PENDAHULUANKolom adalah tabung yang dikalibrasi lurus yang panjangnya antara 3 15 cm dan pada dinding bagian dalam kadang kadang dilapisi dengan material inert seperti kaca atau PEEK Kolom bisa terbuat dari sejenis plastik disebut cartridge atau terbuat dari stainless steel Dimensi: diameter dalam 2-5 mm dan panjang 10-30 cm. Kolom dapat dibeli sudah termasuk bahan isiannya, tapi juga dapat dibeli dalam keadaan kosong lalu diisi sendiri.

LATAR BELAKANGKolom pada HPLC merupakan bagian yang sangat penting sebab pemisahan komponen - komponen sampel akan terjadi di dalam kolom.Pemilihan kolom pada HPLC merupakan langkah yang pertama dan utama untuk penggunaan kromatografi. Kolom adalah jantung kromatografi, Berhasil atau gagalnya suatu analisis tergantung pada pemilihan kolom dan kondisi percobaan yang sesuaiKetepatan dalam pemilihan kolom sangat berpengaruh terhadap performa kromatogramOleh karena itu ada beberapa hal yang harus diperhatikan :1. Pemilihan kolom yang sesuai2. Pemeliharaan kolom3. Uji terhadap spesifikasi kolom( walaupun kolom tersebut merupakan kolom yamg siap dipakai)Kolom akan menjadi penentu keberhasilan pemisahan komponen sampel serta hasil akhir analisis dengan HPLC,itulah sebabnya mengapa makalah ini dibuat

ISI / PEMBAHASANKolom dapat dibagi menjadi dua kelompok :1. Kolom analitik : Diameter dalam 2 - 6 mm. Panjang kolom tergantung pada jenis material pengisi kolom. Untuk kemasan pellicular, panjang yang digunakan adalah 50 -100 cm. Untuk kemasan poros mikropartikulat 10 -30 cm. Dewasa ini ada yang 5 cm.2. Kolom preparatif: umumnya memiliki diameter 6 mm atau lebih besar dan panjang kolom 25 -100 cm.Kolom biasanya dioperasikan pada temperatur kamar, tetapi bisa juga digunakan temperatur yang lebih tinggi, terutama untuk kromatografi penukar ion dan kromatografi eksklusi. Pengepakan kolom tergantung pada model HPLC yang digunakan Liquid Solid Chromatography, (LSC), Liquid Liquid Chromatography (LLC) Ion Exchange Chromatography(IEC), Exclution Chromatography (EC)Ada 2 jenis kolom padaHPLC yaitu kolom konvensional dan kolom mikrobor. Kolom merupakan bagianHPLC yang mana terdapat fase diam untuk berlangsungnya proses pemisahan solut/analit.

Kolom mikrobor mempunyai 3 keuntungan yang utama dibanding dengan kolom konvensional, yakni: Konsumsi fase gerak kolom mikrobor hanya 80 % atau lebih kecil dibanding dengan kolom konvensional karena pada kolom mikrobor kecepatan alir fase gerak lebih lambat (10 -100 l / menit). Adanya aliran fase gerak yang lebih lambat membuat kolom mikrobor lebih ideal jika digabung dengan spektrometer massa. Sensitivitas kolom mikrobor ditingkatkan karena solut lebih pekat, karenanya jenis kolom ini sangat bermanfaat jika jumlah sampel terbatas misal sampel klinis.

Meskipun demikian, dalam prakteknya kolom mikrobor ini tidak setahan kolom konvensional dan kurang bermanfaat untuk analisis rutin.Kebanyakan fase diam padaHPLC berupa silika yang dimodifikasi secara kimiawi, silika yang tidak dimodifikasi, atau polimer-polimer stiren dan divinil benzen. Permukaan silika adalah polar dan sedikit asam karena adanya residu gugus silanol (Si-OH). Silika dapat dimodifikasi secara kimiawi dengan menggunakan reagen-reagen seperti klorosilan. Reagen-reagen ini akan bereaksi dengan gugus silanol dan menggantinya dengan gugus-gugus fungsional yang lain.Oktadesil silika (ODS atau C18) merupakan fase diam yang paling banyak digunakan karena mampu memisahkan senyawa-senyawa dengan kepolaran yang rendah, sedang, maupun tinggi. Oktil atau rantai alkil yang lebih pendek lagi lebih sesuai untuk solut yang polar. Silika-silika aminopropil dan sianopropil (nitril) lebih cocok sebagai pengganti silika yang tidak dimodifikasi. Silika yang tidak dimodifikasi akan memberikan waktu retensi yang bervariasi disebabkan karena adanya kandungan air yang digunakan.

Jenis-jenis kolom HPLCNama kolomJenis adsorbanUltrasil-SiSiO2 (silika)Ultrasil-octyl Octana (C8)Ultrasil-ODSOctadecana (C-18)LiChrosorb SiSiO2 (silika)LiChrosorb RP-2Etana (C-2)LiChrosorb RP-8Octana (C8)LiChrosorb RP-18Octadecana (C-18)LiChrosorb NH2Amina LiChrosorb CNCyanoBentuk Partikel Spherical atau irregularPartikel spherical mengurangi tekanan dan kolom lebih awet

Ukuran Partikel Umumnya 3-10mMakin kecil ukuran partikel, makin tinggi efisiensi

Ukuran Pori-pori Bervariasi antara 60-10,000 Makin besar pori-pori analit molekul besar dapat tertahan lebih lama. Pilih 150 untuk sampel BM 2000.

KOLOM MONOLITIKBatangan silika monolitik Kecepatan alir dapat ditingkatkan dengan resolusi yang baik, t analisis cepat. Boros eluen

Pori-pori besar kecepatan alir dapat ditingkatkan waktu analisis makin cepat

High Pure Silica Spherical particles Almost no metal impurities (< 5 ppm) Excellent peak symmetry Extended stability: pH range 1.5 to 10.5

irregular

spherical

monolithik

Kolom analitik 5 30 cm, 4 10 mm, paking dengan 3 10 cm, N = 40.000 60.000 plat / meter.

jenis : C18, C8, sianopropil, penukar iondibuat dari CH3 CH3Cl Si R+ Si-OH + Si O Si R CH3 CH3

Kolom pengaman/guard kolom: 5 cm, 4 6 mm, partikel > dari a FUNGSI :Menyaring kotoranMenjenuhkan fasa diam

BAHAN ISIANBahan isian kolom biasanya terbuat dari silika, untuk tujuan tertentu kadang-kadang digunakan polymeric gelatau resin.

Kolom pada HPLC dibuat lurus ( tidak dibuat melingkar sebagaimana kolom pada kromatografi gas ataupun bentuk U ) Hal ini dimaksudkan untuk efisiensi kolom