praktikum biokim 3

7/28/2019 Praktikum Biokim 3

1/5

Protein adalahsenyawa organikkompleks berbobot molekul tinggi yang merupakan

polimer dari monomer-monomer asam amino yang dihubungkan satu sama lain dengan

ikatan peptida. Molekul protein mengandung karbon, hidrogen, oksigen, nitrogen dan

kadang kalasulfursertafosfor(Santoso 2008).

Kebanyakan protein merupakan enzim atau subunit enzim. Jenis protein lain

berperan dalam fungsi struktural atau mekanis, seperti misalnya protein yang membentuk

batang dan sendi sitoskeleton. Protein terlibat dalam sistem kekebalan (imun) sebagai

antibodi, sistem kendali dalam bentukhormon(Santoso 2008).

Analisis protein dapat dilakukan dengan dua metode, yaitu secara kualitatif dan

secara kuantitatif. Analisis protein secara kualitatif terdiri atas reaksi Xantoprotein, reaksi

Hopkins-Cole, reaksi Millon, reaksi Nitroprusida, dan reaksi Sakaguchi. Sementara itu,

analisis protein secara kuantitatif terdiri dari metode Kjeldahl, metode titrasi formol, metode

Lowry, metode spektrofotometri visible (Biuret), dan metode spektrofotometri UV

(Apriyantono dkk 1989).

Metode Lowry merupakan pengembangan dari metode Biuret. Dalam metode

ini terlibat 2 reaksi. Awalnya, kompleks Cu(II)-protein akan terbentuk sebagaimana

metode biuret, yang dalam suasana alkalis Cu(II) akan tereduksi menjadi Cu(I). Ion

Cu+ kemudian akan mereduksi reagen Folin-Ciocalteu, kompleks phosphomolibdat-

phosphotungstat, menghasilkan heteropoly-molybdenum blue akibat reaksi oksidasi

gugus aromatik (rantai samping asam amino) terkatalis Cu, yang memberikan warna

biru intensif yang dapat dideteksi secara kolorimetri. Kekuatan warna biru terutama

bergantung pada kandungan residu tryptophan dan tyrosine-nya. Keuntungan

metode Lowry adalah lebih sensitif (100 kali) daripada metode Biuret sehingga

memerlukan sampel protein yang lebih sedikit. Batas deteksinya berkisar pada

konsentrasi 0.01 mg/mL. Namun metode Lowry lebih banyak interferensinya akibat

kesensitifannya (Lowry dkk 1951).

Beberapa zat yang bisa mengganggu penetapan kadar protein dengan

metode Lowry ini, diantaranya buffer, asam nuklet, gula atau karbohidrat, deterjen,

gliserol, Tricine, EDTA, Tris, senyawa-senyawa kalium, sulfhidril, disulfida, fenolat,

asam urat, guanin, xanthine, magnesium, dan kalsium. Interferensi agen-agen ini

dapat diminimalkan dengan menghilangkan interferens tersebut. Sangat dianjurkan

untuk menggunakan blanko untuk mengkoreksi absorbansi. Interferensi yangdisebabkan oleh deterjen, sukrosa dan EDTA dapat dieliminasi dengan penambahan
http://id.wikipedia.org/wiki/Senyawa_organikhttp://id.wikipedia.org/wiki/Senyawa_organikhttp://id.wikipedia.org/wiki/Senyawa_organikhttp://id.wikipedia.org/wiki/Polimerhttp://id.wikipedia.org/wiki/Polimerhttp://id.wikipedia.org/wiki/Monomerhttp://id.wikipedia.org/wiki/Monomerhttp://id.wikipedia.org/wiki/Monomerhttp://id.wikipedia.org/wiki/Monomerhttp://id.wikipedia.org/wiki/Asam_aminohttp://id.wikipedia.org/wiki/Asam_aminohttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Ikatan_peptida&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Ikatan_peptida&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Karbonhttp://id.wikipedia.org/wiki/Karbonhttp://id.wikipedia.org/wiki/Hidrogenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Hidrogenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Oksigenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Oksigenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Nitrogenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Nitrogenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Sulfurhttp://id.wikipedia.org/wiki/Sulfurhttp://id.wikipedia.org/wiki/Sulfurhttp://id.wikipedia.org/wiki/Fosforhttp://id.wikipedia.org/wiki/Fosforhttp://id.wikipedia.org/wiki/Fosforhttp://id.wikipedia.org/wiki/Enzimhttp://id.wikipedia.org/wiki/Enzimhttp://id.wikipedia.org/wiki/Sitoskeletonhttp://id.wikipedia.org/wiki/Sitoskeletonhttp://id.wikipedia.org/wiki/Antibodihttp://id.wikipedia.org/wiki/Antibodihttp://id.wikipedia.org/wiki/Hormonhttp://id.wikipedia.org/wiki/Hormonhttp://id.wikipedia.org/wiki/Hormonhttp://id.wikipedia.org/wiki/Hormonhttp://id.wikipedia.org/wiki/Antibodihttp://id.wikipedia.org/wiki/Sitoskeletonhttp://id.wikipedia.org/wiki/Enzimhttp://id.wikipedia.org/wiki/Fosforhttp://id.wikipedia.org/wiki/Sulfurhttp://id.wikipedia.org/wiki/Nitrogenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Oksigenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Hidrogenhttp://id.wikipedia.org/wiki/Karbonhttp://id.wikipedia.org/w/index.php?title=Ikatan_peptida&action=edit&redlink=1http://id.wikipedia.org/wiki/Asam_aminohttp://id.wikipedia.org/wiki/Monomerhttp://id.wikipedia.org/wiki/Monomerhttp://id.wikipedia.org/wiki/Polimerhttp://id.wikipedia.org/wiki/Senyawa_organik


2/5

SDS atau melakukan preparasi sampel dengan pengendapan protein (Lowry dkk

1951).

Metode Lowry-Folin hanya dapat mengukur molekul peptida pendek dan tidak dapat

mengukur molekul peptida panjang (Alexander dan Griffiths, 1992). Prinsip kerja metode

Lowry adalah reduksi Cu2+ (reagen Lowry B) menjadi Cu+ oleh tirosin, triptofan, dan sistein

yang terdapat dalam protein. Ion Cu+ bersama dengan fosfotungstat dan fosfomolibdat

(reagen Lowry E) membentuk warna biru, sehingga dapat menyerap cahaya (Lowry dkk

1951).

Putih Telur

Putih telur terdiri dari empat lapisan yaitu lapisan encer luar, lapisan kental

luar, lapisan encer dalam dan khalazaferous (Nakai dan Modler 2000 dalam Suryono

2006). Empat bagian utama putih telur yaitu lapisan putih telur yang encer bagian

luar, lapisan putih telur yang kental, lapisan putih telur encer bagian dalam dan

lapisan kalaza. Bagian putih telur diikat dengan bagian kuning telur oleh kalaza,

yaitu serabut-serabut protein berbentuk spiral yang disebut mucin. Bahan utama

penyusun putih telur adalah protein dan air. Perbedaan kekentalan putih telur

disebabkan oleh perbedaan kandungan air (Suryono 2006).

Protein sederhana pada putih telur terdiri atas ovalbumin, ovoconalbumin dan

ovoglobulin, sedangkan yang kedua termasuk glycoprotein, yaitu ovomucoid dan

ovomucin. Ovomucin pada putih telur pada putih telur yang kental lebih besar

daripada putih telur yang encer. Ovomucin merupakan fraksi protein putih telur yang

membentuk selaput dan berfungsi menstabilkan struktur buih. Pemberian asam

asetat yang berlebihan akan mengakibatkan penggumpalan sebagian ovomucin dan

memperkecil elastisitas gelembung buih. Kerusakan gejala-gejala ovomucin

mengakibatkan air dari protein putih telur akan keluar dan putih telur menjadi encer.

Semakin encer putih telur, maka semakin tinggi tirisan buih yang dihasilkan

(Suryono 2006).

Prinsip Spektrofotometri Visibel

Langkah selanjutnya adalah mengukur serapan dengan menggunakan alatspektrofotometri visibel. Spektrofotometri visible disebut juga spektrofotometri sinar tampak.


3/5

Yang dimaksud sinar tampak adalah sinar yang dapat dilihat oleh mata manusia. Cahaya yang

dapat dilihat oleh mata manusia adalah cahaya dengan panjang gelombang 400-800 nm dan

memiliki energi sebesar 299149 kJ/mol (Astuti, 2007).

Elektron pada keadaan normal atau berada pada kulit atom dengan energi terendah

disebut keadaan dasar (ground-state). Energi yang dimiliki sinar tampak mampu membuatelektron tereksitasi dari keadaan dasar menuju kulit atom yang memiliki energi lebih tinggi

atau menuju keadaan tereksitasi. Cahaya yang diserap oleh suatu zat berbeda dengan cahaya

yang ditangkap oleh mata manusia. Cahaya yang tampak atau cahaya yang dilihat dalam

kehidupan sehari-hari disebut warna komplementer. Misalnya suatu zat akan berwarna

orange bila menyerap warna biru dari spektrum sinar tampak dan suatu zat akan berwarna

hitam bila menyerap semua warna yang terdapat pada spektrum sinar tampak. Untuk lebih

jelasnya perhatikan tabel berikut.

Panjang gelombang

(nm)

Warna warna yang

diserap

Warna komplementer

(warna yang terlihat)400435 Ungu Hijau kekuningan

435480 Biru Kuning

480490 Biru kehijauan Jingga

490500 Hijau kebiruan Merah

500560 Hijau Ungu kemerahan

560580 Hijau kekuningan Ungu

580595 Kuning Biru

595610 Jingga Biru kehijauan

610800 Merah Hijau kebiruan

(Astuti, 2007)

Pada spektrofotometer sinar tampak, sumber cahaya biasanya menggunakan lampu

tungsten yang sering disebut lampu wolfram. Wolfram merupakan salah satu unsur kimia,

dalam tabel periodik unsur wolfram termasuk golongan unsur transisi tepatnya golongan VIB

atau golongan 6 dengan simbol W dan nomor atom 74. Wolfram digunakan sebagai lampu

pada spektrofotometri tidak terlepas dari sifatnya yang memiliki titik didih yang sangat tinggi

yakni 5930 C (Astuti, 2007).

Panjang gelombang yang digunakan untuk melakukan analisis adalah panjang

gelombang dimana suatu zat memberikanpenyerapan paling tinggi yang disebut maks. Hal ini

disebabkan jika pengukuran dilakukan pada panjang gelombang yang sama, maka data yang

diperoleh makin akurat atau kesalahan yang muncul makin kecil. Pada praktikum kali ini,

kita menggunakan panjang gelombang 750 nm karena pada panjang gelombang ini warna

komplementernya adalah hijau kebiruan terdapat pada range 610-800 nm. Pada panjang

gelombang 750 nm sinar tampak menyerap warna merah dan meneruskan warna hijau

kebiruan, karena reagen warna yang dipakai dalam praktikum ini adalah follin ciocalteu. Jika

kita menggunakan reagen warna aresnomolibdat pada uji biuret maka yang digunakan adalah

panjang gelombang 660 nm (Astuti, 2007).
http://wanibesak.wordpress.com/http://wanibesak.wordpress.com/http://wanibesak.wordpress.com/http://wanibesak.wordpress.com/category/z-lirik-lagu-iwan-fals/http://wanibesak.wordpress.com/category/z-lirik-lagu-iwan-fals/http://wanibesak.wordpress.com/category/z-lirik-lagu-iwan-fals/http://wanibesak.wordpress.com/http://wanibesak.wordpress.com/http://wanibesak.wordpress.com/http://wanibesak.wordpress.com/category/z-lirik-lagu-iwan-fals/http://wanibesak.wordpress.com/


4/5

Zat yang dapat dianalisis menggunakan spektrofotometri sinar tampak

adalah zat dalam bentuk larutan dan zat tersebut harus tampak berwarna, sehingga

analisis yang didasarkan pada pembentukan larutan berwarna disebut juga metodekolorimetri. Jika tidak berwarna maka larutan tersebut harus dijadikan berwarna

dengan cara memberi reagen tertentu yang spesifik. Dikatakan spesifik karenahanya bereaksi dengan spesi yang akan dianalisis. Reagen ini disebut reagenpembentuk warna (chromogenik r eagent) (Astuti, 2007).

Berdasarkan hukum Beer absorbansi akan berbanding lurus dengan

konsentrasi, karena b atau l harganya 1 cm dapat diabaikan dan merupakan

suatu tetapan.Artinya konsentrasi makin tinggi maka absorbansi yang dihasilkan

makin tinggi, begitupun sebaliknya konsentrasi makin rendah absorbansi yang

dihasilkan makin rendah. Hubungan antara absorbansi terhadap konsentrasi akan

linear (AC) apabila nilai absorbansi larutan antara 0,2-0,8 (0,2 A 0,8) atausering disebut sebagai daerah berlaku hukum Lambert-Beer. Jika absorbansi yang

diperoleh lebih besar maka hubungan absorbansi tidak linear lagi (Astuti, 2007).

Pada praktikum kali ini, absorbansi yang dihasilkan adalah

Kurva

Faktor-faktor yang menyebabkan absorbansi vs konsentrasi tidak linear:

1. Adanya serapan oleh pelarut. Hal ini dapat diatasi dengan penggunaanblangko, yaitu larutan yang berisi selain komponen yang akan dianalisistermasuk zat pembentuk warna.

2. Serapan oleh kuvet. Kuvet yang ada biasanya dari bahan gelas atau kuarsa,

namun kuvet dari kuarsa memiliki kualitas yang lebih baik.3. Kesalahan fotometrik normal pada pengukuran dengan absorbansi sangat

rendah atau sangat tinggi, hal ini dapat diatur dengan pengaturankonsentrasi, sesuai dengan kisaran sensitivitas dari alat yang digunakan

(melalui pengenceran atau pemekatan) (Astuti, 2007).

Hasil kurva yang didapat pada percobaan kali ini sudah hampir linear, namun sudah

sesuai hukum Lambert-Beer yaitu absorbansi berbanding lurus dengan konsentrasi. Untuk

menentukan kadar protein pada sampel albumin digunakan persamaan regresi dengan cara

berikut :
http://wanibesak.wordpress.com/2011/06/16/sintesis-senyawa-senyawa-kompleks-dari-logam-alkali-serta-implikasinya-pada-pengajaran-senyawa-kompleks-di-sekolah-menengah-atas/http://wanibesak.wordpress.com/2011/06/16/sintesis-senyawa-senyawa-kompleks-dari-logam-alkali-serta-implikasinya-pada-pengajaran-senyawa-kompleks-di-sekolah-menengah-atas/http://wanibesak.wordpress.com/2011/06/16/sintesis-senyawa-senyawa-kompleks-dari-logam-alkali-serta-implikasinya-pada-pengajaran-senyawa-kompleks-di-sekolah-menengah-atas/


5/5

DAFTAR PUSTAKA

Apriyantono dkk. 1989.Analisis Pangan. Bogor: Departemen Pendidikan dan Kebudayaan

Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi Psat Antar Universitas Pangan dan Gizi IPB.

Astuti. 2007. Petunjuk Praktikum Teknik Analisisns Bahan Biologi. FMIPA UNY: Yogyakarta

Dennison, C., 2002,A Guide to Protein Isolation, Kluwer Academic Publishers, New York

Dennison. 2002.A Guide to Protein Isolation. New York: Kluwer Academic Publishers.

Lowry , Rosenbrough , Farr, Randall. 1951. Protein Measurement with the Folin Phenol

Reagent. New York: Kluwer Academic Publishers.

Page D S. 1997. Prinsip-prinsip Biokimia. Jakarta: Erlangga

Santoso. 2008. Protein dan Enzim. www.heruswn.teachnology [19 Maret 2010].

Sudarmaji dkk. 1989.Analisa Bahan Makanan dan Pertanian. Yogyakarta: Penerbit Liberty.

Suryono H. 2006. Daya dan Kestabilan Buih Putih Telur Itik Tegal dengan Penambahan

Asam Asetat pada Umur Simpan yang Berbeda [skripsi]. Bogor: Program Studi

Teknologi Hasil Ternak. Fakultas Peternakan Institut Pertanian Bogor.

Yoky Edy Saputra . 2009. Spektrofotometri. http://www.chem-is-try.org [19 Maret 2010].
http://www.heruswn.teachnology/http://www.chem-is-try.org/author/Yoky_Edy_Saputra/http://www.chem-is-try.org/artikel_kimia/kimia_analisis/spektrofotometri/http://www.chem-is-try.org/artikel_kimia/kimia_analisis/spektrofotometri/http://www.chem-is-try.org/author/Yoky_Edy_Saputra/http://www.heruswn.teachnology/

praktikum biokim 3

Documents