bab ii

BAB II

PROSEDUR PEMERIKSAAN CD4

I. Persiapan

I.1 Alat FACSCount

- Hidupkan alat, biarkan sistem bekerja sendiri (protokol disket telah terpasang pada

flopp drive).

- Setelah 2 menit akan tampak pesan dilayar.

- Alat dapat dibiarkan selama 1 hari, jika dilakukan prosedur shutdown dan probe

sampel dalam posisi diatas

I.2 Botol Cairan Pencuci dan Botol Pembuangan

Sebelum melakukan pemeriksaan kontrol dan sampel, siapkan larutan pada botol

system fluid reservoir dan kosongkan botol pembuangan.

1. Pengisian Sistem Fluid Reservoir

a.Buka pintu tempat cairan pencuci dan botol pembuangan dengan cara menekan

bagian atas tengah dari pintu kemudian biarkan pintu terbuka.

b. Lepaskan tubing system fluid dari panel fluidic dengan cara menekan clip metal

konektor putih kenudian tarik tubing dari fitting-nya.

c.Lepaskan system fluid detection probe dari fluidic panel dengan cara menekan tabs

putih disamping konektor dan tarik.

d. Pindahkan system fluid reservoir dari alat BD FACSCount dan letakkan pada

bidang datar.

e.Isi dengan cairan system hampir penuh sekitar 1 inci (2,5 cm) dari atas.

f. Tutup reservoir dan tempat kembali pada alat.

g. Hubungkan system fluid tubing dan fluid detection probe connector pada alat

dengan cara menekan systen fluid tubing secara perlahan sampai terdengar bunyi

9

FACSCount Software Version 1.4 10/93

Becton Dickkinson Immunocytometry Sstems

San Jose, CA 95131 FACSCount 10/02/93 13:12:34

10

click dan menghubungkan system fluid detection probe connector dengan menekan

tabs pada tempatnya.

h. Periksa system fluid filter apakah telah terisi cairan dengan cara :

- Jika terdapat gelembung udara pada filter, buka clamp plastic pinch sampai udara

keluar dari vent tubing.

- Jika perlu, ketuk secara perlahan untuk menghilangkan gelembung keluar dari air

vent tubing.

- Jika telah keluar, tutup clamp.

2. Mengosongkan Botol Pembuangan

a.Lepaskan waste fluid tuing dari fluidics panel dengan cara menekan metal clip

pada konektor dan tarik.

b. Lepaskan waste fluid detection probe connector dari fluidis panel dengan

cara tekan tabs puti pada sisi konektor dan tarik.

c.Lepaskan botol pembuangan dari alat dan letakkan pada tempat datar.

d. Kosongkan botol pembuangan pada tempat pembuangan biohazard.

e.Tambahkan 200 ml larutan blech yang telah diencerkan pada tabung pembuangan,

kemudian tutup kembali.

f. Hubungkan kembali botol pembuangan dengana alat.

I.3 Pengisian Cairan System

Periksa flow cell setiap hari pada saat menghidupkan alat. Lakukan prime pada

system jiak terdapat gelembung udara pada flow cell.

Jika mengganti filter ulangi prosedur priming lima kali untuk memastikan tidak ada

gelembung udara.

- Tekan “UTILIT” pada layar alat FACSCount untuk masuk ke layar utility

- Tekan “DRAIN” pada layar akan tampak pesan :

UTILITY

DRAIN

Put on tube of distilled water

Press DRAIN to start draining

11

- Tekan “DRAIN” kembali. Buka kedua pintu optik untuk melihat cairan mengering pada

flow cell, akan tampak pesan

- Jika semua cairan telah keluar dari flow cell, tekan “STOP”. Floow cell secara otomatis

akan terisi dengan cairan, kemudian akan tampak pesan :

- Tekan “MAIN” untuk kembali ke menu layar FACSCount. Untuk memulai prosedur

pembersihan harian, tekan “CLEAN”. Untuk mematikan alat tekan “SHUTDOWN”

II. PROSEDUR PEMERIKSAAN

II.1Pemeriksaan Kontrol

1. Persiapan

a. Siapkan tubs reagen kontrol bead (Low, Medium, High) dan sampel darah normal

dalam tabung K3EDTA.

b. Vortex tubs reagen kontrol bead dengan posisi keatas selama 5 detik

c. Vortex kembali dengan posisi kebawah selama 5 detik

d. Buka tutup reagen menggunakan coring station dengan cara :

DRAIN

Press STOP to stop draining

DRAIN

Refilling flow cell. Please wait.

UTILITY

12

- Masukkan tubs reagen kedalam alat coring station

- Tekan dari lever core ke bawah

- Biarkan lever kembali ke posisi semula

- Pindahkan tubs reagen kontrol ke workstation dengan posisi tegak keatas

- Tutup workstation untuk mengindari cahaya

e. Bolak-balik tabung sampel darah normal

f. Siapkan 3 buah tubs reagen dan beri label masing-masing Low, Medium, High

g. Pipet sebanyak 50 l darah normal masukkan ke dalam 3 buah tubs reagen

h. Tutup semua tubs reagen dan vortex selama 5 detik

i. Biarkan semua tubs reagen selama 60 – 120 menit pada suhu kamar (20 – 25 oC,

68 – 77 oF) pada workstation dan tutup pintu workstation untuk menghindari cahaya

j. Buka semua tutup tubs reagen kemudian tambahkan 50 l larutan fixatif ke dalam

semua tubs reagen

k. Tutup kembali semua tubs reagen dengan tutup yang baru dan vortex selama 5

detik (sampel dapat dibiarkan selama 24 jam sebelum penambahan control bead)

l. Pindahkan tubs reagen kontrol dan tempatkan pada daerah kontrol workstation

m. Vortex tubs reagen kontrol zero/low masukkan sebanyak 50 l kontrol low (tutup

merah) ke dalam tubs reagen berlabel Low

n. Vortex tubs reagen kontrol medium/high masukkan sebanyak 50 l kontrol

medium (tutup biru) ke dalam tubs reagen berlabel Medium

o. Vortex tubs reagen kontrol medium/high masukkan sebanyak 50 l kontrol high

(tutup ungu) ke dalam tubs reagen berlabel High

p. Tutup kembali tubs reagen dengan tutup yang baru

q. Periksa semua reagen tutup menggunakan alat BD FACSCount

2. Memasukkan Informasi Control dan Reagen

a. Tekan “CONTROL” pada layar

CONTROL BEADS

Lot Code: 39011721

Counts-Low: 50____ Med: 248___ High: 999

13

Lot code dan count values dari bead akan tampak pada layar dimana nilainya

merupakan nilai terakhir yang digunakan. Jika pertama kali dilakukan, lot code dan

count values merupakan nilai default alat

b. Masukkan 8 digit lot code dari kontrol bead. Tekan “ENTER” untuk data

berikutnya

c. Masukkan nilai bead untuk kontrol Low, Medium dan High. Nilai kontrol dapat

dilihat pada kertas yang menyertai reagen

d. Tekan “Confirm” untuk menyimpan informasi ke dalam disket. Kemudian akan

tampak laar reagen

e. Masukkan 8 digit lot code reagent. Nilai reagent dapat dilihat pada label bag

reagen. Tekan “ENTER” untuk data berikutnya

f. Masukkan referensi bead CD4 untuk reagent lot. Nilai referensi dapat dilihat pada

label bag reagen

g. Tekan “Confirm” untuk menyimpan data kedalam disket. Akan tampak data yang

telah dimasukkan kedalam alat, lanjutkan dengan memasukkan nomor ID kontrol

normal

3. Pembacaan

a. Masukkan ID kontrol normal (sebanyak 15 karakter). Setelah memasukkan data

ID kontrol normal pada layar akan tampak :

REAGENTS

Lot Code: 30012121

Counts-CD4: 1000 CD8: 2000

CONTROL NormID: 12345678_____

Type in the lab normal ID number

And press the ENTER key.


First pair. Move the CD4-Low tube

Into position and press the RUN key.

14

b. Vortex reagen Low menghadap ke atas selama 5 detik

c. Buka tutup reagen Low, tempatkan pada sampel holder pada alat CD4

FACSCount

d. Tekan “RUN”, akan tampak pesan pada layar :

Kemudian akan tampak pesan :

Jika analisa telah selesai, sampel holder akan turun, lanjutkan ke pembacaan kontrol

berikutnya

Jika telah selesai pembacaan reagen kontrol, hasil akan tercetak dan akan ditampilkan

pada layar


Control boost. Please wait.

CONTROL-Low NormID: 12345678_____

Event Rate: 300 Total: 1000

Bead search. Please wait.



Acquiring initial data. Please wait.



Acquiring/analyzing data. Please wait.


Move the CD4-Medium tube

Into position and press the RUN key.


Control run: PASSED

Control ruselt are on printout.

15

Untuk memeriksaan sampel, tekan “SAMPLE”.

Untuk kembali ke menu utama, tekan “MAIN”.

Jika terdapat hasil kontrol yang tidak memenuhi syarat maka akan tampak pesan :

Tekan “Continue” untuk melihat hasil kontrol.

4. Hasil Printout


See printout for error code(s).

16

III. Pemeriksaan Sampel Pasien

1. Syarat Sampel

Syarat sampel untuk pemeriksaan CD4 :

- Menggunakan antikoagulan K3EDTA (cair)

- Penyimpanan tidak lebih dari 48 jam pada suhu kamar (20 – 25 oC)

2. Pengerjaan Sampel Pasien

a. Siapkan sampel pasien, larutan fiksatif dan tubs reagen CD4, tempatkan pada

workstation

b. Beri label/identitas masing-masing 1 tubs reagen untuk tiap 1 pasien

c. Vortex dengan posisi keatas selama 5 detik

d. Vortex kembali dengan posisi kebawah selama 5 detik

e. Buka tubs reagen menggunakan coring station

f. Campur sampel darah dengan cara membolak balik tabung

g. Tambahkan sebanyak 50 l sampel darah pasien ke dalam tubs reagen

h. Tutup tubs reagen yang telah mengandung sampel darah pasien dan vortex

selama 5 detik

i. Inkubasi tubs selama 60 – 120 menit pada suhu kamar, tempatkan pada

workstation dan lindungi dari cahaya dengan menutup pintu pelindung sampel

workstation

j. Buka tutup tubs dan tambahkan sebanyak 50 l larutan fiksatif

k. Tutup kembali tubs dan tutup yang baru dan vortex selama 5 detik

l. Baca tubs reagen sampel dalam waktu kurang dari 48 jam

3. Memasukkan Data Pasien dan Reagen

17

a. Pada layar hasil kontrol, tekan “SAMPLE”, akan tampak layar reagen, masukkan

lot code reagen dan reference bead count

b. Setelah memasukkan data tekan “Confirm untuk masuk ke menu sampel

c. Masukkan kode pasien (< 15 karakter)

4. Pembacaan Sampel

a. Setelah memasukkan informasi pasien, akan tampak :

b. Vortex tubs reagen sampel selama 5 detik

c. Buka tutup tubs reagen sampel, tempatkan pada sampel holder

d. Tekan “RUN”, akan timbul pesan

REAGENTS

Lot Code: 30012121

Counts-CD4: 1000 CD8: 2000

SAMPLE NormID: ________________

Type in the sample’s accession number

and press the ENTER key.

SAMPLE NormID: 1234____________

Move the CD4 tube

into position and press the RUN key.

SAMPLE Acc.#: 1234____________

Sample boost. Please wait.

SAMPLE-CD4 Acc.#: 1234____________


Acquiring initial data. Please wait.

18

e. Jika telah selesai akan tampak pesan :

f. Tekan “STOP” untuk membatalkan pemeriksaan CD8

g. Tutup kembali tubs reagen sampel

h. Hasil sampel akan di printout dan tampak pada layar

i. Untuk membaca sampel berikutnya, tekan “SAMPLE”, masukkan kode pasien,

lakukan mulai dari langkah a – d pada pembacaan sampel

j. Jika terdapat kesalahan maka pada layar akan tampak pesan :

k. Tekan “Continue” untuk melihat hasil sampel

5. Hasil Printout Sampel

FACSCount SW Version 1.1 4/93

Sample Results

SAMPLE-CD4 Acc.#: 1234____________


Acquiring/analyzing data. Please wait.

SAMPLE-CD4 Acc.#: 1234____________

Move the CD8 tube

into position and press the RUN key.

SAMPLE-CD4 Acc.#: 1234____________

CD4: 642 CD4/CD8: 0.78 CD4/CD3: 0.43

CD8: 820 CD3 Avg: 1486 CD8/CD3: 0.55

SAMPLE-CD4 Acc.#: 1234____________

See prinout for error code(s).

19

Reagent Lot ID : 20052121

Reference Bead Counts - beads/l

CD4 Tube : 1004

CD8 Tube : 2032

Date : 3/15/93 18:42

Last Control Run : PASSED

Control Run Date : 3/15/93 18:42

Control Run Reagent Lot ID : 20052121

Control Run Control Lot ID : 29031721

Accession #: 5678

Absolute Counts - cells/l

CD4 : 838

CD8 : 1107

Total CD3 Average : 2002

CD4/CD8 : 0.76

CD4/CD8 : 0.42

CD8/CD3 : 0.55

Signature: ________________________________

_________________________________________

Commnents: ______________________________

_________________________________________

_________________________________________

bab ii

Documents