8/12/2019 isolasi limpa

1/4

BAB III

METOLOGI PERCOBAAN

A. AlatPeralatan yang digunakan dalam praktikum ini terdiri dari sarung tangan,

papan bius, botol semprot alkohol, alat bedah, syringe, cawan pet ri steril, tabung sentrifus

teril (1,5 ml), rak tabung sentrifus, sentri fus, mikroskop, dan cover glass, jarum pentul,

pipet, beker glass.

B. BahanBahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah limpa tikus, al cohol 70%,

RPMI standar, NaCl,akuades, k a p a s , k e r t a s s a r i n g , t i s s u e kloroform, dan

pewarna giemsa.

C. Waktu Dan Tempat PercobaanPraktikum isolasi limpa dilakukan pada tanggal 10 Juni 2014 di laboratorium

mikroteknik dan biologi molekuler FMIPA UNNES.

D. Prosedur KerjaHewan coba yang digunakan adalah tikus. Tikus dimasukkan ke dalam beker glass

yang sudah diisi dengan kapas berkloroform. Tikust yang sudah lemas kemudian dipegang

pada bagian tengkuk dengan menggunakan ibu jari dan telunjuk kiri, dan secara bersamaan

tangan kanan menahan tubuh tikus agar tidak bergerak. Tubuh tikus kemudian dibalik,

sehingga bagian ventral menghadap ke atas, lalu diletakkan di papan bius. Bagian ventral

tikus diusap dengan kapas yang telah dibasahi alkohol 70% sebagai desinfeksi. Tikus

diterminasi kemudian dibedah untuk diambil organ limpanya. Pengambilan organ limpa dari

badan tikus dilakukan dengan cepat untuk menjaga limpa agar tetap steril. Limpa yang

didapat kemudian dimasukkan ke dalam kertas saring, kemudian di letakkan pada

cawan petri yang sudah di tetesi dengan NaCl. Kertas saring yang berisi organ

limpa kemudian digerus. Larutan hasil gerusan tersebut disedot menggunakan

syringe kemudian dimasukkan ke dalam microtube 1,5 ml. Kemudian dilakukan

sentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 1500 rpm. Pelet hasil sentrifugasi

di ambil kemudian di sedot menggunakan pipet lalu di teteskan di atas kaca

8/12/2019 isolasi limpa

2/4

preparatA kemudian di apus dengan kaca preparat B, diker inganginkan . Di tet esi

dengan giemsa, kemudian dikeringanginkan, setelah cukup kering kira-kira 15

menit dicuci dengan air mengalir,kemudian dikeringanginkan. Jika preparat

sudah kering maka dapat diamati dibawah mikroskop dengan perbesaran lemah

kemudian dengan perbesaran kuat.

8/12/2019 isolasi limpa

3/4

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil.Hasil pengamatan menunjuukan terdapat sellimfosit yang berwarna bening dan biru.

Hasildapat dilihat di Gambar 1.

Gambar 1. Hasil isolasi limfosit limpa tikus. (perbesaran 10 x 40)

B. PembahasanLimfosit merupakan sel kunci dalam sitem imun. Limfosit adalah sel yang paling

dominan di dalam organ dan jaringan sistem imun. Lokasi limfosit T adalah pada lien

dan kelenjar limfa yaitu pada masing-masing daerah periarterioler, parakortikal dan

perifolikuler. Jumlah 65%-85% dari total limfosit dalam darah. Limfosit berperan

dalam sistem imun spesifik seluler (sel T) untuk pertahanan terhadap bakteri yang hidup

intraseluler, virus, jamur, parasit dan keganasan. Kerusakan membran pada sel limfosit,

yang antara lain dapat disebabkan oleh senyawa-senyawa radikal, berdampak pada

penurunan responnya, antara lain penurunan proliferasi limfosit. Proliferasi limfosit

merupakan penanda adanya fase aktivasi dari respon imun tubuh. Proliferasi limfosit ini

berupa peningkatan produksi limfoblas yang kemudian akan menjadi limfosit di limpa.

Secara makroskopis dapat terlihat dengan adanya pembesaran organ-organ limfoid.

Limpa merupakan salah satu organ limfoid perifer dan bagian dari sistem imun(Khasanah 2009).

8/12/2019 isolasi limpa

4/4

Jumlah sel limfosit pada tubuh dapat dipengaruhi oleh berbagai faktor, antara lain

keberadaan antioksidan dan kandungan gizi lain yang terkandung dalam pangan. Melalui

mikroskop dapat terlihat bahwa sel limfosit yang hidup berwarna bening, sedangkan sel

limfosit yang mati akan berwarna biru.