Pewarnaan Hematoxilin Eosin (HE) Pewarnaan ini digunakan untuk mewarnai jaringan.

Prinsip: inti yang bersifat asam akan menarik zat/ larutan yang bersifat basa sehingga akan berwarna biru. Sitoplasma bersifat basa akan menarik zat /larutan yang bersifat asam sehingga berwarna merah.

Pada pewarnaan HE, ada beberapa tahapan yaitu

1. Deparafinisasi

Tujuan: untuk menghilangkan/ melarutkan parafin yang terdapat pada jaringan.

Zat: xylol

2. Rehidrasi

Tujuan: untuk memasukkan air ke dalam jaringan. Air akan mengisi rongga-rongga jaringan yang kosong.

Zat: alkohol absolut, alkohol 90 %, alkohol 80 %

3. Pewarnaan I

Tujuan: untuk memberi warna pada inti dan sitoplasma pada jaringan

Zat: hematoxylin

4. Differensiasi

Tujuan: untuk mengurangi warna biru pada inti dan menghilangkan warna bitu pada sitoplasma

Zat: HCl 0,6%

5. Blueing

Kris Cahyo Mulyatno ITD UA

Tujuan: untuk memperjelas warna biru pada inti sel

Zat: lithium carbonat 0,5%

6. Pewarnaan II

Tujuan: untuk memberi warna merah pada sitoplasma sel

Zat: eosin

7. Dehidrasi

Tujuan: untuk menghilangkan air dari jaringan

Zat: Alkohol 80 %, Alkohol 90 %, Alkohol 100 % (absolut)

8. Mounting

Tujuan: untuk mengawetkan jaringan yang telah diwarnai

Zat: entellan/ canada balsem

Jaringan yang akan diwarnai HE, sebelumnya telah mengalami “Processing Jaringan” dan dipotong dengan menggunakan mikotrom. Ketebalan jaringan antara 4-6 µm. Jaringan yang telah dipotong sesuai ukuran dilekatkan pada objek glass.

Berikut langkah kerja sebelum pewarnaan HE (persiapan jaringan):

1. Siapkan alat dan bahan yang diperlukan 2. Keluarkan jaringan dari blok/kotak parafin 3. Potong jaringan dengan alat mikotrom dengan ketebalan antara 4-6 µm 4. Ambil 1 slice potongan jaringan, masukkan ke dalam waterbath ( 30-40 C), untuk menghilangkan kerutan pada potongan dan mencairkan parafin. 5. Tempelkan dengan hati-hati potongan jaringan tersebut pada objek glass. 6. Teteskan 1-2 tetes albumin di atas potongan jaringan, lalu dengan menggunakan pinset, rapikan potongan (menghilangkan kerutan ) dengan

Kris Cahyo Mulyatno ITD UA

hati-hati, jangan sampai sobek. 7. Setelah itu, panaskan objek glass yang telah ditempeli jaringan dengan oven pada suhu 30-40 C, bila tidak ada oven, gunakan hotplate. Namun objak glass hanya di gosok-gosokkan agar tidak pecah.

8. Lakukan pewarnaan HE.

No TAHAPAN ZAT WAKTU 1 Deparafinisasi Xylol I 2-3 celup 2 Xylol II 2-3 celup 3 Rehidrasi Alkohol 100 % 10 celup 4 Alkohol 90% 10 celup 5 Alkohol 80 % 10 celup 6 AIR 1 menit 7 Pewarnaan Hematoxylin 1-5 menit 8 AIR 1 menit 9 Differensiasi HCl 0,6 % 1-2 celup 10 AIR 1 menit 11 Blueing Lithium Karbonat 0,5 % 3 menit 12 AIR 1 menit 13 Alkohol 95 % 1-2 celup 14 Pewarnaan Eosin 3 menit 15 Dehidrasi Alkohol 80% 10 celup 16 Alkohol 90% 10 celup 17 Alkohol 100% 10 celup 18 Xylol I 2-3 celup 19 Xylol II 2-3 celup 20 Mounting Entelan 1-2 tetes

9. Setelah di beri entelan, tutup dengan cover glass dengan hati-hati agar tidak terdapat gelembung.

10. Jaringan yang telah diwarnai, akan awet lebih dari 5 tahun.

Kris Cahyo Mulyatno ITD UA