pengembangan produk n validasi hplc

Pengembangan Metode Validasi Metode HPLC pada Azitromisin

HPLC (High Pressure Liquid Chromatography/KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi) :

Metode analisis untuk identifikasi, kuantitas dan pemurnian senyawa. HPLC digunakan untuk memisahkan molekul berdasarkan perbedaan afinitasnya terhadap zat padat tertentu. Cairan yang akan dipisahkan merupakan fase cair dan zat padatnya merupakan fase diam

PENDAHULUANKOMPONENPENGEMBANGAN PRODUK

AZITROMISIN

Adalah Antibiotik golongan makrolida kelas azalide. Azitromisin menghambat sintesis protein bakteri dengan mengikat subunit 50S ribosom dari bakteri 70S ribosom. Azitromisin menghambat aktivitas peptidyltransferase aktivitas dan mengganggu translokasi asam amino selama proses penerjemahan.


A. Instrumen:Seri HPLC terdiri sistem Spectra 2004, spektrofotometri sistem P4000 pompa, Autosampler AS3000, sistem spektrofotometri UV2000 detektor, Thermostat kolom kompartemen terhubung dengan software Win Chrome2004. B. Metodologi:Metode HPLC dilakukan dengan menggunakan ketentuan sebagai berikut :Kondisi kromatografi:Kolom : C-8, 250mm X 4.6mm, 5, kecepatan alir : 1.2 ml / menit Detektor : UV pada Panjang gelombang 210 Nm Suhu kolom: 45 C Volume injeksi : 20 L Waktu dijalankan: 15 menit Pencuci jarum: Air : Metanol perbandingan 90:10 (v/v)

BAHAN DAN METODE

Pembuatan fase gerak dibuat dengan disaring dan didegassing dari campuran buffer fosfat (4.5590 gram Potassium dihydrogen ortofosfat dalam 1,0 liter air dan pH diatur menjadi 7,5) dan metanol dengan perbandingan 20:80 v/v

PERSIAPAN F.GERAKPERS. LART STOK AZITROMISINPEMBUATAN LARUTAN SAMPELPROSEDUR

Timbang seksama sejumlah 50mg serbuk Azitromisin, masukkan kedalam labu ukur 50ml. Kemudian tambahkan pelarut sebanyak 30 mL, lakukan sonikasi dan dilanjutkan dengan saring larutan melalui kertas saring 0,45 dan dibuat pengenceran


Ambil 10 tablet azitromisin 500mg. Tablet dihancur menjadi serbuk halus dan jumlah serbuk setara dengan 100mg azitromisin. Timbang dan masukkan ke labu ukur 100ml. Kemudian tambahkan dengan 20 ml pelarut dan gojog kuat. Setelah itu tambahkan kembali pelarut ad tanda dan diinject-an


Inject sebanyak 20l larutan blanko, larutan pembanding, enam kali larutan standar (abaikan peak karena kosong dan pembanding.

Persyaratan sistem kesesuaian dari larutan SST:- Faktor tailing: NMT 2.0- Plat teoritis: NLT 2000


Presisi (Pengulangan): Persiapan larutan presisi:Encerkan 10 ml larutan stok standar, kemudian ad kan 100 mL pelarut. Prosedur yang sama diulang untu keenam preparasi

Akurasi:Keakuratan metode pengujian ditunjukkan dengan menyiapkan sampel recovery (yaitu, pengujiansampel dengan kuantitas pada level 115%, 125% dan 150% dari konsentrasi target)

Penetapan KadarLinearitasAkurasiPresisi (Pengulangan) LOQLODRobusnessRuggedness

Linearitas:Respon linearitas detektor ditunjukkan oleh pelarut yg telah disiapkan pada rentang 100 sampai 800% dari level target

Penetapan Kadar:Larutan stok standar diambil 10 ml dan dilakukan pengenceran ad 100ml dengan pelarutnyaPenetapan KadarLinearitasAkurasiPresisi (Pengulangan) LOQLODRobusnessRuggedness

Ruggedness (Kekasaran):Metode uji ini ditunjukkan dengan melakukan studi presisi dalam enam sampel yang telah disiapkan pada batch sampel tunggal dengan analisis yang berbeda

Robusness (Ketahanan):Metode uji ini ditunjukkan dengan melakukan variasi fase gerak 2,0%, yaitu (22: 78-18: 82), aliran variasi 10%, yaitu (1.1ml untuk 1.3ml / min) dan variasi suhu kolom 5.0C, yaitu 40 C -50C)

Penetapan KadarLinearitasAkurasiPresisi (Pengulangan) LOQLODRobusnessRuggedness

LOD LOD = 3 x SD/Slope= 53,246 g/ml

LOQ LOQ= 10 x SD/Slope= 158,321 g/mlPenetapan KadarLinearitasAkurasiPresisi (Pengulangan) LOQLODRobusnessRuggedness

Spesifikasi Studi:

Sampel dianalisis dalam kondisi khusus, yaitu perbandingan studi. Kromatogram dari pembanding tidak menunjukkan gangguan pada saat retensi Azitromisin, artinya metode ini khusus untuk penentuan AzitromisinSPESIFIKASI STUDI

HASILProfil Kromatogram Azitromisin

HASILPrecisionKriteria Penerimaan: % RSD area dari 6 preparasi tingkat presisi tidak boleh lebih dari 2,0 %

HASILAkurasi

HASILKesesuaian sistem dg metode yang digunakan

HASILLinearitas

HASILPenetapan Kadar Azitromisin

HASILRoggudness (Kekasaran)Robustness (Ketahanan)

Metode analisis:Panjang gelombang azitromisin tetap 210nm

Spesifikasi Studi :Kromatogram dari pembanding tidak menunjukkan interferensi pada saat retensi Azitromisin metode ini khusus untuk penentuan Azitromisin

HASIL

KESIMPULANMetode RP-HPLC merupakan metode yang sederhana, akurat dan tepat untuk penentuan Azitromisin baik secara teknis maupun formulasi dari yang telah dikembangkan Metode ini dapat direkomendasikan untuk analisis rutin dan kontrol kualitas penelitian obat dalam formulasiSehingga dapat disimpulkan, bahwa metode analisis ini valid dan dapat digunakan untuk analisis rutin

TERIMA KASIH ^^

*

pengembangan produk n validasi hplc

Documents