lap 5 mikorpang

7/31/2019 Lap 5 Mikorpang

1/12

Lia Choirunnisa

240210100010

VI. PEMBAHASAN

Praktikum kali ini melakukan analisis kuantitatif mikroorganisme pada

bahan pangan. Analisis kuantitatif pada bahan pangan penting dilakukan untuk

mengetahui mutu dari bahan pangan yang diuji dan sangat diperlukan untuk

berbagai macam penelaahan mikrobiologis. Ada beberapa cara perhitungan jumlah

mikroorganisme.

Praktikum kali ini dilakukan dua metode analisi kuantitatif terhadap

mikroorganisme yaitu perhitungan dengan metode Petroff Hauserdan perhitungan

jumlah terkecil atau terdekat (MPN methode). Sampel yang digunakan adalah Mr.

Jussie jambu, tekita, ABC jambu, dan teh gelas.

6.1 Metode Petroff Hauser

Gambar 1. Petroff Hauser

(Sumber : google_image, 2011)

Penghitungan secara langsung dapat dilakukan secara mikroskopis yaitu

dengan menghitung jumlah bakteri dalam satuan isi kotak-kotak yang sangat kecil.

Alat yang digunakan adalah Petroff-Hauser Chamber atau Haemocytometer.

Jumlah cairan yang terdapat antara coverglass dan alat ini mempunyai volume

tertentu sehingga satuan isi yang terdapat dalam satu bujur sangkar juga memiliki

jumlah tertentu. (Pradikha, 2011)


2/12

Lia Choirunnisa

240210100010

Gambar 2. Penampang Kotak Petroff-Hauser

(Sumber : Pradhika, 2011)

Ruang hitung terdiri dari 9 kotak besar dengan luas 1 mm. Satu kotak besar

di tengah, dibagi menjadi 25 kotak sedang dengan panjang 0,2 mm. Satu kotak

sedang dibagi lagi menjadi 16 kotak kecil. Dengan demikian satu kotak besartersebut berisi 400 kotak kecil. Tebal dari ruang hitung ini adalah 0,1 mm. Sel

bakteri yang tersuspensi akan memenuhi volume ruang hitung tersebut sehingga

jumlah bakteri per satuan volume dapat diketahui. (Pradhika, 2011)

Prinsip dari perhitungan Petroff-Hauser yaitu melakukan perhitungan

dengan pertolongan kotak-kotak skala. Alat haemocytometer digunakan di bawah

mikroskop, sisinya mempunyai ukuran 0,05 mm. Oleh karena itu, luas dari kotak

sedang adalah 4 x 10-2 mm2. Maka volume Haemocytometer dapat dihitung dengan

rumus volume balok dimana tingginya adalah 0,1 cm. Jadi, volumenya adalah 4 x

10-3 mm3 sama dengan 4 x 10-6 cm3 atau 4 x 10-6 ml. (Pradhika, 2011)

Hal pertama yang dilakukan dalam percobaan ini, menutup

Haemocytometer dengan menggunakan cover glass. Setelah itu, tetesi sampel di

satu sisinya, kemudian lihat di bawah mikroskop. Sampel yang digunakan adalah

sampel yang disediakan.

Tabel 1. Analisis Jumlah Bakteri dengan Metode Petroff Hauser

Jumlah Bakteri/ KotakJumlah

bakteri /mlKuadran

1(a)

Kuadran 2

(b)

Kuadran 3

(c)

Kuadran 4

(d)

Kuadran 5

(e)

4 3 2 1 2 1,25 x 106

Rata-rata = 2,4 bakteri/ kotak

(Sumber : Dokumen Pribadi, 2011)

Untuk menghitung jumlah bakteri permililiter digunakan rumus :


3/12

Lia Choirunnisa

240210100010

sel KS : Volume KS

Percobaan ini merupakan percobaan yang paling sulit dilakukan pada saat

praktikum. Hal ini disebabkan oleh beberapa faktor, seperti intensitas kesabaran

praktikan yang kurang serta ditunjang pula oleh alat mikroskop yang daya

fungsionalnya sudah tidak optimal, sehingga memerlukan waktu yang relatif lama

atau bahkan hasil pengamatan hamper tidak ditemukan.

Namun kendala tersebut dapat sedikit teratasi dengan adanya bantuan

pengkajian ulang menggunakan mikroskop yang lebih baik, sehingga pengamatan

membuahkan hasil bahwa terdapat koloni bakteri pada 5 kuadran yang dalam kotak

Petroff Hauser. Oleh karena itu berdasarkan data yang diperoleh, dapat diketahui

bahwa terdapat 0,6 x 10 6 sel/ml pada sampel bakteri tersebut .

Keuntungan menggunakan Petroff Hauser adalah murah dan cepat.

(Sumanti, 2009)

Sumanti (2009) menyatakan bahwa kelemahan penggunaan Petroff Hauser

diantaranya :

Sel mati tidak dapat dibedakan dengan sel hidup ( terhitung semuanya)

Sel-sel berukuran sangat kecil sukar dilihat dibawah mikroskop sehingga

kadang-kadang tidak terhitung.

Untuk mempertinggi ketelitian maka jumlah sel dalam suspense harus

tinggi, misalkan bakteri = 106 sel/ml

Tidak boleh digunakan untuk menghitung mikroorganisme di dalam

makanan, banyak mengandung ekstrak makanan.

6.2.1 MetodeMost Probable Number(MPN)

Pendekatan lain untuk enumerasi bakteri hidup adalah dengan metode MPN.

MPN merupakan metode penentuan jumlah bakteri yang tumbuh pada pengenceran

beberapa seri tabung dengan tabel MPN coliform. Metode MPN ini lebih baik bila

dibandingkan dengan metode hitung cawan, karena lebih sensitif dan dapat

mendeteksi coliform dalam jumlah yang sangat rendah di dalam sampel yang

digunakan pada praktikum kali ini diantaranya Mr. Jussie, Tehkita, jus ABC jambu,

dan Teh gelas.


4/12

Lia Choirunnisa

240210100010

Metode MPN ini menggunakan medium cair di dalam tabung reaksi, yang

perhitungannya dilakukan berdasarkan jumlah tabung yang positif setelah

diinkubasi pada suhu dan waktu tertentu. Pengamatan tabung positif dapat dilihat

dengan mengamati timbulnya kekeruhan atau terbentuknya gas pada tabung

Durham untuk mikroba pembentuk gas, seperti Escherichia coli. Metode MPN ini

biasanya dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba di dalam sampel cair, dapat

pula dilakukan untuk menghitung jumlah mikroba untuk sampel yang bentuknya

padat, dengan terlebih dahulu membuat suspensi 1:10 dari sampel tersebut.

Media yang digunakan dalam metode MPN ini adalah Nutrient Broth yang

ditambah tabung durham. Indikator PH yang digunakan adalah Neutral Redyang

membuat media NB menjadi berwarna merah. Fungsinya untuk mengidentifikasi

bakteri pembentuk asam atau basa, namun dalam praktikum kali ini tidak dilakukan.

Nutrient Broth yang digunakan dibagi menjadi tiga seri, yaitu NBDS

(Nutrient Broth Double Stegth) untuk sampel 10 ml, NBSS (Nutrient Broth Single

Stegth) untuk sampel 1 ml, dan NBSS 0,1 ml. Masing-masing seri terdiri dari tiga

tabung.

Sebanyak 10 ml, 1 ml, dan 0,1 ml sampel dipipet kedalam masing-masing

tabung dari ketiga seri NB. Apabila semua tabung telah siap, kemudian dilanjutkan

inkubasi semua tabung pada suhu 300C selama dua hari. Setelah diinkubasi

kemudian amati perubahan warna yang terjadi dalam tabung, adanya kekeruhan,

terbentuknya gas dalam tabung durham yang menentukan hasil positif atau negatif.

Kemudian hitung jumlah tabung yang positif dari masing-masing seri. Lalu

cocokkan dengan tabel yang menunjukkan nilai MPN, dan tentukan nilai MPN

sampel. Brikut ini adalah contoh gambar yang menunjukkan prosedur analisis

kuantitatif dengan metode MPN.


5/12

Lia Choirunnisa

240210100010

Gambar 3. Prosedur Metode MPN

( Sumber: Sumanti, 2010 )

Dari hasil pengamatan didapat hasil sebagai berikut :

Tabel 2. Analisis Kuantitatif dengan Metode MPN

Kelompok Sampel Hasil pengamatan Nilai

MPNSeri A Seri B Seri C

IA

Mr.

Juice

Warna keruh,

terdapat

endapan

berwarna

orange

Warna tidak

berubah

(kuning

bening),

terdapat

endapan

berwarna

orange

Warna tidak

berubah

(kuning

bening), tidak

terdapat

endapan

24 x

=

24 x 102

3 3 3

IIA

Tehkita

Warna

kekuningan (+

++) agak

kecoklatan,

sedikit bening

Ada keruhan

(+++)

Warna

kekuningan (+

+) agak

kecoklatan,

sedikit bening

Ada keruhan

(++)

Warna

kekuningan

(+) agak

kecoklatan,

sedikit bening

Ada keruhan

(o)

24 x

=

24 x 102

3 3 3

IIIA

Jus

ABC

Jambu

Fase 1:

Kuning

Fase 2:

Orange

Terdapat

endapan

Warna keruh,terdapat

endapan

kemerahan

Warnabening,

sedikit

endapan

7

1 0 1

IVA Teh Warna putih

keruh, keruh (

Warna putih

keruh, keruh

Warna

coklat , keruh

29


6/12

Lia Choirunnisa

240210100010

gelas

+ ) , dan

bergelembung

( + )

( ++ ) , dan

bergelembung

( + )

( ++ ) , dan

bergelembung

( + )

1 3 3

(Sumebr : dokumen pribadi, 2011)

Dari hasil pengamatan tersebut, semua sampel menunjukkan hasil positif

terhadap adanya bakteri, karena dapat dibuktikan dengan terbentuknya gas pada

tabung durham.

Prinsip utama metode ini adalah mengencerkan sampel sampai tingkat

tertentu sehingga didapatkan konsentrasi mikroorganisme yang pas/sesuai dan jika

ditanam dalam tabung menghasilkaan frekensi pertumbuhan tabung positif namun

terkadang tidak selalu tepat. Semakin besar jumlah sampel yang dimasukkan

(semakin rendah pengenceran yang dilakukan) maka semakin sering tabung positif

yang muncul. Semakin kecil jumlah sampel yang dimasukkan (semakin tinggi

pengenceran yang dilakukan) maka semakin jarang tabung positif yang muncul.

Jumlah sampel/pengenceran yang baik adalah yang menghasilkan tabung positif,

tetapi terkadang tidak selalu deemikian. Semua tabung positif yang dihasilkan

sangat tergantung dengan probabilitas sel yang terambil oleh pipet saat

memasukkannya ke dalam media. Oleh karena itu homogenisasi sangat

mempengaruhi metode ini. Frekuensi positif atau negatif ini menggambarkan

konsentrasi mikroorganisme pada sampel sebelum diencerkan.

Dengan demikian seperti yang terpaparkan dalam tabel hasil pengamatan di

atas, sample yang berbeda menghasilkan nilai MPN yang berbeda pula, seperti

sample pertama Mr. Jusie dan Tehkita menghasilkan nilai MPN penuh atau

maksimal, sedangkan jus ABC jambu dan Teh gelas menghasilkan nilai MPN yang

tidak penuh. Nilai MPN keempat sample diatas berturut-turut adalah 24 x 102 untuk

sampel Mr. Jusie dan Tehkita, nilai MPN 7 untuk sampel jus ABC jambu serta nilai

MPN 29 untuk sampel Teh gelas. Nilai MPN jus ABC jambu memiliki nilai MPN

paling kecil.

Namun ada yang perlu diperhatikan dalam percobaan ini, dimana praktikan

tidak melakukan proses pengenceran sampel terlebih dahulu melainkan sampel


7/12

Lia Choirunnisa

240210100010

dimasukkan dengan takaran yang ditentukan langsung terhadap tabung reaksi yang

berisi medium, sehingga pada saat perhitungan MPN hasil yang di dapat pada setiap

seri tabung tidak harus dikalikan dengan nilai pengenceran pada tabung yang berada

di tengah. Oleh karena itu, nilai MPN dari setiap seri tabung itulah yang dianggap

sebagai nilai MPN yang dicari.

Perbedaan hasil dari nilai MPN disebabkan oleh beberapa faktor yang erat

kaitannya dengan asumsi yang diterapkan dalam metode MPN, menurut Pradhika

(2010) diantaranya :

bakteri terdistribusi sempurna dalam sampel

sel bakteri terpisah-pisah secara individual, tidak dalam bentuk rantai atau

kumpulan (bakteri coliform termasuk E. coli terpisah sempurna tiap selnya dan

tidak membentuk rantai).

media yang dipilih telah sesuai untuk pertumbuhan bakteri target dalam

suhu dan waktu inkubasi tertentu sehingga minimal satu sel hidup mampu

menghasilkan tabung positif selama masa inkubasi tersebut.

jumlah yang didapatkan menggambarkan bakteri yang hidup (viable) saja.

Sel yang terluka dan tidak mampu menghasilkan tabung positif tidak akan

terdeteksi.

Selain itu, mikroorganisme dalam suatu bahan cair dapat dideteksi

berdasarkan kekeruhannya. Pertumbuhan sel bakteri didalam suatu medium cair

akan meningkatkan kekeruhan media, yang akan mempengaruhi jumlah sinar yang

dapat ditransmisikan menembus medium (Rukmi, MG.I., A.T.Lunggani, A.

Suprihadi, 2008).

Menurut Rukmi, MG.I., A.T.Lunggani, A. Suprihadi, (2008) nilai MPN ini

diperoleh dengan anggapan sebagai berikut :

a. Bakteri dalam contoh menyebar secara random

b. Bakteri dalam contoh tidak berkelompok atau cluster, tetapi saling terpisah

c. Organisma yang terdapat dalam contoh dapat tumbuh dalam medium selama

inkubasi

d. Kondisi yang sesuai untuk pertumbuhan, seperti media dan waktu inkubasi.

MPN dinilai dari perkiraan unit tumbuh (GrowthUnit / GU) seperti CFU,

bukan dari sel individu. Meskipun begitu baik nilai CFU atau MPN dapat


8/12

Lia Choirunnisa

240210100010

menggambarkan seberapa banyak sel individu yang tersebar dalam sampel. Metode

MPN dirancang dan lebih cocok untuk diterapkan pada sampel yang memiliki

konsentrasi


9/12

Lia Choirunnisa

240210100010

Terakhir, 0,1 ml sampel pada medium NBSS menunjukkan warna kuning

kecoklatan (+), lebih bening dengan kekeruhan yang dihasilkan sangat sedikit.

Intensitas warnanya pun tentu semkin berkurang dari sebelumnya.

Gambar 4. 0,1 ml Sampel Pada NBSS

(Sumber : Dokumen Pribadi, 2011)

Berdasarkan data hasil pengamatan dari percobaan yang telah dilakukan,

bakteri hampir selalu terdapat dalam sampel yang digunakan serta merupakan

bahan pangan dalam bentuk minuman. Data hasil pengamatan dengan metode

Petroff Hauser menunjukkan bahwa terdapat 0,6 x 10 6 / ml dari sampel yang

diamati. Namun menurut literature, disebutkan bahwa setiap sediaan produk

mensyaratkan batas angka bakteri dan kapang/khamir tertentu yang masih dianggap

aman untuk dikonsumsi, yaitu < 104 koloni per ml untuk kapang/khamir dan < 106

koloni per ml untuk bakteri (Anonimb, 1992). Dengan demikian, sampel yang telah

diamati masih dikatakan dalam batas aman untuk dikonsumsi masyarakat.

Dari serangkaian percobaan yang telah diamati menegenai analisis

kuantitatif, metode Petroff Hauser dan Metode MPN memiliki keunggulan dan

fungsi masing-masing. Metode Petroff Hauser dapat digunakan sebagai metode

dalam analisis kuantitatif perhitungan jumlah mikroorganisme dalam suatu sampel,sedangkan metode MPN dapat mengindikasi adanya mikroorganisme dalam suatu

sampel.


10/12

Lia Choirunnisa

240210100010

VII. KESIMPULAN

Berdasarkan pengamatan yang telah dilakukan dapat diperoleh kesimpulan

sebagai berikut : Semua sampel pada metode MPN menunjukkan hasil positif terhadap

bakteri pembentuk gas.

Metode MPN lebih sensitif dan dapat mendeteksi coliform dalam jumlah

yang sangat rendah di dalam sampel air.

Rata-rata nilai MPN semua sampel sebesar 2,4 x 105.

Sampel yang dilakukan analisis kuantitatif dengan menggunakan metode

Petroff Hausermengandung mikroorganisme sebanyak 0,6 x 106 sel/ml.


11/12

Lia Choirunnisa

240210100010

DAFTAR PUSTAKA

Ackerman E., Lynda B. M. Ellis, Lawrence E. Williams.1988. Mikrobiologi Pangan

Hewani-Nabati. Penerbit Kanisius, Yogyakarta.

Debby, M. Sumanti, dkk. 2009. Buku Ajar Kuliah Mikrobiologi Pangan. Fakultas

Teknologi Industri Pertanian Universitas Padjadjaran, Bandung.

Fardiaz, S. 1992. Mikrobiologi Pangan 1. PT Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.

Pelczar, Michael J. dan E.C.S. Chan. 2006. Dasar-Dasar Mikrobiologi Jilid 1. UI-

Press, Jakarta.


12/12

Lia Choirunnisa

240210100010

Pradhika, Indra. 2011.Mikrobiologi Dasar. Available at http://ekmon-

saurus.blogspot.com/2011/03/metode-mpn-most-probable-number-

atau.html. [diakses tanggal 21 Maret 2011]

Rukmi, MG.I., A.T. Lunggani, A. Suprihadi, 2008. Available athttp://journal.discoveryindonesia.com/PDFInterstitial,perhitungan+jumlah+

mikroba.id). [diakses tanggal 21 Maret 2011]
http://ekmon-saurus.blogspot.com/2011/03/metode-mpn-most-probable-number-atau.htmlhttp://ekmon-saurus.blogspot.com/2011/03/metode-mpn-most-probable-number-atau.htmlhttp://ekmon-saurus.blogspot.com/2011/03/metode-mpn-most-probable-number-atau.htmlhttp://journal.discoveryindonesia.com/PDFInterstitial,perhitungan+jumlah+mikroba.idhttp://journal.discoveryindonesia.com/PDFInterstitial,perhitungan+jumlah+mikroba.idhttp://ekmon-saurus.blogspot.com/2011/03/metode-mpn-most-probable-number-atau.htmlhttp://ekmon-saurus.blogspot.com/2011/03/metode-mpn-most-probable-number-atau.htmlhttp://ekmon-saurus.blogspot.com/2011/03/metode-mpn-most-probable-number-atau.htmlhttp://journal.discoveryindonesia.com/PDFInterstitial,perhitungan+jumlah+mikroba.idhttp://journal.discoveryindonesia.com/PDFInterstitial,perhitungan+jumlah+mikroba.id

lap 5 mikorpang

Documents