asnah Marzuki; Sumarheni. 2013.
Produksi Antibiotika Secara Fermentasi dari Biakan Mikroorganisme
Simbion Rumput Laut Euchema cottonii. Makassar: Universitas
Hasanuddin. Jurnal Majalah Farmasi dan Farmakologi. 17 (3): 61-68.
Noor, Djauhari. 2006. Geologi Lingkungan. Graha Ilmu: Yogyakarta.
Nuryady, Moh. Mirza, Tifani Istiqomah, Rion Faizah, Syafiq Ubaidillah, Zainal
Mahmudi, dan Sutoyo. 2013. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat
Asal Yoghurt. UNEJ Jurnal
Panjaitan,D., I. K. Suadadan M. Sritamin. 2014. Uji Keefektivan Ekstrak
Beberapa Biji Tanaman untuk Menghambat Pertumbuhan Bakteri Bercak
Daun (Xanthomonascampestris) padaTanamanTomat. E-Jurnal Agroeko
teknologi Tropika; 3 (2) : 89-96.
Purwohadi santoso, K., E.Zubaidah dan E. Saparianti. 2009. Isolasi Bakteri Asam
Laktat dari Sayur Kubis yang Memiliki Kemampuan Penghambat Bakteri
Pathogen (Staphylococcus aureus,Listeriamonocytogenes, Esherichia coli
dan Salmonella thypimurium). Jurnal Teknologi Pertanian; 10 (1) : 19-27
Suhardi, S.H., Koesnandar, D. K. Indriani, H. Arnaldo. 2008.Biosafety : Pedoman
Keselamatan Kerja di Laboratorium Mikrobiologi dan Rumah
Sakit.Jakarta. PT.Multazam Mitra Prima.
Waluyo, Lud. 2004. Mikrobiologi umum. Universitas Muhammadiyah Malang.
Malang.
LAMPIRAN
Gambar 1: Pembuatan Larutan Gambar 2: Proses Sterilisasi
Antiseptik
Gambar 3: Perebusan dan Gambar 4: Proses Pengenceran
Penyaringan Air Laut
Gambar 5: Proses Pemanasan Gambar 6: Proses Penuangan Media NA
Pada Hot Plate
Gambar 7: Proses Pemanasan pada Gambar 8: Proses Penuangan Media TCBS
Autoclave
Gambar 9: Media TCBS Gambar 10: Media NB
Gambar 11: Penghitungan Koloni NA Gambar 12: Penghitungan koloni TCBS
Gambar 13: Metode streak Gambar 14: Metode spread
Gambar 15: Proses forteks Gambar 16: Hasil pertumbuhan Bakteri pada media Streak
Gambar 17: Hasil Pertumbuhan Bakteri Gambar 18: Suasana Praktikum Malam
Pada Media Spread