Ana Indrayati

Pengertian teknologi DNA rekombinan (kloning)

Komponen kloning Vektor Enzim restriksi DNA ligase Sel kompeten DNA donor (sisipan)

Tahapan kloning

Cara seleksi hasil kloningKarakterisasi hasil kloning

Genomik/kromosom:

karena terdapat di dalamkromosom

Ekstrakromosom: terdapat diluar kromosom-PLASMID Sirkuler/ bulat Dapat bereplikasi

sendiri (karena mempunyai origin of replication /ori)

Rekayasa genetika

DNA kloning: perbanyakan gen di dalam suatu selyang bukan inang alamiah/aslinya Pembentukan molekul DNA baru yang disebut molekul

DNA rekombinan-penyisipan molekul DNA ke dalamsuatu vektor sehingga memungkinkan molekul rekombinan tersebut untuk terintegrasi dan mengalami

perbanyakan di dalam sel inang

ENZIM RESTRIKSI: ENZIM YANG DAPAT MEMOTONG DNA PADA URUTAN YANG SPESIFIK ENZIM DNA LIGASE: ENZIM YANG DAPAT MENYAMBUNGKAN POTONGAN DNA DNA REKOMBINAN: DNA YANG BERASAL DARI MOLEKUL DNA ASING YANG DISISIPKAN KE DALAM SUATU PLASMID/VEKTOR PLASMID: MOLEKUL DNA SIRKULER, EKSTRAKROMOSOM, DAPAT BEREPLIKASI SENDIRI TRANSFORMASI: PROSES MEMASUKKAN DNA REKOMBINAN KE DALAM SEL INANG

KLONING: PROSES PERBANYAKAN DNA REKOMBINAN DI DALAM SEL INANGKLON: KUMPULAN SEL YANG MEMBAWA PLASMID REKOMBINAN YANG SAMA

DNA DONOR: DNA YANG AKAN DIKLON ENZIM RESTRIKSI PLASMID/VEKTOR - VEKTOR KLONING: MEMPEBANYAK DNA DNA LIGASE SEL INANG

ISOLASI DAN PERBANYAKAN DNA: PCR PEMOTONGAN DENGAN ENZIM RESTRIKSI LIGASI DENGAN ENZIM DNA LIGASE TRANSFORMASI KE DALAM SEL INANG KARAKTERISASI KLON HASIL TRANSFORMASI

Sisi pengenalan

enzim restriksi

Urutan nukleotida rantai atas=urutan

nukleotida rantaibawah Sisi pengenalan enzim

restriksi

DNA (enzim restriksi) 5- NNNGAATTCNNN -3 3- NNNCTTAAGNNN -5 EcoRI 5- NNNG 3- NNNCTTAA AATTCNNN -3 GNNN -5

DNA (ligase) 5- NNNGOH 3- NNNCTTAAPPAATTCNNN

-3

OHGNNN

-5

ligase 5- NNNGAATTCNNN -3 3- NNNCTTAAGNNN -5

Sel yang siap

menerima DNAdari luar

CaCl2 meningkatkan permeabilitas membran sel bakteri

Heat shock/kejut panas 42oC. 90 detik

Analisis migrasi Analisis restriksi: enzim restriksi PCR DNA sekuensing