Malaria merupakan salah satu yang paling penting dari penyakit menular ditropis dan sub-tropis. Pencarian senyawa antimalaria memiliki telah diharuskan oleh P. falciparum resistensi untuk hampir semua obat antimalaria. Dalam penelitian ini, in vitro aktivitas antimalaria dari ekstrak minyak mentah berair dan etanol Vernonia amygdalina, sebuah tanaman yang digunakan oleh dukun untuk mengobati malaria dan penyakit lainnya,dievaluasi terhadap 14 isolat segar P. falciparum dari Damboa, Borno, Nigeria. Uji toksisitas akut dan aktivitas antiinflamasi ekstrak juga ditentukan. Adapenghambatan yang signifikan dalam pematangan skizon relatif untuk mengontrol (P =0,05). Ekstrak etanol menunjukkan aktivitas antimalaria yang lebih tinggi dari 78,10%, IC50 11,2 ekstrak ug / ml dan berair memiliki aktivitas 74,02%,IC50 13,6 mg / ml. Kedua ekstrak menunjukkan antimalaria moderat aktivitas. Ekstrak dipamerkan toksisitas diabaikan pada tikus dan menunjukkanukuran baik aktivitas anti-inflamasi. Hasil ini membenarkanpenggunaan tradisional tanaman dalam pengobatan malaria. Pekerjaan selanjutnya adalah disarankan untuk mengisolasi, mengidentifikasi dan mengkarakterisasi prinsip aktif dari tanaman.

PENDAHULUAN.Malaria merupakan salah satu penyakit tropis yang paling penting danpenyebab terbesar rawat inap dan kematian di antara anak-anak usia 6bulan sampai 5 tahun (. Molta et al, 2006; Quattara et al, 2006.). ItuOrganisasi Kesehatan Dunia melaporkan bahwa ada diperkirakan246 juta kasus malaria didistribusikan di antara 3,3 miliar orang dirisiko pada tahun 2006, yang menyebabkan setidaknya satu juta kematian. Ini adalah sebagian besaranak di bawah lima tahun. Seratus sembilan negara yangendemik pada tahun 2008 dan 45 di wilayah WHO Afrika (WHO,2008). Sekitar 80% kasus malaria di dunia adalahdiperkirakan berada di Afrika di mana penyakit ini endemik (WHO,2008). Penyakit ini merupakan penyebab utama dari benua bayi tinggikematian, menewaskan 1 dari setiap 20 anak di bawah usia 5 tahun(Goose, 1993). Di Nigeria, penularan malaria terjadi tahun semua-bulat di Selatan, dan lebih musiman di Utara. Negaramenyumbang seperempat dari semua kasus malaria di Afrika WHOdaerah (WHO, 2008).

Tingkat mengkhawatirkan di mana Plasmodium falciparum telah dikembangkanresistensi terhadap klorokuin dan obat antimalaria sintetik lainnyamembuat perlu untuk mencari antimalaria yang lebih efektifSenyawa ( Bhat & Surolia , 2001) . Di Afrika dan negara-negara lainendemis malaria , tanaman obat tradisional sering digunakan untuk mengobati atau menyembuhkan malaria ( Gessler et al ., 1994; Jenett - Siems et al . , 1999) . Ini adalah fakta bahwa konvensional antimalaria seperti klorokuin , kina dan artemisinin derivatif berasal dari tanaman ( Taylor et al . , 1993) . ini Oleh karena itu penting untuk mengetahui aktivitas antimalaria dari tanaman obat untuk menentukan potensi mereka sebagai sumber agen antimalaria baru ( Mustofa et al . , 2007) .

Vernonia amygdalina , dikenal sebagai daun sambiloto , adalah di bawahsemak tinggi variabel dengan daun hijau petiolate sekitar 6mmgaris tengah. Daun biasanya pahit dan sup yang sangat populersayuran di Nigeria ( Ojiako & Nwanjo , 2006) . Tanaman ini ditemukan didaerah sabana dan melalui Afrika tengah dan selatan tropis . semua bagian tanaman ( daun , batang dan akar ) dikatakan memiliki menggunakan obat . Ini termasuk promosi diuresis , penyembuhan tonsilitis , demam , malaria , diabetis , pneumonia , penyakit kuning , anemia ,Masalah perut dan Ascaris ( NNMDA , 2006; Odugbemi et al , .2007) .

Kedua ekstrak air dan etanol kulit batang dan daun dilaporkan telah digunakan sebagai pencahar , antimalaria dan pengobatan eksim ( Ojiako & Nwanjo , 2006) . Dalam penelitian ini , aktivitas antimalaria dari Vernonia amygdalina dievaluasi in vitro . Toksisitas akut dan aktivitas anti - inflamasi tanaman yang juga ditentukan .

BAHAN DAN METODE.Pengumpulan dan Ekstraksi bahan tanaman: daun segar dari V.amygdalina dikumpulkan pada bulan Oktober 2008 di Jos, Nigeria. Itu tanaman telah dikonfirmasi oleh ahli taksonomi di Federal College of Kehutanan, Jos dan Herbarium sampel spesimen dengan voucher Nomor FCFBM 008 diendapkan di Botanical Museum College.Daun segar V. amygdalina dipotong-potong dan dikeringkan di laboratorium. Potongan yang dikeringkan kemudian dikurangi menjadi bubuk menggunakan penggiling laboratorium. Delapan puluh gram bubuk kering bentuk bahan tanaman diekstraksi dengan air dalam sebuah soxlet aparatus untuk 72 jam. Lain 80 g bubuk tanaman adalah diekstraksi dengan etanol dalam ekstraktor soxlet selama 72 jam. Semua ekstrak yang terkonsentrasi untuk kekeringan pada air mandi danditimbang. Ekstrak kemudian disimpan dalam wadah yang tertutup dan disimpan dalam lemari es pada 4 C untuk melindungi dari cahaya dan kelembaban sampai digunakan (Sutharson et al., 2007).

Skrining fitokimia ekstrak : The pendahuluan Analisis fitokimia dari ekstrak tanaman dilakukan dengan menggunakan tipis - kromatografi lapis ( TLC ) . Pemutaran standar pengujian dengan menggunakan prosedur standar yang digunakan untuk mendeteksi aktifkonstituen ( Harborne , 1984) . Hal ini dilakukan padaPharmacognosy , Fakultas Farmasi , UniversitasJos , Nigeria .

Pengumpulan sampel darah dalam tabung percobaan Tes sensitivitas: ThePenelitian dilakukan di Rumah Sakit Umum Damboa, Borno,Nigeria. Damboa adalah Utara-timur zona National MalariaSitus Surveillance Sentinel. Penelitian ini dilakukan antaraOktober-Desember 2009, di antara pasien yang menghadiri departemen rawat jalan rumah sakit. Kriteria inklusi berikutditetapkan untuk pekerjaan ini: anak-anak dan orang dewasa usia 6 bulan ke atas,yang memiliki demam dalam 24 jam terakhir, suhu tambahan 37,5o C, tidak mengambil antimalaria apapun dalam 2 minggu terakhir, yang memberiinformed consent lisan atau tertulis setelah tujuan dari penelitian ini adalah menjelaskan kepada mereka (pasien / orang tua / wali atau dalam kasusanak di bawah umur). Pasien yang memenuhi kriteria inklusi disaringuntuk infeksi P. falciparum. Beberapa tetes sampel darah yang diperolehdari jari tusukan, menggunakan jarum sekali pakai steril digunakan untuk mempersiapkan smear tebal dan tipis pada slide yang bersih untuk setiap pasien. Slide disiapkan diwarnai selama 10 menit dengan 10% GiemsaSolusi disiapkan dapar fosfat pH 7,3 dan diperiksamikroskopis untuk parasit (Molta et al., 1992). Pasien yang memilikiInfeksi mono P. falciparum dengan parasitemia 2000 / ml dantidak lebih dari 80.000 / ml darah termasuk dalam obat in vitrouji kepekaan (WHO, 2001).

Empat belas isolat segar P. falciparum yang diperoleh daripasien bergejala , usia 5 sampai 25 tahun dengan mengumpulkan 2,5 sampai 3ml darah ke dalam botol EDTA dari pasien dengan dikonfirmasi P.infeksi mono falciparum . Sampel darah segar yangdisentrifugasi pada 2000 rpm selama 10 menit , plasma darah adalahdihapus dan pelet darah ditangguhkan dan dicuci tiga kali dalamMedium RPMI 1640 ( Gibco USA ) sebelum digunakan untuk parasitbudidaya ( Flyg et al . , 1997) . Pasien kemudian diobati denganArtemeter - lumefantrine ( Coartem ) atau amodiakuin obat kombinasi -Artesunate .

Persiapan larutan ekstrak Budaya menengah dan : Budayamedia dibuat dengan melarutkan 10,43 g RPMI 1640 bubuk( Gibco ) , 6 g HEPES , 2 g NaHCO3 ( Sigma Aldrich ) dalam 1 literair suling - deionisasi . Media disaring menggunakan 0,22 mmembran filter dan 0,5 ml gentamacin (dari 50 mg / ml saham ) adalahditambahkan dan disimpan pada 4 C di aliquot 45ml . Sebelum budidaya ,setiap aliquot dilengkapi dengan 5 ml 5 % Albumax II( Cranmer et al . , 1997) .

Ekstrak air pertama kali dilarutkan dalam air suling dan etanolekstrak dilarutkan dalam metanol dan diencerkan dalam air distilleddeionised , dan solusi 2 mg / ml masing-masing disiapkan . itu2 mg solusi / ml telah terdilusi dalam media kultur malariauntuk memberikan 200 mg / ml larutan stok ( Clarkson et al . , 2004) . ekstrakkemudian diuji di 6 seri dua kali lipat pengenceran dengan akhirKisaran konsentrasi 1,56-100 mg / ml dalam 96 sumur microtitrepiring ( Becton Dickinson Lab barang , USA ) .

Dalam budidaya in vitro P. falciparum isolat dan sensitivitasTes : Pengujian dilakukan dalam rangkap dua . Seratus mlair suling pertama kali didistribusikan ke piring dengan baik setelah 100ml medium kultur yang mengandung ekstrak pada berbagai konsentrasiditambahkan ke dalam piring dengan baik. Seratus liter mikro parasitBudaya akhirnya ditambahkan . Piring titer diinkubasi CO2Kondisi pada 37 C dalam stoples lilin untuk 24-30 jam ( Trager & Jensen ,1976) . Setelah inkubasi , isi sumur dipanen dansel darah merah ditransfer ke slide mikroskopis bersih untuk membentukseri film tebal . Film-film yang bernoda selama 10 menit di 10 %Solusi Giemsa pH 7,3 .

Hambatan pertumbuhan skizon per 200 parasit aseksual dihitungdalam 10 bidang mikroskopis . Budaya pengendalian parasit dibebaskan dariekstrak dianggap sebagai pertumbuhan 100 % . persentasepenghambatan per konsentrasi dihitung dengan rumus:

[ ( % Parasitemia dalam sumur kontrol - % parasitemia sumur uji ) /( % Parasitemia kontrol ) ] x 100 ( WHO , 2001; Ngemenya etal . , 2006) .

Nilai-nilai IC50 , konsentrasi yang dibutuhkan untuk menghambat skizonPertumbuhan sebesar 50 % ditentukan dengan interpolasi linier darikurva hambatan pertumbuhan skizon ( Log konsentrasi terhadappersen penghambatan ) yang dihasilkan dari setiap interaksi parasit - ekstrak( Mustofa et al . , 2007) .

Hewan percobaan : Hewan-hewan yang digunakan untuk uji toksisitas akutdan aktivitas anti - inflamasi adalah laki-laki dewasa dan tikus betina ( 20- 25 g ) dan tikus ( 150-200 g ) diperoleh dari rumah hewanUniversitas Jos , Nigeria . Hewan-hewan diaklimatisasi untukperiode 7 hari pada suhu kamar dan kelembaban sebelum merekadigunakan . Mereka tinggal di kandang standar dan dipelihara dipelet hewan standar dan ad libitum air . semua eksperimenmelibatkan hewan dilakukan di rumah hewan dariUniversitas Jos . Hewan ditangani sesuai dengan peraturan lokaldan regulasi Experimental Animals , Universitas Jos , Nigeria .

Uji toksisitas akut : Toksisitas akut ekstrak tumbuhan yangdiuji pada tikus dengan menggunakan 3 dosis ( 500 , 1000 dan 3000 mg / kgberat badan ) diberikan secara oral . Tikus kontrol disimpan di bawah samakondisi tanpa perawatan apapun . Hewan-hewan yang secara rutindiperiksa untuk penampilan atau tanda-tanda keracunan seperti tremor ,kelemahan dan penolakan feed , jatuh dari rambut , koma atau bahkankematian selama 48 jam . The Lethal Dose LD50 diperkirakan dariGrafik kematian persentase dikonversi ke probit terhadap log -doseekstrak , probit 5 menjadi 50 % .

Anti - inflamasi Test: topikal Edema dari Telinga Mouse:Pengaruh air dan alkohol ekstrak Vernonia amygdalina padaedema akut topikal dinilai menggunakan xylene - diinduksi telingaedema pada tikus ( Okoli et al . , 2005) . Mencit albino Swiss ( 20 - 25 g )menerima aplikasi topikal ( 5 g / telinga ) ekstrak air V.amygdalina atau etanol ekstrak V. amygdalina , di anteriorpermukaan telinga kanan sementara xylene ( 0,08 ml) langsung diterapkanpada permukaan posterior dari telinga yang sama . Kontrol hewan yang diterima0,2 ml air suling pada anterior permukaan dan 0.08ml xylenepada permukaan posterior . Telinga kiri yang tidak diobati .

Setelah 3 jam aplikasi xilena , telinga edema diukurdengan sekrup mikrometer gauge ( Moore dan Wright , Inggris ) ( Inoueet al . , 1989) . Perbedaan ketebalan telinga dari diperlakukan tepatdan telinga kiri diobati dihitung dan digunakan sebagai ukuranedema ( Okoli et al . , 2005) . Tingkat inhibisi ( % ) dari edemadihitung dengan menggunakan hubungan :Penghambatan ( % ) = 100 [ 1 - ( Et / Ec ) ] ,Dimana Et = edema rata-rata telinga dirawat ,Ec = rata edema kontrol diobati .

Analisis statistik : Microsoft Excel 2007 digunakan untukmenghitung pertumbuhan parasit mean dan penghambatan persentase parasit .T - tes siswa digunakan untuk menganalisis data dan nilai-nilai P 0,05 dianggap signifikan .

HASIL .Hasil penapisan fitokimia bahan tanaman menunjukkankehadiran saponin , tanin , flavonoid , karbohidrat , jantungglikosida , alkaloid , steroid dan anthaquinones .

Ekstrak kasar diuji pada trofozoit, terutama bentuk cincin.Pada masing-masing tujuh konsentrasi semua ekstrak (Tabel 1),ada penurunan yang signifikan dalam jumlah sel diparasitirelatif untuk mengontrol (P 0,05). Pengukuran dasaraktivitas antimalaria yang digunakan dalam penelitian ini adalah pengurangan jumlah sel terparasit dalam budaya uji dibandingkan dengan kontrol pada 24 -30 jam inkubasi. Dari dua ekstrak yang diuji, etanolekstrak V. amygdalina menunjukkan aktivitas antimalaria tertinggi78,1%, dengan IC50 11,2 mg / ml. Ekstrak air memiliki parasitpenghambatan pertumbuhan 74,0% dan IC50 13,6 mg / ml (Tabel 2). Gambar. 1menunjukkan kurva hambatan pertumbuhan skizon yang dihasilkan dari masing-masingparasit-ekstrak kombinasi / interaksi. Penghambatan Konsentrasi(IC50) nilai yang ditentukan dengan interpolasi linear dari masing-masingkurva penghambatan. Berkenaan dengan konsentrasi diberikan,tergantung dosis aktivitas antimalaria jelas ditunjukkan untuk duaekstrak mentah. Persentase hambatan yang lebih tinggi denganpeningkatan konsentrasi.