Judul : PEMISAHAN PROTEIN PUTIH TELUR ( ALBUMIN ) DENGAN FRAKSINASI AMONIUM SULFAT ( (NH4)2SO4 ).Tanggal Praktikum : SELASA 9 DESEMBER 2014Tanggal Pengumpulan : SELASA 30 DESEMBER 2014Tujuan : Menganalisis profil setiap fraksi ammonium sulfat (NH4)2SO4 ). Menghitung kadar albumin masing-masing fraksi ammonium sulfat (NH4)2SO4 ) dengan metode Bradford.Dasar teoriTelur merupakan bahan makanan yang hampir dikatakan mendekati sempurna, selain rasanya enak, sangat mudah dicerna dan mudah pengolahannya serta relatif murah dibanding sumber protein hewani lainnya. Satu butir telur ayam dengan berat 50 gram mengandung gizi yaitu energi 81 kkal, protein 6.4 gr, lemak 5.75 gram, karbohidrat 0.35 gram, kalsium 180 mg, vitamin A 309 SI (Hakim, 2010a).Nilai gizi telur sangat lengkap, telur merupakan sumber protein yang baik, kadarnya sekitar 14%, sehingga dari tiap butir telur akan diperoleh sekitar 8 gram protein. Kandungan asam amino proteinnya sangat lengkap, sehingga protein telur (campuran putih dan kuning telur) seringkali dijadikan sebagai protein referensi. Telur kaya fosfor dan besi, tetapi kandungan kalsiumnya rendah. Keadaan sepeerti ini sama seperti yang dijumpai pada daging. Selain itu telur juga mengandung vitamin B kompleks, serta vitamin A dan D (dalam kuning telur). Telur sama sekali tidak mengandung vitaminC. Satu butir telur berukuran sedangakan memberikan energi sekitar 80 kilokalori (Sirait, 2003).Protein (asal kata protos dari bahasa Yunani yang berarti "yang paling utama") adalah senyawa organikkompleks berbobot molekul tinggi yang merupakan polimerdari monomer-monomerasam aminoyang dihubungkan satu sama lain dengan ikatan peptida. Molekul protein mengandung karbon, hidrogen, oksigen, nitrogendan kadang kala sulfur serta fosfor. Protein merupakan salah satu dari biomolekulraksasa, selain polisakarida, lipid, dan polinukleotida, yang merupakan penyusun utama makhluk hidup. Selain itu, protein merupakan salah satu molekulyang paling banyak diteliti dalam biokimia. Kebanyakan protein merupakan enzim atau subunit enzim. Protein terlibat dalam sistem kekebalan (imun) sebagai antibodi, sistem kendali dalam bentuk hormon, sebagai komponen penyimpanan (dalam biji) dan juga dalam transportasi hara. Sebagai salah satu sumber gizi, protein berperan sebagai sumber asam aminobagi organismeyang tidak mampu membentuk asam amino tersebut (Arsyad, 1997). Protein putih telur terdiri atas protein serabut yang terdiri ovomucin dan protein globular yang terdiri dari ovalbumin, conalbumin, ovomucoid, lizosim, flavoprotein, ovoglobulin, ovoinhibitor, dan avidin. Protein globular merupakan protein yang berbentuk bola. Protein ini larut dalam larutan garam asam encer, juga lebih mudah berubah dibawah pengaruh suhu, konsentrasi garam, pelarut asam basa dibandingkan protein serabut. Protein globular juga merupakan protein yang mudah terdenaturasi (Winarno, 1997).Nilai Haugh unit merupakan nilai yang mencerminkan keadaan albumen telur yang berguna untuk menentukan kualitas telur. Nilai Haugh unit ditentukan berdasarkan keadaan putih telur, yaitu korelasi antara bobot telur dan tinggi putih telurbagian putih telur menjadi lebih encer disebabkan hilangnya sebagian protein ovomucin yang berfungsi sebagai pembentuk struktur putih telur. Nilai Haugh unit yang tinggi menunjukkan kualitas telur tersebut juga tinggi (Sudaryani ,2000).Sifat fisikokimia setiap protein tidak sama, tergantung jumlah dan jenis asam aminonya. Bila dalam suatu larutan protein ditambahkan garam, daya larut protein akan berkurang, akibatnya protein akan terpisah sebagai endapan. Peristiwa pemisahan protein ini disebut salting out. Garam-garam logam berat dan asam-asam mineral kuat ternyata baik digunakan untuk mengendapkan protein. Apabila protein dipanaskan atau ditambah alkohol, maka protein akan menggumpal. Hal ini disebabkan alkohol menarik mantel air yang meliputi molekul-molekul protein. Selain itu penggumpalan juga dapat terjadi karena aktivitas enzim-enzim proteolitik.Protein akan mengalami kekeruhan terbesar pada saat mencapai ph isoelektrik yaitu ph dimana protein memiliki muatan positif dan negatif yang sama, pada saat inilah protein mengalami denaturasi yang ditandai kekeruhan meningkat dan timbulnya gumpalan. Asam dan basa dapat mengacaukan jembatan garam dengan adanya muatan ionik. Sebuah tipereaksi penggantian dobel terjadi sewaktu ion positif dan negatif di dalam garam berganti pasangan dengan ion positif dan negatif yang berasal dari asam atau basa yang ditambahkan (Anna, 1994).Albumin (albumin) adalah nama umum dari sekelompok protein yang berupa koloid. Albumin merupakan unsur utama yang terdapat padaputih telur (ovalbumin), merupakan unsur penting dalam serum darah (Serum albumin), juga terdapat dalam susu (lactalbumin), jaringan dan cairan fisiologis dan dalam tumbuhan (vegetable (albumin). Hasil beberapa analisis menunjukkan bahwa albumin telur mengandung 54,3%, karbon, 7,1% hidrogen, 21% oksigen, 15,8% nitrogen, serta 1,8% sulfur. Albumin dapat bergabung dengan beberapa logam berat, maka digunakan sebagai penangkal pada keracunan garam-garam merkuri. Albumin dapat terkoagulasi atau terdenaturasi oleh panas, alkohol, atau asam (Makfoeld, 2006).Romanoff dan Romanoff (1963) menyatakan bahwa nilai pH putih telur segar 7,6 kemudian akan meningkat menjadi 9,0 atau 9,7 setelah satu minggu. Perubahan pH putih telur ini disebabkan hilangnya CO2 dari telur. Penggantian CO2 yang hilang ini dengan cara pemecahan bikarbonat. Bikarbonat terdiri dari sodium dan potasium sebagai buffer. Bikarbonat yang semakin menurun menyebabkan sistem buffer menjadi menurun. Penambahan asam maka pH menjadi turun dan harga E naik. Hal ini disebabkan karena dengan bertambahnya asam, iob H+ semakin banyak. Ini membuktikan bahwa larutan semakin asam, maka pH semakin kecil dan semakin banyak H+ maka muatan ion semakin positif dan tentunya potensial semakin besar. Begitu sebaliknya, jika adanya penambahan basa maka pH menjadi naik dan harga E turun. Ini menyebabkan pH semakin besar dan semakin banyak OH- maka muatan ion semakin negatif dan tentunya potensial semakin kecil (Anonim, 2012).Reaksi yang terjadi antara logam berat dengan protein akan mengakibatkan terbentuknya protein logam yang tidak larut. Protein akan mengalami presipitasi bila beraksi dengan ion logam. Pengendapan oleh ion positif (logam berat) diperlukan pH larutan diatas pI karena protein bermuatan negatif sedangkan pengendapan oleh ion negative diperlukan pH larutan dibawah pI karena protein bermuatan positif. Ion-ion positif yang dapat mengendapkan protein adalah Ag+, Ca2+, Zn2+, Hg2+, Fe2+,Cu2+, dan Pb2+. Sedangkan ion-ion negatif yang dapat mengendapkan protein adalah ion salisilat, triklorasetat, piktrat, tanat, dan sulfosalisilat. Logam berat juga merusak ikatan disulfide karena afinitasnya yang tinggi dan kemampuannya untuk menarik sulfur sehingga mengakibatkan denaturasi protein (Febriliaar, 2012).Molekul protein akan membentuk ion positif dalam suasana asam, sedangkan dalam suasana basa akan membentuk ion negatif. Pada titik isolistrik protein mempunyai muatan positif dan negatif yang sama, sehingga tidak bergerak ke arah elektroda positif maupun negatif apabila ditempatkan di antara kedua elektroda tersebut. Protein mempunyai titik isolistrik yang berbeda-beda. Titik isolistrik protein mempunyai arti penting karena pada umumnya sifat fisika dan kimia erat hubungannya dengan pH isolistrik ini. Pada pH di atas titik isolistrik protein bermuatan negatif, sedangkan di bawah titik isolistrik,protein bermuatan positif. Titik isolistrik pada albumin adalah pada pH 4,55-4,90 (Poedjiadi, 1994).Amonium Sulfat [(NH4)2SO4] adalah senyawa kimia yang berwujud padat, berwarna putih, berbentuk kristal (pada T > 513C), larut dalam air, tidak larut dalam alkohol dan memiliki titik leleh 235-280C pada tekanan 1 atm. Ammonium Sulfat banyak dimanfaatkan sebagai pupuk nitrogen dan biasa disebut pupuk ZA (Zwuafel Ammonium), terutama pada tanaman industri dan perkebunan diantaranya tebu, tembakau, cengkeh, kopi, lada, kelapa sawit, dan teh. Selain sebagai pupuk, senyawa Amonium Sulfat juga digunakan dalam bidang industri seperti untuk pengolahan air, fermentasi, bahan tahan api dan penyamakan. Sebagai pupuk, Amonium Sulfat merupakan jenis pupuk anorganik tunggal yang terdiri dari unsur Sulfur (24% berat) dalam bentuk ion Sulfat dan unsur Nitrogen (21% berat) dalam bentuk ion ammonium (Anonim, 2011b). Dalam biokimia, amonium sulfat curah hujan adalah metode umum untuk memurnikan protein dengan pengendapan selektif, sulfat Amonium sangat larut dalam air dan sehingga dapat membuat solusi yang sangat terkonsentrasi, yang dapat "keluar garam" protein, menyebabkan curah hujan pada konsentrasi tertentu. Ini menyediakan sarana yang nyaman dan sederhana untuk fraksinasi campuran protein yang kompleks. Sebagaibahan tambahan makanan, amonium sulfatdianggapumumnya diakui sebagai aman(GRAS) oleh USA Foodand Drug Administration, dandi Uni Eropaituditunjuk olehnomorEE517. Hal ini digunakansebagaipengatur keasamandalamtepungdan roti. Amonium sulfat digunakan dalam skala kecil dalam penyusunan garam amonium lainnya, terutama amonium persulfat (Anonim, 2011b).Pengendapan pada protein yang dikarenakan penambahan ammonium sulfat pekat menyebabkan terjadinya dehidratasi protein (kehilangan air) sehingga protein yang mempunyai kelarutan yang rendah akan mengendap. Endapan ini akan larut kembali apabila ditambahkan air. Pengendapan ini bersifat reversible. Pada percobaan ini larutan protein telur dan susu masing masing ditambahkan larutan ammonium sulfat menghasilkan endapan berwarna putih. Endapan berwarna putih terbentuk karena ammonium sulfat dapat menyebabkan dehidratasi air, sehingga kelarutannya berkurang. Kemudian endapan ini larut pada penambahan air. Berarti dalam protein telur dan susu mengandung gugus amino yang memiliki kelarutan yang rendah yang menyebabkannya mengendap dan endapan yang terbentuk bersifat reversible karena dapat dilarutkan kembali.Albumin merupakan fraksi protein, sehingga proses pemisahannya dapat dilakukan menggunakan prinsip-psinsip pemisahan protein. Pemisahan protein acap kali dilakukan dengan menggunakan berbagai pelarut, elektrolit atau keduanya, untuk mengeluarkan fraksi protein yang berbeda menurut karakteristiknya. Pemisahan protein dari berbagai campuran yang terdiri dari berbagai macam sifat asam-basa, ukuran dan bentuk protein dapat dilakukan dengan cara elektrofesa, kromatografi, pengendapan, dan perbedaan kelarutan (Anonim, 2010).Pada putih telur, albumin akan berubah dari bening menjadi putih. hal ini terjadi akibat adanya denaturasi albumin telur yang dipengaruhi oleh faktor panas yang dilakukan dengan perebusan, faktor asam basa yang dapat membentuk ion pada beberapa gugus sisi amino, faktor senyawa organik yang membentuk ikatan hidrogen dengan asam amino dan factor logam berat yang dapat bereaksi dengan ikatan sulfida (Candra Prabowo, 2007). Prinsip dari masing-masing metode pemisahan fraksi protein menurut Anonim (2010) adalah sebagai berikut:1. ElektroforesaElektroforesa merupakan teknik pemisahan senyawa yang tergantung dari pergerakan molekul bermuatan. Jika suatu larutan campuran protein diletakkan di antara kedua elektroda, molekul yang bermuatan akan berpindah ke salah satu elektrode dengan kecepatan tergantung pada muatan bersihnya, dan tergantung pada medium penyangga yang digunakan. Kecepatan gerak albumin dalam elektroforesa adalah 6,0 dalam buffer berkekuatan ion 0,1 pH 8,6. 2. KromatografiKromatografi meliputi cara pemisahan bahan terlarut dengan memanfaatkan perbedaan kecepatan geraknya melalui medium berpori. Metode ini didasarkan pada perbedaan kelarutan dan sifat asam basa pada masing-masing fraksi protein. Ada tiga teknik kromatografi yang biasanya dipergunakan untuk pemisahan protein yaitu kromatografi partisi dan kromatografi penukar ion, dan kromatografi lapis tipis. 3. Pengendapan protein sebagai garamSebagian besar protein dapat diendapkan dari larutan air dengan penambahan asam tertentu, seperti asam triklorasetat dan asam perklorat. Penambahan ini menyebabkan terbentuknya garam protein yang tidak larut. Zat pengendap lainnya adalah asam tungstat, fosfotungstat, dan metafosfat. Protein jugha dapat diendapkan dengan kation tertentu seperti Zn dan Pb.4. Pengendapan protein dengan penambahan garamPengendapan protein dengan cara penambahan garam didasarkan pada pengaruh yang berbeda daripada penambahan garam tersebut pada kelarutan protein globuler. Pada umunya dengan meningkatnya kekuatan ion, kelarutan protein semakin besar, tetapi setelah mencapai titik tertentu kekuatannya justru akan semakin menurun. Pada kekuatan ion rendah gugus protein yang terionisasi dikelilingi oleh ion lawan sehingga terjadinya interaksi antar protein, dan akibatnya kelarutan protein akan menurun. Jenis garam netal yang biasa digunakan untuk pengendapan protein adalah magnesium klorida, magnesium sulfat, natrium sulfat, dan ammonium sulfat.5. Pengendapan pada titik isoelektikTitik isoelektrik adalah pH pada saat protein memiliki kelarutan terendah dan mudah membentuk agregat dan mudah diendapkan. Berbagai protein globular mempunyai daya kelarutan yang berbeda di dalam air. Variable yang mempengaruhi kelarutan ini dalah pH, kekuatan ion, sifat dielektrik pelarut dan temperature. Setiap protein mempunyai pH isoelektrik, dimana pada pH isoelekrik tersebut molekul protein mempunyai daya kelarutan yang minimum.. Perubahan pH akan mengubah ionisasi gugus fungsional protein, yang berarti pula mengubah muatan protein. Protein akan mengendap pada titik isoelektiknya, yaitu titik yang menunjukkan muatan total protein sama dengan nol (0), sehingga interaksi antar protein menjadi maksimum.6. Pengedapan protein dengan pemanasanTemperatur dalam batas-batas tertentu dapat menaikkan kelarutan protein. Pada umunya kelarutan protein naik pada suhu lebih tinggi (0-40C). pada suhu di atas 40C kebanyakan protein mulai tidak mantap dan mulai terjadi denaturasi. Denaturasi dapat didefinisikan sebagai perubahan struktur sekunder, tersier, dan kuartener dari molekul protein tanpa terjadinya pemecahan ikatan peptide. Peristiwa denaturasi biasanya diikuti dengan koagulasi (penggumpalan). Rentang suhu denaturasi dan koagulasi sebagian besar protein sekitas 55 sampai 75C. suhu koagulasi albumin telur 56C, albumin serum sapi 67C, dan albumin susu sapi 72C.Ekstraksi merupakan proses pemisahan suatu komponen dari suatu campuran berdasarkan proses distribusi terhadap dua macam pelarut yang tidak saling bercampur. Ekstraksi pelarut umumnya digunakan untuk memisahkan sejumlah gugus yang diinginkan dan mungkin merupakan gugs pengganggu dalam analisis secara keseluruhan. Kadang-kadang gugus-gugus pengganggu ini diekstraksi secara selektif.. Teknik pengerjaan meliputi penambahan pelarut organik pada larutan air yang mengandung gugus yang bersangkutan. Dalam pemilihan pelarut organik agar kedua jenis pelarut (dalam hal ini pelarut organik dan air) tidak saling tercamupr satu sama lain. Selanjutnya proses pemisahan dilakukan dalam corong pisah dengan jalan pengocokan beberapa kali. Hal yang harus diperhatikan untuk memilih jenis pelarut yang sesuai menururt Arsyad (2001) adalah sebagai berikut:a. Harga konstanta distribusi tinggi untuk gugus yang bersangkutan dan konstanta distribusi rendah untuk gugus pengotor lainnya.b. Kelarutan pelarut organik rendah dalam airc. Viskositas kecil dan tidak membentuk emulsi dengan aird. Tidak mudah terbakar dan tidak bersifat racune. Mudah melepas kembali gugus yang terlarut didalamnya untuk keperluan analisa lebih lanjutEkstraksi dapat dilakukan secara kontinu atau bertahap, ekstraksi bertahap cukup dilakukan dengan corong pisah. Campuran dua pelarut dimasukkan dengan corong pemisah, lapisan dengan berat jenis yang lebih ringan berada pada lapisan atas.Dengan jalan pengocokan proses ekstraksi berlangsung, mengingat bahwa proses ekstraksi merupakan proses kesetimbangan maka pemisahan salah satu lapisan pelarut dapat dilakukan setelah kedua jenis pelarut dalam keadaan diam. Lapisan yang ada dibagian bawah dikeluarkan dari corong dengan jalan membuka kran corong dan dijaga agar jangan sampai lapisan atas ikut mengalir keluar. Untuk tujuan kuantitatif, sebaiknya ekstraksi dilakukan lebih dari satu kali. Jika sebagai metode analisis digunakan metode spekttrofotometri, tidak perlu dilakukan pelepasan karena konsentrasi gugus yang bersangkutan dapat ditentukan langsung dalam lapisan organik. Metode spektrofotometri dapat digunakan untuk pelarut air maupun organik. Faktor-faktor yang mempengaruhi laju ekstraksimenurut Arsyad (2001) adalah sebagai berikut:1. Tipe persiapan sampel2. Waktu ekstraksi3. Kuantitas pelarut4. Suhu pelarut5. Tipe pelarut

Prosedur KerjaDisiapkan 10 mL larutan protein putih telur dalam tabung valcon. Lalu ditambahkan garam ammonium sulfat hingga mencapai 20% jenuh (11,4 gram ammonium sulfat per 100 mL larutan). campuran diaduk dan dibiarkan selama lima menit pada temperature kamar. Lalu disentrifugasi selama 15 menit. supernatant lalu diindahkan ke dalam tabung valcon yang baru. Endapan yang terbentuk disebut fraksi 0-20% ammonium sulfat jenuh. Endapan lalu dilarutkan dengan 5 mL buffer Tris pH 7. Kemudian ditambahkan garam ammonium sulfat ke dalam supernatant dari tahap 5 hingga mencapai 50% jenuh (18,9 gram ammonium sulfat per 100 mL larutan). campuran diaduk dan dibiarkan selama lima menit pada temperature kamar. Lalu disentrifugasi selama 15 menit. supernatant lalu diindahkan ke dalam tabung valcon yang baru. Endapan yang terbentuk disebut fraksi 20-50% ammonium sulfat jenuh. Endapan lalu dilarutkan 70% jenuh (13,7 gram ammonium sulfat per 100 mL larutan). campuran diaduk dan dibiarkan selama lima menit pada temperature kamar. Lalu disentrifugasi selama 15 menit. supernatant lalu diindahkan ke dalam tabung valcon yang baru. Endapan yang terbentuk disebut dengan fraksi 50-70% ammonium sulfat jenuh. Endapan lalu diarutkan dengan 5 mL buffer Tris pH 7. Kemudian, setiap fraksi ammonium sulfat yang dihasilkan didialysis dengan menggunakan buffer Tris pH 7 selama satu malam.

Hasil PengamatanPembuatan larutan buffer tris pH 7PERLAKUAN HASIL PENGAMATAN

17,799 gr NaHPO4.2H2O dilarutkan dalam lbu takar 500 mlLarutan tak berwarna

8,8995 gr NaHPO4.2H2O dilarutkan dalam lbu takar 500 mlLarutan tak berwarna

15,601 gr NaHPO4.2H2O dilarutkan dalam lbu takar 1 LLarutan tak berwarna (Lar B)

1000 ml NaHPO4.2H2O dicampur dengan 222 ml NaHPO4.2H2OLarutan tak berwarna (Lar A)

Larutan A + Larutan B dalam labu takar 2000 ml.1222 mL A : 778 mL BLarutan tak berwarna

Sampel telur ayam negriPERLAKUAN HASIL PENGAMATAN

Putih telur dimasukan ke tabung valconCairan tak berwarna, kental

Ditambah garam (NH4)2SO4 20 % atau 2 gr dan disentrifuge 15 menit pada 3000 rpmBagian bawah menggumpal, ada supernatant

Supernatant Ditambah garam (NH4)2SO4 50 % atau 5 gr Bagian bawah putih, atas supernatant 1

Endapan ditambah 5 ml buffer tris pH 7 dalam tabung reaksiLarut, tak berwarna,terdapat buih diatas larutan (fraksi 1)

Supernatant 1 disentrifuge 15 menit pada 3000 rpmBagian bawah putih, atas supernatant 2

Endapan 2 ditambah buffer tris pH 7 dalam tabung reaksiLarut, tak berwarna,terdapat buih diatas larutan (fraksi 2)

Supernatant 2 ditambah garam (NH4)2SO4 70 % atau 4,2 gr dan disentrifuge 15 menit pada 3000 rpmBagian bawah putih, atas supernatant 3

Endapan ditambah 5 ml buffer tris pH 7 dalam tabung reaksiTak larut sempurna, warna putih keruh, terdapat buih diatas (fraksi 3)

fraksi 1,2,3 didialisis selama 3 jam dalam larutan buffer tris pH 7Larutan berwarna putih

Hasil dialysis fraksi 1,2,3 diukur absorbansinya dengan spektrofotometri UV-VIS dengan menambahkan reagen bradfordLarutan biru tua, data terlampir

Tabel pengukuran absorbansi = 595 nmFraksi ke-Pengukuran ke-

123

11,5201,5291,548

21,5031,5381,529

31,5291,5381,557

Pengukuran larutan standardsampelPengukuran ke-

123

Blanko0,000,000,00

BSA 1 mg/ml0,1761,0791,102

BSA 0,5 mg/ml1,3111,2131,210

BSA 0,25 mg/ml1,4231,2711,235

BSA 0,125 mg/ml1,4021,2551,229

BSA 0,0625 mg/ml1,2691,1111,129

BSA 0,03125 mg/ml0,8150,7900,782

PerhitunganPersamaan garis y = 0,062 x + 1,210

Fraksi 1 BSA 1 Kadar Albumin cuplikan 1Y = 1,5201,520 = 0,062 x + 1,2101,520 - 1,210 = 0,062 x x = = 5 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 2Y = 1,5291,529 = 0,062 x + 1,2101,529 - 1,210 = 0,062 x x = = 5,1 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 3Y = 1,5481,548 = 0,062 x + 1,2101,548- 1,210 = 0,062 x x = = 5,4 mg/mlFraksi 2 BSA 1 Kadar Albumin cuplikan 1Y = 1,5031,503 = 0,062 x + 1,2101,503- 1,210 = 0,062 x x = = 4,7 mg/ml

Kadar Albumin cuplikan 2Y = 1,5381,538 = 0,062 x + 1,2101,538 - 1,210 = 0,062 x x = = 5,2 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 3Y = 1,5291,529 = 0,062 x + 1,2101,529 - 1,210 = 0,062 x x = = 5,1 mg/mlFraksi 3 BSA 1 Kadar Albumin cuplikan 1Y = 1,5291,529 = 0,062 x + 1,2101,529 - 1,210 = 0,062 x x = = 5,1 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 2Y = 1,5381,538 = 0,062 x + 1,2101,538 - 1,210 = 0,062 x x = = 5,2 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 3Y = 1,5571,557 = 0,062 x + 1,2101,557 - 1,210 = 0,062 x x = = 5,5 mg/mlPersamaan garis y = 0,068 x + 1,098Fraksi 1 BSA 2 Kadar Albumin cuplikan 1Y = 1,5201,520 = 0,068 x + 1,0981,520 - 1,098= 0,068 xx = = 6,2 mg/ml Y = 1,5291,529 = 0,068 x + 1,0981,529 - 1,098= 0,068 xx = = 6,3 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 3Y = 1,5481,548 = 0,068 x + 1,0981,548 - 1,098= 0,068 xx = = 6,6 mg/mlFraksi 2 BSA 2 Kadar Albumin cuplikan 1Y = 1,5031,503 = 0,068 x + 1,0981,503 - 1,098= 0,068 xx = = 5,9 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 2Y = 1,5381,538 = 0,068 x + 1,0981,538 - 1,098= 0,068 xx = = 6,4 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 3Y = 1,5291,529 = 0,068 x + 1,0981,529 - 1,098= 0,068 xx = = 6,3 mg/mlFraksi 2 BSA 2 Kadar Albumin cuplikan 1Y = 1,5291,529 = 0,068 x + 1,0981,529 - 1,098= 0,068 xx = = 6,3 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 2Y = 1,5381,538 = 0,068 x + 1,0981,538 - 1,098= 0,068 xx = = 6,4 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 3Y = 1,5571,557 = 0,068 x + 1,0981,557 - 1,098= 0,068 xx = = 6,7mg/mlPersamaan garis y = 0,102 x + 1,081Fraksi 1 BSA 3 Kadar Albumin cuplikan 1Y = 1,5201,520 = 0,102 x + 1,0811,520 - 1,098= 0,068 xx = = 4,3 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 2Y = 1,5291,529 = 0,102 x + 1,0811,529 - 1,098= 0,068 xx = = 4,3 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 3Y = 1,5481,548 = 0,102 x + 1,0811,548 - 1,098= 0,068 xx = = 4,5 mg/mlFraksi 2 BSA 3 Kadar Albumin cuplikan 1Y = 1,5031,503 = 0,102 x + 1,0811,503 - 1,098= 0,068 xx = = 4,1 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 2Y = 1,5381,538 = 0,102 x + 1,0811,538 - 1,098= 0,068 x

x = = 4,1 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 3Y = 1,5291,529 = 0,102 x + 1,0811,529 - 1,098= 0,068 xx = = 4,3 mg/mlFraksi 2 BSA 3 Kadar Albumin cuplikan 1Y = 1,5291,529 = 0,102 x + 1,0811,529 - 1,098= 0,068 xx = = 4,3 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 2Y = 1,5381,538 = 0,102 x + 1,0811,538 - 1,098= 0,068 xx = = 4,1 mg/ml Kadar Albumin cuplikan 3Y = 1,5571,557 = 0,102 x + 1,0811,557 - 1,098= 0,068 xx = = 4,4 mg/ml