gt - bioquimica ing a01 2016-i

8/17/2019 Gt - Bioquimica Ing a01 2016-i

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Asi natura: Bio uímica

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V i v e t u p r o p ó s i t o

GUÍA DE TRABAJO

BIOQUÍMICA


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p o r n u e s % r a e & $ e l e n $ i a a $ a d ' m i $ a ( v o $ a $ i ) n d e s e r v i $ i o # l * d e r e s e n + o r m a $ i ) n i n % e , r a l # $ o n p e r s p e$%

MISIÓN

n%erna$ional# para ue se $onvier%an en $iudadanos responsa-les e impulsen el desarrollo de sus $omun


"

Universidad ContinentalMaterial publicado con fines de estudioPrimera edición (I !"#uanca$o% &' )


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3

PRESENTACIÓN

*a Bioquímica es la ciencia que nos permite conocer todas las reacciones químicasque ocurren en los organismos vivientes $ que abarca todas las investigacionesrelacionadas con su% composición $ fisiología+

Por este motivo el estudio de esta ciencia es mu$ interesante% debido a losimportantes $ nuevos descubrimientos biológicos% que vienen afectandopr,cticamente cada día de nuestras vidas% inclu$endo nuestro organismo% laalimentación% las relaciones con los seres -umanos $ con los otros organismos $nuestra capacidad para disfrutar de la vida que nos rodea+

.s recomendable que el estudiante desarrolle una permanente actitud de estudio /unto a una minuciosa investigación de campo% vía internet% la consulta a e0pertos$ los res1menes% fuentes bibliogr,ficas% traba/os de investigación+ .l contenido delmaterial se complementar, con las lecciones presenciales $ virtuales que sedesarrollan en la asignatura+

Mg+ 2erónica Canales !uerra


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ÍNDICE

P,g+

P3.4. 5ACI6 78 9IC.

P3IM.3A U I9A9:

!uía de Pr,ctica : 3econocimiento de material de laboratorio $ bioseguridad ;!uía de Pr,ctica &: 9eterminación de p# $ amortiguación <!uía de Pr,ctica 7: 9eterminación de proteínas+ &!uía de Pr,ctica =: Actividad en>im,tica+ )!uía de Pr,ctica ;: Identificación de carbo-idratos+ &'!uía de Pr,ctica ): 9ifusión $ ósmosis+ &=

4.!U 9A U I9A9:!uía de Pr,ctica ?: !lucólisis $ fermentación+ &@!uía de Pr,ctica @: Cromatografía de pigmentos verdes+ 7

5.3C.3A U I9A9:

!uía de Pr,ctica


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PRIMERA UNIDADPRÁCTICA N° 1: RECONOCIMIENTO DE MATERIAL DE

LABORATORIO Y BIOSE !RIDAD

I 453UCCI .4: *ee con cuidado la guía% sigue sus instrucciones así como las deldocente% reali>a tu pr,ctica seguro $ atento+

+ TEMA:3econocimiento de material de laboratorio $ normas de bioseguridad+

2. OBJETIVO:Eue el estudiante se familiarice con los materiales $ equipos que usara en lassucesivas clases pr,cticas+ Eue aprenda las normas de bioseguridad $ comportamientoen el laboratorio+3. INTRODUCCIÓN:

BIOSEGURIDAD:

.s un con/unto de medidas preventivas destinadas a mantener la atención paraproteger la salud $ la integridad de las personas frente a riesgos laborales+ .s adem,sdecisión% responsabilidad% cuidado $ est, orientado a la participación consciente deestudiantes $ profesores involucrados en actividades dentro del laboratorio+

AGENTES DE RIESGO:

4on todos aquellos que pueden penetrar en el organismo $ causar alguna alteraciónde la integridad del individuo% los -a$ de diverso tipos:

• Agentes Biológicos: que penetran por ingestión (bacterias% par,sitos% virus"%por in-alación (bacterias"% o por inoculación directa (virus"+

• Agentes físicos $ mec,nicos: temperaturas e0tremas% contactos elFctricos%cone0iones defectuosas que pueden ocasionar quemaduras% agua caliente%vapor+ 2idrios% materiales daGados+

• Agentes químicos: por sus propiedades diversas constitu$en riesgos concaracterísticas particulares% pueden ser corrosivos (ac+ AcFtico% fenol%-idró0idos de sodio% potasio $ bario"% tó0icos (gases% barbit1ricos% atropina%sedantes"% alimentos contaminados (gasolina% Herosene% le/ía"% inflamables(acetona% Fter% metanol% tolueno"% otros+

Por todo esto ser, necesario tener en cuenta las siguientes

NORMAS DE BIOSEGURIDAD:

+ .l laboratorio debe mantenerse ordenado $ limpio con 1nicamente losmateriales previstos para la pr,ctica+

&+ *as mesas de traba/o deben ser descontaminadas al empe>ar el traba/o einmediatamente despuFs de -aberse derramado material contaminado+

7+ Profesores $ estudiantes deben lavarse las manos antes $ sobre todo despuFs

de cada traba/o en el laboratorio+=+ 9ebe descontaminarse $ lavarse todo material que -a$a sido usado+

Se$$i)n 6 7777777777//777777777///

8o$en%e 6

Apellidos 6 77777777777//7777777777/Nom-res 67777777777777//


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;+ Profesores $ estudiantes deben llevar mandil durante su permanencia en ellaboratorio+

)+ *as puertas permanecer,n cerradas durante el traba/o+ 4e cerraran ; minutosdespuFs del -orario de entrada+

?+ o entraran al laboratorio niGos o personas inmunodeprimidas+@+ o se permitir, comer% beber% fumar% almacenar alimentos ni aplicarse

productos de tocador durante el traba/o en el laboratorio+ Jita>atoProbetas graduadas 2asos de precipitación

rascos goteros Ca/as Petri*una de relo/ .mbudos MorteroPipetas graduadas 5ubos de centrífuga

*aminas porta $ cubre ob/etos Mater a! "e %$r&e!a'a: abricados a base de arcilla químicamente pura%

usaremos:C,psula de porcelana Mortero $ pilón

Mater a! "e (a"era: fabricados en madera simple% sirven de soporte $aislamiento :Pin>a .sp,tula

• Mater a! "e (eta! : fabricados con una aleación de -ierro% cobre $ bronce+ 4onde gran dure>a $ resistencia a los cambios de temperatura+

uentes !radillas5ena>as Mec-ero de Bunsen5i/eras Asa de Jo-le

EQUIPOS DE LABORATORIO:

4on aparatos cu$o uso $ aplicación requiere la instrucción $ guía de un apersona cone0periencia:

.stufa Balan>a analítica Centrífuga*upas simples *upa estereoscópica C,mara de

eubauer Autoclave


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:

). EQUIPOS*MATERIALES + REACTIVOS A UTILI,AR EN LA PRÁCTICA:

CANTIDAD

MATERIALES CAPACIDAD

5ubos de ensa$o: 70 ''mm% )0 ;'mmBalones volumFtricos ''mlMatra> Jita>ato &;'mlProbetas graduadas ''ml2asos de precipitación ''ml

rascos goteros Ca/as petri*una de relo/.mbudosMorteroPipetas graduadas ml% ;ml+5ubos de centrífuga*aminas porta $ cubreob/etos

-. PROCEDIMIENTO + RESULTADOS:bservar los materiales entregados% dibu/arlos en un cuadro seg1n el siguiente

modelo:

MATERIAL DIBUJO PARA QUE SIRVE


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;

. CONCLUSIONES:

/. CUESTIONARIO:+K LEue materiales utili>arías para medir: ' gramos de aCl% ' ml de #Cl% l de

agua destilada&+K LCu,les de las reglas de bioseguridad no debes ol vidar al terminar la pr,ctica

Re0ere'& a1 ! $ r40 &a1 &$'15!ta"a1 +*$ e'!a&e1 re&$(e'"a"$1

+ 9. 3 B.35I4% .+9+P+ $ 9. 3 B.35I4 .+M+ +


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M


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B+K Con las sustancias solidas: &cuc-aradas de sólido $ completa -asta ;' ml conagua destilada+C+K Medir el p# de todas las sustancias con los siguientes mFtodos:K Cuantitativos: potenciómetro $ cinta universal+K Cualitativos: Papel de tornasol $ fenolftaleína+.+K Constru$e una escala de p#+

+K .labora una conclusión+

2.> SISTEMA DE AMORTIGUACION:

A+K Colocar apro0imadamente cuc-aradita de detergente en polvo de preferenciablanco $ completa -asta ;' ml con agua destilada en un matra> de ''ml $ adiciona= gotas de fenolftaleína% si aparece un color rosado% -idró0idos $ carbonatos se -allanpresentes% en este caso titule con # &4 = $ con gotas de limón -asta que el colorrosado desapare>ca+B+K Indica en tu cuadro de resultados cuantas gotas de cada acido necesitaste paratitular la muestra+C+K .labora una conclusión+

?. RESULTADOS:+K 9eterminación del p#:

MUESTRA @ENOL@TALEINA

PAPEL DETORNASOL

POTENCIOMETRO

6.>2.>3.>).>-.>

.>/.>?.>

.>6 .>

&+K Amortiguación:

MUESTRA 72SO) ! ( '

. CONCLUSIONES:


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1"

Re0ere'& a1 ! $ r40 &a1 &$'15!ta"a1 +*$ e'!a&e1 re&$(e'"a"$1:

+K 5IM COJ N+Bioquímica + .ditorial 3everte+ Barcelona+ &' =+ Bibliotec UCK;?& R5


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no establecen interacciones intermolec"lares como son los p"entes de hidro'eno(caracter$stico de las prote$nas fibrosas siendo sol"bili adas en s"spensiones coloidalesEn la leche hay tres clases de prote$nas) case$na, lactato alb"minas y lactato 'lob"linas(todas 'lob"lares %La case$na es "na prote$na con*"'ada de la leche del tipo fosfoprote$na !"e se separa dela leche por acidificaci+n y forma "na masa blanca% Las fosfoprote$nas son "n 'r"po deprote$nas !"e están !"$micamente "nidas a "na s"stancia !"e contiene acido fosf+rico,en la case$na la mayor$a de los 'r"pos fosfato están "nidos por los 'r"pos hidro ilo delos aminoácidos serina y treonina% La case$na en la leche se enc"entra en forma de salcálcica (caseinato cálcico % La case$na representa cerca cerca del --. al /0. de lasprote$nas presentes en la leche y el 0%- . en composici+n de la leche l$!"ida%La propiedad caracter$stica de la case$na es s" ba*a sol"bilidad a p1 2,3% El p1 de laleche es 3,3 apro imadamente, estando a ese p1 la case$na car'ada ne'ativamente ysol"bili ada como sal cálcica% Se a#ade acido a la leche, la car'a ne'ativa de las"perficie de la micela se ne"trali a (los 'r"pos fosfato se protonan y la prote$na ne"traprecipita

Ca2

+ Caseinato + 2HCl Caseína + CaCl 2

La conformaci+n de la case$na es similar a las prote$nas desnat"rali adas 'lob"lares% Elalto n&mero de resid"os de prolina en la case$na ca"sa "n especial ple'amiento en lacadena de prote$na e inhibe la formaci+n de "na f"erte y ordenada estr"ct"ra sec"ndaria%ABSORBANCIA (A)

Absorbancia es "n concepto más relacionado con la m"estra p"esto !"e nos indica lacantidad de l" absorbida por la misma, y se define como el lo'aritmo de 456 enconsec"encia)

A = log 1/T = -log T = -log It/ Io.

C"ando la intensidad incidente y trasmitida son i'"ales (lo7 lt , la trasmitancia es del488. e indica !"e la m"estra no absorbe a "na determinada lon'it"d de onda, yentonces A vale lo' 47 8La cantidad de l" absorbida dependerá de la distancia !"e atraviesa la l" a trav9s de lasol"ci+n del crom+foro y de la concentraci+n de este%

ES ECTO!OTO"ETRO

Sirve para medir: en f"nci+n de la lon'it"d de onda, la relaci+n entre valores de "namisma ma'nit"d fotom9trica relativa a 0 haces de radiaci+n y la concentraci+n oreacciones !"$micas !"e se miden en "na m"estra;"eden ser de absorci+n at+mica o de masa y vis"ales6iene la capacidad de proyectar "n ha de la l" monom9trica a trav9s de "n m"estra ymedir la cantidad de l" !"e es absorbida por dicha m"estra, eso permite reali ar 0f"nciones% Dar informaci+n sobre la nat"rale a de la s"stancia% Indicador directamente!"e la cantidad de la s"stancia !"e interesa está presente en la m"estra

BI#RET

La presencia de prote$nas en "na me cla se p"ede determinar mediante la reacci+n del


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de dos de "rea (10N@C=@N1@C=@N10 , !"e es la más sencilla !"e da positiva estareacci+n, com&n a todos los comp"estos !"e ten'an dos o más enlaces pept$dicosconsec"tivos en s"s mol9c"las%

EQUIPOS*MATERIALES + REACTIVOS A UTILI,AR EN LA PRÁCTICA:

CANTIDAD

EQUIPO

+ .spectrofotómetro con = celdas++ Balan>a digital

CANTIDAD


= 5ubos con gradilla

vaso ''mlBaguetaPipeta ;ml

CANTIDAD

UNIDAD REACTIVO

@' ml Agua destilada&' ml 3eactivo de Biuret en frasco gotero+

). NOTAS DE SEGURIDAD:

e cla c"idadosamente cada reactivo y de*a en reposo B8 min para favorecer eldesarrollo de color% Antes de iniciar t"s lect"ras en el espectrofot+metro, previocalentamiento de 4 , es necesario calibrarlo con el blanco de reactivos a "naabsorbancia de cero, con "na lon'it"d de onda de -8 mm%

-. 7IPÓTESIS:

-. PROCEDIMIENTO E=PERIMENTAL:

; E;A ACI=N DE LA LEC1E

4% En "n vaso de precipitado de 488ml dis"elve 08ml% de leche evaporada, con 08ml dea'"a destilada%

0%@ eali a el paso 4 con el yo'"rt%B%@ Dis"elve 08' de !"eso cremoso con 08ml de a'"a destilada%

DE6E INACIFN DE ; =6EGNAS C=N EL E6=D= DE


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4% C=L=CA EN HNA ADILLA 2 t"bos de 43 4 8 mm, rot"la "no de ellos comon&mero cero, el c"al llevara los reactivos para calibrar el espectrofot+metro (blanco dereactivos o testi'o los si'"ientes B t"bos llevaran n&meros consec"tivos del 4 al B

0% A#ade a cada t"bo 'otas de reactivo de


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1:

GUIA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUIMICAPRIMERA UNIDAD

PRÁCTICA N° %: ACTIVIDAD EN&IMATICA


6. TEMA: Proteínas .

2. OBJETIVO:econocer las propiedades y caracter$sticas f"ncionales de las prote$nas y en imas%

3. INTRODUCCIÓN:

PROTEÍNAS:

4on compuestos constituidos por C% % #% adem,s de 4% P% e% Cu% Mg+ .st,nformados por cadenas de amino,cidos unidos por enlace peptídico+ *as proteínas tienegran variedad de funciones% la m,s importante de ellas es la en>im,tica+ 9e acuerdo ala configuración en el espacio se distinguen estructura primaria% secundaria% terciaria $

cuaternaria las cuales se mantienen mediante diferentes fuer>as que se rompen enpresencia de algunos reactivos como ,cidos $ bases dFbiles% calor etc+*os alimentos se degradan por la acción de las proteínas con función en>im,tica+ *oscarbo-idratos% empie>an la degradación en la boca por medio de la acción de unaen>ima presente en la saliva llamada ptialina+*as en>imas reali>an diversas funciones en la cFlula+ *a catalasa est, presente encFlulas vegetales $ animales $ se encarga de la protección celular por medio de lasiguiente reacción química:

*as en>imas tienen una temperatura en la cual adquieren la m,0ima velocidad dereacción+ .sta temperatura varía de acuerdo a cada en>ima+ .n general% los aumentosde temperatura aceleran las reacciones químicas: por cada ' C de incremento% lavelocidad de reacción se duplica+ *as reacciones catali>adas por en>imas siguen estale$ general+ 4in embrago% al ser proteínas% a partir de cierta temperatura% se empie>aa desnaturali>ar por el calor+ *a temperatura a la cual la actividad catalítica es m,0imase llama te(%erat5ra %t (a + Por encima de esta temperatura% el aumento develocidad de la reacción debido a la temperatura es contrarrestado por la pFrdida deactividad catalítica debida a la desnaturali>ación tFrmica% $ la actividad en>im,ticadecrece r,pidamente -asta anularse+

Se$$i)n 6 7777777777//777777777///

8o$en%e 6



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). EQUIPOS*MATERIALES + REACTIVOS A UTILI,AR EN LA PRÁCTICA

TRAER %$r GRUPO MATERIAL DE LABORATORIO+ !alleta de soda++ papa pequeGa++ -ígado de pollo++ .spinaca++ c-ampiGón fresco+

; tubos de ensa$o de ) 0 7 con gradilla+ Pin>a de madera*ugol% peró0ido de -idrogeno%

& vasos de precipitado de ;'ml $ ; de &''ml+ cuc-ara

= morteros con pilón+!asa+& goteros

placa de porcelana+Cocinilla+5ermómetro+#ielo

-. NOTAS DE SEGURIDAD:Mantente atento a las indicaciones para el uso del material de vidrio $ el mane/o de losreactivos+

. 7IPÓTESIS:

/. PROCEDIMIENTO E=PERIMENTAL:

E=PERIENCIA N 6: A&& ' &ata! t &a "e !a %t a! 'a+K 3ompe por la mitad una galleta de soda $ desmen1>ala dentro de un vaso de

;'ml+ Agrega & cuc-aradas de agua+ Me>cla bien+&+K Mastica la otra mitad -asta que se convierta en una masa pastosa+ Pon la masa enotro vaso de ;'ml+7+K Coloca en ambos vasos 7 gotas de lugol% agita $ observa+=+K 3egistra tus resultados el cuadro de resultados+

E=PERIENCIA N 2: Pre1e'& a "e &ata!a1a e' " #er1a1 &

+K Prepara un -omogeni>ado de papa% -ígado% espinaca $ c-ampiGón% en cada uno delos morteros% me>clando la muestra con un poco de agua de caGo+ 9e ser necesariofiltra cada -omogeni>ado con un poco de gasa+&+K Coloca un poco del -omogeni>ado en cada fosa de la placa de porcelana $ aGade; gotas de peró0ido de -idrogeno a cada fosa+7+ 3egistra tus observaciones en el cuadro de resultados+

E=PERIENCIA N 3: E0e&t$ "e !a te(%erat5ra e' !a a&t # "a" e'F (4t &a.

+K Prepara un BM controlando la temperatura con el termómetro+&+K 3otula ; tubos de ) 0 7+&+K AGade un poco de -omogeni>ado de -ígado a cada tubo rotulado+7+K Agregar ; gotas de peró0ido de -idrogeno a cada tubo por ve> e inmediatamente

mantener los tubos a las siguientes temperaturas controlando el tiempo de reacción%que anotaras en el cuadro de resultados+


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1<

?. RESULTADOS:

6: A&& ' &ata! t &a "e !a %t a! 'a

MUESTRA OBSERVACIÓN

!alleta agua lugol

!alleta saliva lugol

2: Pre1e'& a "e &ata!a1a e' " #er1a1 &

MUESTRA A ADIR RESULTADO: t e(%$ "e rea&& '.

agua; gotas de # & &

&#omogeni>adode papa+

; gotas de # & &

7#omogeni>adode -ígado+

; gotas de # & &

= #omogeni>adode espinaca+

; gotas de # & &

; #omogeni>adode c-ampiGón+

; gotas de # & &

3: A: E0e&t$ "e !a te(%erat5ra e' !a a&t # "a" e'F (4t &a.

TUBO T CTIEMPO QUE TARDO EN REACCIONAR

'

& 7

7 7?

= ;'

; @;

B: Gra0 &a !a Te(%erat5ra e' 05'& ' "e! t e(%$:


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"0

. CONCLUSIONES:

Re0ere'& a1 ! $ r40 &a1 &$'15!ta"a1 +*$ e'!a&e1 re&$(e'"a"$1;+ 9. 3 B.35I4% .+9+P+ $ 9. 3 B.35I4 .+M+ +


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PRÁCTICA N° ': IDENTI(ICACION DE CARBO#IDRATOS)


6 TEMA: !l1cidos $ glucobiología+

2 OBJETIVO:3econocer quF muestras contienen gl1cidos por medio del an,lisis de suspropiedades químicas+

3 INTRODUCCIÓN:

CARBO7IDRATOS:

4on compuestos químicos formados por C% #% + Alde-ídos o cetonas poli-idro0ilados%constitu$en la fuente energFtica m,s importante+ *os vegetales los sinteti>an pormedio de la fotosíntesis% los animales los consumen del medio ambiente+

M$'$1a&4r "$1 : o a>1cares simples% se resumen en la fórmula (C#& "n donde n esentre 7 $ ?+ .n una reacción química act1an como reductores+D 1a&4r "$1: constituidos por dos monosac,ridos que se unen mediante enlaceglucosídico% los -a$ reductores (maltosa $ lactosa" $ no reductores (sacarosa"+P$! 1a&4r "$1: son cadenas de monosac,ridos unidos entre sí+ o reductores+

REACTIVO DE @E7LING

.l ensa$o con el reactivo de e-ling se fundamenta en el poder reductor del grupocarbonilo de un alde-ído+ Vste se o0ida a ,cido $ reduce la sal de cobre (II" a ó0ido de

cobre (I"% que forma un precipitado de color ro/o (siendo antes a>ul"+ 4i un a>1carreduce el licor de e-ling a ó0ido de cobre (I" ro/o se dice que es un a>1car reductor% $el cambio de color nos demuestra la presencia de dic-os a>1cares+ *os reactivos A $ Bse guardan por separados -asta el momento de su utili>ación para evitar el precipitadodel -idró0ido de cobre+

REACCION DE LOS POLISACARIDOS CON EL LUGOL+

.l almidón es un polisac,rido vegetal formado por dos componentes: la amilosa $ laamilopectina+ *a primera se colorea de a>ul en presencia de $odo debido no a unareacción química sino a la adsorción o fi/ación de $odo en la superficie de la molFculade amilosa% lo cual sólo ocurre en frío+ Como reactivo se usa una solución denominadalugol que contiene $odo $ $oduro pot,sico+

Se$$i)n 6 7777777777//777777777///

8o$en%e 6



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""

) EQUIPOS*MATERIALES + REACTIVOS A UTILI,AR EN LA PRÁCTICA:

CANTIDAD

EQUIPO

+ Cocinilla

CANTIDAD


' 5ubos de ensa$o con gradilla $ pin>a2aso de precipitado &''ml

& Pipetas ;ml& goterosCuc-ara $ bagueta

CANTIDAD

UNIDAD REACTIVO

' ml 3eactivo de e-ling A $ B' ml *ugol

'ml #Cl en frasco gotero+

)' ml 4oluciones al &'W de: glucosa% fructuosa%galactosa% maltosa% lactosa% almidón+

' ml a #

' ml enolftaleína

- NOTAS DE SEGURIDAD:Atención con el mane/o de los reactivos% sobre todo #Cl $ a # que son bastantecorrosivos+

7IPÓTESIS:


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/ PROCEDIMIENTO E=PERIMENTAL:E=PERIENCIA N 6:

+ Preparar el BaGo maría en el vaso de precipitación con '' ml de agua+&+ Preparar ' ml de solución de sacarosa al 'W: en un tubo de ensa$o me>clar gm

de sacarosa con < ml de agua+7+ Preparar solución de almidón: me>clar gm de almidón con < ml de agua+=+ 3otula @ tubos de ensa$o $ procede de acuerdo al cuadro de resultados+

E=PERIENCIA N 2:+K .n un tubo limpio $ seco prepara &ml de solución de sacarosa $ procede de

acuerdo al cuadro de resultados+

? RESULTADOS:E=PERIENCIA N 6:

TUBO MUESTRA AGREGAR RESULTADOml

4olución deglucosa

7gotas de e-ling A 7gotas de e-ling BCalentar a BM &X

& ml4olución defructuosa


7 ml4olución degalactosa


= ml4olución demaltosa


; ml4olución delactosa


) ml4olución desacarosa


? ml4olución dealmidón


@ ml4olución dealmidón

7 gotas de lugol


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E=PERIENCIA N 2:

TUBO MUESTRA AGREGAR OBSERVACION& ml de4olucióndesacarosa

Agregar ; gotas de #C*concentrado+*levar a BM 07X+& Agregar 7 gotas defenolftaleína+7 Agregar gotas de A #-asta virar el color+= Agregar ; gotas de

e-ling ; gotas dee-ling B+*levar a BM 0 7X+

CONCLUSIONES:




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PRÁCTICA N° *: DI(!SION Y OSMOSIS)


6 TEMA: 5ransporte a travFs de las membranas+

2 OBJETIVO:

4% Identificar factores !"e afectan la inte'ridad de las membranas%0% E plicar c+mo la dif"si+n y la osmosis son importantes para las c9l"las%3 INTRODUCCIÓN:

Las membranas cel"lares son barreras selectivas !"e separan las c9l"las yforman compartimientos intracel"lares% Entre s"s f"nciones están)

• e'"lar el transporte de mol9c"las !"e entran o salen de la c9l"la o del or'anelo%• enerar se#ales para modificar el metabolismo%• Adherir c9l"las para formar te*idos%

La membrana cel"lar está formada por "na capa doble de fosfol$pidos, prote$nas ycarbohidratos% i'%4% Cada fosfol$pido está comp"esto por 'licerol, ácidos 'rasos yfosfato, !"e en con*"nto crean "na barrera hidrof+bica entre los compartimientos ac"ososde la c9l"la% Las prote$nas permiten el paso de mol9c"las hidrof$licas a trav9s de lamembrana, determinan las f"nciones espec$ficas de 9sta e incl"yen bombas, canales,receptores, mol9c"las de adhesi+n, transd"ctores de ener'$a y en imas% Las prote$nasperif9ricas están asociadas con las s"perficies, mientras !"e las inte'rales estánincr"stadas en la membrana y p"eden atravesar completamente la capa doble% Laf"nci+n de los carbohidratos adheridos a las prote$nas ('l"coprote$nas o a losfosfol$pidos ('l"col$pidos es la de adhesi+n y com"nicaci+n intercel"lar% El colesterol, !"ees "n esteroide (l$pido , determina la fl"ide de la membrana%

TRANS ORTE A TRA$ES %E &AS "E"BRANAS'

;ara !"e la c9l"la f"ncione eficientemente, debe mantenerse en "n ambiente estable

conocido como homeostasis% ;ara mantener este e!"ilibrio e isten mecanismos para eltransporte selectivo de materiales hacia el interior o e terior de la c9l"la% Las membranasde la c9l"la son selectivamente permeables, permitiendo el paso de al'"nas s"stancias o

Se$$i)n 6 7777777777//777777777///

8o$en%e 6



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"9

part$c"las (mol9c"las, átomos, o iones , e impidiendo el paso de otras% Esta selectividadse debe a la capa doble de fosfol$pidos de la membrana% La forma en !"e las mol9c"laspasan por la membrana depende en parte de la polaridad de las mismas% Las mol9c"lashidrof+bicas, o no polares, pasan con relativa libertad a trav9s de la capa de l$pidos,mientras !"e mol9c"las hidrof$licas, o polares, incl"yendo el a'"a, y las mol9c"las demayor tama#o, pasan a trav9s de canales formados por prote$nas transportadoras% Lare'"laci+n del transporte de las mol9c"las, o la direcci+n en !"e se m"even depende des" 'radiente de concentraci+n (diferencia en concentraci+n entre dos l"'ares %

i'"ra 4) Estr"ct"ra de la membrana%

Las mol9c"las se m"even constantemente debido a s" ener'$a cin9tica y se esparcen"niformemente en el espacio disponible% Este movimiento, llamado movimientobroMniano, es la f"er a motri de la dif"si+n%Dif"si+n se define como el movimiento nat"ral de las part$c"las de "n área de mayor concentraci+n a "n área de menor concentraci+n hasta alcan ar "n e!"ilibrio dinámico,en el c"al el movimiento neto de part$c"las es cero% La dif"si+n no re!"iere 'asto deener'$a por parte de la c9l"la y por lo tanto es "n movimiento pasivo% C"ando la c9l"latransporta s"stancias en contra de "n 'radiente de concentraci+n (de "n área de menor concentraci+n a "n área de mayor concentraci+n ener'$a (A6; y s"cede movimientoactivo%Dif"si+n de mol9c"las de a'"a% El movimiento del a'"a será de "n l"'ar de mayor concentraci+n de mol9c"las de a'"a a "n l"'ar con menos concentraci+n de mol9c"lasde a'"a hasta lle'ar a "n e!"ilibrio dinámico%El movimiento de a'"a a trav9s de las membranas (!"e son selectivamente permeablesse llama osmosis (dif"si+n de a'"a y s"cede siempre del área de mayor concentraci+nde a'"a (con menor concentraci+n de sol"to al área de menor concentraci+n de a'"a(con mayor concentraci+n de sol"to % El a'"a se moverá, entonces, a favor de "n'radiente de concentraci+n hacia el área de mayor concentraci+n de sol"to (donde hay"na menor concentraci+n de mol9c"las de a'"a libres %


CANTIDA EQUIPO


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":

DCocinilla

CANTIDAD


) 5ubos de ensa$o con pin>a $ gradilla '' ml& vasos ''ml

BaguetaCuc-illo5ermómetro

CANTIDAD

UNIDAD REACTIVO

'' ml Agua destilada' cubos -ielo

- NOTAS DE SEGURIDAD:5ener cuidado con los baGos a distintas temperaturas% deben ser estables $ e0actos+

7IPÓTESIS:

/ PROCEDIMIENTO E=PERIMENTAL:

4%Corte seis peda os de beterra'a (4 mm de lar'o y col+!"elos en t"bos de ensayorot"lados del 4 al 3%

0% A#ada ml de a'"a al t"bo 3 y col+!"elo en el con'elador por B8 min%B% A#ada ml de a'"a al t"bo y col+!"elo en el ba#o de hielo por B8 min%2% A#ada ml de a'"a al t"bo 4 y col+!"elo en "n ba#o de a'"a caliente a -8 Cd"rante 4 min% Desp"9s de 08 min, rem"eva el peda o de remolacha del t"bo%

% De*e !"e la temperat"ra del ba#o ba*e a C y ha'a lo mismo con el t"bo 0%3% epita el procedimiento de arriba con el t"bo B a B- C y con el t"bo 2 a 08 C%-% Compare la intensidad de color de las sol"ciones en los t"bos%/% Colo!"e los res"ltados en el c"adro correspondiente%K% rafi!"e la intensidad de color vs% 6emperat"ra%


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";

? RESULTADOS:

E!ECTO %E TE" ERAT#RA6"bo 6emperat"ra Intensidad de color

(4 7 menos intenso: 3 7 más intenso

4 -8 C0 CB B- C2 08 C

En ba#o de hielo3 En con'elador

CONCLUSIONES:




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"<

GUIA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUIMICASEGUNDA UNIDAD

PRÁCTICA N° +: L!COLISIS Y (ERMENTACION)


6 TEMA:BioenergFtica $ tipos de reacciones bioquímicas% !lucolisis% gluconeogFnesis+

2 OBJETIVO:bservar los efectos de las reacciones anaeróbicas en levaduras $ la in-ibición de las

mismas+

3 INTRODUCCIÓN:

De todos los or'anismos vivientes, solo "nas pocas especies son totalmenteanaer+bicas, es decir !"e p"eden vivir en a"sencia de o $'eno% De ellas, la mayor$a sonmicroor'anismos del s"elo prof"ndo, de sedimento de la'os y oc9anos o en los pantanosdonde el o $'eno es verdaderamente escaso%La mayor$a de or'anismos tiene la capacidad de vivir tano en presencia como ena"sencia de o $'eno% Entre ellos se enc"entran tanto microor'anismos como or'anismoss"periores animales y plantas e incl"so al'"nos te*idos !"e p"eden vivir tanto aer+bicacomo anaer+bicamente%Las c9l"las !"e p"eden vivir de ambas maneras se llaman c9l"las fac"ltativas% El aspectosi'nificativo de ellas es !"e c"ando se enc"entran en "na ambiente con poco o $'eno,e traen la ener'$a de la 'l"cosa por medio de la fermentaci+n anaer+bica% En cambioc"ando hay s"ficiente o $'eno, o idan los alimentos hasta C= 0 y A'"a%E isten diversos prod"ctos de la fermentaci+n, como se ve en el si'"iente c"adro)

Se$$i)n 6 7777777777//

777777777///8o$en%e 6

Apellidos 6 77777777777//

7777777777/Nom-res 67777777777777//


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Las levad"ras obtienen ener'$a de'radando la 'l"cosa a pir"vato y l"e'o por medio de lafermentaci+n alcoh+lica, convierten el pir"vato en etanol%) EQUIPOS*MATERIALES + REACTIVOS A UTILI,AR EN LA PRÁCTICA:

CANTIDAD

EQUIPO

BaGomaria a 7? C

CANTIDAD


7 5ubos de ensa$o con tapón de /ebe $manguera de desprendimiento+

7 0 )

gradillaBaguetaCuc-ara

CANTIDAD

UNIDAD REACTIVO

'' ml Agua destilada+7' ml 4olución de glucosa al ;'W&' ml 4olución de fluoruro de sodio

- NOTAS DE SEGURIDAD:

Mantener la temperatura del baGomaria $ observar atentamente la producción de C &

7IPÓTESIS:


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3"

3/=#IC#4 !6M.O N+ Bioquímica +&da+.dición+Mc!raT R #ill% &''?+

GUIA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUIMICASEGUNDA UNIDAD

PRÁCTICA N° ,: CROMATO RA(IA DE PI MENTOSVE ETALES)


6 TEMA: otosíntesis: captación de la energía luminosa+

6 OBJETIVO:

Identificar los pi'mentos fotosint9ticos% Entender la relaci+n entre la fotos$ntesis y lalon'it"d de onda !"e absorben los pi'mentos% E plicar !"9 oc"rre en la cromato'raf$a depapel%

66 INTRODUCCIÓN:

La 0$t$1 'te1 1 es un proceso que convierte energía solar en energía química+ *afotosíntesis se lleva a cabo en los &!$r$%!a1t$19organelos de membrana doble quecontienen pigmentos fotosintFticos que absorben la lu> solar+ *a membrana interior delcloroplasto rodea el e1tr$(a % donde lost !a&$ "e1se agrupan formando ra'a1 + *afotosíntesis produce glucosa $ o0ígeno a partir de bió0ido de carbono% agua $ lu> solar+*a reacción fotosintFtica se resume de la siguiente manera:*a glucosa es la fuente principal de energía en las cFlulas% $ el o0ígeno es necesariopara las plantas% los animales $ dem,s organismos que llevan a cabo respiración

Se$$i)n 6 7777777777//777777777///

8o$en%e 6

Apellidos 6 77777777777//7777777777/

Nom-res 67777777777777//


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aeróbica en los mitocondrios+ .l proceso de fotosíntesis se divide en dos fases: lasreacciones dependientes de la lu> $ las reacciones independientes de la lu> (queocurren en presencia o ausencia de lu>"+

CO2 H 62 7 2O C 7 2O H O2 H 7 2O

@a1e "e%e'" e'te "e !a !5F:

Y 4e absorbe la lu> solar $ se convierte en energía química+Y *as reacciones dependientes de luz ocurren en la membrana de los t !a&$ "e1de loscloroplastos+Y 9urante esta reacción se descompone agua% se libera o0ígeno como productosecundario% $ se sinteti>a A5P $ A9P#+

@a1e '"e%e'" e'te "e !a !5F:

Y *as reacciones independientes de la luz (o de fi/ación de carbono" ocurren en ele1tr$(a del cloroplasto+

Y *a energía del A5P $ del A9P#% producidos en las reacciones dependientes de lalu>% se usa para transformar el bió0ido de carbono en carbo-idratos+

Para utili>ar la energía solar se requiere que la lu> sea absorbida por pigmentosfotosintFticos que se encuentran en las membranas de los tilacoides en loscloroplastos+ .l pigmento principal para la fotosíntesis es la &!$r$0 !a a.5ambiFn -a$% (e't$1 a&&e1$r $1 % como la clorofilab% el caroteno $ la 0antofila% que absorbenla lu> $ la transfieren a la clorofila a+

LOS PIGMENTOS @OTOSINT TICOS

A. Se%ara& ' "e !$1 % (e't$1 0$t$1 't


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6) 7IPÓTESIS:

6- PROCEDIMIENTO E=PERIMENTAL:

1. ;repare s" Ocámara de corridaP% Consi'a "n corcho para el t"bo de ensayo !"e"sará e ins9rtele "na presilla en la parte inferior ( i'"ra 2. C"el'"e "n peda o de papel de la presilla%

. Jerifi!"e !"e el papel !"epa dentro del t"bo pero sin tocar el fondo%

. Con "n lápi mar!"e 4 cm en la p"nta inferior del papel de cromato'raf$a


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*. ida hasta d+nde lle'a el papel de cromato'raf$a dentro del t"bo y transfiera lamarca de 4% cm al t"bo%

. Colo!"e "na ho*a de espinaca sobre el área del papel de cromato'raf$a, dondehi o s" marca y transfiera con "na moneda el pi'mento al papel% "ede la monedavarias veces sobre la ho*a hasta obtener "na l$nea osc"ra de pi'mento ( i'"ra %,. A#ada al t"bo sol"ci+n de cromato'raf$a hasta lle'ar "n poco por deba*o de lamarca !"e hi o en el t"bo% Ase'&rese !"e la sol"ci+n no lle'"e a la l$nea depi'mento en el papel%

. Colo!"e s" t"bo en el matra donde se manten'a derecho%

. Colo!"e el papel de cromato'raf$a dentro del t"bo de ensayo sin !"e to!"e elfondo del t"bo ( i'"ra % ec"erde !"e la sol"ci+n de cromato'raf$a no debe lle'ar almacerado%1 . De*e correr la cromato'raf$a ( i'"ra hasta 0 cm del borde s"perior y det9n'alaremoviendo el papel del t"bo%11. ar!"e hasta donde lle'+ la corrida y de*e secar el papel%12. Identifi!"e las bandas de pi'mentos y dib"*e s" corrida%


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6 RESULTADOS:Cuando la corrida alcance dos centímetros antes del final del papel% retirar $ de/arsecar+bservar los colores obtenidos de acuerdo al siguiente cuadro:

C$!$re1 re%re1e'tat #$1 "e !$1 % (e't$1:

P (e't$1 C$!$rClorofilaa 2erdeKa>ulClorofilab 2erdeKolivaBeta carotenos Anaran/adoZantofilas Amarillo (tonos m1ltiples"

6/ CONCLUSIONES:




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3:

GUIA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUIMICATERCERA UNIDAD

PRÁCTICA N° -: E.TRACCION DE ADN ANIMAL


6 TEMA: Metabolismo del A9 +

2 OBJETIVO:.0traer A9 en muestras de te/idos animales+

Se$$i)n 6 7777777777//777777777///8o$en%e 6



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3;

3 INTRODUCCIÓN:

Para la e0tracción del A9 del n1cleo de las cFlulas% es necesario -omogeni>ar laslevaduras en -idró0ido de sodio ( a #" $ sodio duodecil sulfato (494"+ .stetratamiento favorece la ruptura de la pared $ de la membrana celular% adem,s decontribuir a la desnaturali>ación de las proteínas+

Con el fin de liberar el A9 de las proteínas% se utili>an una serie de agentesdesnaturali>antes% como el perclorato de sodio $ la me>cla de cloroformo $ alco-olisoamilo+ 9espuFs de agregar los agentes desnaturali>antes% se centrifuga la solución$ se obtienen dos fases: una org,nica $ una acuosa% separadas por una interfase deproteínas desnaturali>adasS en la fase acuosa se encuentra el A9 + *a me>cla decloroformo $ alco-ol no solo desnaturali>a las proteínas% sino que disuelve los lípidosde la muestra $ aumenta la separación de las fases+

.l A9 de la fase acuosa se recupera por precipitación+ *a precipitación en etanolabsoluto en presencia de una sal es un mFtodo mu$ utili>ado en los procesos dee0tracción de A9 + *uego% el A9 se disuelve en solución salina% $ puede seralmacenado para utili>arlo en e0perimentos posteriores+


CANTIDAD

EQUIPO

0 grupo + .quipo con electrodo de p#+

CANTIDAD


Bagueta& vasos &''ml $ ;''ml

BaguetaProbeta &''ml

.mbudoMortero con pilón+


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3<

CANTIDAD

UNIDAD

REACTIVO

' g 494 .l dodecilsulfato sódico ( cualquier detergenteconcentrado"+

7' ml Alco-ol


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CONCLUSIONES:




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gt - bioquimica ing a01 2016-i

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