BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Tujuan Percobaan Praktikum

Pemisahan senyawa dengan metoda High Performance Liquid

Chromatography (HPLC).

1.2. Prinsip Kerja

HPLC menggunakkan kolom yang mengandung partikel-partikel

kecil-kecil dari fase tetap dan kkarena luas permukaan yang lebih besar dari

fase tetap maka sampel dalamHPLC terpisah dengan sangat baik dengan

efisiensi yang tinggi. Mekanisme pemisahan yang berbeda dengan cepat

dilakukan mengikatkan gugus-gugus kimia yang berbeda pada permukaan

partikel silika yang disebut dengan fase terikat. Secara teoritis HPLC itu

identik dengan Liquid Solid Chromatography. Liquid Chromatography dan

ion Exchange Chromatography.

1.3. Landasan Teori

1.3.1. Separation and Characterization of The Vanillin

Coumpound from Soda Lignin

Pendahuluan

Para guineensis Elaesis  atau yang biasa  dikenal sebagai  kelapa sawit

diperkenalkan untuk berbagai  bagian  daerah tropis  untuk buah 

minyak memproduksi.  Diperkirakan 2,28 juta  ha tanah 

yang sedang  ditanami dengan  pohon  kelapa sawit di Malaysia.

Selain memproduksi  sawit minyak,  industri kelapa sawit juga menghasilkan 

sejumlah besar  residu lingo selulosa  seperti

sebagai  batang, daun dan tandan kosong (TKS). TKS  telah diakui sebagai

berpotensi menjadi bahan baku alternatif untuk industri kertas dan pulp [2, 3, 4].

Tujuan dari proyek ini adalah untuk mengidentifikasi cara yang lebih efisien

mengelola  pembuangan lingo selulosa  residu dan  pada saat yang

sama mengubah residu menjadi produk yang bermanfaat seperti lignin.

Sumber utama lignin di Malaysia adalah dari luar negeri dimana awalnya

diekstrak dari pohon pinus dan akasia sebagai produk sampingan dari kayu dan

industri pulp.

Namun, metode ini kurang efektif karena  mata uang asing hilang dalam

mengimpor produk  asing . Ada kebutuhan  untuk mencari alternatif

sumber lignin yang dapat berasal dari bahan  limbah dan pada saat yang sama 

membantu melestarikan harta alami untuk masa depan generasi. 

Salah satu sumber tersebut adalah kelapa sawit tandan buah kosong (TKS). ini

adalah karena jumlah besar TKS dikumpulkan setiap hari lebih dari kelapa

sawit 300 pabrik pengolahan yang tersebar di seluruh Malaysia.

Lignin merupakan bahan amorf polifenol yang timbul dari suatu enzim yang

dimediasi dehydrogenates polimerisasi monomer tiga fenilpropanoid utama, yaitu

coniferyl,  sinapyl  dan p-coumaryl alkohol. Elemen struktur lignin terkait

oleh ikatan karbon-karbon dan eter untuk membentuk tri-dimensi jaringan yang

terkait dengan hemiselulosa  polisakarida  di dalam dinding sel .

Lignin biasanya tidak larut dalam semua pelarut dan hanya dapat mengalami

degradasi oleh proses pulping fisik atau kimia di hightemperature dan

tekanan tinggi. Reaksi  delignifikasi melibatkan  pembelahan non-fenolik PO-

4 linkage, fenolik a-0-4 keterkaitan dan melepaskan dari yang terkait dengan

polisakarida [8, 9].Karena kompleksitas  tinggi  makromolekul lignin,

lignin perlu untuk diuraikan melalui proses oksidasi untuk monomer, yang

memiliki  berat molekul  lebih rendah sebelum mereka dianalisis. 

Oksidasi nitrobenzena digunakan  sebagai metode untuk memecah lignin ke

monomer  sebelum  mengidentifikasi mereka menggunakan kromatografi cair

kinerja tinggi (KCKT) analisis.

Sebuah penelitian sebelumnya [10] melaporkan bahwa 8 komponen oleh ligninter

degradasi.Mereka adalah  vanillin , syringaldehyde, 4-hydroxybenzaldehyde,

asam syringic, 4 hydroxybenzoic asam, asam vanilat, asam p-coumaric dan

asam ferulat. 

Diantara  8 senyawa,  vanilin  ditemukan menjadi  komponen utama of

soda lignin. Vanili, sebuah komponen utama vanili, banyak digunakan sebagai

bahan dalam  rasa makanan, dalam farmasi dan sebagai wewangian di parfum

dan bau-masking produk .

Dalam studi ini  persentase  hadir  vanillin  dalam sampel lignin soda akan

ditentukan. Selanjutnya, senyawa vanilin akan dipisahkan dari soda lignin melalui

kristalisasi teknik.

Bahan

Kelapa sawit tandan buah kosong (TKS) bahan baku dalam penelitian ini telah

diberikan oleh Sabutek (M) Sdn. Bhd, Teluk Intan, Malaysia, sebuah perusahaan

lokal yang mengkhususkan diri dalam daur ulang TKS. 

Cairan hitam TKS itu dipasok oleh Fakultas Teknologi Industri, Universiti Sains

Malaysia (USM). Penelitian ini dilakukan dari Mei 2005 sampai Maret 2006

di Sekolah Ilmu Kimia, Universiti Sains Malaysia (USM).

nitrobenzena oksidasi Oksidasi  nitrobenzena  dilakukan dengan menambahkan 50

mg  lignin  sodakering  menjadi campuran  7 ml  2M  NaOH  dan 4 mL 

nitrobenzena dalam autoklaf baja 15 mL.

Kemudian, otoklaf dipanaskan sampai 165 ° C selama 3 jam dalam penangas

minyak termostat dipanaskan. Setelah otoklaf didinginkan sampai suhu kamar,

campuran tersebut kemudian ditransfer ke cair-cair ekstraktor untuk ekstraksi

kontinyu dengan  kloroform  (5 x20 ml)·  untuk menghapus setiap produk

reduksi  nitrobenzena  nitrobenzena  dan  berlebih.oksidasi campuran  kemudian 

diasamkan  dengan  HCl pekat  sampai pH 3-4 dan selanjutnya diekstraksi dengan

kloroform (5 x 15 mL). 

Pelarut  dari larutan kloroform kedua  kemudian diangkat dengan menggunakan 

rotary evaporator pada suhu 40 ° C di bawah tekanan dikurangi agar memperoleh

nitrobenzena  oksidasi campuran. Campuran tersebut kemudian dilarutkan ke

dalam  dicloromethane  dan yang disusun sampai dengan 10 mL. Campuran

ini kemudian digunakan sebagailarutan stok untuk kinerja tinggi

kromatografi cair (HPLC) analisis [6].

Nitrobenzena  Para · campuran  oksidasi  dianalisa  dengan menggunakan metode

HPLC. 0.2 mL  larutan stok  yang  dipipet  ke dalam labu  volumetrik 25 mL 

asetonitril dan air (1:2 v / v) ditambahkan untuk itu. Sekitar 20 ~ L dari larutan

sampel adalahinjectedinto berikutnya HPLC sistem (Shimatzu) dilengkapi dengan

kolom ikatan CIS Hypersil (partikelsize5J.11,25 mm x 4,6 mm Ld.) Untuk secara

kuantitatif  menentukan komponen  vanilin sementara yang lain komponen 

ditentukan  secara kualitatif. Asetonitril-air (1:8) yang mengandungasetat 1%

asam digunakan sebagai eluen dengan laju alir 2 mL / menit. Eluen ini

kemudiandipantau dengan detektor (ultraviolet) UV pada 280 om .

Kristalisasi Proses 

Produk  oksidasi  nitrobenzena digunakan dalam proses ini. Campuran adalah

dilarutkan dalam aseton dan disusun sampai

dengan 10 mL. Selanjutnya,campuran tersebut  dipanaskan sampai 60 ° C untuk

10 menit menggunakan hot plate. Endapan kemudian disaring dan dicuci dengan

menggunakan aseton.

Kemudian, endapan dianalisis menggunakan Transformasi Fourier infra merah

(FT-IR), inti magnetik resonansi (IH-NMR)  dan kromatografi  cair kinerja

tinggi (KCKT).

Persentase vanillin

Komponen oflignin diperoleh tercantum dalam Tabel 1 dan diberi label menurut

abjad pada Gambar 1. Solusi standar untuk setiap komponen yang

diharapkan untuk hadir dalam lignin disuntikkan ke dalam 3 konsentrasi yang

berbeda,  10 ppm, 100 ppm dan 1000ppm. Ini dilakukan untuk memastikan bahwa

solusi untuk setiap komponen yang samapada konsentrasi yang berbeda memiliki

waktu retensi yang sama. Dari kromatogram HPLC, 6 komponen yang terdeteksi

dalam lignin soda. 

Mereka adalah vanilin, syringaldehyde, hydroxybenzaldehyde, 4hydroxybenzoic

asam, asam vanilat dan asam syringic. Dari analisis kami menemukan bahwa

konsentrasi vanilin dalam 50 mg lignin adalah 0,8032 ppm atau setara dengan1,6

bahkan meskipun  hanya ada  persentase yang rendah  yang hadir vanilin dalam 

lignin, itu adalah cukup  sebagai penelitian menggunakan sampel lignin

dari limbah industri, yaitu lindi hitam. Selain itu, penelitian ini bertujuan untuk

menghasilkan produk baru dari item yang umumnyadiperlakukan sebagai limbah.

Pemisahan proses melalui teknik kristalisasi digunakan untuk memisahkan vanili

dari komponen lain yang ada di lignin. Endapan yang diperoleh dari proses ini

merilis bau mirip dari jenis yang sama untuk vanilin. Analisis dilakukan untuk

menentukan apakah endapan yang diperoleh adalah vanilin. Ini melibatkan

penggunaan infra merah (IR) analisis spektrometri untuk menentukan kelompok

fungsional hadir dalam mengendap. 

Pendekatan ini  dipilih sebagai  pelet endapan  mudah dibentuk dan

tidak hancur ketika IR analisis dilakukan di atasnya. Puncak terbentuk dari IR

analisis juga lebih mudah untuk ditelusuri dan diamati. Karakterisasi · fungsional

untuk sampel endapan ini dilakukan pada 4000-400 cm-! rentang frekuensi.

Spektrum  IR  jelas menunjukkan  karakterisasi  fungsi  utama  beberapa

kelompok dalam struktur vanilin. Sebuah spektrum IR khas sampel endapan dari

proses kristalisasi ditunjukkan pada Gambar 2. Band yang kuat dan luas pada

3471,25 cm-I adalah karakteristik dari kelompok OH atau senyawa fenolik.

Sebuah bagian  dari ini, C-H peregangan cincin aromatik berada

di band cm'l 3230,12. Namun, frekuensitidak menunjukkan  puncak yang

sangat jelas.  Band di 1636,19 cm'l  sesuai dengan yang karbonil yang

kelompok (C == O). Band  Peregangan di 1399.83cm, 1 dan 1338,6 em ')

merupakan karakteristik  OFC-H getaran pada  gugus metil. Sedangkan getaran 

untuk C == C pada cincin aromatik berada pada 692,77 cm'l pita [14]. Gambar

3 menggambarkan struktur vanilin(4-hidroksi-3methoxybenzaldehyde).

Dengan demikian, spektrum dari produk endapan dari kristalisasi diidentifikasi

sebagai vanilin  sebagai  kelompok  fungsi utama dari struktur adalahvanilin

terungkap melalui analisis IR.

Endapan  kemudian dianalisis menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi

(KCKT)  untuk menegaskan kembali  hasil sebagai  dicirikan  oleh analisis IR.

Endapan  adalah dikumpulkan dan dilarutkan dalam larutan aseton dengan air 

(1:2 v/v)  bertindak sebagai pelarut sebelum  analisis dilakukan. 

Akhirnya, 1,0  ppm  sampel  pekat  disuntikkan ke sebuah 

mesin HPLC. Kromatogram menunjukkan puncak pada waktu retensi <Rt) yang

hampir sama dengan waktu retensi standar vanilin dengan konsentrasi yang sama.

Gambar 4 menyajikan kromatogram HPLC dari sampel vanilin dan standar

vanilin.

Spektrum  FT-IH-NMR  diperoleh  dari  operasi  Broker  Avance 300 di

modus FT pada 400 MHz dalam kondisi jumlah proton dipisahkan. Spektrum itu

direkam pada 40° C dari  200 mg  sampel  vanilin  dilarutkan dalam 1

mL CDChsetelah 3.000scan. Sebuah ° 90 pulsa membalik sudut,seorang 26,6 leba

r  JLS pulsa danwaktu akuisisi 1.74s dipekerjakan. Tidak ada perbedaan yang

signifikan  dalam struktur  vanilin diendapkan dari proses kristalisasi

dan vanilin standar berdasarkan LH NMRanalisis(Gambar 5). 

Tidak lengkap pembubaran sampel karena mungkin dari tinggi tak terduga

sinyal / noise ratio. Puncak menunjukkan bahwa pergeseran kimia untuk kedua

vanillins sangat serupa.

1.3.2. Kromatografi

Kromatografi berasal dari kata chroma (warna) dan graphein (penulisan),

Merupakan suatu teknik pemisahan fisika yang memanfaatkan perbedaan yang

kecil dari sifat-sifat fisika komponen yang akan dipisahkan. Teknik kromatografi

telah dikembangkan dan telah digunakan untuk memisahkan dan

mengkuanntifikasi bernagai macam komponen yang kompleks, baik komponen

organic maupun komponen anorgsnik. Kromatografi adalah teknik pemisahan

fisika suatu campuran zat-zat kimia yang berdasarkan pada perbedaan

perpindahan masing-masing komponen campuran yang terpisah pada fase diam

yang dipengaruhi pergerakan fase yang bergerak. Beberapa sifat fisika umum dari

molekul yang dipakai sebagai asas tteknik pemisahan kromatografi adalah:

1. Kecenderungan molekul untuk teradsorbsi oleh partikel-partikel

padatan yang halus.

2. Kecenderungan molekul untuk melarut pada fase cair.

3. Kecenderungan molekul untuk teratsirikan.

1.3.3. Jenis-jenis Kromatografi

Kromatografi dapat dibedakan atas berbagai macam tergantung pada

pengelompokannya. Berdasarkan pada mekanisme pemisahannya, kromatografi

dibedakan menjadi:

1. Partisipasi Kromatografi

2. Adsorbsi Kromatografi

3. Ion Exchanger Kromatografi

4. Gel kromatografi

Berdasarkan alat yang diigunakan, kromatografi dibedakan menjadi:

1. Kromatografi kertas

2. Kromatogari Lapis tipis yang keduanya sering disebut dengan

kromatoggrafi planar

3. Colom Kromatografi

1.3.4. HPLC

HPLC secara mendasar merupakan perkembangan tingkat tinggi dari

kromatografi kolom. Selain dari pelarut yang menetes melalui kolom dibawah

grafitasi,didukung melalui tekanan tinggi sampai dengan 400 atm. Ini

membuatnya lebih cepat. HPLC memperbolehkan penggunaan partikel yang

berukuran sangat kecil untuk material terpadatkan dalam kolom yang mana akan

memberi luas permukaan yang lebih besar berinteraksi antara fase diam dan

molekul-molekul yang melintasinya. Hal ini memungkinkan pemisahan yang

lebih baik dari komponen-komponen dalam campuran. Perkembangan yang lebih

luas melalui kromatografi kolom mempertimbangkan metode pendeteksian yang

dapat digunakan. Metode-metode ini sangat otomatis dan sangat peka.

Kolom dan pelarut.

Membingungkan, ada dua perbedaan dalam HPLC, yang mana tergantung

pada polaritas relatif dari pelarut dan fase diam.

Fase normal HPLC

Ini secara esensial sama dengan apa yang sudah anda baca tentang

kromatografi lapis tipis atau kromatografi kolom. Meskipun disebut sebagai

dengan partikel silika yang sangat kecil dan pelarut non polar misalnya heksan.

Sebuah kolom sederhana memiliki diameter internal 4.6 mm (dan mungkin

kurang dari nilai ini) dengan panjang 150 sampai 250 mm.Senyawa-senyawa

polar dalam campuran melalui kolom akan melekat lebih lama pada silika yang

polar dibanding degan senyawa-senyawa non polar. Oleh karena itu, senyawa

yang non polar kemudian akan lebih cepat melewati kolom

Fase balik HPLC.

Dalam kasus ini, ukuran kolom sama, tetapi silika dimodifikasi menjadi

non polar melalui pelekatan rantai-rantai hidrokarbon panjang pada

permukaannya secara sederhana baik berupa atom karbon 8 atau 18. Sebagai

contoh, pelarut polar digunakan berupa campuran air dan alkohol seperti metanol.

Dalam kasus ini, akan terdapat atraksi yang kuat antara pelarut polar dan

molekul polar dalam campuran yang melalui kolom. Atraksi yang terjadi tidak

akan sekuat atraksi antara rantai-rantai hidrokarbon yang berlekatan pada silika

(fase diam) dan molekul-molekul polar dalam larutan. Oleh karena itu, molekul-

molekul polar dalam campuran akan menghabiskan waktunya untuk bergerak

bersama dengan pelarut.Senyawa-senyawa non polar dalam campuran akan

cenderung membentuk atraksi dengan gugus hidrokarbon karena adanya dispersi

gaya van der Waals. Senyawa-senyawa ini juga akan kurang larut dalam pelarut

karena membutuhkan pemutusan ikatan hydrogen sebagaimana halnya senyawa-

senyawa tersebut berada dalam molekul-molekul air atau metanol misalnya. Oleh

karenanya, senyawa-senyawa ini akan menghabiskan waktu dalam larutan dan

akan bergerak lambat dalam kolom.Ini berarti bahwa molekul-molekul polar akan

bergerak lebih cepat melalui kolom.Fase balik HPLC adalah bentuk yang biasa

digunakan dalam HPLC.

Diagram alir HPLC

Injeksi sampel.

Injeksi sample seluruhnya otomatis dan anda tidak akan mengharapkan

bagaimana mengetahui apa yang terjadi pada tingkat dasar. Karena proses ini

meliputi tekanan, tidak sama halnya dengan kromatografi gas.

Waktu retensi.

Waktu yang dibutuhkan oleh senyawa untuk bergerak melalui kolom

menuju detektor disebut sebagai waktu retensi. Waktu retensi diukur berdasarkan

waktu dimana sampel diinjeksikan sampai sampel menunjukkan ketinggian

puncak yang maksimum dari senyawa itu. Senyawa-senyawa yang berbeda

memiliki waktu retensi yang berbeda. Untuk beberapa senyawa, waktu retensi

akan sangat bervariasi dan bergantung pada: tekanan yang digunakan (karena itu

akan berpengaruh pada laju alir dari pelarut). kondisi dari fase diam (tidak hanya

terbuat dari material apa, tetapi juga pada ukuran partikel), komposisi yang tepat

dari pelarut, temperatur pada kolom.

Itu berarti bahwa kondisi harus dikontrol secara hati-hati, jika anda

menggunakan waktu retensi sebagai sarana untuk mengidentifikasi senyawa-

senyawa.

Detektor.

Ada beberapa cara untuk mendeteksi substansi yang telah melewati kolom.

Metode umum yang mudah dipakai untuk menjelaskan yaitu penggunaan serapan

ultra-violet.Banyak senyawa-senyawa organik menyerap sinar UV dari beberapa

panjang gelombang. Jika anda menyinarkan sinar UV pada larutan yang keluar

melalui kolom dan sebuah detektor pada sisi yang berlawanan, anda akan

mendapatkan pembacaan langsung berapa besar sinar yang diserap.

Jumlah cahaya yang diserap akan bergantung pada jumlah senyawa

tertentu yang melewati melalui berkas pada waktu itu. Anda akan heran mengapa

pelarut yang digunakan tidak mengabsorbsi sinar UV. Pelarut menyerapnya!

Tetapi berbeda, senyawa-senyawa akan menyerap dengan sangat kuat bagian-

bagian yang berbeda dari specktrum UV. Misalnya, metanol, menyerap pada

panjang gelombang dibawah 205 nm dan air pada gelombang dibawah 190 nm.

Jika anda menggunakan campuran metanol-air sebagai pelarut, anda sebaiknya

menggunakan panjang gelombang yang lebih besar dari 205 nm untuk mencegah

pembacaan yang salah dari pelarut.

Interpretasi output dari detektor.

Output akan direkam sebagai rangkaian puncak-puncak, dimana masing-

masing puncak mewakili satu senyawa dalam campuran yang melalui detektor

dan menerap sinar UV. Sepanjang anda mengontrol kondisi kolom, anda dapat

menggunakan waktu retensi untuk membantu mengidentifikasi senyawa yang

diperoleh, tentunya, anda (atau orang lain) sudah mengukur senyawa-senyawa

murninya dari berbagai senyawa pada kondisi yang sama.

Anda juga dapat menggunakan puncak sebagai jalan untuk mengukur kuanti?tas

dari senyawa yang dihasilkan. Mari beranggapan bahwa tertarik dalam senyawa

tertentu, X. Jika anda menginjeksi suatu larutan yang mengandung senyawa murni

X yang telah diketahui jumlahnya pada instrumen, anda tidak hanya dapat

merekam waktu retensi dari senyawa tersebut, tetapi anda juga dapat

menghubungkan jumlah dari senyawa X dengan puncak dari senyawa yang

dihasilkan.

Area yang berada dibawah puncak sebanding dengan jumlah X yang

melalui detektor, dan area ini dapat dihitung secara otomatis melalui layar

komputer. Area dihitung sebagai bagian yang berwarna hijau dalam gambar

(sangat sederhana). High-performance liquid chromatography ( HPLC) adalah

suatu format kolom chromatography yang sering digunakan di ilmu kimia organik

dan biokimia. HPLC digunakan untuk memisahkan komponen dari suatu

campuran menggunakan berbagai interaksi kimia antara unsur yang sedang

dianalisa dan chromatography column. RP-HPLC bekerja dengan prinsip

hydrophobic interaksi yang diakibatkan oleh kakas tolak antara suatu bahan

pelarut non-polar, analyte non-polar, dan fase keseimbangan non-polar.

HPLC, yang dalam bahasa Indonesia berarti ‘Kromatografi Cair Kinerja

Tinggi’ memiliki fasa gerak cair dan fasa diam cair amupun padat. Laju aliran

fasa gerak pada HPLC ini dipercepat dengan pompa bertekanan tinggi. Sebelum

1970′s, hanya sedikit chromatographic yang di pakai oleh masyarakat umum,

hanya tersedia untuk ilmuwan laboratorium. Selama 1970, kebanyakan separasi

kimia dilaksanakan menggunakan berbagai teknik mencakup open-column

chromatography, kertas chromatography, dan thin-layer chromatography.

Bagaimanapun, kromatografi ini tidak cukup untuk hitungan resolusi dan

campuran antara campuran yang serupa. Selama waktu ini, cairan tekanan

chromatography mulai untuk digunakan untuk mengurangi flowthrough waktu,

kemudian mengurangi pemurnian jam campuran yang sedang terisolasi oleh

kolom chromatogaphy. Bagaimanapun, laju alir tidaklah konstant, dan pertanyaan

apakah menjadi lebih baik untuk mempunyai tekanan tetap atau laju alir tetap

diperdebatkan.

Sekarang ini, orang mempunyai pilihan dalam mempertimbangkan jenis

kolom untuk pemisahan campuran, seperti halnya berbagai detektor untuk

menghubungkan dengan HPLC dalam rangka mendapatkan analisa optimal

(menyangkut) campuran itu. Kita berharap tinjauan ulang ini akan menyediakan

suatu acuan semua tingkat HPLC para pemakai yang akan mampu menemukan

jawab cepat mengenai permasalahan permasalahan HPLC. Walaupun HPLC

secara luas dianggap sebagai suatu teknik utama untuk biotechnological,

biomedical, dan riset biokimia seperti halnya untuk industri yang berkenaan

dengan farmasi, bidang ini saat ini berisikan hanya sekitar 50% Hplc Users.

Sekarang Ini HPLC digunakan oleh berbagai bidang yang mencakup kosmetik,

energi, makanan, dan industri.

. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) atau High Pressure Liquid

Chromatography (HPLC) merupakan salah satu metode kimia dan fisikokimia.

KCKT termasuk metode analisis terbaru yaitu suatu teknik kromatografi dengan

fasa gerak cairan dan fasa diam cairan atau padat. Banyak kelebihan metode ini

jika dibandingkan dengan metode lainnya. Kelebihan itu antara lain:

• mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu campuran

• mudah melaksanakannya

• kecepatan analisis dan kepekaan yang tinggi

•dapat dihindari terjadinya dekomposisi / kerusakan bahan yang dianalisis

• Resolusi yang baik

• dapat digunakan bermacam-macam detektor

• Kolom dapat digunakan kembali

• mudah melakukan "sample recovery"

BAB II

PROSEDUR KERJA

2.1. Alat dan Bahan

a. Alat yang digunakan

Seperangkat alat Hight Liquid Performance Chromatography yang

dilengkapi:

- Wadah fase gerak

- Pompa

- Unit injeksi

- Kolom

- Detektor

- Corong buchner

- pump reset

b. Bahan yang digunakan

- Campuran CH3-Buffer KH2PO4 0,005 M, pH 4,8 perbandingan 12:88

2.2. Prosedur Kerja

Cara pembuatan fase gerak yaitu :

- Fase gerak dicampur (campuran CH3-Buffer KH2PO4 0,005 M, pH 4,8

perbandingan 12:88)

- Disaring dengan Buchner filter.

- Digasing dengan ultrasonik cleaner untuk menghilangkan gas pada fase

gerak.

Set semua alat

- Kecepatan aliran pada 0 ml permenit

- Tekanan pada 0 kgf/cm2.

- Diset UV-Visible spektrofotometry detector pada panjang gelombang 254

nm.

- Dipakai lamp D2.

- Ditekan tombol absorbansi dan reson standart (kepekaan absorbabsi 0,02 )

- Dihubungkan sisitem dengan arus listrik.

- Power detector UV-Visible spektrofotometry ke posisi ON.

- Power recorder ke posisi ON.

- Drain valve diputar ke kiri.

- Pada ujung pipa pembuangan dipasang disposable syringe.

- Flow rate diatur pada 5 ml/menit.

- Pump pada posisi ON sambil diisap dengan disposible syringe untuk

mempece pat keluarnya udara dari pada cairan pembawa.

- Setelah 10 ml pump dimatikan.

- Dispossible syringe dilepaskan dari ujung pipa.

- Ujung pipa dimasukkan ke dalam erlenmeyer.

- Pump ke posisi ON lagi untuk memastikan udara tidak ada lagi dalam pipa

aliran.

- Lalu pimp diset ke OFF.

- Katup pembuangan ditutup (diputar ke arah kanan).

- Lalu flow rate dinaikkan ke 1 ml/menit.

- Hidupkan pump, tekanan akan naik sampai kira-kira 1 X 100 kgf/cm2,

cairan carrier mengalir injector

- Analisa dilakukan pada flow rate 2 ml/menit

Mencheck stabil tidaknya alat

- Dicari base line dengan menekan tombol ZERO pada detektor.

- Diturun kan posisi pen.

- Posisi drive ke ON.

Injeksi Fase Gerak

- Ditekan tombol ZERO.

- Ditekan tombol MARK.

- Untuk injeksi, injektor diputar ke posisi LOAD.

- Dimasukkan fase gerak ke dalam injektor ke posisi inject.

- Dihidupkan chart drive.

Injeksi Serum

- Ditekan tombol ZERO.

- Ditekan tombol MARK.

- Injektor diputar ke posisi LOAD.

- Dimasukkan serum ke dalam injektor dengan syringe.

- Injektor diputar ke posisi inject.

- Dihidupkan chart drive.

Mematikan Alat

- Recorder ke posisi OFF.

- UV-Visible spektrophotometry ke posisi OFF.

- RID ke posisi OFF.

- Pump ke posisi OFF.

- Flow rate diturunkan 1 ml/menit.

- Pump dihidupkan lagi kemudian diatur ke OFF lagi.

- Flow rate diturunkan perlahan-lahan hingga 0 ml/menit.

- Lalu kolom dicuci dengan CH3OH.

BAB III

GAMBAR RANGKAIAN

3.1. Gambar Peralatan

Seperangkat alat Hight Liquid Performance Chromatography (HPLC).

3.2. Gambar Rangkaian

3.3. Keterangan Gambar Rangkaian

1. Wadah fase gerak

2. Pompa

3. Unit injeksi

4. Kolom

BAB IV

DATA PENGAMATAN

Tabel Analisis Obat-obatan

Kadar Paracetamol

No

Konsentrasi std

Paracetamol (ppm)

%

Intensitas

Area

X Y

1 1 758

2 2 1540

3 3 2270

4 4 3035

5 5 3775

Kadar Sampel

No

Berat

sampel

(gr)

Nama

sampel

Intensity

Area

1 0.5 Bodrex 3136

2 0.5 Mixagrip 1930

3 0.5 Panadol 4445

4 0.5 Poldanmig 4510

BAB V

PENGOLAHAN DATA

No

Konsentrasi

std

Paracetamol

X

%

Intensitas

Area

Y

XY X2 Y2

1 1 758 758 1 574564

2 2 1540 3080 4 2371600

3 3 2270 6810 9 5152900

4 4 3035 12140 16 9211225

5 5 3775 18875 25 14250625

Σ 15 11378 41663 55 31560914

a. Kurva Kalibrasi

b.1. Koefisien korelasi dan determinasi

X = 3

Ȳ = 2275,6

=

=

=

752,9

Ȳ = a + bX

a = Ȳ – b X

= 2275,6 – 752,9(3)

= 16,9

Maka dari hasil perhitungan yang diperoleh didapat persamaan regresi

Y = a + bX menjadi Y = 16,9 + 752,9X.

b.2. Koefisien korelasi dan determinasi

R =

=

=

R = 0,9999

R2 = 0,9998

b.3. Konsentrasi Parasetamol dalam Sampel

Y = a + bX

X =

Untuk Bodrex

X = = 4,14 ppm

Untuk Mixagrip

X = = 2,54 ppm

Untuk Panadol

X = = 5,88 ppm

Untuk Poldanmig

X = = 5,97 ppm

b.4. Konsentrasi Paracetamol (% )

% = x 100 %

Untuk Bodrex

% = x 100 %

= 0,828 %

Untuk Mixagrip

% = x 100 %

= 0,508 %

Untuk Panadol

% = x 100 %

= 1,176 %

Untuk Poldanmig

% = x 100 %

= 1,194 %

BAB VI

KESIMPULAN DAN SARAN

6.1. Kesimpulan

Dari data percobaan spektofotometer HPLC yang telah dilakukan dapat

diambil kesimpulan bahwa :

1. Dari hasil perhitungan Koefisien Korelasi Konsentration -vs- Emisi

diketahui bahwa hubungan antar variable kuat yaitu semakin besar

konsentrasi unsure dalam larutan maka semakin banyak sinar yang

diabsorbsi oleh unsure tersebut. Dimana didapat harga R = 0,9999 dan

R2 = 0,9998

2. Hasil perhitngan persamaan regresi linier sederhana dimana Y = a +

bX adalah Y = 16,9 + 752,9X.

3. Semakin besar luas permukaan sampel maka kensentrasinya semakin

besar pula sreta emisinya semakin besar.

4. Konsentrasi paracetamol dalam sampel yang paling tinggi adalah pada

obat Poldanmig yaitu sebesar 5,97 ppm.

5. Semakin besar luas area sampel maka semakin besar pula

konsentrasinya.

6.2. Saran

Dalam melakukan praktikum,harus lebih teliti dan hati-hati agar diperoleh

hasil yang maksimal.

DAFTAR PUSTAKA

Ir.Adil Barus. 2012. Chemistry Diktat Kimia Analisa Instrument. PTKI. Medan

Juna, Sihombing. 2012. Penuntun Praktikum Kimia Analisa Instrument. PTKI.

Medan

Mastuti, Retno. 2010. Identifikasi Pigmen Betasianin Pada Beberapa Jenis

Inflorescence Celosia. The University of Hongkong.