ekspresi subtansi p (sp) pada jaringan pulpa normal dan pulpitis

EKSPRESI SUBTANSI P (SP) PADA JARINGAN PULPA NORMAL DAN PULPITIS REVERSIBEL GIGI

MACACA FASCICULARIS (PENELITIAN IN VIVO)

TESIS

DENNIS 117028005

PROGRAM STUDI MAGISTER (S2) ILMU KEDOKTERAN GIGI FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA MEDAN

2014

Universitas Sumatera UtaraUniversitas Sumatera Utara

LEMBAR PENGESAHAN

Judul Penelitian Tesis:

“EKSPRESI SUBSTANSI P (SP) PADA JARINGAN PULPA NORMAL DAN PULPITIS REVERSIBEL GIGI Macaca fascicularis

(PENELITIAN IN VIVO) ”

Nama Mahasiswa : Dennis, drg

Nomor Induk Mahasiswa : 117028005

Jenjang Pendidikan : Magister (S-2)

Bidang Ilmu : Kedokteran Gigi

Kepeminatan : Ilmu Kedokteran Gigi Dasar/Material

Disetujui Oleh:

Komisi Pembimbing:

Pembimbing Utama,

Prof. Trimurni Abidin, drg.,M.Kes.,Sp.KG.(K) NIP. 19500828 197902 2 001

Pembimbing Anggota,

Prof. Dr. Narlan Sumawinata, drg.,Sp.KG(K)

Diketahui Oleh:

Ketua Program Studi,

Dr. Ameta Primasari, drg.,MDSc.,M.Kes NIP. 19680311 199203 2 001

D e k a n,

Prof. H. Nazruddin, drg.,C.Ort.,Ph.D.,Sp.Ort NIP. 19520622 198003 1 0001


DAFTAR ISTILAH

SP = Substansi P

ALP = fosfatase alkali

ELISA = Enzyme linked immunosorbent assay

PBS = phosphate buffer saline

PGE2 = prostaglandin E2

COX-2 = cyclooxygenase 2

CNS = central nervous system

NPs = neuropeptides

CGRP = calcitonin gene related peptide

NKA = neurokinin A

NK1,2,3 = neurokinin 1, 2, 3

NGF = nerve growth factor

VR1 = vanilloid receptor 1

IL = Interleukin

TNF = Tumor necrosis factor

APC = Antigen presenting cell

MHC = Major histocompatibility complex


ABSTRAK

Cedera pada pulpa akan menyebabkan respons inflamasi lokal yang akan mengaktifkan sistem persarafan pulpa (A delta dan C) untuk melepaskan protein-protein saraf (neuropeptida) di antaranya yaitu substansi P (SP) yang merupakan neuropeptida utama yang memegang peranan yang penting pada saat awal terjadinya inflamasi. SP merupakan mediator inflamasi lini pertama yang bersifat vasodilator dan merupakan zat algogenik serta merupakan agen kemotaktik yang kuat sehingga dengan peninggian konsentrasi SP pada jaringan pulpa dapat menyebabkan perubahan laju aliran darah pulpa dan peninggian tekanan darah pulpa. Penelitian ini bertujuan untuk melihat ekspresi konsentrasi SP pada pulpa normal dan pulpitis reversible akibat cedera mekanis. Subyek pada penelitian ini adalah 32 gigi Macaca fascicularis yang dibagi menjadi 2 kelompok. Kelompok I : kelompok pulpa normal dan gigi dilakukan eksktraksi lalu diambil jaringan pulpa dengan menghancurkan gigi. Jaringan pulpa disimpan pada suhu -80°C sampai dilakukan pengujian dengan ELISA. Kelompok II: pulpitis reversibel yang dilakukan induksi secara mekanis melalui pengeburan. Jaringan pulpa dilakukan ekskavasi lalu disimpan pada suhu -80°C sampai dilakukan pengujian dengan ELISA. Uji bootstrapping dan t menunjukkan nilai rerata dan SD pada kelompok I yaitu 38.541867±1.2910005; sedangkan pada kelompok II yaitu 159.040600±7.3507764. Uji t berpasangan pada setiap kelompok menunjukkan adanya perbedaan konsentrasi SP yang sangat signifikan di antara kedua kelompok penelitian (p<0.0001). Hasil penelitian ini menunjukkan adanya peningkatan ekpresi konsentrasi SP sebesar 4 (empat) kali pada pulpitis reversibel dibanding pulpa normal.

Kata kunci: neuropeptida, substansi P (SP), pulpa normal, pulpitis reversibel


ABSTRACT

Pulpal injury will cause a local inflammatory response that activates neural systems of the pulp namely A delta and C fiber to release the neural proteins (neuropeptides) among which substance P (SP) is a neuropeptide that plays an important role at the beginning of inflammation. SP is the first line among those inflammatory mediators which is algogenic and a strong chemotactic agent so that the elevation of the concentration of SP in the pulp tissue can cause changes in blood flow rate and elevation of pulpal blood pressure. This study was aimed to investigate the concentration of SP in normal pulp and reversible pulpitis due to mechanical injury. The subjects in this study were 32 teeth of Macaca fascicularis. Group I: normal pulp and teeth were extracted in order to obtain pulp tissues by breaking the teeth. They were stored at -80 ° C until tested by ELISA. Group II: Induction of reversible pulpitis was done mechanically by drilling. Pulp tissues were excavated and stored at -80 ° C until tested by ELISA. Bootstrapping and t test showed the mean and SD values in group I: 38.541867 ± 1.2910005; whereas in group II: 159.040600 ± 7.3507764. Paired t test in each group showed a highly significant difference of SP concentrations between the two groups (p <0.0001). The results of this study showed an increase in expression of SP concentration of 4 (four) times in reversible pulpitis compared with normal pulp.

Key words: neuropeptide, substance P (SP), normal pulp, reversible pulpitis


KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis ucapkan kepada Tuhan Yesus karena berkat, rahmat,

karunia, dan kasih sayang-Nya sehingga tesis ini telah selesai disusun sebagai salah

satu syarat untuk mendapatkan gelar Magister Kedokteran Gigi pada Fakultas

Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara.

Pada penulisan tesis ini, dengan segala kerendahan hati penulis ingin

mengucapkan terima kasih kepada:

1. Prof. Nazruddin, drg., C.Ort., Ph.D., Sp Ort. selaku Dekan Fakultas

Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara.

2. Cut Nurliza, drg., M.Kes selaku Ketua Departemen Konservasi Gigi

Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan kesempatan dan dukungan

kepada penulis untuk melanjutkan pendidikan ke jenjang magister.

3. Dr. Ameta Primasari, drg., MDSc., M.Kes. selaku Ketua Panitia Penguji

dan Ketua Program Studi Magister Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera

Utara yang telah banyak memberikan bimbingan, masukan dan dorongan semangat

kepada penulis.

4. Prof. Trimurni Abidin, drg., M.Kes., Sp.KG (K) selaku pembimbing utama

yang telah memberikan judul tesis ini dan banyak meluangkan waktu, memberikan

inspirasi, masukan serta koreksi yang berharga, tunjuk ajar, arahan, semangat serta

dukungan kepada penulis sehingga tesis ini dapat selesai.


5. Prof. Dr. Narlan Sumawinata, drg., Sp.KG(K) selaku pembimbing kedua

penulis yang telah banyak meluangkan waktu untuk membimbing, memberikan

tunjuk ajar serta bimbingan, arahan dan dukungan pada penulis sehingga tesis ini

dapat diselesikan dengan baik.

6. Prof. Dr. Harry Agusnar, M.Sc., M.Phil., selaku panitia penguji yang telah

banyak meluangkan waktu untuk membimbing dan memberikan masukan

7. Prof. Dr. Syafruddin Ilyas, M.Biomed selaku panitia penguji yang telah

banyak memberikan bimbingan dan masukan kepada penulis.

8. Prof. Dr. Rasinta Tarigan, drg., Sp.KG(K); Bakri Soeyono, drg; Darwis

Aswal, drg; Nevi Yanti, drg., M.Kes; Epita Sarah Pane, drg., MDSc; Wandania

Farahanny, drg., MDSc; Widi Prasetia, drg; dan Fitri Yunita Batubara, drg selaku staf

pengajar Departemen Konservasi Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas

Sumatera Utara. Terima kasih atas dukungan dan kerja sama yang telah diberikan

kepada penulis.

9. Seluruh Pegawai Departemen Konservasi Gigi Fakultas Kedokteran Gigi

Universitas Sumatera Utara yang juga telah banyak membantu penulis selama

menjalani pendidikan.

10. Teman-teman terbaik yang penulis cintai, sahabat dalam suka duka, yang

sangat mendukung, membantu, dan member semangat kepada penulis dalam

menjalani Program Magister Kedokteran Gigi dan membantu penulis dalam


menyelesaikan tesis ini. Terima kasih setulus-tulusnya buat: Kak Pretty, kakPonty,

Henny, KakNani, Gita, KakYumi, danVeronika.

Secara khusus penulis tujukan kepada kedua orang tua tercinta, Papa Daniel

Hartono (Alm.) dan Mama Netty Lim atas segala doa, dukungan, dan kasih sayang

kepada penulis.

Penulis menyadari bahwa tesis ini masih terdapat banyak kekurangan, oleh

karena itu, penulis masih mengharapkan kritik dan saran untuk peningkatan ilmu

pengetahuan dan penelitian pada masa yang akan datang.

Medan, 10 September 2014

Penulis,

(Dennis)


RIWAYAT HIDUP

Keterangan Pribadi

Nama : Dennis

Alamat Tempat Tinggal : Jl. Rahmadsyah. Komp. Japaris Residence

Blok B No.7. Medan

Jenis Kelamin : Laki-laki

Agama : Kristen Protestan

Pekerjaan : Dokter gigi / PNS Dosen

Golongan/Pangkat/Jabatan : III-B/ Asistenahli

NIP : 19841110200812 1 002

No. Kontak : 08126555068

Nama Ayah : Daniel Hartono (Alm)

Nama Ibu : Netty Lim

Pendidikan Formal

Sekolah Dasar : SD Budi Murni-1

Sekolah Menengah : SMP Budi Murni-3

Sekolah Menengah Atas : SMA Budi Murni-1

Fakultas Kedokteran Gigi : Universitas Sumatera Utara


Program Spesialis : Ilmu Konservasi Gigi

Universitas Sumatera Utara

Publikasi Ilmiah:

1. Dennis, Trimurni A, 2013. Watermelon Frost as Intracanal Medicament of

C- Shaped mandibular Molar: Case Report. International Journal of Dental

Clinics; vol.5, no.4

2. Dennis, Trimurni A, 2013. Degradation of Resin-Dentin Bonds and Current

Methods of Its Prevention: Review Articles. Indian Journal of Restorative

Dentistry; vol 2, no. 1

3. Dennis, Trimurni A, 2012. Retreatment of Mandibular Second Molar with

Five Root Canals: Case Report. Proceeding Temu Ilmiah Nasional IKORGI

(TINI) II, Surabaya.

4. Dennis, Trimurni A, 2011. Role of Amelogenin in Enamel Biomineralization:

Review Articles. Proceeding Kongres Nasional dan Seminar Ilmiah IKORGI,

Surabaya

5. Dennis, Trimurni A, 2010. Endodontic Preventive Consideration in Pulp and

Periapical Traumatism in Fixed Final Restoration (Clinical Report). Dentika

Dental Journal; vol 15, no.1

6. Dennis, Trimurni A, 2009. Effect of Watermelon Frost on PGE2 in Inflamed

Pulp Tissue (In Vitro Study). Dental Journal; Vol 42, no.2

PresentasiIlmiah;

1. Short Lecture: ‘Anti Inflammatory Effect of watermelon Frost on

Prostaglandin E2 (PGE2) in Irreversible Pulpitis (In Vitro Study)’ pada


American Chemical Society (ACS) Symposium, Maret 2014 di Bangkok,

Thailand

2. Main Lecture: ‘ Clinical Situation of Endodontics in Indonesia’ pada One Day

Endodontic Seminar of Japan National Research Institute, Mei 2013 di Obu,

Aichi, Jepang

3. Short Lecture: ‘Use of Watermelon Frost as Root Canal Medicament in Non

Surgical Retreatment of C-Shaped Mandibular Second Molar with Periapical

Lesion: Case Report’ pada The 8th World Endodontic Congress, Mei 2013 di

Tokyo, Jepang

4. Short Lecture: ‘ Retreatment of Mandibular Second Molar with Five Root

Canals: Case Report’ pada Temu Ilmiah Nasional IKORGI (TINI) II,

November 2012 di Surabaya, Indonesia

5. Short Lecture: ‘ Role of Amelogenin in Enamel Biomineralization’ pada

Kongres Nasional dan Seminar Ilmiah IKORGI, November 2011 di Surabaya,

Indonesia

6. Poster: ‘Endodontic Preventive Consideration in Pulp and Periapical

Traumatism in Fixed Final Restoration (Clinical Report)’ pada Regional

Dental Meeting and Exhibition IV, November 2009 di Medan, Indonesia

7. Poster: ‘Effect of Watermelon Frost on PGE2 in Inflamed Pulp Tissue (In

Vitro Study)’ pada Temu Ilmiah Nasional, Februari 2009 di Surabaya,

Indonesia.


DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR ISTILAH ............................................................................................ i

ABSTRAK .......................................................................................................... ii

ABSTRACT ........................................................................................................ iii

KATA PENGANTAR ........................................................................................ iv

RIWAYAT HIDUP ............................................................................................ vi

DAFTAR ISI ....................................................................................................... ix

DAFTAR TABEL ............................................................................................... xii

DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xiii

DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... xiv

BAB 1. PENDAHULUAN ................................................................................ 1

1.1 Latar Belakang .............................................................................. 1 1.2 Peumusan Masalah ....................................................................... 5 1.3 Tujuan Penelitian .......................................................................... 6 1.4 Manfaat Penelitian ........................................................................ 6

1.4.1 Manfaat Ilmiah ..................................................................... 6 1.4.2 Manfaat Klinis ..................................................................... 6 1.4.3 Manfaat Praktis .................................................................... 6

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA ....................................................................... 7

2.1 Jaringan Pulpa ............................................................................... 7 2.2 Sel-Sel Odontoblas ....................................................................... 9 2.3 Pulpitis Reversibel dan Ireversibel .............................................. 12 2.4 Neuropeptid dalam Inflamasi Pulpa ............................................. 17


2.5 Substansi P (SP) dan Jaringan Pulpa ............................................ 23 2.6 Macaca fascicularis ...................................................................... 33 2.6.1 Penyebaran dan Habitat ....................................................... 34 2.6.2 Morfologi ............................................................................. 35 2.6.3 Kelompok Sosial ................................................................. 36 2.7 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) ........................... 36 2.8 Landasan Teori ............................................................................. 39 2.9 Kerangka Konsep .......................................................................... 40 2.10 Hipotesis ....................................................................................... 41 BAB 3. METODE PENELITIAN ..................................................................... 42

3.1 Jenis Penelitian dan Rancangan Penelitian .................................... 42 3.2 Lokasi dan Waktu Penelitian ......................................................... 42 3.2.1 Lokasi Penelitian ................................................................... 42 3.2.2 Sampel Penelitian .................................................................. 42 3.3 Sampel dan Besar Sampel Penelitian ............................................ 42 3.4 Bahan dan Alat Penelitian ............................................................. 31 3.4.1 Bahan Penelitian .................................................................. 43 3.4.2 Alat Penelitian ...................................................................... 44 3.5 Variabel dan Definisi Operasional ................................................ 45 3.5.1 Variabel Bebas ..................................................................... 45 3.5.2 Variabel Terikat ................................................................... 45 3.6 Identifikasi Variabel ..................................................................... 46 3.7 Prosedur Penelitian ....................................................................... 47 3.8 Diagram Alir Penelitian ................................................................ 52 3.8.1 Diagram Alir Prosedur Pulpotomi ....................................... 52 3.8.2 Diagram Alir Pengambilan Supernatant Substansi P (SP) .. 53 3.8.3 Prosedur Ekstraksi Pulpa Gigi ............................................. 54 3.8.4 Diagram Alir Ekstraksi SP ................................................... 55 3.8.5 Prosedur Tes ELISA ............................................................. 59 3.9 Analisis Data ................................................................................. 61 3.10 Etika Penelitian ............................................................................. 62 BAB 4. HASIL PENELITIAN .......................................................................... 63

4.1 Konsentrasi SP pada Pulpa Normal dan Pulpitis Reversibel ......... 64 4.2 Hasil Uji t Konsentrasi SP ............................................................. 65 BAB 5. PEMBAHASAN .................................................................................... 66 5.1 Analisis Konsentrasi SP ................................................................. 67


5.2 Ekspresi Konsentrasi SP ................................................................ 68

BAB 6. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 72

6.1 Kesimpulan ..................................................................................... 72

6.2 Saran ............................................................................................... 72

DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 73

LAMPIRAN ....................................................................................................... 79


DAFTAR TABEL

Tabel Judul Halaman

3.1 Definisi Operasional Variabel Bebas................................................... 45

3.2 Definisi OperasionalVariabel Terikat................................................. 45

3.3 Skema Persiapan Larutan Standar ELISA Kit SP............................... 59

6.1 Distribusi Konsentrasi SP Menurut Kelompok Perlakuan.................. 64


DAFTAR GAMBAR

Gambar Judul Halaman

2.1 Peranan Substansi P (SP) dalam Inflamasi Neurogenik........................... 26

2.2 Peranan Substansi P (SP) sebagai Imunomodulator................................. 30

2.3 Peranan Substansi P (SP) dalam Mekanisme Nyeri.................................. 30

2.4 Macaca fascicularis.................................................................................. 33

3.1 M. fascicularis di Bawah Anestesi Umum................................................ 48

3.2 Gigi-gigi M.fascicularis............................................................................ 50

3.3 Ekskavasi Jaringan Pulpa.......................................................................... 50

3.4 Gigi-Gigi Rahang Atas M.fascicularis setelah Euthanasia...................... 51

3.5 Gigi-Gigi Rahang Bawah M.fascicularis setelah Euthanasia................... 51

3.6 Ekstraksi Jaringan Pulpa........................................................................... 56

3.7 Prekondisi C-18 Sep Pak Column............................................................. 56

3.8 Supernatant Dialirkan melalui Column dengan Laju 1 ml/menit............. 57

3.9 Evaporasi Methyl Format dengan Gas Nitrogen....................................... 57

3.10 ELISA Kit SP dan ALP............................................................................... 58

3.11 ELISA Well................................................................................................ 58

4.1 Grafik Distribusi Rata-Rata Konsentrasi SP pada Setiap Kelompok….... 65


DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Judul Halaman 1. Persetujuan Protokol Etika Penggunaan dan Pemanfaatan Hewan

Penelitian ........................................................................................... 79 2. Persetujuan Komisi Etik tentang Pelaksanaan Penelitian Bidang

Kesehatan .......................................................................................... 80 3. Surat Keterangan Kegiatan Penelitian dari Pusat Studi Satwa

Primata .............................................................................................. 81 4. Tabel Hasil Uji T Konsentrasi Substansi P ....................................... 82 5. Hasil Uji Bootsrap ............................................................................. 83


ekspresi subtansi p (sp) pada jaringan pulpa normal dan pulpitis

Documents