Download - Prinsip Dasar Kloning (4)

Transcript

Ana Indrayati

Pengertian teknologi DNA rekombinan (kloning)

Komponen kloning Vektor Enzim restriksi DNA ligase Sel kompeten DNA donor (sisipan)

Tahapan kloning

Cara seleksi hasil kloningKarakterisasi hasil kloning

Genomik/kromosom:

karena terdapat di dalamkromosom

Ekstrakromosom: terdapat diluar kromosom-PLASMID Sirkuler/ bulat Dapat bereplikasi

sendiri (karena mempunyai origin of replication /ori)

Rekayasa genetika

DNA kloning: perbanyakan gen di dalam suatu selyang bukan inang alamiah/aslinya Pembentukan molekul DNA baru yang disebut molekul

DNA rekombinan-penyisipan molekul DNA ke dalamsuatu vektor sehingga memungkinkan molekul rekombinan tersebut untuk terintegrasi dan mengalami

perbanyakan di dalam sel inang

ENZIM RESTRIKSI: ENZIM YANG DAPAT MEMOTONG DNA PADA URUTAN YANG SPESIFIK ENZIM DNA LIGASE: ENZIM YANG DAPAT MENYAMBUNGKAN POTONGAN DNA DNA REKOMBINAN: DNA YANG BERASAL DARI MOLEKUL DNA ASING YANG DISISIPKAN KE DALAM SUATU PLASMID/VEKTOR PLASMID: MOLEKUL DNA SIRKULER, EKSTRAKROMOSOM, DAPAT BEREPLIKASI SENDIRI TRANSFORMASI: PROSES MEMASUKKAN DNA REKOMBINAN KE DALAM SEL INANG

KLONING: PROSES PERBANYAKAN DNA REKOMBINAN DI DALAM SEL INANGKLON: KUMPULAN SEL YANG MEMBAWA PLASMID REKOMBINAN YANG SAMA

DNA DONOR: DNA YANG AKAN DIKLON ENZIM RESTRIKSI PLASMID/VEKTOR - VEKTOR KLONING: MEMPEBANYAK DNA DNA LIGASE SEL INANG

ISOLASI DAN PERBANYAKAN DNA: PCR PEMOTONGAN DENGAN ENZIM RESTRIKSI LIGASI DENGAN ENZIM DNA LIGASE TRANSFORMASI KE DALAM SEL INANG KARAKTERISASI KLON HASIL TRANSFORMASI

Sisi pengenalan

enzim restriksi

Urutan nukleotida rantai atas=urutan

nukleotida rantaibawah Sisi pengenalan enzim

restriksi

DNA (enzim restriksi) 5- NNNGAATTCNNN -3 3- NNNCTTAAGNNN -5 EcoRI 5- NNNG 3- NNNCTTAA AATTCNNN -3 GNNN -5

DNA (ligase) 5- NNNGOH 3- NNNCTTAAPPAATTCNNN

-3

OHGNNN

-5

ligase 5- NNNGAATTCNNN -3 3- NNNCTTAAGNNN -5

Sel yang siap