laporan praktikum analisis instrumen-hplc

LAPORAN PRAKTIKUM ANALISIS INSTRUMEN

KELOMPOK 1D

Anggota :

Rahmi Sertiana N. A. 1111102000085

Subhan Asfari

1111102000086

Ambar Khaerinnisa 1111102000090

Ichsana Eskha Widya 1111102000092

Nindya Nurfitriani A. 1111102000095

Sri Puji Astuti

1111102000097

M.A.W. Khairurrijal 1111102000102

Beryl Zahyin Adyani 1111102000106

Ana Yuliana

1111102000109

Hestiawati

1111102000110

Niekha Zoelienna I. 1111102000111

Raaflyan Wahyu P. 1111102000112

Khairunnisa

1111102000113

Andis Saputra

1111102000119

Khairul Bahtiar A. 1111102000117

Program Studi Farmasi

Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan

Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah

Jakarta Landasan Teori

KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI

Kromatografi cair kinerja tinggi(KCKT) atau biasa disebut dengan HPLC(High Performance Liquid Chromatography) dikembangkan pada akhir tahun 1960-an dan awal tahun 1970-an. Saat ini, KCKT merupakan teknik pemisahan yang diterima secara luas untuk analisis dan pemurnian senyawa tertentu dalam suatu sampel pada sejumlah bidang, antara lain farmasi, lingkungan, bioteknologi, polimer, dan industri-industri makanan.

Kegunaan umum KCKT adalah untuk pemisahan sejumlah senyawa-senyawa organik, anorganik, maupun senyawa biologis; analisis ketidakmurnian(impuritis); analisis senyawa-senyawa yang tidak menguap(non-volatil); penentuan molekul-molekul netral,ionik, maupun zwitter ion; isolasi dan pemurnian senyawa; pemisahan senyawa-senyawa yang strukturnya hampir sama; pemisahan senyawa-senyawa dalam jumlah sekelumit (trace elements), dalam jumlah banyak, dan dalam skala proses industri.

Cara Kerja KCKT

Kromatografi merupakan teknik yang mana solut atau zat-zat terlarut terpisah oleh perbedaan kecepatan elusi, dikarenakan solut-solut ini melewati suatu kolom kromatografi. Pemisahan solut-solut ini di atur oleh distribusi solut dalam fase gerak dan fase diam.

Prinsip kerja instumentasi HPLC

HPLC menggunakan fasa gerak untuk memisahkan komponen dari sebuah campuran komponen (analit). Prinsip keja HPLC adalah pemisahan setiap komponen dalam sampel berdasarkan kepolarannya. Yang paling membedakan HPLC dengan kromatografi lainnya adalah pada HPLC digunakan tekanan tinggi untuk mendorong fasa gerak. Fasa diam yang biasa digunakan (pada kolom) HPLC jenis fasa terbalik adalah RMe2SiCl, dimana R adalah rantai alkana C-18 atau C8. Sementara fasa geraknya berupa larutan yang diatur komposisinya (gradien elusi), misalnya : air:asetonitril (80:20), hal ini bergantung pada kepolaran analit yang akan dipisahkan. Campuran analit akan terpisah berdasarkan kepolarannya, dan waktu retensinya akan berbeda, hal ini akan teramati pada spektrum yang punsak-puncaknya terpisah.

Instrumentasi KCKT pada dasarnya terdiri atas delapan komponen pokok, yaitu: wadah fase gerak, sistem penghantaran fase gerak, alat untuk memasaukan sampel, kolom, detektor, wadah penampung buangan fase gerak, tabung penghubung, dan suatu computer atau integrator atau perekam.

Gambar KCKT secara umum

1. Wadah fase gerak

Wadah fase gerak harus bersih dan lembam(inert). Wadah pelarut kosong ataupun labu laboratorium dapat digunakan sebagai wadah fase gerak.Wadah ini biasanya dapat menampung fase gerak antara 1-2 liter pelarut. Fase gerak sebelum digunakan harus dilakukan degassing(penghilangan gas) yang ada fase gerak. Sebab adanya gas akan berkumpul dengan komponen lain terutama di pompa dan detector sehingga akan mengacaukan analisis.

2. Fase gerak

Fasa gerak dari HPLC merupakan zat cair yang disebut eluen atau pelarut. Berfungsi untuk membawa komponen-komponen campuran menuju ke detektor, selain itu juga dapat berinteraksi dengan solut-solut. Oleh karena itu, fasa gerak dalam HPLC merupakan salah satu faktor penetu keberhasilan proses pemisahan. Persyaratan zat cair yang akan digunakan sebagai fasa gerak sebagai berikut:

a) Zat cair harus bertindak sebagai pelarut yang baik untuk cuplikan yang akan dianalisis

b) Zat cair harus murni, untuk menghindari masuknya kotoran yang dapat mengganggu interpretasi kromatogram

c) Zat cair harus jernih, untuk meghindari penyumbatan pada kolom

d) Zat cair harus mudah diperoleh, murah, tidak mudah terbakar dan tidak beracun

e) Zat cair tidak kental dan harus sesuai dengan detektor

Fasa gerak sebelum digunakan harus disaring terlebih dahulu untuk menghindari partikel-partikel kecil. Selain itu adanya gas dalam fasa gerak juga harus dihilangkan, sebab adanya gas akan berkumpul dengan komponen lain terutama di pompa dan detektor sehingga akan mengacaukan analisis.

Elusi dapat dilakukan dengan cara isokratik (komposisi fasa gerak tetap selama elusi) atau dengan cara bergradien (komposisi fase gerak berubah-ubah selama elusi) yang analog dengan pemrograman suhu pada kromatografi gas. Elusi bergradien digunakan untuk meningkatkan resolusi campuran yang kompleks terutama jika sampel mempunyai kisaran polaritas yang luas.

Fase gerak yang paling sering digunakan untuk pemisahan dengan fase terbalik adalah campuran larutan buffer dengan metanol atua campuran air dengan asetonitril. Untuk pemisahan dengan fase normal, fasa gerak yang paling sering digunakan adalah campuran pelarut-pelarut hidrokarbon dengan pelarut yang terklorisasi atau menggunakan pelarut-pelarut jenis alkohol. Pemisahan dengan fase normal ini kurang umum dibanding fase terbalik.

3. Pompa

Pompa yang cocok digunakan untuk KCKT adalah pompa yang mempunyai syarat sebagaimana syarat wadah pelarut yakni pompa harus inert terhadap fase gerak. Bahan yang umum dipakai untuk pompa adalah gelas, baja tahan karat, teflon, dan batu nilam. Pompa yang digunakan sebaiknya mampu memberikan tekanan sampai 5000 psi dan mampu mengalirkan fase gerak dengan kecepatan alir 3 mL/menit. Untuk tujuan preparatif, pompa yang digunakan dengan kecepatan 20mL/menit.

Tujuan pengggunaan pompa atau sistem penghantaran fase gerak adalah menjamin proses penghantaraan fase gerak berlangsung secara tepat, reprodusibel, konstan, dan bebas dari pengguan. Ada 2 jenis pompa dalam KCKT yaitu: pompa dengan tekanan konstan dan pompa dengan aliran fase gerak yang konstan. Tipe pompa dengan aliran fase gerak yang konstan ini lebih umum dibandingkan dengan tipe pompa dengan tekanan konstan.

Dikenal 3 jenis pompa yang masing-masing memiliki keuntungan yaitu :

a) Pompa Reciprocating

Pompa ini terdiri dari ruangan kecil tempat pelarut yang dipompa dengan cara gerakan piston maju mundur yang dijalankan oleh motor. Gerakan piston memberikan aliran eluen yang konstan, memiliki volume internal kecil (35-400 mL) menghasilkan tekanan tinggi (sampai 10.000 psi). Piston berupa batang gelas dan berkontak lengsung dengan pelarut.

b) Pompa Displacement

Pompa ini menyerupai syringe (alat suntik) tersiri dari tabung yang dilengkapi pendorong yang digerakkan oleh motor. Menghasilkan aliran yang cenderung tidak tergantung pada tekanan balik kolom dan viskositas pelarut. Memiliki keterbatasan kapasitas pelarut ( SHAPE \* MERGEFORMAT

250 mL) dan tidak mudah untuk pergantian pelarut.

c) Pompa Pneumatic

Dalam pompa ini pelarut didorong oleh gas bertekanan tinggi.Pompa jenis ini murah, tetapi memiliki keterbatasan kapasitas dan tekanan yang dihasilkan ( 2000 dalton. Fase diam yang digunakan dapat berupa silika atau polimer yang bersifat porus sehingga solut dapat melewati porus (lewat diantara partikel), atau berdifusi lewat fase diam. Molekul solut yang mempunyai BM yang jauh lebih besar, akan terelusi terlebih dahulu, kemudian molekul-molekul yang ukuran medium, dan terakhir adalah molekul yang jauh lebih kecil. Hal ini disebabkan solut dengan BM yang besar tidak melewati porus, akan tetapi lewat diantara partikel fase diam. Dengan demikian, dalam pemisahan dengan eksklusi ukuran ini tidak terjadi interaksi kimia antara solut dan fase diam seperti tipe kromatografi yang lain. (Meyer, 2004)

6.Kromatografi Afinitas

Dalam kasus ini, pemisahan terjadi karena interaksi-interaksi biokimiawi yang sangat spesifik. Fase diam mengandung gugus-gugus molekul yang hanya dapat menyerap sampel jika ada kondisi-kondisi yang terkait dengan muatan dan sterik tertentu pada sampel yang sesuai (sebagaimana dalam interaksi antara antigen dan antibodi).

Kromatografi jenis ini dapat digunakan untuk mengisolasi protein (enzim) dari campuran yang sangat kompleks. (Meyer, 2004)

PARACETAMOL (ACETAMINOPHEN)

Paracetamol mengandung tidak kurang dari 98,0% dan tidak lebih dari 101,0% C8H9NO2, dihitung terhadap zat anhidrat

BM: 151,16

Pemeriaan: Serbuk hablur, putih, tak berbau, rasa sedikit pahit

Kelarutan: Larut dalam air mendidih dan dalam NaOH 1N, mudah larut dalam etanol

Titik lebur: 168-172oC

Penyimpanan: disimpan di dalam wadah tertutup rapat dan tidak tembus cahaya

(anonym, 1995)

Acetaminophen atau Parasetamol adalah obat analgetik dan antipiretik yang digunakan untuk melegakan sakit kepala, sengal-sengal atau sakit ringan dan demam. Parasetamol digunakan dalam sebagian resep obat analgetik selesma dan flu. Berbeda dengan obat analgetik yang lain seperti aspirin dan ibuprofen, parastamol tidak memiliki sifat antiradang.

Parasetamol merupakan derivate dari asetanilida yang efek enalgetiknnya dapat diperkuat dengan koffein dengan kira-kira 50% dan codein. Overdose dapat menimbulkan antara lain mual, muntah dan anoreksia. Penanggulangannya dengan cuci lambung, juga perlu diberikan zat-zat penawar (asam amino N-asetilsistein atau metionin) sedini mungkin, sebaiknya 8-10 jam setelah intoksikasi. Penggunaan parasetamol dalam dosis besar dan dalam jangka waktu yang lama dapat menyebabkan kerusakan pada hati, untuk itu parasetamol dikontraindikasikan untuk pasien dengan gangguan fungsi hati berat. Wanita hamil dapat menggunakan parasetamol dengan aman, juga selama laktasi walaupun mencapai susu ibu. Interaksi dengan dosis tinggi memperkuat efek antikoagulansia dan pada dosis biasa tidak interaktif ( Tjay, 2000). Parasetamol adalah senyawa yang memiliki sifat polar dan gugus kromofor yang dimilikinya menyebabkan senyawa ini dapat menyerap sinar UV. (Sani Ali, 2012)

Metode KerjaA. Judul Praktikum

High Performance Liquid Chromatography (HPLC) / kromatografi cair kinerja tinggiB. Tempat dan tanggal praktikum

Laboratorium PNA, 1 dan 8 Oktober 2013

C. Alat dan Bahan

Beker glass

Labu erlenmeyer

Labu ukur

Mikropipet

Membran filter

Syringe

Pipet tetes

Gelas vial

HPLC

Aquadest

Paracetamol

Coffein

KPOH4 Dapar fosfat

Etanol

D. Prosedur Kerja

1. Pembuatan larutan standar campuran kafein dan parasetamol

Buat pengenceran dari larutan induk masing-masing larutan parasetamol dan kafein.

Labu ukur 10 ml disiapkan sebanyak dua buah. Lakukan pengenceran untuk mendapatkan 6 ppm kafein dan 10 ppm parasetamol.

Lalu kedua larutan dicampur hingga homogen.

Larutan campuran dianalisis menggunakan HPLC, dengan optimasi yang sesuai.

Diamati waktu retensi standar dan luas area dibawah kurva kromatogram.

2. Analisis kualitatif larutan kafein dan parasetamol

Ditimbang masing-masing 5,0 mg kafein dan parasetamol

Dimasukkan ke dalam labu terukur 50 mL

Ditambahkan aquadest hingga batas tanda, sehingga didapat larutan kafein dan larutan parasetamol dengan konsentrasi 100 g/mL (larutan induk)

Encerkan masing-masing larutan induk, hingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 10 g/mL.

Lalu masing-masing larutan dianalisis menggunakan HPLC, dengan optimasi yang sesuai.

Diamati waktu retensi standar dan luas area dibawah kurva kromatogram.

3. Pembuatan larutan standar Kafein dan Parasetamol untuk kurva kalibrasi

Buat 5 seri standar yang terdiri dari campuran parasetamol dan kafein dengan konsentrasi tertentu.

Larutan standarParasetamolKafein

1106

2128

31410

41612

51814

4. Penetapan kadar sampel dalam sediaan yang beredar

Ditimbang satu tablet sediaan yang mengandung paracetamol dan kafein. Lalu digerus.

Serbuk dilarutkan menggunakan pelarut yang sesuai (air), cukupkan hingga 100mL.

Dibuat larutan dengan konsentrasi 14 ppm untuk mengukur kadar PCT

Dibuat larutan dengan konsentrasi 10 ppm untuk mengukur kadar kafein

Lalu masing-masing larutan dianalisis menggunakan HPLC, dengan optimasi yang sesuai.

Hasil kromatorgram berupa waktu retensi dan luas area dibawah kurva diamati.

Hasil dan Pembahasan

KUALITATIF

HasilStandar Eksternal

NoNama PeakWaktu Retensi (menit)Tinggi

(mAU)Area

(mAU x menit)

1Standar Parasetamol (10 ppm)1,6327,9422,463

2Standar Kofein (10 ppm)4,3446,7139,372

Sampel Campuran

NoNama PeakWaktu Retensi (menit)Tinggi

(mAU)Area

(mAU x menit)

1Senyawa 11,7237,6023,232

2Senyawa 23.7347,75115,231

Perhitungan Kadar

Karena waktu retensi senyawa 1 hampir sama dengan parasetamol, maka senyawa 1 dianggap parasetamol.

Serta karena waktu retensi senyawa 2 hampir sama dengan kofein, maka senyawa 2 dianggap dianggap.

Pembahasan

Pada praktikum ini digunakan HPLC/KCKT untuk analisis paracetamol, coffein, serta sampel campuran dari paracetamol dan coffein secara kualitatif. Fase gerak yang digunakan adalah campuran KH2PO4, metanol, dan asetonitril dengan perbandingan 90 ml: 6 ml : 4 ml. Sedangkan Okta Desil Silan (C18) digunakan sebagai fase diam. Penggunaan campuran eluen atau fase gerak yang sedemikian rupa merupakan hasil dari pengalaman pemisahan campuran parasetamol dengan kofein. Dapar fosfat (KH2PO4) pH 4,5 digunakan karena kedua senyawa tersebut stabil dalam kondisi yang sedikit asam. Campuran metanol dengan asetontril akan mengkondisikan sistem eluen bersifat semi polar, hal tersebut terkait sifat kepolaran senyawa yang dianalisis. Parasetamol dan kofein bersifat semi polar karena mengandung gugus yang memiliki elektron bebas (sehingga bersifat polar), sekaligus memiliki struktur siklik yang bersifat nonpolar.Fase diam yang berupa okta desil silan (C18) bersifat nonpolar. Kombinasi dari sistem eluent dan adsorban (fase diam) akan menimbulkan proses tarik menarik solute pada sampel diantara keduanya sehubungan dengan kemiripan dari sifat kepolaran solute dengan eluent dan adsorben. Hasilnya berupa waktu retensi yang bersifat khas dari senyawa tertentu dalam solute terhadap sistem KCKT yang digunakan.

Detektor yang digunakan berupa detektor UV-Vis dengan pertimbangan bahwa senyawa yang dianalisis memiliki gugus kromofor. Panjang gelombang yang digunakan adalah 215 nm, suhu 27.30C-27.50C, dan volume alir 0,7 ml/menit. Pengkondisian sistem kromatografi ini diadaptasi dari hasil pengalaman optimasi untuk memisahkan sampel campuran parasetamol-kofein serta disesuaikan dengan campuran eluen dan adsorban yang digunakan. Sehubungan dengan telah diketahuinya komponen dalam sampel, maka elusi digunakan dengan sistem isokratik, dimana gradien persentasi komponen eluen selalu sama.

Sebelum dilakukan pengujan terhadap sampel campuran, dibuat larutan standar dari komponen sampel tersebut. Metode analisis ini menggunakan standar eksternal karena kadar komponen sampel cukup besar dan dalam rentang deteksi teliti instrument analisis yang digunakan. Dibuat larutan standar parasetamol dan kofein dengan kadar masing-masing 10 ppm. Medium pelarut yang digunakan untuk pembuatan standar adalah aquades terkait ketidaktersediaan aquades.Untuk meminimalisasi keikutsertaan pengotor saat analisis, standar disaring terlebih dahulu dengan penyaring mikro.Selanjutnya standar dianalisis menggunakan KCKT dengan sistem instrument yang telah dipersiapkan sebelumnya, untuk menentukan waktu retensi masing-masing senyawa. Diketahui bahwa waktu retensi parasetamol pada sistem KCKT ini adalah 1,63 menit dengan luas area di bawah kurva 2,463 mAU*menit sedangkan kofein 4,34 menit dengan luas area di bawah kurva 9,372 mAU*menit. Waktu retensi akan menjadi acuan untuk menentukan identitas peak yang dihasilkan pada kromatogram hasil analisis sampel campuran. Dari hasil analisis larutan standar, dihasilkan bentuk kromatogram berbahu (shoulder) dengan sedikit tailing. Hal ini disebabkan oleh terlalu banyak pengotor yang ikutserta dalam proses analisis dengan KCKT.

Selanjutnya dilakuan analisis sampel campuran parasetamol.Waktu retensi yang dihasilkan pada peak 1 adalah 1.72 menit dengan luas area di bawah kurva 3.232 (mAU*min) dan peak 2 adalah 3.73 (menit) dengan luas area dibawah kurva 15.231 (mAU*min).Bentuk kromatogram yang dihasilkan adalah bentuk berbahu (shoulder) dengan sedikit tailing.Kemudian dibandingkan waktu retensi standar dengan waktu retensi sampel.Dilihat dari kedekatan nilai (waktu retensi), diputuskan bahwa peak 1 merupakan parasetamol dan peak 2 merupakan kofein.Dilihat dari perbandingan waktu retensi standard dan sampel, terjadi perubahan yang cukup signifikan.Perubahan ini mungkin terjadi karena terjadi reaksi antara komponen sampel dengan campuran eluen yang didukung dengan kondisi sistem saat analisis.Reaksi tersebut mungkin menghasilkan produk yang secara struktur kimia berbeda dengan senyawa sampel yang selanjutnya berimplikasi pada perubahan waktu retensi.Selain itu ketidakstabilan temperature kolom meningkatkan viskositas eluent serta kelarutan senyawa dalam sampel.Perubahan viskositas eluent serta kelarutan senyawa sampel mendukung perubahan waktu retensi pada setiap kali analisis.

Selain melakukan uji kualitatif terhadap sampel, dilakukan pula uji kuantitatif terhadap kadar komponen dalam sampel campuran. Penghitungan kadar dapat dilakukan dengan membandingkan luas area dibawah kurva pada komponen sampel terhadap luas area kurva pada standar, dikali dengan konsentrasi standar. Dengan cara tersebut, diperoleh kadar parasetamol pada sampel campuran sebesar 13,122 ppm dan kofein sebesar 16,252. Untuk memastikan tingkat kepercayaan analisis, perlu dilakukan uji validasi terhadap data hasil analisis.KUANTITATIF

A. Pembuatan seri standar

Larutan induk 1000 ppm

1. Konsentrasi 4 ppm

M1 X V1 = M2 X V2

100 ppm X V1 = 4 ppm X 5 mL

V1 = 0,2 mL = 200 L


M1 X V1 = M2 X V2


V1 = 0,3 mL = 300 L3. Konsentrasi 8 ppm

M1 X V1 = M2 X V2


V1 = 0,4 mL = 400 L


M1 X V1 = M2 X V2

100 ppm X V1 = 10 ppm X 5 mL

V1 = 0,5 mL = 500 L


M1 X V1 = M2 X V2

100 ppm X V1 = 12 ppm X 5 mL

V1 = 0,6 mL = 600 L

Hasil Kromatogram1. Optimasi

Volume injection: 10 Run time

: 7 menit Panjang gelombang: 215 nm Dtektor

: Uv-Vis Jenis kolom

: Silika C18 Jenis pelarut: - Kalium dihidrogen fosfat 90% Methanol 4% Asetonitril 6%2. Uji Kualitatif (Data terlampir)

a. Parasetamol

Ret. Time (min)Height (MAU)Area MAU*minRel.Area%Type

1.6327.9422.46366.69BMB

b. Kafein


4.3446.7319.37274.91BM

c. Campuran


1.7237.6023.23215.89M

3.7347.75115.23174.89MB

3. Uji Kuantitatif kadar Sampel yang beredar (Data Terlampir)

a. Persamaan linier Parasetamol dan Kafein

StandarKonsentrasi (ppm)Luas Area (mAU*min)PlatesAsymResolusi

PCTKafeinPCTKafeinPCTKafeinPCT KafeinPCT Cafeiin

110610.4873.592256836812,972,419,12-

212814.2318.531198624053,103,319.58-

3141021.1706.520242943863,301,4410,50-

4161223.61312.344269644503,443,339,74-

5181429.76313.309234741533,332,509,84-

b. Penetapan kadar parasetamol (10 ppm) dalam Panadol

Diketahui :kadar pada etiket 500 mg

Luas area mAU*min = y = 90,208

Persamaan regresi untuk parasetamol ( y = 2,3967x 13,701

90.208 = 2,3967x 13,701

Konsentrasi sebelum pengenceran = 43,355 ppm X faktor pengenceran

= 43,355 ppm x = 21677,5 ppm

c. Penetapan kadar kafein (10 ppm) dalam Panadol



Persamaan regresi untuk kafein ( y = 1,1624 x 2,7643

10,055 = 1,1624 x 2,7643

Konsentrasi sebelum pengenceran = 11.0283 ppm X faktor pengenceran

= 11.0283 ppm x = 716,8395 ppm

d. Penetapan kadar parasetamol (14 ppm) dalam Bodrex



Persamaan regresi untuk parasetamol ( y = 2,3967x 13,701

25,142 = 2396,7x - 13701


= 16,2069 ppm x = 6945,814 ppm

e. Penetapan kadar kafein (10 ppm) dalam Bodrex



Persamaan regresi untuk kafein ( y = 1,1624 x 2,7643

7,635 = 1,1624 x 2,7643


= 8,9464 ppm x = 447.32 ppm

Pembahasan

Pada praktikum kali ini, dilakukananalisis kuantitatif kadar paracetamol dan coffein pada sampel obat yang beredar yaitu Panadol dan Bodrex dengan instrument analisis HPLC. Sebelum masuk tahap pengujian terhadap kadar paracetamol dan coffein, dilakukan optimasi instrument analisis yang digunakan. HPLC/KCKT dioptimasi melalui studi literature analisis sampel campuran paracetamol dan coffein. Berdasarkan hasil studi, ditentukan bahwa fase gerak yang digunakan adalah campuran KH2PO4, metanol, dan asetonitril dengan perbandingan 90 ml: 6 ml : 4 ml. Sedangkan Okta Desil Silan (C18) digunakan sebagai fase diam.Detektor yang digunakan berupa detektor UV-Vis dengan pertimbangan bahwa senyawa yang dianalisis memiliki gugus kromofor. Panjang gelombang yang digunakan adalah 215 nm, suhu 27.30C-27.50C, dan volume alir 0,7 ml/menit.Penggunaan campuran eluen atau fase gerak yang sedemikian rupa merupakan hasil dari hasil uji peneliti lain terhadap campuran parasetamol dengan kofein. Dapar fosfat (KH2PO4) pH 4,5 digunakan karena kedua senyawa tersebut stabil dalam kondisi yang sedikit asam. Campuran metanol dengan asetontril akan mengkondisikan sistem eluen bersifat semi polar, hal tersebut terkait sifat kepolaran senyawa yang dianalisis. Parasetamol dan kofein bersifat semi polar karena mengandung gugus yang memiliki elektron bebas (sehingga bersifat polar), sekaligus memiliki struktur siklik yang bersifat nonpolar. Fase diam yang berupa okta desil silan (C18) bersifat nonpolar. Kombinasi dari sistem eluent dan adsorban (fase diam) akan menimbulkan proses tarik menarik solute pada sampel diantara keduanya sehubungan dengan kemiripan dari sifat kepolaran solute dengan eluent dan adsorben. Hasilnya berupa waktu retensi yang bersifat khas dari senyawa tertentu dalam solute terhadap sistem KCKT yang digunakan.

Setelah instrument analisis dioptimasi, dilakukan praperlakuan terhadap sampel. Kedua jenis sampel digerus dalam lumpang yang berbeda, selanjutnya di larutkan dalam fase gerak sampai 100 mL. Selanjutnya disaring dengan penyaring mikro untuk meminimalisasi terbawanya esksipien yang tidak larut. Diprediksi bahwa kadar dalam larutan uji masih terlalu tinggi untuk dilakukan analisis kadarnya dengan HPLC/KCKT, dan sehingga diperlukan pengenceran. Prediksi kadar dilakukan dengan melihat komposisi sediaan yang tertera pada brosur. Rata-rata, kedua sediaan tersebut mengandung 500 mg parasetamol dan 50 mg kafein. Pengenceran dilakukan dengan menambah sejumlah larutan fase gerak pada sejumlah sampel uji. Karena kafein memiliki kadar yang paling kecil, maka pengenceran dilakukan dengan bertolak pada kadar kaffein pada sediaan.

Sebelum dilakukan pengujan terhadap sampel, dibuat larutan standar dari komponen sampel tersebut. Metode analisis ini menggunakan kruva standar yang berisi campuran parasetamol dan kaffein dalam rentang tertentu. Digunakan larutan standar yang berisi campuran senyawa komponen sampel karena kemungkinan pergeseran waktu retensi dapat terjadi jika komponen standar dibuat dalam masig-masing larutan. Medium pelarut yang digunakan untuk pembuatan standar adalah fase greak yang digunakan. Untuk meminimalisasi keikutsertaan pengotor saat analisis, standar disaring terlebih dahulu dengan penyaring mikro. Selanjutnya standar dianalisis menggunakan KCKT dengan sistem instrument yang telah dipersiapkan sebelumnya, untuk menentukan waktu retensi masing-masing senyawa. Waktu retensi akan menjadi acuan untuk menentukan identitas peak yang dihasilkan pada kromatogram hasil analisis sampel campuran. Dari hasil analisis larutan standar, dihasilkan bentuk kromatogram berbahu (shoulder) dengan sedikit tailing. Hal ini disebabkan oleh terlalu banyak pengotor yang ikutserta dalam proses analisis dengan KCKT. Dengan memplot luas area dibawah kurva pada masing-masing larutan standar sebagai y, dan konsentrasi yang dibuat sebagai x, didapatkan persamaan regresi linier untuk parasetamol y = 2.3967x - 13.701 dengan nilai R = 0.99217 dan koffein y = 1.1624x - 2.7643 dengan nilai R = 0.909945. Dapat dilihat dari nilai R bahwa kurva regresi linier untuk kaffein tidak terlalu linier.

Kemudian dilakukan pengujian terhadap kedua larutan sampel pada HPLC/KCKT. Dari hasil pengujian, didapatkan luas area permukaan masing-masing komponen larutan uji. Dengan mensubstitusi luas area permukaan sebagai y pada masing-masing persamaan linier, maka didapat konsentrasi komponen tertentu dalam larutan. Lalu masing-masing kadar yang diperoleh dikalikan faktor pengenceran dan volume pengenceran awal untuk mengetahui jumlah masing-masing komponen. Diketahui dari larutan uji Panadol terdapat paracetamol 2167.75 mg dan koffein 71,683 mg, dan pada bodrex mengandung parasetamol 694,58 mg dan kaffein 44,732 mg. Setiap komponen hasil uji memiliki jumlah berbeda dengan yang tertera pada etiket. Hal ini mungkin terjadi karena masih terdapat pengotor yang ikut terbaca pada HPLC/KCKT.

Untuk menguji kevalidan hasil analisis, maka dilakukan perhitungan terhadap % recovery. Dari hasil perhitungan, didapatkan % recovery PCT 2,219% dan kaffein 10,863%.Karena % recovery lebih dari 2%, maka disimpulkan bahwa hasil percobaan tidak valid.Kesimpulan dan Saran

Kesimpulan

Waktu retensi parasetamol pada sistem KCKT menurut percobaan kali ini adalah 1,63 menit dengan luas area di bawah kurva 2,463 mAU*menit, sedangkan waktu retensi kofein adalah 4,34 menit dengan luas area di bawah kurva 9,372 mAU*menit. Sementara itu waktu retensi yang dihasilkan pada sampel campuran adalah peak 1 adalah 1.72 menit dengan luas area di bawah kurva 3.232 (mAU*min) dan peak 2 adalah 3.73 (menit) dengan luas area dibawah kurva 15.231 (mAU*min), dengan bentuk kromatogram yang dihasilkan adalah bentuk berbahu (shoulder) dengan sedikit tailing. Menurut kami peak 1 merupakan parasetamol dan peak 2 merupakan kofein. Sedangkan untuk uji kuantitatifnya, kadar parasetamol pada sampel campuran didapat sebesar 13,122 ppm dan kofein sebesar 16,252 ppm. Pada percobaan kali ini masih terdapat perbedaan waktu retensi standard yang diperoleh dengan waktu retensi sampel, hal ini kemungkinan terjadi karena adanya reaksi antara komponen sampel dengan campuran eluen yang didukung dengan kondisi sistem saat dilakukan analisis, selain itu ketidakstabilan temperature kolom juga dapat mempengaruhi waktu retensi, dan begitupula halnya dengan terjadinya human error.

Saran

Lakukanlah pengoptimalan instrumen terlebih dahulu sebelum melakukan percobaan, dan lakukanlah percobaan secara hati-hati dan teliti untuk menghindari terjadinya human error.

Daftar Pustaka

Meyer, F.R., 2004,Practical High-Performance Liquid Chromatography, 4thEd., John Wiley & Sons, New York.

Kealey, D and Haines, P.J., 2002,Instant Notes: Analytical Chemistry, BIOS Scientific Publishers Limited, New York.

Sani Ali, Audu. et all 2012. Analysis of Different Brands ofParacetamol500mg Tablets Used In Maiduguri,. Using Ultra Violet Spectrophotometric and High Performance Liquid Chromatography (HPLC) Methods. Nigeria ; IRJP

Tjay, T.H. 2000. Obat-obat Penting. Edisi kelima. Cetakan Pertama. Jakarta ; PT. Elex Media Computindo

Anonim, 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Jakarta ; Departemen Kesehatan Republik IndonesiaParasetamolnknjnjolol

Kofein

Gugus yang menentukan sifat polar,

Gugus yang menentukan sifat nonpolar

_1444649140.xlsChart1

10.487

14.2314

21.17

23.613

29.763

Luas Area

Konsentrasi (g/mL)

Luas Area (mAU*min)

Kurva Kalibrasi Parasetamol

Sheet1

KonsentrasiLuas Area

1010.487

1214.231

1421.170

1623.613

1829.763

To resize chart data range, drag lower right corner of range.

_1444649137.xlsChart1

3.592

8.531

6.52

12.344

13.309

Luas Area

Konsentrasi (g/mL)

Luas Area (mAU*min)

Kurva Kalibrasi Kafein

Sheet1

KonsentrasiLuas Area

63.592

88.531

106.520

1212.344

1413.309

To resize chart data range, drag lower right corner of range.

laporan praktikum analisis instrumen-hplc

Documents