lprn tetap ddma, nurul 05 bner nn

LAPORAN TETAP

PRAKTIKUM DASAR-DASAR MIKROBIOLOGI AKUATIK

Oleh

Nurul Janah

05121006005

Kelompok II

PROGRAM STUDI BUDIDAYA PERAIRAN

DAN TEKNOLOGI HASIL PERIKANAN

FAKULTAS PERTANIAN

UNIVERSITAS SRIWIJAYA

INDRALAYA

2013

ii

LAPORAN TETAP PRAKTIKUM

DASAR-DASAR MIKROBIOLOGI AKUATIK

Oleh

Nurul Janah

05121006005

Telah Diterima

Sebagai Salah Satu Syarat untuk Mengikuti Ujian Praktikum

Dasar-Dasar Mikrobiologi Akuatik

Indralaya, 03 Juni 2013

Mengetahui,

Koordinator Praktikum

Ade Dwi Sasanti S.Pi, M.Si

NIP. 197612302000122001

Asisten I Asisten II

Rovil Amin Tara Suprayogi. AS

NIM. 05091006004 NIM. 05111005012

Asisten III Asisten IV

Wasahla Yolanda Yusiana

NIM. 05111006001 NIM. 05111005031

iii

IDENTITAS PRAKTIKAN

Nama : Nurul Janah

NIM : 05121006005

Program Studi : Teknologi Hasil Perikanan

Tempat Tanggal Lahir: Tanjung Batu, 02 Mei 1994

Agama : Islam

Nama Orang Tua

Ayah : Bakar

Ibu : Hermiah

Alamat : Jalan Anggrek RSS 41, Timbangan, Indralaya

Kesan :Saya merasa nyaman pada saat praktikum DDMA (Dasar-dasar

Mikrobiologi Akuatik) karna penjelasan yg diberikan oleh para

asisten sngat jlas dan sntai, shingga saya bisa memhami materi

yang disampaikan terutma saya bisa melakukan smua praktikum

dgn baik.

Pesan : Pesan saya agar perlengkapan praktikum terutama smua alat2 dapat

dilengkapi lagi agar praktikum dapat berjalan dgn baik.

Indralaya, 03 juni 2013

Praktikan

Nurul Janah

NIM. 05121006005

iv

KATA PENGANTAR

Segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa yang

senantiasa mencurahkan rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan

laporan praktikum pada mata kuliah Dasar-dasar Mikrobiologi Akuatik ini tepat pada

waktunya.

Banyak pengetahuan yang didapatkan selama mengerjakan laporan praktikum ini.

Semua ini berkat kerja sama kelompok serta bantuan dari dosen pembimbing dan asisten

yang telah memberikan bimbingan sehingga dapat terselesaikanya penulisan laporan ini.

Walaupun dalam penyusunan laporan ini banyak kendala yang ditemui, baik secara teknis

maupun non teknis, tetapi dapat diatasi dengan hasil yang cukup memuaskan.

Penulis menyadari bahwa laporan ini masih banyak kekurangan dan masih sangat

jauh dari kesempurnaan dan harapan, karena keterbatasan kemampuan dan pengetahuan

penulis. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran serta masukan yang

konstruktif untuk menyempurnakan laporan-laporan berikutnya.

Demikianlah semoga laporan ini bermanfaat bagi penulis khususnya dan pembaca

umumnya, serta bagi para praktikan selanjutnya. Dan hasil laporan ini dapat turut serta

dalam membangun peningkatan mutu mahasiswa.

Indralaya, 03 Juni 2013

Penulis

v

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL i

HALAMAN PENGESAHAN.. ii

IDENTITAS PRAKTIKAN iii

KATA PENGANTAR.. iv

DAFTAR ISI. v

DAFTAR TABEL. viii

DAFTAR GAMBAR ix

MATERI PRAKTIKUM

PENGENALAN ALAT DAN STERILISASI

I. PENDAHULUAN. 1

A. Latar Belakang. 1

B. Tujuan.. 2

II. TINJAUAN PUSTAKA 3

A. Laboratorium 3

B. Pengenalan Alat Laboratorium Kimia dan Penyimpanannya.. 3

C. Pengenalan Bahan-bahan Kimia dan Penyimpanannya... 4

D. Pengertian Sterilisasi 5

III. METODELOGI PRAKTIKUM.. 9

A. Tempat dan Waktu... 9

B. Alat dan Bahan. 9

C. Cara Kerja 9

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN. 11

A. Hasil. 11

B. Pembahasan.. 18

V. KESIMPULAN DAN SARAN. 20

A. Kesimpulan.. 20

B. Saran. 20

vi

PEMBUATAN MEDIA AGAR

I. PENDAHULUAN. 21


B. Tujuan.. 22


A. Media Agar.. 23

B. Macam-macam Media Agar..... 24




C. Cara Kerja 27


A. Hasil. 29

B. Pembahasan.. 30


A. Kesimpulan. 32

B. Saran. 32

ISOLASI BAKTERI DAN PERHITUNGAN BAKTERI

I. PENDAHULUAN. 33


B. Tujuan.. 34


A. Isolasi Bakteri.. 35

B. Bakteri.. 36




C. Cara Kerja 38


A. Hasil. 40

vii

B. Pembahasan 41


A. Kesimpulan.. 44

B. Saran. 44

PEWARNAAN GRAM

I. PENDAHULUAN. 45


B. Tujuan.. 46


A. Pewarnaan Gram.. 47

B. Macam-macam Pewarnaan Gram 49




C. Cara Kerja 55


A. Hasil. 57

B. Pembahasan.. 57


A. Kesimpulan.. 60

B. Saran. 60

DAFTAR PUSTAKA

LAMPIRAN

viii

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Daftar alat-alat beserta fungsi di laboratorium. 11

Tabel 2. Jumlah bakteri.. 40

ix

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Hasil media agar dengan menggunakan media PCA... 29

Gambar 2. Hasil isolasi bakteri dari sampel terasi. 40

Gambar 3. Diagram alir proses pewarnaan gram... 56

Gambar 4. Hasil pewarnaan gram di atas kaca objek 57

PENGENALAN ALAT DAN STERILISASI

1

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Mikrobiologi ialah ilmu pengetahuan tentang peri kehidupan mahluk-mahluk kecil

yang hanya kelihatan dengan mikroskop ( bahasa Yunani: mikros = kecil, bios= hidup,

logos= kata atau ilmu). Mahluk-mahluk kecil itu disebut mikroba atau jasad renik.

Mikrobiologi mencakup pengetahuan tentang virus (virology), pengetahuan tentang bakteri

(bacteriology), dan pengetahuan tentang jamur (mycology). Pada beberapa abad yang lalu

di tanah jawa dikenal istilah pageblug, yang berarti adanya suatu wabah penyakit yang

melanda disuatu daerah yang disebabkan oleh mahluk-mahluk halus yang marah kepada

penduduk sehingga banyak yang meninggal (Wahjono, 2007).

Sejak ditemukan mikroskop oleh Antony van Leeuwenhoek pada tahun 1683 (Gupte,

1990 dalam Rachmawati, 2008), dapat diketahui ternyata kuman ada di mana-mana, di air,

tanah, udara, benda-benda, bahkan di tubuh setiap orang. Keberadaan kuman-kuman yang

tidak kasat mata tersebut seringkali membuat kita tidak sadar akan bahaya yang dapat

ditimbulkan. Secara kontinyu kuman-kuman tersebut diteliti atau dipelajari di laboratorium

mikrobiologi (Rachmawati, 2008).

Ekperimen diartikan sebagai rangkaian kegiatan (menyusun alat mengoperasikan

alat, mengukur, dan sebagainya) dan pengamatan untuk memverifikasi dan menguji suatu

hipotesis berdasarkan bukti-bukti empiris. Sementara kerja lab cakupannya lebih luas dari

pada eksperimen yang diartikan sebagai aktifitas dengan menggunakan fasilitas lab, seperti

melatih keterampilan menggunakan alat, melakukan eksperimen (percobaan),

mendemonstrasikan percobaan, melakukan pengontrolan kualitas bahan baku,

pengontrolan kualitas produk industri, ekshibisi (pameran) proses-proses kimia dan

sebagainya (Widhy, 2009).

Alat laboratorium kimia merupakan benda yang digunakan dalam kegiatan di

laboratorium kimia yang dapat dipergunakan berulangulang. Contoh alat laboratorium

kimia: pembakar spiritus, thermometer, tabung reaksi, gelas ukur jangka sorong dan lain


2

B. Tujuan

Tujuan dari praktikum Pengenalan Alat-alat Laboratorium dan Sterilisasi adalah

sebagai berikut:

1. Agar praktikan dapat mengenal dan memahami alat-alat yang ada di laboratorium

beserta fungsi dan cara pemakaian dari alat-alat tersebut.

2. Agar praktikan dapat melakukan sterilisasi alat-alat dengan baik sebelum digunakan.

3

II. TINJAUAN PUSTAKA

A. Laboratorium

Laboratorium berasal dari kata laboratory yang memiliki pengertian yaitu : (1) tempat

yang dilengkapi peralatan untuk melangsungkan eksperimen di dalam sains atau melakukan

pengujian dan analisis (is a place equipped for experimental study in ascience or for testing

and analysis , (2) bangunan atau ruangan yang dilengkapi peralatan untuk melangsungkan

penelitian ilmiah ataupun praktek pembelajaran bidang sains (a building or room equipped for

conducting scientific research or for teaching practical science), (3) tempat memproduksi

bahan kimia atau obat (a place where chemicals or medicines are manufactured), (4) tempat

kerja untuk melangsungkan penelitian ilmiah ( a workplace for the conduct of scientific

research), (5) ruang kerja seorang ilmuwan dan tempat menjalankan eksperimen bidang studi

sains (kimia, fisika, biologi, dsb.) (the workplace a saintist also a place devoted to experiments

in any branch of natural science , as chemistry, physics, biology etc. ) (Widhy, 2009).

Fungsi laboratorium dikategorikan ke dalam tiga kelompok yaitu fungsi yang

memberikan peningkatan pengetahuan (knowledge), fungsi yang memberikan peningkatan

keterampilan (psychomotoric), dan fungsi yang memberikan penumbuhan sikap (attitude)

(Widhy, 2009).

Secara umum Laboratorium mikrobiologi mempelajari tentang mikroorganisme:

virus, bakteri, jamur yang meliputi diagnostik (isolasi dan identifikasi), prognosis pada

kasus infeksi, pedoman dalam pengobatan, mencari sumber infeksi (misal pada

suatu kasus ledakan penyakit infeksi) (Rachmawati, 2008).

B. Pengenalan Alat Laboratorium Kimia dan Penyimpanannya

Alat laboratorium kimia merupakan benda yang digunakan dalam kegiatan di

laboratorium kimia yang dapat dipergunakan berulang kali. Contoh alat laboratorium

kimia: pembakar spiritus, thermometer, tabung reaksi, gelas ukur jangka sorong dann lain

sebagainya. Alat yang digunakan secara tidak langsung di dalam praktikum merupakan alat

bantu laboratorium, seperti pemadam kebakaran dan kotak Pertolongan Pertama

(Widhy, 2009).

4

Dengan diketahuinya bahan dasar dari suatu alat kita dapat menentukan atau

mempertimbangkan cara penyimpanannya. Alat yang terbuat dari logam tentunya harus

dipisahkan dari alat yang terbuat dari gelas atau porselen. Jadi alat seperti kaki tiga harus

dikelompokkan dengan statif atau klem tiga jari karena ketiganya memiliki bahan dasar

yang sama yaitu logam, sedangkan gelas kimia dikelompokkan dengan labu erlenmeyer

dan labu dasar rata karena bahan dasarnya gelas. Belumlah cukup hanya dengan

memperhatikan bahan dasar dari alat, namun penyimpanan alat yang memiliki bahan dasar

yang sama harus ditata kembali. Jika tempat penyimpanan kaki tiga dan klem tiga jari

adalah menggunakan lemari rak, maka tahapan rak untuk kaki tiga harus berbeda dengan

tahap rak klem tiga jari, akan tetapi kedua tahap rak harus berdekatan. Dengan

memperhatikan bahan dasar alat pula, peralatan yang terbuat dari logam umumnya

memiliki bobot lebih tinggi dari peralatan yang terbuat dari gelas atau plastik. Oleh karena

itu dalam penyimpanan dan penataan alat aspek bobot benda perlu juga diperhatikan.

Janganlah menyimpan alat-alat yang berat di tempat yang lebih tinggi, agar mudah diambil

dan disimpan kembali (Widhy, 2009).

C. Pengenalan Bahan-bahan Kimia dan Penyimpanannya

Bahan kimia yang ada di lab jumlahnya relatif banyak seperti halnya jumlah

peralatan. Di samping jumlahnya cukup banyak juga bahan kimia dapat menimbulkan

resiko bahaya cukup tinggi, oleh karena itu dalam pengelolaan lab aspek penyimpanan,

penataan dan pemeliharaan bahan kimia merupakan bagian penting yang harus

diperhatikan. Hal umum yang harus menjadi perhatian di dalam penyimpanan dan

penataan bahan kimia diantaranya meliputi aspek pemisahan (segregation), tingkat resiko

bahaya (multiple hazards), pelabelan (labeling), fasilitas penyimpanan (storage facilities),

wadah sekunder (secondary containment), bahan kadaluarsa (outdate chemicals),

inventarisasi (inventory), dan informasi resiko bahaya (hazard information). Penyimpanan

dan penataan bahan kimia berdasarkan urutan alfabetis tidaklah tepat, kebutuhan itu hanya

diperlukan untuk melakukan proses pengadministrasian. Pengurutan secara alfabetis akan

lebih tepat apabila bahan kimia sudah dikelompokkan menurut sifat fisis, dan sifat

kimianya terutama tingkat kebahayaannya (Widhy, 2009).

5

Wadah bahan kimia dan lokasi penyimpanan harus diberi label yang jelas. Label

wadah harus mencantumkan nama bahan, tingkat bahaya, tanggal diterima dan dipakai.

Alangkah baiknya jika tempat penyimpanan masing-masing kelompok bahan tersebut

diberi label dengan warna berbeda. Misalnya warna merah untuk bahan flammable, kuning

untuk bahan oksidator, biru untuk bahan toksik, putih untuk bahan korosif, dan hijau untuk

bahan yang bahayanya rendah. label bahan flammable label bahan oksidator label bahan

toksik label bahan korosif label bahan dengan tingkat bahaya rendah (Widhy, 2009).

D. Pengertian Sterilisasi

Sterilisasi adalah suatu proses untuk membunuh semua jasad renik yang ada

sehingga jika ditumbuhkan dalam suatu media tidak ada jasad renik yang dapat

berkembang biak. Sterilisasi harus dapat membunuh jasad renik yang paling tahan panas

yaitu spora bakteri. Sterilisasi sangat penting dalam penelitian-penelitian di bidang

mikrobiologi, mengingat bahwa penelitian terhadap suatu spesies mikrobia harus selalu

didasarkan atas penelitian terhadap sifat biakan murni spesies tersebut, sehingga untuk

dapat memisahkan kegiatan mikrobia yang satu dengan mikrobia yang lain, atau untuk

memelihara suatu mikrobia secara biakan murni, perlu digunakan alat-alat dan medium

yang bebas mikroorganisme atau steril (Nike, 2012).

Sterilisasi merupakan suatu proses untuk membebaskan suatu benda dari semua

mikroorganisme, baik bentuk vegetative maupun bentuk spora (Rachmawati, 2008).

Fungsi sterilisasi di antaranya : pada bidang mikrobiologi untuk mencegah pencemaran

organisme luar, pada bidang bedah untuk mempertahankan keadaan asepsis, pada

pembuatan makanan dan obat-obatan untuk menjamin keamanan terhadap

pencemaran oleh mikroorganisme (Rachmawati, 2008). Salah satu cara yang digunakan

adalah dengan desinfeksi yaitu proses mematikan semua mikroorganisme patogen yang

dapat menyebabkan infeksi (Rachmawati, 2008).

Di laboratorium mikrobiologi, sterilisasi merupakan bagian yang sangat penting atau

merupakan keharusan, baik pada alat maupun media. Hal ini penting karena jika alat atau

media tidak steril, kita akan sulit menentukan apakah isolat kuman berasal dari spesimen

pasien yang diperiksa atau kontaminan. Bekerja di laboratorium mikrobiologi mengandung

6

risiko yang tidak kecil. Setiap saat harus selalu berasumsi bahwa setiap mikroorganisme

adalah potensial patogen dan kita harus berhati-hati agar tidak terinfeksi oleh kuman

yang akan diperiksa (Rachmawati, 2008).

Laboratorium mikrobiologi sendiri merupakan laboratorium yang mempelajari,

menyimpan dan melakukan pelayanan dalam bidang mikrobiologi yang meliputi bakteri,

virus dan jamur. Fungsi utama laboratorium mikrobiologi, membantu menegakkan

diagnosis penyakit infeksi yang disebabkan oleh mikroba, melakukan uji kepekaan serta

penelitian-penelitian yang berkaitan dengan mikroba. Sekalipun yang diuji atau diteliti

adalah mikroba, namun sterilitas merupakan hal yang mutlak pada pemeriksaan

mikrobiologi. Tanpa adanya sterilitas maka hasil yang diperoleh bukanlah kuman yang

sesungguhnya namun kuman kontaminan. Alat-alat yang steril namun tidak

memperhatikan faktor lain, tidak menjamin bebas dari kontaminasi. Salah satu cara untuk

menjaga agar hasil pekerjaan di laboratorium mikrobiologi tidak terkontaminasi, serta

dapat melindungi pemeriksa adalah dengan cara cuci tangan (Rachmawati, 2008).

Kemampuan penghambatan etil alkohol ini disebabkan karena etil alkohol memiliki

sifat hidrofilik maupun hidrofobik, tetapi sifat hidrofobiknya jauh lebih besar dibandingkan

sifat hidrofiliknya. Struktur yang demikian ini akan menyebabkan terganggunya proses

osmosis maupun difusi pada membran sel mikrobia tersebut (Faatih, 2005).

Menurut Tim Penyusun Praktikum Mikrobiologi tahun 2011 dalam Anonim, 2011,

sterilisasi ada dua jenis yaitu:

Sterilisasi dengan cara fisik:

a. Pemanasan

Air dan uap adalah media panas yang baik. Dalam waktu relatif singkat, alat yang

akan disterilkan akan mencapai suhu yang diinginkan. Udara adalah penyalur panas yang

kurang baik. Oleh karena itu, untuk mecapai suhu yang diinginkan akan membutuhkan

waktu yang cukup lama.

1. Panas kering

Cara ini untuk membunuh mikroba hanya memakai udara panas kering yang tinggi.

Sterilisasi panas kering dibedakan atas :

Panas membara

7

Dengan jalan menaruh benda yang akan di sterilkan dalam nyala api bunsen sampai

merah membara. Alat yang disterilkan yaitu sengkelit, jarum, ujung pinset dan ujung

gunting.

Melidah - apikan

Dengan melewatkan benda dalam api bunsen, namun tidak sampai menyala terbakar.

Alat yang disterilkan yaitu scalpel, kaca benda, mulut tabung dan mulut botol.

Udara kering

Oven merupakan ciri umum yang dimaksud. Alat ini terbuat dari kotak logam, udara

yang terddapat di dalamnya mendapat udara panas melalui panas dari nyala listrik. Alat

yang disterilkan yaitu tabung reaksi, cawan petri, pipet, scalpel dari logam, gunting dan

botol. Pemanasan satu jam dengan temperatur 160 oC dianggap cukup.

2. Panas Basah

Yang dimaksud panas basah adalah pemansan menggunakan air atau uap air. Uap air

adalah media penyalur panas yang terbaik dan terkuat daya penetrasinya. Panas basah

mematikan mikroba. Oleh karena koagulasi dan denaturasi enzim dan protein protoplasma

mikroba. Untuk mematikan spora diperlukan panas basah selama 15 menit pada suhu

121oC. Sterilisasi panas basah dapat dibedakan atas tiga golongan yaitu:

Panas basah 100oC

Sterilisasi dengan cara ini hasilnya mutlak steril, sehingga biasa dipergunakan di

rumah sakit dan laboratorium besar. Cara ini menggunakan tangki yang diisi dengan uap

8

air yang disebut autoclave. Alat yang disterilkan adalah alat dari kaca, kain kasa, media

pembenihan, cairan injeksi, dan bahan makanan.

b. Filtrasi (Penyaringan)

Penyaringan dilakukan dengan mengalirka larutan melalui suatu alat penyaringan

yang memiliki pori-pori cukup kecil. Untuk menahan mikroorganisme dengan ukuran

tertentu. Saringan yang umum digunakan tidak dapat menyaring virus. Penyaringan

dilakukan dengan untuk mensterilkan cairan yang tidak tahan terhadap pemanasan dengan

suhu tinggi seperti : serum, larutan yang mengandung enzim, toksin kuman, ekstrak sel,

antibiotik dan asam amino.

c. Radiasi / Penyinaran

Mikroorganisme dapat dibunuh dengan penyinaran yang memakai sinar ultrraviolet

yang panjang gelombangnya antara 220-290 nm. Radiasi paling efektif adalah 253,7 nm.

Sinar matahari langsung mengandung sinar ultraviolet 290 nm, sehingga sinar matahari

adalah sinar yang bersifat bakterida yang baik.

Sterilisasi Dengan Cara Kimia:

Zat kimia yang dapat digunakan untuk sterilisasi dapat berwujud :

a. Gas : Ozon, formaldehyde, ethylene oxide gas

b. Larutan : Deterjen, yodium, alcohol, peroksida fenol, formalin, AgNO3 dan

merkuroklorid.

Sterilisasi dengan cara kimia antara lain dengan disenfektan. Daya kerja antimikroba

disenfektan ditentukan oleh konsenntrasi, waktu dan suhu. Beberapa contoh desinfektan

yang digunakan antara lain : Desinfektan lingkungan misalnya :

1. Untuk permukaan meja : lisol 5%, formalin 4% dan alcohol.

2. Untuk di udara : natrium hipoklorit 1%, lisol 5% atau senyawa fenol lain.

3. Desinfektan kulit atau luka : dicuci denngan air sabun, providon yodium dan etil

alkohol 70%.

9

III. METODELOGI PRAKTIKUM

A. Tempat dan Waktu

Adapun praktikum dilaksanankan pada hari rabu 20 Maret 2013 pada pukul 14.30

sampai dengan selesai. Bertempat dilaboraturium program studi Teknologi Hasil Perikanan

Fakultas Pertanian Universitas Sriwijaya.

B. Alat dan Bahan

Adapun alat yang digunakan dalam praktikum Pengenalan Alat dan Sterilisasi yaitu

cawan petri, tabung reaksi, erlenmeyer, gelas kimia, bunsen, bola hisap, tisue, pipet tetes,

botol sepray, korek api dan kertas.

Sedangkan bahan yang digunakan dalam praktikum ini yaitu spitus dan alkohol 70%.

C. Cara Kerja

Cara kerja pada praktikum kali ini adalah sebagai berikut:

1. Pengenalan alat-alat

Cara kerja praktikum pengenalan alat ini adalah amati alat-alat yang disiapkan lalu

digambar sebagai laporan sementara kemudian catat fungsi dan cara kerja dari

masing-masing alat tersebut.

2. Sterilisasi

Cara kerja pada praktikum sterilisasi dilakuka dengan dua cara yaitu:

a. Sterilisasi basah

Cara kerja pada praktikum ini adalah:

Sediakan semua alat-alat yang akan disterilkan. Semprotkan tangan anda

dengan alkohol 70% lalu keringkan dengan menggunakan tissue, kemudian

semprotkan alkohol keseluruh bagian alat-alat yang akan disterilkan satu per

satu. Keringkan alat retsebut dengan menggunakan tissue, kemudian tutuplah

10

mulut alat dengan kapas lalu dibungkus dengan menggunakan kertas putih atau

kertas bersih.

Dengan menggunakan autoklaf, alat-alat yang akan disterilisasi dimasukkan ke

dalam autoklaf selama 15 menit dengan suhu 121oC pada tekanan 1 atm.

Setelah itu didinginkan lalu tutuplah mulut alat dengan menggunakan kapas

dan bungkus dengan kertas putih atau bersih.

b. Sterilisasi kering

Pada sterilisasi kering kita dapat melakukan sterilisasi dengan melakukan

pemanasan langsung dan menggunakan oven.

Pada pemanasan langsung alat-alat yang digunakan langsung dipanaskan pada

api dari pemanas spitus atau bunsen secara keseluruhan lalu tutuplah mulut alat

dengan kapas dan kemudian dibungkus dengan kertas putih atau bersih.

Pada pemanasan menggunakan oven, alat-alat yang akan disterilisasi

dimasukkan kedalam oven sekitar 1 jam dengan suhu sekitar 160oC kemudian

setelah dioven dan didinginkan alat-alat tersebut mulutnya ditutup dengan

kapas dan dibungkus dengan kertas putih atau bersih.

11

IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil

Adapun hasil dari praktikum Pengenalan Alat Laboratorium dan Sterilisasi

dituangkan dalam sebuah tabel sebagai berikut :

Tabel 1. Daftar alat-alat beserta fungsi di laboratorium

No Nama Alat Fungsi Gambar

1 Gelas kimia

(beaker)

a. Untuk mengukur volume

larutan yang tidak memerlukan

tingkat ketelitianYang tinggi

b. Menampung zat kimia

c. Memanaskan cairan

d. Media pemanasan cairan.

2 Labu

erlenmeyer

a.Untuk menyimpan dan

memanaskan larutan

b.Menampung filtrat hasil

penyaringan

c Menampung titran (larutan yang

dititrasi) pada proses titrasi.

3 Gelas ukur Untuk mengukur volume larutan

tidak memerlukan tingkat

ketelitian yang tinggi dalam

jumlah tertentu.

4 Pipet seukuran digunakan untuk mengambil

cairan dalam jumlah tertentu

secara tepat, bagian tengahnya

menggelembung.

5 Pipet berukuran Berguna untuk mengukur dan

memindahkan larutan dengan

volume tertentu secara tepat.

6 Pipet tetes Berguna untuk mengambil cairan

dalam skala tetesan kecil.

12

7 Buret Untuk mengeluarkan larutan

dengan volume tertentu, biasanya

digunakan untuk titrasi.

8 Tabung reaksi a.Sebagai tempat untuk

mereaksikan bahan kimia

bUntuk melakukan reaksi kimia

dalam skala kecil

9 Kaca arloji a.Sebagai penutup gelas kimia saat

memanaskan sampel

b.Tempat saat menimbang bahan

kimia

c.Tempat untuk mengeringkan

padatan dalam desikator

10 Corong Untuk menyaring campuran kimia

dengan gravitasi.

11 Cawan terbuat dari porselen dan biasa

digunakan untuk menguapkan

larutan.

12 Mortar dan

pestle

digunakan untuk menghancurkan

dan mencampurkan padatan kimia.

13 Spatula a.Untuk mengambil bahan kimia

yang berbentuk padatan

b.Dipakai untuk mengaduk larutan

14 Batang

pengaduk

terbuat dari kaca tahan panas,

digunakan untuk mengaduk cairan

di dalam gelas kimia.

13

15 Kawat kasa digunakan sebagai alas dalam

penyebaran panas yang berasal

dari suatu pembakar.

16 Kaki tiga besi yang menyangga ring dan

digunakan untuk menahan kawat

kasa dalam pemanasan.

17 Burset /

pembakar

spiritus

digunakan untuk memanaskan

bahan kimia.

18 Bola hisap digunakan untuk membantu proses

pengambilan cairan. Terbuat dari

karet yang disertai dengan tanda

untuk menyedot cairan (suction),

mengambil udara (aspirate) dan

mengosongkan (empty).

19 Neraca analisis digunakan untuk menimbang

padatan kimia.

20 Labu ukur Untuk membuat larutan dengan

konsentrasi tertentu dan

mengencerkan larutan.

21 Labu bundar Untuk memanaskan larutan dan

menyimpan larutan.

14

22 Corong Buchner Berguna untuk menyaring sampel

agar lebih cepat kering.

23 Erlenmeyer

Buchner

Dipakai untuk menampung cairan

hasil filtrasi.

24 Corong pisah Untuk memisahkan campuran

larutan yang memiliki kelarutan

yang berbeda. Biasanya digunakan

dalam proses ekstraksi.

25 Desikator a.Tempat menyimpan sampel

yang harus bebas air

b.Mengeringkan padatan

26 Cawan petri Berfungsi sebagai wadah

menimbang dan menyimpan bahan

kimia, mikrobiologi.

27 Botol semprot Berfungsi sebagai tempat

menyimpan aquadest.

28 Krusibel Dipakai sebagai tempat untuk

mereaksikan bahan kimia.

15

29 Kaki tiga krus berfungsi untuk menaruh krusibel

saat akan dipanaskan langsung di

atas api.

30 Statif berfungsi untuk menegakkan

buret, corong, corong pisah dan

peralatan gelas lainnya pada saat

digunakan.

31 Klem manice berfungsi untuk memegang

peralatan gelas yang dipakai pada

proses destilasi.

32 Klem bosshead berfungsi untuk menghubungkan

statif dengan klem manice atau

pemegang corong.

33 Klem buret terbuat dari besi atau baja untuk

memegang buret yang digunakan

untuk titrasi.

34 Pemegang

corong

untuk memegang corong atau

corong pisah yang dipakai pada

proses penyaringan atau

pemisahan.

35 Tang krusibel untuk mengambil dan membawa

krusibel.

36 Stirrer magnetic magnet yang digunakan untuk

mengaduk larutan.

16

37 Sentrifuge berfungsi untuk mengendapkan

dan memisahkan padatan dari

larutan.

38 Chromatography

chamber

terbuat dari kaca yang digunakan

dalam proses kromatografi kertas.

39 Spectronic 20 digunakan untuk mengukur

absorbansi larutan berwarna dalam

proses spektrofotometri

40 Kertas saring Digunakan untuk menyaring

larutan.

41 Jarum ose Untuk mengambil dan

menanamkan bakteri

42 Kaca preparat Sebagai tempat sampel yang akan

diuji

43 Mikroskop Untuk melihat benda-benda yang

berukuran mikroskopik.

17

44 Rak Sebagai tempat penyimpanan

tabung reaksi.

45 Penjepit tabung

reaksi

Untuk mengambil tabung reaksi

pada saat proses pemanasan.

46 Incubator Sebagai tempat inkubasi bakteri

setelah ditanam.

47 Autoclave Untuk mensterilkan alat pada suhu

100-121oC.

48 Oven Untuk mensterilkan alat pada suhu

180oC.

49 Colonicounter Untuk menghitung koloni bakteri

50 lup Untuk alat pembesar

Pada proses sterilisasi hasil yang kita dapat adalah dua cara sterilisasi. Adapun dua

cara tersebut adalah:

18

a. Sterilisasi basah, sterilisasi basah dilakukan dengan menggunakn alkohol 70%.

b. Sterilisasi kering, sterilisasi kering dilakukan dengan pemanasan langsung

menggunakn bunsen.

B. Pembahasan

Kita sebagai praktikan tidak akan pernah lepas untuk berhubungan dengan

laboratorium. Laboratorium adalah sebuah tempat untuk melakukan percobaan dan

penelitian.

Dari hasil yang diperoleh, telah kita ketahui bahwa begitu banyak macam alat-alat

yang ada dilaboratorium. Semua alat-alat yang ada dilaboratorium mempunyai nama yang

berbeda, bentuk yang berbeda, dan fungsi serta cara penggunaan yang berbeda-beda. Kita

sebagai praktikan yang akan selalu berhubungan langsung dengan alat-alat tersebut,

sehingga kita wajib untuk mengetahui fungsi dan cara penggunaan alat-alat tersebut.

Contohnya pipet tetes digunakan untuk memindahkan larutan dari satu tempat ke tempat

lainnya dalan skala kecil, sedangkan bola hisap juga digunakan untuk memindahkan

larutan dalam skala besar. Jadi, kita sebagai praktikan harus tau benar fungsi dan cara

penggunaan suatu alat agar tidak terjadi kesalahan saat menggunakan alat tersebut.

Selain itu, kita juga harus mengetahui apa saja bahan-bahan yang ada di dalam

laboratorium terutama bahan-bahan kimia. Agar kita tidak salah menggunakan bahan yang

ingin digunakan dan berhati-hati dalam menggunakannya. Karena, bahan kimia bersifat

berbahaya dan beracun.

Sebelum melakukan percobaan kita pastinya harus menyediakan alat dan bahan yang

digunakan untuk percobaan tersebut. Alat dan bahan yang digunakan haruslah dalam

keadaan steril. Keadaan steril adalah keadaan dimana segala subtansi bebas dari semua

makhluk hidup terutama bersifat mikropis. Sedangkan kegiatan pembebasan tersebut

dinamakan sterilisasi. Sterilisasi dilakukan untuk mengindari terjadinya infeksi yang

mungkin terjadi pada manusia, menghindari kerusakan alat atau bahan dari kontaminan

dan mencegah pencampuran dari bahan-bahan yang tidak diinginkan.

Biasanya makhluk hidup yang ingin dimusnahkan yaitu makhluk hidup yang bersifat

parasit seperti bakteri, virus, alga, protozoa, serta jamur yang merugikan.

19

Dalam percobaan kali ini kami melalukan sterilisasi terhadap beberapa alat seperti

cawan petri dan tabung reaksi. Sterilisasi yang kami lakukan dengan dua metode yaitu

sterilisasi basah dan sterilisasi kering.

Pada sterilisasi basah kami menggunakan bahan yaitu alcohol 70%. Dimana alkohol

70% bisa membunuh bakteri karna alkohol bersifat racun (toxic). Alkohol 70% adalah

alkohol yang mengandung 70% alkohol murni dan 30% aquadest selain itu alkohol 70%

juga mudah didapatkan dengan harga yang murah. Sebelum melakukan sterilisasi alat kita

harus mensterilkan tangan kita dengan menyemprotkan alkohol keseluruh bagian tangan

lalu mengeringkannya dengan menggunakan tissue. Setelah itu barulah kita mensterilkan

alat-alat yang akan digunakan dengan menyemprotkan alkohol 70% keseluruh bagian alat

tersebut dan mengeringkannya dengan menmggunakan tisue. Setelah itu untuk tabung

reaksi yang memiliki mulut, mulut tabung reaksi tersebut kita tutup dengan kapas agar

tertutup dan tidak ada lagi kemungkinan mikroba untuk masuk ke dalam tabung reaksi

tersebut, setelah itu alat-alat tersebut kita bungkus dengan teknik tersendiri. Selain dengan

menggunakan alkohol, sterilisasi basah juga dapat dilakukan dengan menggunakan

autoklaf dengan suhu 121oC selama 15 menit dengan tekanan 1 atm.

Pada sterilisasi kering kami menggunakan pemanasan langsung dengan alat pemanas

berbahan bakar spritus atau bunsen, Bunsen selalu digunakan sebagai pemanas dalam

berbagai percobaan maupun penelitian. Dimana bunsen umumnya menggunakan bahan

bakar spritus karena spritus menghasilkan api biru yang tidak menyebabkan kerusakan

pada alat-alat laboratorium. Setelah Bunsen dinyalakan tabung reaksi dan cawan petri

dipanaskan secara langsung pada api dengan jarak sekitar 1 cm, jarak ini digunakan agar

alat tidak langsung menerima panas secara cepat sehingga bisa menyebabkan kerusakan.

Setelah dipanaskan keseluruhan bagian alat tersebut lalu didinginkan, pada tabung reaksi

dan cawan petri akan diperlakukan hal yang sama seperti pada sterilisasi basah yaitu

menutupi mulut tabung dengan kapas dengan tujuan yang sama. Setelah itu cawan petri

dan tabung reaksi dibungkus dengan menggunakan kertas putih dan bersih.

Itulah hasil pembahasan yang dapat dituangkan pada praktikum Pengenalan Alat dan

Sterilisasi. Sehingga kita diharapkan dapat mengetahui fungsi dan cara menggunakan alat-

alat di laboratorium serta dapat melakukan proses sterilisasi dengan baik.

20

V. KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

Adapun kesimpulan dari praktikum Pengenalan Alat dan Sterilisasi antara lain

sebagai berikut:

1. Setiap alat dan bahan yang ada di dalam laboratorium mempunyai fungsi dan cara

kerja yang berbeda-beda.

2. Alat-alat yang ada di dalam laboratorium harus disimpan di tempat yang aman sesuai

dengan bahan baku pembuatan alat tersebut.

3. Sebelum melakukan percobaan ataupun penelitian kita harus melakukan sterilisasi,

yaitu pembebasan segala subtansi dari semua makhluk hidup.

4. Sterilisasi dilakukan untuk mencegah segala hal yang tidak diinginkan.

5. Yang tidak diinginkan biasanya bersifat parasit seperti bakteri, virus, protozoa, alga

dan jamur.

6. Sterilisasi dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu sterilisasi basah dan kering.

7. Alkohol bersifat racun dan dapat membunuh bakteri, sehingga bisa digunakan sebagai

bahan untuk melakukan sterilisasi.

B. Saran

Adapun saran saya pada praktikum kali ini adalah agar seluruh praktikan dapat

melakukan setiap percobaan tersebut, sehingga setiap praktikan dapat memahami dan

dapat mencapai tujuan dari praktikum tersebut untuk memudahkan praktikan kemudian

harinya.

PEMBUATAN MEDIA AGAR

21

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Untuk menelaah mikroorganisme di laboratorium, kita harus dapat menumbuhkan

mereka. Mikroorganisme dapat berkembang biak dengan alami atau dengan bantuan

manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia diantaranya melalui substrat

yang disebut media. Untuk melakukan hal ini, haruslah dimengerti jenis-jenis nutrien yang

diisyaratkan oleh bakteri dan juga macam lingkungan fisik yang menyediakan kondisi

optimum bagi pertumbuhannya (Label, 2008).

Sejak ditemukan mikroskop oleh Antony van Leeuwenhoek pada tahun 1683 (Gupte,

1990 dalam Farida, 2008), dapat diketahui ternyata kuman ada di mana-mana, di air, tanah,

udara, benda-benda, bahkan di tubuh setiap orang. Keberadaan kuman-kuman yang tidak

kasat mata tersebut seringkali membuat kita tidak sadar akan bahaya yang dapat

ditimbulkan. Secara kontinyu kuman-kuman tersebut diteliti atau dipelajari di laboratorium

mikrobiologi (Rachmawati, 2008).

Ekperimen diartikan sebagai rangkaian kegiatan (menyusun alat mengoperasikan

alat, mengukur, dan sebagainya) dan pengamatan untuk memverifikasi dan menguji suatu

hipotesis berdasarkan bukti-bukti empiris. Sementara kerja lab cakupannya lebih luas dari

pada eksperimen yang diartikan sebagai aktifitas dengan menggunakan fasilitas lab, seperti

melatih keterampilan menggunakan alat, melakukan eksperimen (percobaan),

mendemonstrasikan percobaan, melakukan pengontrolan kualitas bahan baku,

pengontrolan kualitas produk industri, ekshibisi (pameran) proses-proses kimia dan


Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dan dikembangkan pada suatu substrat yang

disebut medium. Medium yang digunakan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan

mikroorganisme tersebut harus sesuai susunanya dengan kebutuhan jenis-jenis

mikroorganisme yang bersangkutan. Beberapa mikroorganisme dapat hidup baik pada

medium yang sangat sederhana yang hanya mengandung garam anargonik di tambah

sumber karbon organik seperti gula. Sedangkan mikroorganime lainnya memerlukan suatu

medium yang sangat kompleks yaitu berupa medium ditambahkan darah atau bahan-

22

bahan kompleks lainnya. Alat-alat yang digunakan dalam perkembangbiakan

inipun harus disterilisasikan terlebih dahulu. Hal tersebut dimaksudkan agar tidak ada

mikroorganisme lain, yang tidak diinginkan, tumbuh dalam media tersebut, sehingga dapat

menghambat pertumbuhan mikroorganisme yang akan dibiakkan dalam media tersebut

(Mila, 2005).

Akan tetapi yang terpenting medium harus mengandung nutrien yang merupakan

substansi dengan berat molekul rendah dan mudah larut dalam air. Nutrien ini adalah

degradasi dari nutrien dengan molekul yang kompleks. Nutrien dalam medium harus

memenuhi kebutuhan dasar makhluk hidup, yang meliputi air, karbon, energi, mineral dan

faktor tumbuh (Mila, 2005).

Mikroorganisme yang ingin kita tumbuhkan, yang pertama harus dilakukan adalah

memahami kebutuhan dasarnya kemudian memformulasikan suatu medium atau bahan

yang akan digunakan. Air sangat penting bagi organisme bersel tunggal sebagai komponen

utama protoplasmanya serta untuk masuknya nutrien ke dalam sel. Pembuatan medium

sebaiknya menggunakan air suling. Air sadah umumnya mengandung ion kalsium dan

magnesium yang tinggi. Alat yang akan digunakan dalam suatu penelitian atau praktikum

harus disterilisasi terlebih dahulu untuk membebaskan semua bahan dan peralatan tersebut

dari semua bentuk kehidupan. Sterilisasi merupakan suatu proses untuk mematikan semua

organisme yang teradapat pada suatu benda. Proses sterilisasi dapat dibedakan menjadi 3

macam, yaitu penggunaan panas (pemijaran dan udara panas); penyaringan; penggunaan

bahan kimia (etilena oksida, asam perasetat, formaldehida dan glutaraldehida alkalin)

(Mushoffa, 2011).

B. Tujuan

Adapun tujuan dari praktikum Pembuatan Media Agar adalah agar mahasiswa dapat

mengetahui bagaimana cara membuat media agar sebagai media menumbuhkan bakteri.

23


A. Media agar

Media adalah suatu substansi yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi)

yang diperlukan untuk pertumbuhan dan perkembang biakan bakteri . Untuk menaikan

tekanan osmose dan menjaga keseimbangan fisikokhemis sel-sel bakteri yang tumbuh,

kedalam media harus ditambahkan NaCL. Wadah yang digunakan pada pembuatan media

dipakai alat-alat gelas dan stainless, sedangkan pH (derajat keasaman) media bisa diukur

dengan kertas penunjuk, pH meter dan zat penunjuk . Untuk sterilisasi media dapat

dilakukan dengan uap air panas bertekanan (autoclave), uap air panas yang mengalir

(steam) atau dengan saringan Seitz EK, sedangkan alat-alat gelas disterilisasi dengan udara

panas kering (oven). Setiap batch media yang sudah dikontrol sterilitas dan mutunya harus

disimpan pada suhu 5C-8C, selama belum/tidak dipakai (Hidayat, 2000)

Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran

zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya.

Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit

untuk menyusun komponen sel. Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat

mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media

pertumbuhannya (Indra, 2008).

Jenis medium sangat bervariasi bergantung kepada apa yang dijadikan dasar

penamaan. Berdasarkan kepada bentuknya dikenal tiga macam medium, yaitu medium

cair, medium semi solid dan medium padat. Beda utama ketiga macam medium, yaitu ada

tidaknya bahan pemadat. Medium cair tidak menggunakan bahan pemadat. Medium semi

solid dan medium padat menggunakan bahan pemadat. Bahan pemadat dapat berupa

amilum, gelatin, selulosa, dan agar-agar. Agar-agar paling umum digunakan. Jumlah bahan

pemadat pada medium semi solid setengahnya dari medium padat. Pada medium padat

jumlah agarnya 1,5%-1,8%. Berdasarkan fungsi/sifatnya beberapa macam medium, antara

lain medium umum, medium selektif dan medium diferensial. Berdasarkan komposisi

kimianya, dikenal medium alami, medium semi sintetik, dan medium sintetik. Perlu

sterilisasi terhadap medium dan alat-alat yang akan digunakan untuk kegiatan prakatikum

24

Mikrobiologi. Sterilisasi adalah suatu program untuk mematikan semua organisme

yang terdapat pada atau di dalam suatu benda. Pemilihan cara sterilisasi didasarkan pada

sifat bahan yang akan disterilkan. Cara sterilisasi yang umum digunakan secara rutin di

laboratorium Mikrobiologi ialah dengan pemanasan. Bila panas digunakan bersama-sama

dengan uap air maka disebut sterilisasi panas lembab, bila tanpa kelembaban disebut

sterilisasi panas kering atau sterilisasi kering (Ammi et al, 2001).

Agar biakan bakteri dapat dibuat, maka medium dan alat-alat yang diperlukan harus

disterilisasi sebelum inokulasi. Sterilisasi yaitu suatu proses untuk mematikan semua

organisme yang dapat menjadi kontaminan. Metode yang lazim digunakan untuk

mensterilisasikan media dan alat-alat ialah dengan pemanasan. Jika panas digunakan

bersama-sama dengan uap air disebut sterilisasi basah (menggunakan autaklaf), sedangkan

jika tanpa uap air disebut sterilisasi kering (menggunakan oven) (Mila, 2005).

B. Macam-macam Medium

Untuk menumbuhkan bakteri tersebut di dalam suatu biakan murni, haruslah

dimengerti jenis- jenis nutrient yang disyartakan oleh bakteri dan juga macam lingkungan

fisik yang mana dapat menyebabkan kondisi yang optimum bagi pertumbuhannya tersbut

(Mushoffa, 2011).

Adapun macam-macam media Pertumbuhan antara lain (Indra, 2008) :

1. Medium berdasarkan sifat fisik

Medium padat yaitu media yang mengandung agar 15% sehingga setelah dingin

media menjadi padat.

Medium setengah padat yaitu media yang mengandung agar 0,3-0,4% sehingga

menjadi sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair. Media semi solid dibuat dengan

tujuan supaya pertumbuhan mikroba dapat menyebar ke seluruh media tetapi tidak

mengalami percampuran sempurna jika tergoyang. Misalnya bakteri yang tumbuh

pada media NfB (Nitrogen free Bromthymol Blue) semisolid akan membentuk cincin

hijau kebiruan dibawah permukaan media, jika media ini cair maka cincin ini dapat

dengan mudah hancur. Semisolid juga bertujuan untuk mencegah/menekan difusi

oksigen, misalnya pada media Nitrate Broth, kondisi anaerob atau sedikit oksigen

25

meningkatkan metabolisme nitrat tetapi bakteri ini juga diharuskan tumbuh merata

diseluruh media.

Medium cair yaitu media yang tidak mengandung agar, contohnya adalah NB

(Nutrient Broth), LB (Lactose Broth).

2. Medium berdasarkan komposisi

Medium sintesis yaitu media yang komposisi zat kimianya diketahui jenis dan

takarannya secara pasti, misalnya Glucose Agar, Mac Conkey Agar.

Medium semi sintesis yaitu media yang sebagian komposisinya diketahui secara

pasti, misanya PDA (Potato Dextrose Agar) yang mengandung agar, dekstrosa dan

ekstrak kentang. Untuk bahan ekstrak kentang, kita tidak dapat mengetahui secara

detail tentang komposisi senyawa penyusunnya.

Medium non sintesis yaitu media yang dibuat dengan komposisi yang tidak dapat

diketahui secara pasti dan biasanya langsung diekstrak dari bahan dasarnya, misalnya

Tomato Juice Agar, Brain Heart Infusion Agar, Pancreatic Extract.

3. Medium berdasarkan tujuan

Media untuk isolasi. Media ini mengandung semua senyawa esensial untuk

pertumbuhan mikroba, misalnya Nutrient Broth, Blood Agar.

Media, selektif/penghambat. Media yang selain mengandung nutrisi juga ditambah

suatu zat tertentu sehingga media tersebut dapat menekan pertumbuhan mikroba lain

dan merangsang pertumbuhan mikroba yang diinginkan. Contohnya adalah Luria

Bertani medium yang ditambah Amphisilin untuk merangsang E.coli resisten

antibotik dan menghambat kontaminan yang peka, Ampiciline. Salt broth yang

ditambah NaCl 4% untuk membunuh Streptococcus agalactiae yang toleran terhadap

garam.

Media diperkaya (enrichment). Media diperkaya adalah media yang mengandung

komponen dasar untuk pertumbuhan mikroba dan ditambah komponen kompleks

seperti darah, serum, kuning telur. Media diperkaya juga bersifat selektif untuk

mikroba tertentu. Bakteri yang ditumbuhkan dalam media ini tidak hanya

membutuhkan nutrisi sederhana untuk berkembang biak, tetapi membutuhkan

komponen kompleks, misalnya Blood Tellurite Agar, Bile Agar, Serum Agar, dll.

26

Media untuk peremajaan kultur. Media umum atau spesifik yang digunakan untuk

peremajaan kultur

Media untuk menentukan kebutuhan nutrisi spesifik. Media ini digunakan unutk

mendiagnosis atau menganalisis metabolisme suatu mikroba. Contohnya adalah

Kosers Citrate medium, yang digunakan untuk menguji kemampuan menggunakan

asam sitrat sebagai sumber karbon.

Media untuk karakterisasi bakteri. Media yang digunakan untuk mengetahui

kemempuan spesifik suatu mikroba. Kadang-kadang indikator ditambahkan untuk

menunjukkan adanya perubahan kimia. Contohnya adalah Nitrate Broth, Lactose

Broth, Arginine Agar.

Media diferensial. Media ini bertujuan untuk mengidentifikasi mikroba dari

campurannya berdasar karakter spesifik yang ditunjukkan pada media diferensial,

misalnya TSIA (Triple Sugar Iron Agar) yang mampu memilih Enterobacteria

berdasarkan bentuk, warna, ukuran koloni dan perubahan warna media di sekeliling

koloni.

27


A. Tempat dan Waktu

Adapun praktikum dilaksanankan pada hari rabu 03 April 2013 pada pukul 14.30

sampai dengan selesai. Bertempat dilaboraturium bersama program studi Budidaya

Perairan dan Teknologi Hasil Perikanan Fakultas Pertanian Universitas Sriwijaya.

B. Alat dan Bahan

Adapun alat yang digunakan dalam praktikum Pengenalan Alat dan Sterilisasi yaitu

cawan petri, tabung reaksi, erlenmeyer, magnetik stirrer, gelas kimia, gelas ukur, pipet

tetes, tissue, kertas putih.

Adapun bahan yang digunakan yaitu media agar PCA (Plat Count Agar) dan

aquadest serta alcohol 70%.

C. Cara Kerja

Cara kerja pratikum pembuatan media agar adalah sebagai berikut:

1. Langkah pertama yang dilakukan yaitu dengan mensterilisasikan terlebih dahulu alat-

alat yang digunakan dengan alkohol 70% agar tidak ada mikroba yang tidak

diinginkan masuk kedalam alat dan bahan yang akan digunakan tersebut.

2. Lalu homogenkan larutan PCA (Plate Count Agar) sebanyak 4,2 gram dengan 15 ml

aquadest kedalam Erlenmeyer dan masukkan magnetik stirrer. Magnetik stirrer

berfungsi sebagai agar larutan dapat bercampur dengan sempurna, cara kerja dari

magnetik stirrer yaitu magnetic akan berputar saat akan terkena tekanan panas dan

larutan akan homogen.

3. Kemudian panaskan larutan kedalam autoclave denagan suhu 1210 C selama 15 menit

dengan tekanan 1 atm.

4. Setelah itu, larutan tersebut dimasukkan kedalam cawan petri dan tabung reaksi.

28

5. Pada cawan petri diisi sebanyak 15 ml dan digoyang-goyangkan membentuk angka 8

sampai agar tersebut mengeras seperti jelly.

6. Pada tabung reaksi diisi dengan larutan tersebut sebanyak dari tinggi tabung.

29


A. Hasil

Adapun hasil dari praktikum Pembuatan Media Agar dapat dilihat dari gambar

berikut:

Gambar 1. Hasil media agar dengan menggunakan media PCA

30

Adapun hasil dari praktikum ini yaitu media agar yang dibuat dari medium PCA

(Plat Count Agar). Dimana media berbentuk padatan dan dilarutkan menggunakan

aquadest dengan pemanasan sehingga menghasilkan larutan berwarna merah kecoklatan.

Setelah didinginkan larutan akan mengeras menjadi agar.

B. Pembahasan

Berdasarkan hasil praktikum ini, dapat diketahui bahwa untuk menumbuhkan

mikroba kita dapat menggunakan media agar sebagai medium. Media agar yang kita

gunakan pada praktikum kali ini yaitu media agar PCA (Plat Count Agar).

Dimana telah di ketahui bahwa medium adalah media berupa bahan-bahan berisi

nutrient atau nutrisi yang dibutuhkan mikroorganisme untuk proses pertumbuhan.

Sedangkan disini agar berperan sebagai gelling agent untuk memadatkan media cair

sehingga sel tidak larut dalam larutan.

Penggunaan media PCA karna media PCA mengandung nutrisi yang dibutuhkan

mikroorganisme yang sedang dikembangkan, memiliki kelembaban optimum yang

dibutuhkan, mengandung oksigen kultur untuk bakteri aerob dan pH yang sesuais serta

bebas dari mikroba lainnya.

Media PCA pertama berbentuk padatan, lalu diambil sebanyak 4,2 gram untuk

dilarutkan kedalam 240 ml aquadest. Lalu dihomogenkan dengan cara dipanaskan dengan

bantuan stirrer magnetik. Larutan yang dihasilkan berwarna merah kecoklatan. Dimana,

stirrer magnetik berfungsi untuk menghomogenkan suatu larutan. Cara kerja stirrer

magnetik yaitu apabila larutan dipanaskan maka stirrer magnetik akan berputar untuk

menghomogenkan larutan. Setelah larutan dihomogenkan, larutan dimasukkan ke dalam

cawan petri sebanyak 15 ml dan ke dalam tabung reaksi sebanyak dari tinggi tabung

tersebut. Pada cawan petri larutan didinginkan dengan cara memutar cawan petri seperti

angka 8 hingga larutan mengeras. Cara ini dilakukan agar larutan mengeras secara

keseluruhan dengan tingkat kepadatan yang tinggi. Sedangkan pada tabung reaksi larutan

dikenakan pada sisi dinding tabung dengan cara memiringkan tabung, hal terbebut

dilakukan agar mikroba yang ingin ditumbuhkan dapat tumbuh pada sisi tabung. Banyak

lagi media agar yang dapat digunakan untuk menumbuhkan mikroba, contohnya media

31

TSA (Triptic Soy Agar), media TSB (Triptic Soy Broth), media OF (Oksidatif

Fermentatif), Media Agar TSI (Triple Sugar Iron), dan lain-lain.

Setiap media mempunyai kelebihan tersendiri, seperti media TSA yang sudah

terkontaminasi dengan bakteri yang ingin di tumbuhkan. Sedangkan media TSB yaitu

media yang belum terkontaminasi dengan bakteri apapun. Itulah pembahasan pada

praktikum kali ini.

32


A. Kesimpulan

Adapun kesimpulan dari praktikum Pengenalan Alat dan Sterilisasi antara lain

sebagai berikut:

1. Media agar digunakan untuk menumbuhkan bakteri.

2. Sebelum membuat media agar kita harus mensterilkan semua alat agar tidak terjadi

hal-hal yang tidak diinginkan.

3. Agar berperan sebagai gelling agent untuk memadatkan media cair sehingga sel tidak

larut dalam air.

4. Media agar yang digunakan harus mempunyai kandungan nutrient, oksigen kultur, pH

yang sesuai, kelembaban yang optimum, serta bebas dari mikroba yang tidak

diinginkan.

5. Dalam melarutkan media agar dengan akuadest biasanya dibantu dengan stirrer

magnetik.

6. Stirrer magnetik akan berputar dalam larutan yang dipanaskan untuk memudahkan

dalam menghomogenkan larutan.

7. Semua jenis media agar mempunyai kelebihan tersendiri sesuai kegunaan spesifiknya.

B. Saran




harinya.

ISOLASI BAKTERI DAN PERHITUNGAN BAKTERI

33

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dan dikembangkan pada suatu substrat yang

disebut medium. Medium yang digunakan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan

mikroorganisme tersebut harus sesuai susunanya dengan kebutuhan jenis-jenis

mikroorganisme yang bersangkutan. Beberapa mikroorganisme dapat hidup baik pada

medium yang sangat sederhana yang hanya mengandung garam anargonik di tambah

sumber karbon organik seperti gula. Sedangkan mikroorganime lainnya memerlukan suatu

medium yang sangat kompleks yaitu berupa medium ditambahkan darah atau bahan-

bahan kompleks lainnya. Alat-alat yang digunakan dalam perkembangbiakan inipun

harus disterilisasikan terlebih dahulu. Hal tersebut dimaksudkan agar tidak ada

mikroorganisme lain, yang tidak diinginkan, tumbuh dalam media tersebut, sehingga dapat

menghambat pertumbuhan mikroorganisme yang akan dibiakkan dalam media tersebut

(Mila, 2005).

Secara alami, mikroba di alam ditemukan dalam populasi campuran. Untuk

memperoleh biakan murni dapat dilakukan isolasi yang diawali dengan pengenceran

bertingkat. Proses isolasi mikroba adalah memisahkan mikroba satu dengan mikroba lain

yang berasal dari campuran berbagai mikroba untuk dapat mempelajari sifat biakan,

morfologi dan sifat mikroba lainnya. Bakteri aerob merupakan bakteri yang membutuhkan

O2 untuk pertumbuhannya. Sistem enzimnya membutuhkan O2 sebagai elektron aseptor

pada proses fosforilasi oksidatifnya. Contoh bakteri areob adalah Bacillus sp., Escherichia

coli, dan Streptococcus (Fajar et al, 2012).

Pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru harus

dilakukan secara teliti. Terlebih dahulu harus diusahakan agar semua alat-alat yang ada

sangkut pautnya dengan medium dan pekerjaan inokulasi itu benarbenar steril. Hal ini

untuk menghindari kontaminasi, yaitu masuknya mikkroorganisme yang tidak diinginkan

(Budiarti, 2009).

Indonesia merupakan suatau negara kepulauan yang memiliki perairan cukup luas

dengan pencampurran arus dari samudera Indonesia dan samudera Pasifik. Sehingga kaya

34

akan hasil-hasil perikanan. Hasil laut tersebut sidah banyak dimanfaatkan dalam bentuk

segar maupun olahan. Salah satu pengolahan yang sering dilakukan adalah dengan cara

permentasi. Fermentasi merupakan suatu proses penguraian secara biologis dari senyawa-

senyawa komplek terutama protein menjadi senyawa-senyawa yang lebih sederhana dalam

keadaan terkontrol dan hasil yang diinginkan serta dianggap aman untuk dikonsumsi.

Dalam proses fermentasi bakteri berperan dalam penguraian senyawa-senyawa tersebut

(Chistanti, 2006).

Selama proses fermentasi akan terjadi aktivitas enzim protease, lipase dan amylase

yang diproduksi oleh mikroba yang berperan dalam proses fermentasi yang bersangkutan.

Fermentasi padat dalam produksi enzim pada umumnya memberikan hasil yang lebih

baik dan enzim yang dihasilkan juga lebih beragam (Amelia et al, 2005).

B. Tujuan

Adapun tujuan dari praktikum Isolasi Bakteri dan Perhitungan Bakteri antara lain

sebagai berikut:

1. Untuk mengisolasi mikroba dengan berbagai metode atau teknik,

2. Untuk mengisolasi bakteri dan jamur untuk mendapatkan biakan murni,

3. Untuk menghitung jumlah mikroba, baik yang sudah mati maupun yang masih hidup

secara langsung maupun secara tidak langsung.

35

III. TINJAUAN PUSTAKA

A. Isolasi bakteri

Isolasi bakteri bertujuan untuk mendapatkan bakteri yang menyerang pada sampel

yang diduga terinfeksi bakteri. Sumber isolasi pada ikan adalah semua bagian tubuh yang

mengalami kelainan patologi yang diduga disebabkan oleh penyakit bakterial dari bagian

tubuh eksternal maupun internal. Isolasi bakteri ini dilakukan dengan menggunakan media

agar yang bersifat umum, yaitu media Triptic Soy Agar (TSA) atau Nutrient Agar (NA)

(Balai Karantina Ikan, 2000).

Pemurnian Bakteri Pemurnian ini merupakan kelanjutan dari isolasi bakteri bertujuan

mengidentifikasi mikroorganisme penyebab penyakit dengan cara mengambil koloni

bakteri yang tumbuh dominan atau terbanyak dengan asumsi bahwa bakteri yang dominan

tersebut merupakan bakteri penyebab penyakit. Media yang digunakan sama dengan media

yang digunakan untuk isolasi bakteri yaitu media TSA (Balai Karantina Ikan, 2000).

Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba

lain yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. Hal ini dapat dilakukan

dengan menumbuhkannya dalam media padat, sel-sel mikroba akan membentuk koloni sel

yang tetap pada tempatnya (Nur, I. dan Asnani, 2007).

Dikenal beberapa cara atau metode untuk memperoleh biakan murni dari suatu

biakan campuran. Dua diantaranya yang paling sering digunakan adalah metode cawan

gores dan metode cawan tuang. Yang didasarkan pada prinsip pengenceran dengan maksud

untuk memperoleh spesies individu. Dengan anggapan bahwa setiap koloni dapat terpisah

dari satu jenis sel yang dapat diamati (Afrianto, 2004).

Biakan murni diperlukan dalam berbagai metode mikrobiologis, antara lain

digunakan dalam mengidentifikasi mikroba. Untuk mengamati ciri-ciri kultural morfologi,

fisiologi dan serologi dibutuhkan mikroba yang berasal dari satu spesies (Dwidjoseputro,

2005).

Menurut Gandjar (2006), terdapat berbagai cara mengisolasi mikroba, yaitu:

isolasi pada agar cawan, isolasi pada medium cair, dan Isolasi sel tunggal.

36

1. Isolasi pada agar cawan, prinsip isolasi pada agar cawan adalah mengencerkan

mikroorganisme sehingga diperoleh individu spesies yang dapat dipisahkan dari

organisme lainnya. Setiap koloni yang terpisah yang tampak pada cawan tersebut

setelah inkubasi berasal dari satu sel tunggal. Terdapat beberapa cara dalam metode

isolasi pada agar cawan, yaitu: Metode gores kuadran, dan metode agar cawan tuang

Metode gores kuadran. Bila metode ini dilakukan dengan baik akan menghasilkan

terisolasinya mikroorganisme, dimana setiap koloni berasal dari satu sel. Metode

agar tuang Berbeda dengan metode gores kuadran, cawan tuang menggunakan

medium agar yang dicairkan dan didinginkan (50oC), yang kemudian dicawankan.

Pengenceran tetap perlu dilakukan sehingga pada cawan yang terakhir mengandung

koloni-koloni yang terpisah di atas permukaan/di dalam cawan.

2. Isolasi pada medium cair, metode ini dapat dilakukan apabila mikroorganisme tidak

dapet tumbuh pada agar cawan. Metode ini juga perlu dilakukan pengenceran dengan

beberapa kali pengenceran. Semakin tinggi pengenceran peluang untuk mendapatkan

satu sel semakin besar.

3. Isolasi sel tunggal, metode ini dilakukukan apabila mikroorganisme berukuran besar

dan tidak dapat diisolasi dengan metode agar cawan atau medium cair. Sel

mikroorganisme dilihat dengan menggunakan perbesaran sekitar 100 kali. Kemudian

sel tersebut dipisahkan dengan menggunakan pipet kapiler yang sangat halus ataupun

micromanipulator, yang dilakukan secara aseptis.

Bakteri yang memiliki flagella sering kali membentuk koloni yang menyebar

terutama jika menggunakan lempengan agar basah, untuk mencegah menyebarnya koloni

maka harus digunakan agar benar-benar kering (Djida, N., 2000).

B. Bakteri

Eubacteria (bakteri) merupakan organisme mikroskopis uniseluler (bersel tunggal)

yang paling banyak dijumpai di dunia. Ilmuwan yang meneliti bakteri pertama kali adalah

Antoni van Leeuwenhoek pada tahun 1674 menggunakan mikroskop ciptaannya sendiri.

Istilah bakteri diperkenalkan oleh Ehrenberg pada tahun 1828 yaitu dari bahaya Yunani

bacterium yang berarti tongkat kecil. Berdasarkan fosil yang ditemukan, diduga bakteri

37

telah ada sekurang-kurangnya 3,2 milyar tahun yang lalu. Ilmu yang mempelajari tentang

bakteri disebut bakteriologi yang merupakan bagian dari mikrobiologi. Bakteri dapat

ditemukan hampir di semua tempat, baik di udara, air, tanah, laut, es, sumber air panas,

hingga di dasar lautan, bahkan di lingkungan yang tidak memungkinkan bagi organisme

lain untuk hidup. Penyebaran yang luas ini disebabkan karena ukurannya kecil,

bentuknya sederhana, kemampuan metabolismenya tinggi, dan dapat menggunakan

hamper semua jenis senyawa organic sebagai sumber makanannya

(Aryulina, 2006).

Laju pertumbuhan bergantung pada reaksi biokimiawi dan reaksi ini dipengaruhi

oleh suhu. Dengan demikian pola pertumbuhan bakteri dipengaruhi oleh suhu. Suhu

optimum yang dikehendaki bakteri untuk pertumbuhan berbeda-beda (Aryulina, 2006).

Berdasarkan Aryulina, (2006). Suhu optimum merupakan suhu yang paling baik

(sesuai) untuk kehidupan suatu jenis bakteri. Berdasarkan suhu optimumnya, bakteri

dibedakan menjadi tiga kelompok.

1. Bakteri psikrofil, dapat tumbuh pada suhu 0 30C dengan suhu optimum 15C.

Contoh bakteri psikrofil adalah Pseudomonas, Flavobacterium, Achromobacter, dan

Alcaligenes.

2. Bakteri mesofil, dapat tumbuh pada suhu 25 37C dengan suhu optimum 32C.

Umumnya bakteri jenis ini hidup di dalam alat pencernaan. Beberapa jenis bakteri

bahkan dapat hidup dengan baik pada suhu sekitar 40C. Semua jenis bakteri yang

bersifat patogen pada hewan merupakan bakteri mesofil.

3. Bakteri termofil, dapat tumbuh pada daerah yang suhunya tinggi, lebih dari 40C.

Temperatur optimumnya antara 55 60C. Bakteri ini dijumpai pada sumbersumber

air panas, kawah gunung berapi, geiser, dan sebagainya. Contoh bakteri termofil

adalah Thermus aquaticus, Sulfolobus acidocaldarius, dan Chloroflexus.

38


A. Tempat dan Waktu

Adapun praktikum dilaksanankan pada hari rabu 17 April dan 19 April 2013 pada

pukul 14.30 sampai dengan selesai. Bertempat dilaboraturium bersama program studi

Budidaya Perairan dan Teknologi Hasil Perikanan Fakultas Pertanian Universitas

Sriwijaya.

B. Alat dan Bahan

Adapun alat yang digunakan dalam praktikum Isolasi Bakteri dan Perhitungan

Bakteri yaitu cawan petri, tabung reaksi, erlenmeyer, magnetik stirrer, gelas kimia, gelas

ukur, autoklaf, coloni Counter, jarum ose, inkubator, bunsen, pipet tetes, mortal, tissue,

kertas putih.

Adapun bahan yang digunakan yaitu media agar PCA (Plat Count Agar), terasi dan

aquadest serta alcohol 70%.

C. Cara Kerja

Cara kerja pratikum isolasi bakteri dan perhitungan bakteri adalah sebagai berikut:

1. Langkah pertama yang dilakukan yaitu dengan mensterilisasikan terlebih dahulu alat-

alat yang digunakan dengan alkohol 70%,

2. Lalu alat-alat tersebut disterilkan dengan pemanasan langsung dan sterilisasi basah

menggunakan autoklaf dengan suhu 121oC dan tekanan 1 atm selama 15 menit agar

tidak ada mikroba yang tidak diinginkan masuk kedalam alat dan bahan yang akan

digunakan tersebut,

3. Lalu homogenkan larutan PCA (Plate Count Agar) sebanyak 4,2 gram dengan 15 ml

aquadest kedalam Erlenmeyer dan masukkan magnetik stirrer. Magnetik stirrer

berfungsi sebagai agar larutan dapat bercampur dengan sempurna, cara kerja dari

39

magnetik stirrer yaitu magnetic akan berputar saat akan terkena tekanan panas dan

larutan akan homogen,

4. Setelah itu, larutan tersebut dimasukkan kedalam cawan petri,

5. Pada cawan petri diisi sebanyak 15 ml dan digoyang-goyangkan membentuk angka 8

sampai agar tersebut mengeras seperti jelly,

6. Sampel (terasi) dihaluskan menggunakan mortal dan ditimbang sebanyak 1 garam,

7. Sampel 1 gram tadi diencerkan dengan aquadest sebanyak 10 ml,

8. Dari hasil yang diencerkan tadi diambil sebanyak 1 ml lalu diencerkan lagi ke dalam 9

ml aquadest, hasil pengenceran ini diberi nama sampel 10-1

,

9. Dari sampel 10-1, diambil 1 ml lalu diencerkan lagi kedalam 9 ml aquadest, hasil

pengenceran ini diberi nama sampel 10-2

,



,



,

12. Dari keempat sampel, sampel 10-2 digunakan sebagai sampel pada isolasi bakteri

dengan teknik gores menggunakan jarum ose,

13. Sampel 10-4 digunakan sebagai sampel pada isolasi bakteri dengan teknik penaburan,

14. Media agar yang telah diberi sampel yang mengandung bakteri didiamkan selama 3

hari di dalam inkubator untuk proses pembiakan bakteri,

15. Setelah 3 hari bakteri yang dibiakkan dihitung dengan menggunakan coloni counter.

40


A. Hasil

Adapun hasil dari praktikum Isolasi Bakteri dan Perhitungan Bakteri dapat dilihat

dari gambar berikut:

Tabel 2. Jumlah Bakteri

Kelompok

1 56 24

2 14 -

3 34 10

4 8 23

5 8 61

6 43 56

7 29 11

Gambar 2. Hasil isolasi bakteri dari sampel terasi

Adapun hasil dari praktikum Isolasi Bakteri dan Perhitungan Bakteri yaitu pada

isolasi bakteri dengan teknik gores yang menggunakan sampel 10-2

berjumlah 14-2

koloni.

Sedangkan isolasi bakteri dengan teknik penaburan yang menggunakan sampel 10-4

berjumlah 0 koloni.

41

B. Pembahasan

Berdasarkan hasil praktikum ini, dapat diketahui bahwa dalam melakukan isolasi

bakteri dan perhitungan bakteri kita melakukan dua macam praktikum utama yaitu isolasi

bakteri pada hari rabu tanggal, 17 April 2013 dan perhitungan bakteri pada hari jumat, 19

April 2013. Isolasi bakteri dilakukan terlebih dahulu dibandingkan perhitungan bakteri

karna bakteri yang akan dihitung merupakan bakteri hasil biakan dari praktikum isolasi

bakteri. Dimana pada praktikum isolasi bakteri kita akan melakukan sterilisasi alat,

pembuatan media agar untuk medium isolasi bakteri, pengenceran sampel dan isolasi

bakteri. Bakteri yang akan dibiakkan yaitu bakteri yang ada pada terasi kilo.

Pada proses sterilisasi terhadap beberapa alat seperti tabung reaksi dan cawan petri.

Sterilisasi yang kami lakukan dengan dua metode yaitu sterilisasi basah dan sterilisasi

kering. Pada sterilisasi basah kami menggunakan bahan yaitu alcohol 70%. Dimana

alkohol 70% bisa membunuh bakteri karna alkohol bersifat racun (toxic). Alkohol 70%

adalah alkohol yang mengandung 70% alkohol murni dan 30% aquadest selain itu alkohol

70% juga mudah didapatkan dengan harga yang murah. Sebelum melakukan sterilisasi alat

kita harus mensterilkan tangan kita dengan menyemprotkan alkohol keseluruh bagian

tangan lalu mengeringkannya dengan menggunakan tissue. Setelah itu barulah kita

mensterilkan alat-alat yang akan digunakan dengan menyemprotkan alkohol 70%

keseluruh bagian alat tersebut dan mengeringkannya dengan menggunakan tisue. Setelah

itu kami langsung melakukan sterilisasi dengan pemanasan langsung dengan alat pemanas

berbahan bakar spritus atau bunsen. Setelah bunsen dinyalakan tabung reaksi dan cawan

petri dipanaskan secara langsung pada api dengan jarak sekitar 1 cm, jarak ini digunakan

agar alat tidak langsung menerima panas secara cepat sehingga bisa menyebabkan

kerusakan. Setelah dipanaskan keseluruhan bagian alat tersebut lalu didinginkan, pada

tabung reaksi dan cawan petri akan diperlakukan hal yang sama seperti pada sterilisasi

basah yaitu menutupi mulut tabung dengan kapas dengan tujuan yang sama. Setelah itu

cawan petri dan tabung reaksi dibungkus dengan menggunakan kertas putih dan bersih.

Selain dengan menggunakan alkohol, sterilisasi basah juga dapat dilakukan dengan

menggunakan autoklaf dengan suhu 121oC selama 15 menit dengan tekanan 1 atm.

42

Media PCA pertama berbentuk padatan, lalu diambil sebanyak 4,2 gram untuk

dilarutkan kedalam 240 ml aquadest. Lalu dihomogenkan dengan cara dipanaskan dengan

bantuan stirrer magnetik. Larutan yang dihasilkan berwarna merah kecoklatan. Dimana,

stirrer magnetik berfungsi untuk menghomogenkan suatu larutan. Cara kerja stirrer

magnetik yaitu apabila larutan dipanaskan maka stirrer magnetik akan berputar untuk

menghomogenkan larutan. Setelah larutan dihomogenkan, larutan dimasukkan ke dalam

cawan petri sebanyak 15 ml. Larutan yang ada di dalam cawan petri didinginkan dengan

cara memutar cawan petri seperti angka 8 hingga larutan mengeras. Cara ini dilakukan agar

larutan mengeras secara keseluruhan dengan tingkat kepadatan yang tinggi.

Setelah membuat media agar, kita akan mengencerkan sampel. Sampel terasi

ditimbang 1 gram setelah itu diencerkan dengan 10 ml aquadest. Hasil pengenceran

tersebut diambil sebanyak 1 ml lalu diencerkan lagi kedalam 9 ml aquadest. Hasil


. Dari sampel 10-1

diambil 1 ml dan diencerkan

lagi dengan 9 ml aquadest, pengenceran kali ini diberi nama sampel 10-2

. 1 ml sampel 10-2

diencerkan lagi dengan aquadest sebanyak 9 ml, hasil pengenceran ini diberi nama sampel

10-3.

Dari sampel 10-3

diambil 1 ml dan diencerkan lagi dengan 9 ml aquadest, dan hasil

pengenceran ini di beri nama sampel 10-4

. Dari keempat sampel yang telah di beri nama

maka sampel 10-2

dijadikan sampel pada isolasi bakteri dengan teknik penggoresan dan

sampel 10-4

dijadikan sampel pada isolasi bakteri dengan teknik penaburan. Pengenceran

pada sampel dilakukan untuk mengurangi jumlah bakteri yang ada pada sampel karna

apabila bakteri yang akan diisolasikan dalam jumlah terlalu banyak maka nutrien yang ada

pada medium tidak mencukupi untuk proses perkembangbiakan bakteri.

Setelah medium (media agar) dan sampel sudah siap untuk digunakan, saatnya kita

melakukan isolasi bakteri, pada praktikum kali ini kita menggunakan dua teknik dalam

proses isolasi bakteri yaitu teknik penggoresan dan penaburan. Pada teknik penggoresan

kita menggunakan jarum ose sebagai alat untuk menggores medium. Jarum ose dipanaskan

dengan menggunakan bunsen, setelah pijar jarum langsung dicelupakan di dalam sampel

10-2

. Pemanasan jarum ose bertujuan untuk mencairkan kembali medium yang digoreskan

untuk tempat pertumbuhan (pembiakan) bakteri. Setelah itu jarum ose digoreskan pada

medium sebanyak empat goresan yang berbentuk huruf Z. Pada isolasi bakteri dengan

teknik penaburan sampel 10-4

diambil sebanyak 1 ml dan langsung dituangkan di atas

43

medium secara merata. Setelah isolasi selesai dan diberi lebel nama medium yang sudah

diisolasi bakteri dimasukkan ke dalam inkubator selama kurang lebih 2 hari untuk proses

penumbuhan bakteri dari sampel terasi kilo.

Setelah dua hari, hasil isolasi bakteri terasi kilo dikeluarkan dan akan dilakukan

proses perhitungan bakteri. Hasil isolasi bakteri tersebut diletakkan di atas coloni counter

dengan membalik hasil isolasi, lalu nyalakan coloni counter amati subjek dengan

menggunakan kaca pembesar yang ada di coloni counter. Berilah titik-titik pada koloni

yang telah terlihat dengn menggunakan spidol. Secara otomatis coloni counter akan

menyimpan data yang telah dititik-titik tadi. Pada hasil isolasi dengan teknik penaburan

kita beri garis empat bagian pada cawan petri tempat hasil tersebut. Perhitungan hanya

dilakukan disalah satu bagian.

Dari hasil perhitunagan didapat bahwa isolasi bakteri dengan teknik gores yang

menggunakan sampel 10-2

berjumlah 14-2

koloni. Sedangkan isolasi bakteri dengan teknik

penaburan yang menggunakan sampel 10-4

berjumlah 0 koloni. Jumlah yang didapatkan

pada isolasi bakteri dengan teknik penaburan dikatakan gagal. Kegagalan dari praktikum

ini dikarenakan medium yang digunakan belum terlalu keras sehingga apabila cawan petri

tempat medium dibalikkan medium akan hancur. Alasan lainnya karna pada saat

pendinginan medium terlalu cepat membuat putaran 8 dan sempat tergeser kuat sehingga

medium setengah keras pecah. Pada proses isolasi bakteri kita harus menggunakan media

agar (medium) yang benar-benar keras agar tidak terjadi pemecahan medium.

Pada proses isolasi bakteri ini kita menggunakan sampel terasi kilo untuk

membiakkan bakteri yang ada didalamnya. Bakteri atupun mikroba yang ada didalam

terasi merupakan bakteri yang membantu proses fermentasi pada udang sehingga menjadi

terasi. Mikroba yang terdapat didalam terasi juga merupakan mikroba yang dapat

mempertahankan mutu terasi dan mikroba yang tahan terhadap garam. Menurut Agustin

(2006), mikroba yang terdapat di dalam terasi antara lain Rhizopus sp, Penicillium sp,

Aspergillus sp, Micrococcus sp, Aerococcus sp, dan Neisseria sp.

44


A. Kesimpulan

Adapun kesimpulan dari praktikum Isolasi Bakteri dan Perhitungan Bakteri antara

lain sebagai berikut:

1. Isolasi bakteri dilakukan untuk dapat membiakkan mikroba dari suatu sampel.

2. Pada proses isolasi bakteri dapat dilakukan dengan menggunakan dua teknik yaitu

teknik penggoresan dan penaburan.

3. Sebelum melakukan isolasi bakteri kita harus mensterilkan smua alat dan membuat

media agar.

4. Media agar berperan sebagai medium pertumbuhan mikroba.

5. Pengenceran terhadap sampel untuk mengurangi jumlah mikroba yang akan diisolasi.

6. Perhitungan bakteri dapat dilakukan menggunakan alat penghitung bakteri yaitu coloni

counter.

7. Mikroba yang terdapat didalam terasi antara lain Rhizopus sp, Penicillium sp,

Aspergillus sp, Micrococcus sp, Aerococcus sp, dan Neisseria sp.

B. Saran




harinya dan media agar yang digunakan sebaiknya kurang dari 15 ml agar media keras

dengan baik dalam waktu yang singkat.

PEWARNAAN GRAM

45

I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Mikrobiologi adalah ilmu pengetahuan yang mempelajari kehidupan makhluk kecil

yang hanya kelihatan dengan mikroskop. Makhluk kecil tersebut adalah mikroorganisme,

protista, mikrobia. Mikrobiologi mencakup pengetahuan tentang virus (virologi),

pengetahuan tentang bakteri (bakteriologi), pengetahuan tentang hewan bersel satu

(protozoologi), pengetahuan tentang jamur (mikologi), terutama yang meliputi jamur-

jamur rendah seperti Phycomycetes, dan juga Ascomycetes, serta Deuteromycetes.

Mikroorganisme memegang peranan penting dalam menganalisa sistem enzim dan dalam

menganalisa komposisi suatu bahan makanan. Bakteri dapat diperoleh dari mana saja

(Waluyo, 2008).

Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat

yang khas, begitu pula dengan bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan

kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Salah satu cara untuk

mengamati bentuk sel bakteri sehingga mudah untuk diidentifikasi ialah dengan metode

pengecatan atau pewarnaan. Hal tersebut juga berfungsi untuk mengetahui sifat

fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding sel bakteri melalui serangkaian pengecatan

(Jimmo, 2008).

Bakteri berukuran sangat kecil dan tipis sehingga sukar dilihat struktur tubuhnya

walaupun dengan bantuan mikroskop. Untuk melihat morfologi bakteri secara lebih jelas

dikembangkan teknik pewarnaan bakteri. Prinsip pewarnaan bakteri adalah pertukaran

antara ion zat warna dengan ion protoplasma sel (Waluyo, 2008).

Bakteri memiliki beberapa bentuk yaitu basil (tongkat), kokus, dan spirilum. Bakteri

yang berbentuk tongkat maupun kokus dibagi menjadi beberapa macam. Pada bentuk basil

pembagiannya yaitu basil tunggal, diplobasil, dan tripobasil. Sedangkan pada kokus dibagi

monokokus (satu buah bakteri berbentuk kotak), diplococcus, sampai staphylococcus

(bentuknya mirip buah anggur. Khusus pada spirul hanya dibagi 2 yaitu setengah

melengkung dan tidak melengkung. Bakteri juga dapat dibedakan melalui teknik

pewarnaan gram. Teknik pewarnaan gram tersebut dapat menghasilkan warna merah dan

46

ungu. Bakteri gram negatif ditandai dengan pewarnaan ungu sedangkan yang positif

berwarna merah. Hal ini bertujuan untuk memberikan warna pada bakteri pada akhirnya

dapat diidentifikasi dengan mudah (Kuntarti, 2011).

Pengamatan morfologi koloni bakteri dilakukan setelah mendapatkan biakan murni.

Pengamatan ini meliputi warna, bentuk, tepian koloni, elevasi atau permukaan koloni dan

struktur dalam koloni. Pewarnaan gram Pewarnaan gram ber tujuan untuk menentukan

apakah bakteri tersebut termasuk di dalam kelompok bakteri gram positif atau kelompok

bakteri gram negatif. Cara kerja dari pewarnaan gram yaitu suspensikan bakteri dengan

ose, kemudian letakkan pada obyek dan difiksasi, tetesi dengan larutan gram A yang

mengandung kristal violet, kemudian tetesi dengan larutan gram B yang mengandung

lugol, tetesi dengan larutan gram C yang mengandung alkohol, dan yang terakhir tetesi

dengan larutan gram D yang mengandung safranin (Kismiyati, 2009).

B. Tujuan

Tujuan dari praktikum Pewarnaan Gram adalah sebagai berikut:

1. Agar praktikan dapat mengenal bentuk pertumbuhan koloni dan sifat-sifat

karakteristik koloni bakteri pada berbagai bentuk media.

2. Mengetahui cara mewarnai bakteri.

3. Mempermudah melihat bentuk jasad mikrobia.

4. Memperjelas ukuran dan bentuk mikrobia.

47


A. Pewarnaan Gram

Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah suatu metode empiris untuk

membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, gram-positif dan gram-negatif,

berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka. Metode pengecatan pertama kali

ditemukan oleh Christian gram pada tahun 1884. Dengan metode ini, bakteri dapat

dikelompokkan menjadi dua, yaitu bakteri gram positif dan gram negatif yang didasarkan

dari reaksi atau sifat bakteri terhadap cat tersebut. Reaksi atau sifat bakteri tersebut

ditentukan oleh komposisi dinding selnya sehingga pengecatan gram tidak bisa dilakukan

pada mikroorganisme yang tidak mempunyai dinding sel seperti Mycoplasma sp

(Priyani, 2008).

Struktur bakteri terbagi menjadi dua yaitu:

1. Struktur dasar (dimiliki oleh hampir semua jenis bakteri)

Meliputi: dinding sel, membran plasma, sitoplasma, ribosom, DNA, dan granula

penyimpanan.

2. Struktur tambahan (dimiliki oleh jenis bakteri tertentu)

Meliputi kapsul, flagelum, pilus, fimbria, klorosom, Vakuola gas dan endospora.

Pewarnaan pada mikrobia dapat dilakukan dengan dua cara yaitu dengan pewarnaan

sederhana yang menggunakan larutan tunggal methylen blue 0.1 % dan metode pewarnaan

gram dengan 4 tahapan pewarnaan yang terdiri atas pemberian larutan gram A yaitu kristal

violet sebagai pewarnaan dasar, larutan gram B yaitu iodium sebagai cat penguat, larutan

gram C yaitu ethyl alcohol 95 % sebagai peluntur cat dan larutan gram D safranin yang

memberikan warna merah pada cat yang luntur (Madigan, 2000).

Pewarnaan sederhana mudah dan cepat, sehingga pewarnaan ini sering digunakan

untuk melihat bentuk, ukuran, dan penataan mikroorganisme. Pada bakteri dikenal

berbagai bentuk, yaitu kokus, batang dan spiral. Dengan pewarnaan sederhana dapat juga

terlihat penataan bakteri. Pada kokus dapat terlihat penataan seperti rantai (stereptococcus),

buah anggur (stapylococcus), pasangan (diplococcus), bentuk kubus yang terdiri dari 4

48

atau 8 kokus (sarcinae). Zat warna yang digunakan antara lain larutan biru metilen, larutan

karbol fuksin basa (Dwidjoseputro. D, 2003).

Menurut Volk dan Wheeler (2003) zat warna yang digunakan dalam pewarnaan

sederhana adalah : lembayung gentian, lembayung safranin, biru metilen, fuksin basa,

aniline basa.

Pewarnaan gram merupakan pewarnaan diferensial yang berguna dan digunakan

dalam laboratorium mikrobiologi. Pewarnaan ini merupakan tahap penting dalam pencirian

dan identifikasi bakteri. Pewarnaan gram memilahkan bakteri menjadi kelompok gram

positif dan gram negatif. Bakteri gram positif berwarna ungu yang disebabkan kompleks

zat warna kristal violet iodium tetap dipertahankan meskipun diberi larutan pemucat,

sedangkan bakteri gram negative berwarna merah muda, karena kompleks tersebut larut

sewaktu pemberian larutan pemucat dan kemudian mengambil zat warna kedua yang

berwarna merah (Lay dan Hastowo, 2007).

Pewarnaan gram memberikan hasil yang baik, bila digunakan biakan segar yang

berumur 24-48 jam. Bila dikembangbiakan tua, terdapat kemungkinan penyimpangan hasil

pewarnaan gram. Pada biakan tua, banyak sel mengalami kerusakan pada dinding selnya.

Kerusakan pada dinding sel ini menyebabkan zat warna dapat keluar sewaktu dicuci

dengan larutan pemucat. Ini berarti bahwa bakteri gram positif dengan dinding yang rusak

tidak lagi dapat mempertahankan komplek warna kristal violet iodium sehingga terlihat

sebagai bakteri gram negative (Lay dan Hastowo, 2007).

Menyiapkan bakteri agar dapat diwarnai, sedikit biakan disebarkan dalam setetes

air pada gelas preparat, Inilah yang dinamakan olesan. Olesan ini dikeringkan pada suhu

kamar dan bakteri dapat dilekatkan erat (difiksasi) dengan jalan melewatkan gelas preparat

(olesan di permukaan atas) dua atau tiga kali dengan cepat pada nyala api pembakar

bunsen (Volk dan Wheeler, 2003).

Menurut Waluyo (2007), Prinsip atau pokok-pokok pewarnaan Gram meliputi 4

tingkatan yaitu :

1. Pewarnaan dengan zat warna utama (kristal gentian violet yang warnanya violet).

2. Merekatkan (mengintensifkan) dengan suatu larutan mordant, yaitu larutan lugol

(J-KJ).

49

3. Menambahkan zat decolorisasi (bahan peluntur) misalnya alkohol atau alkohol-

asam.

4. Pemberian zat penutup (counter stain), misalnya : larutan fuchsin, safranin, dll.

Zat pewarna adalah garam yang tediri atas ion positif dan negatife, salah satu

diantaranya berwarna. Bakteri lebih sering diamati dalam olesan terwanai daripada dalam

keadaan hidup, yang dimaksud dengan bakteri terwarnai adalah organisme yang telah

diwarnai dengan zat pewarna kimia agar mudah dilihat dan dipelajari, Pada umumnya,

olesan bakteri terwarnai mengungkapkan ukuran, bentuk, susunan dan adanya struktur

internal seperti spora dan butira (Lay dan Hastowo, 2007).

Terdapat dua kelompok zat pewarna bakteri, yaitu : (1) bersifat Asam, berupa anion

dan umum digunakan dalam bentuk garam natrium. (2) bersifat Alkali, berupa kation dan

umum digunakan dalam bentuk klorida. Selain zat warna diperlukan zat tambahan yang

berfungsi untuk mengendapkan hasil rekasi zat warna dengan komponen dinding sel

bakteri. Zat tersebut dikenal dengan istilah zat Pematek yang akan melekatkan zat warna

pada plasma sel (Priyani, 2008).

Teknik pewarnaan bakteri dapat dibagi menjadi dua jenis, yaitu :

1. Pewarnaan Sedehana atau Tunggal, dengan menggunakan satu macam zat warna

seperti : Metilen Blue, Karbol Violet dan Air Fucshin.

2. Pewarnaan Differensial dengan menggunakan dua atau lebih zat warna.

Pengamatan morfologi bakteri hasil pewarnaan dilakukan di bawah pengamatan

mikroskop.

B. Macam-macam Pewarnaan

Menurut Kuntarti (2011), secara garis besar teknik pewarnaan bakteri dapat

dikategorikan sebagai berikut :

1. Pewarnaan Sederhana

Menggunakan satu macam zat warna (biru metilen/air fukhsin) tujuan hanya untuk

melihat bentuk sel. Pewarnaan sederhana, merupakan pewarna yang paling umum

digunakan. Berbagai macam tipe morfologi bakteri (kokus, basil, spirilum, dan sebagainya)

dapat dibedakan dengan menggunakan pewarna sederhana, yaitu mewarnai sel-sel bakteri

50

hanya digunakan satu macam zat warna saja. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan

pewarna-pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat basofilik (suka akan basa)

sedangkan zat-zat warna yang digunakan untuk pewarnaan sederhana umumnya bersifat

alkalin (komponen kromoforiknya bermuatan positif). Zat warna yang dipakai hanya

terdiri dari satu zat yang dilarutkan dalam bahan pelarut. Pewarnaan Sederhana merupakan

satu cara yang cepat untuk melihat morfologi bakteri secara umum. Beberapa

lprn tetap ddma, nurul 05 bner nn

Documents