PENGARUH MINYAK JINTAN HITAM DALAM MENCEGAH

PENINGKATAN KADAR KOLESTEROL LDL

TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus)

SKRIPSI

Untuk Memenuhi Persyaratan

Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran

Pradipta Arief Pramono

G 0006136

FAKULTAS KEDOKTERAN

UNIVERSITAS SEBELAS MARET

SURAKARTA

2010

ii

PENGESAHAN SKRIPSI

Skripsi dengan judul : Pengaruh Minyak Jintan Hitam Dalam Mencegah

Peningkatan Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih (Rattus norvegicus)

Pradipta Arief Pramono, G0006136, Tahun 2010

Telah diuji dan sudah disahkan di hadapan Dewan Penguji Skripsi

Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta

Pada Hari Senin, Tanggal 31 Mei 2010

Pembimbing Utama

Nama : Veronika Ika Budiastuti, dr., M.Pd

NIP : 19730312 200212 2 001 (…………………………….)

Pembimbing Pendamping

Nama : Kustiwinarni, Dra., Apt.

NIP : 19520308 198503 2 001 (…………………………….)

Penguji Utama

Nama : Ida Nurwati, dr., M.Kes

NIP : 19650203 199702 2 001 (…………………………….)

Anggota Penguji

Nama : Dian Ariningrum, dr., SpPK, M.Kes

NIP : 19710720 200604 2 001 (…………………………….)

Surakarta,

Ketua Tim Skripsi Dekan FK UNS

Sri Wahjono, dr., M.Kes. Prof. Dr.H. AA. Subijanto, dr., MS.

NIP: 19450824 197310 1 001 NIP: 19481107 197310 1 003

iii

PERNYATAAN

Dengan ini menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah

diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan Tinggi, dan

sepanjang pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah

ditulis atau diterbitkan oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis diacu dalam

naskah dan disebutkan dalam daftar pustaka.

Surakarta, 31 Mei 2010

Pradipta Arief Pramono

NIM. G0006136

iv

ABSTRAK

Pradipta Arief Pramono, G0006136, Pengaruh Minyak Jintan Hitam dalam Mencegah Peningkatan Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih (Rattus norvegicus), Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Peningkatan kadar kolesterol LDL dalam plasma merupakan faktor resiko terjadinya penyakit jantung koroner (PJK). Meningkatkan asupan asam lemak tidak jenuh rantai ganda (polyunsaturated fatty acid; PUFA) dapat mencegah terjadinya peningkatan kadar kolesterol LDL plasma. Minyak jintan hitam diketahui memiliki kandungan PUFA cukup tinggi (84%) terutama asam linoleat. Tujuan Penelitian: Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui adanya pengaruh pemberian minyak jintan hitam dalam mencegah peningkatan kadar kolesterol LDL pada tikus putih (Rattus norvegicus). Metode Penelitian: Penelitian ini bersifat eksperimental laboratorik dengan pretest and posttest controlled group design, dilakukan di Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT) Universitas Gadjah Mada Yogyakarta (UGM) Yogyakarta. Subjek penelitian adalah tikus putih jantan (Rattus norvegicus) sebanyak 34 ekor, strain Wistar, umur 3 bulan dengan berat badan kurang lebih 200 gram. Tikus-tikus dibagi menjadi 2 kelompok , masing-masing kelompok terdiri dari 17 ekor tikus. Semua kelompok diberi pakan tinggi kolesterol. Kelompok I sebagai kontrol, sedangkan kelompok II diberi minyak jintan hitam sebanyak 0,4 ml/ 200 gram BB/ hari. Seluruh tikus diperiksa kadar kolesterol LDL darahnya sebelum dan setelah 28 hari perlakuan. Hasil Penelitian: Hasil uji t berpasangan pada kelompok I tidak menunjukkan perbedaan kadar kolesterol LDL yang signifikan dengan nilai p= 0,218 (p> 0,05) sedangkan hasil uji t berpasangan pada kelompok II menunjukkan kadar kolesterol LDL yang meningkat secara signifikan dengan nilai p= 0,000 (p<0,05). Simpulan Penelitian: Pemberian oral minyak jintan hitam sebanyak 0,4 ml/200 gram BB/hari selama 28 hari tidak terbukti dapat mencegah peningkatan kadar kolesterol LDL tikus putih (Rattus norvegicus). Kata kunci: Minyak jintan hitam; Kadar kolesterol LDL; Rattus norvegicus

v

ABSTRACT

Pradipta Arief Pramono, G0006136, The Effect of Black Cumin Oil on Preventing The Increase of LDL Cholesterol Level of White Rats (Rattus norvegicus), Medical Faculty, Universitas Sebelas Maret, Surakarta. The increase of LDL cholesterol level in plasma is a predisposing factor of coronary heart disease (CHD). Increasing the intake of polyunsaturated fatty acid (PUFA) can prevent the increase of LDL cholesterol level in plasma. The Black Cumin Oil contains high level of PUFA (84%) especially linoleic acid. Objective: The purpose of this study was to assess the effect of black cumin oil on preventing the increase of LDL cholesterol level of white rats’ (Rattus norvegicus) blood. Methods: This experimental laboratoric study with pre test and post test controlled group design was held in Trial and Research Laboratory Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, Indonesia. Thirty-four male white rats, Wistar strain, 3 months old, and about 200 gram weights were divided into 2 groups. Both groups were fed by high cholesterol food. The first group was the control group and the second group was fed with black cumin oil 0,4 ml/ 200 gram body weight/day. The LDL cholesterol level of both groups were checked twice, before and after 28 days treatment. Results: The result of paired sample t-test in the first group showed no significant difference in LDL cholesterol level with p= 0,218 (p>0,05). The result of paired sample t-test on second group showed a significant increase in LDL cholesterol level with p= 0,000 (p<0,05). Conclusion: The oral fed of black cumin oil 0,4 ml/ 200 gram body weight/day during 28 days has no effect on preventing the increase of LDL cholesterol level of white rats (Rattus norvegicus). Keywords: Black cumin oil; LDL cholesterol level; Rattus norvegicus

vi

PRAKATA

Penulis mengucapkan puji syukur kehadirat Allah swt. atas segala kesempatan, nikmat dan rahmat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Pengaruh Minyak Jintan Hitam Dalam Mencegah Peningkatan Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih (Rattus norvegicus)”.

Skripsi ini disusun dengan maksud untuk memenuhi salah satu syarat dalam proses untuk memperoleh gelar kesarjanaan dalam bidang kedokteran di Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.

Segala sesuatu yang telah penulis lakukan dalam upaya menyelesaikan skripsi ini tentunya tidak terlepas dari bantuan dan dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, dengan rasa hormat dan tulus, penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada:

1. Prof. Dr. H. AA. Subijanto, dr., MS., selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.

2. Sri Wahjono, dr., MKes., selaku Ketua Tim Skripsi beserta Staf Bagian Skripsi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.

3. Veronika Ika Budiastuti, dr., MPd., selaku Pembimbing Utama yang telah memberikan bimbingan dan saran bagi penulis selama penulisan skripsi ini.

4. Kustiwinarni, Dra., Apt., selaku Pembimbing Pendamping yang telah memberikan bimbingan dan saran bagi penulis selama penulisan skripsi ini.

5. Ida Nurwati, dr., MKes., selaku Penguji Utama yang telah berkenan menguji dan memberi masukan yang berarti dalam penulisan skripsi ini.

6. Dian Ariningrum, dr., MKes., SpPK., selaku Penguji Pendamping yang telah berkenan menguji dan memberi masukan yang berarti dalam penulisan skripsi ini.

7. Staf Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran UNS yang telah membantu penyelesaian skripsi ini.

8. Kedua orangtuaku tercinta dan adik-adikku yang telah memberikan doa dan dukungan dalam menyelesaikan skripsi ini.

9. Sahabat-sahabatku yang sudah membantu kelancaran dalam proses penyusunan skripsi.

10. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu-persatu yang telah membantu dalam penulisan skripsi ini. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa dalam penulisan skripsi ini masih

jauh dari sempurna, oleh karena itu penulis mengharap saran dan kritik yang membangun kedepannya. Semoga penelitian ini bermanfaat bagi ilmu kedokteran pada umumnya dan bagi para pembaca pada khususnya.

Surakarta, Mei 2010

Penulis

vii

DAFTAR ISI

PRAKATA ……………………………………………………………… vi

DAFTAR ISI …………………………………………………………… vii

DAFTAR TABEL ………………………………………………………. ix

DAFTAR GAMBAR …………………………………………………… x

DAFTAR LAMPIRAN ………………………………………………… xi

BAB I PENDAHULUAN ……………………………………………... 1

A. Latar Belakang Masalah ……………………………………… 1

B. Perumusan Masalah …………………………………………... 3

C. Tujuan Penelitian ……………………………………………... 3

D. Manfaat Penelitian ……………………………………………. 3

BAB II LANDASAN TEORI …………………………………………. 4

A. Tinjauan Pustaka ……………………………………………… 4

1. Kolesterol LDL …………………………………………….. 4

2. Polyunsaturated Fatty Acid (PUFA) …..…………………. 6

3. Minyak Jintan Hitam …..………………………………….. 7

4. Mekanisme Minyak Jintan Hitam dalam Mencegah

Peningkatan Kadar Kolesterol LDL ...................................... 9

B. Kerangka Pemikiran …………………………………………... 11

C. Hipotesis ………………………………………………………. 12

viii

BAB III METODE PENELITIAN …………..………………………… 13

A. Jenis Penelitian ……………………………………………... 13

B. Lokasi Penelitian …………………………………………… 13

C. Subjek Penelitian …………………………………………… 13

D. Teknik Sampling …………………………………………… 13

E. Identifikasi Variabel Penelitian ……………………………. 14

F. Definisi Operasional Variabel ……………………………... 15

G. Alur Penelitian ……………………………………………... 21

H. Alat, Bahan dan Cara Kerja ……………………………….. 22

I. Analisis Statistik …………………………………………… 24

BAB IV HASIL PENELITIAN ……………………………………… 25

BAB V PEMBAHASAN ……………………………………………. 32

BAB VI SIMPULAN DAN SARAN ………………………………… 36

A. Simpulan ………………………………………………... 36

B. Saran ……………………………………………………. 36

KELEMAHAN PENELITIAN ………………………………………... 37

DAFTAR PUSTAKA ………………………………………………….. 38

LAMPIRAN …………………………………………………………… 41

ix

DAFTAR TABEL

Tabel 1. Komposisi fraksi PUFA minyak jintan hitam.

Tabel 2. Rerata berat badan tikus putih sebelum perlakuan.

Tabel 3. Rerata kadar kolesterol LDL kedua kelompok tikus

putih sebelum perlakuan.

Tabel 4. Rerata kadar kolesterol LDL tikus putih setelah

perlakuan.

Tabel 5. Rerata kadar kolesterol LDL tikus putih sebelum

dan setelah perlakuan pada kelompok I (kontrol).

Tabel 6. Rerata kadar kolesterol LDL tikus putih sebelum dan

setelah perlakuan pada kelompok II (perlakuan).

Hal.

9

26

28

29

30

30

x

DAFTAR GAMBAR

Hal.

Gambar 1. Metabolisme kolesterol 5

Gambar 2. Struktur asam linoleat dan asam linolenat 7

Gambar 3. Mekanisme PUFA dalam menurunkan kadar kolesterol LDL 9

Gambar 4. Distribusi Data Berat Badan Tikus Putih pada K I (kiri)

dan K II (kanan) 25

Gambar 5. Distribusi Data Kolesterol LDL Pretest pada K I (kiri)

dan K II (kanan) 27

Gambar 6. Distribusi Data Kolesterol LDL Posttest pada K I (kiri)

dan K II (kanan) 29

Gambar 7. Rerata Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih sebelum dan

setelah Perlakuan 31

xi

DAFTAR LAMPIRAN

Hal.

Lampiran 1 Konversi Perhitungan Dosis untuk Berbagai Jenis Hewan

dan Manusia 41

Lampiran 2 Kadar Kolesterol LDL Berdasarkan Umur Tikus Putih 42

Lampiran 3 Cara Pembuatan Pakan Hiperkolesterolemik 43

Lampiran 4 Komposisi Pellet 44

Lampiran 5 Daftar Volume Maksimal Bahan Uji pada Pemberian

Per Oral 45

Lampiran 6 Data Biologis Tikus 46

Lampiran 7 Kandungan Nutrisi per 100 gram Jintan Hitam 47

Lampiran 8 Hasil Pengukuran Berat Badan Tikus Putih Sebelum

Perlakuan (Gram) 48

Lampiran 9 Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih

Sebelum Perlakuan (mg/dL) 49

Lampiran 10 Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih

Setelah Perlakuan (mg/dL) 50

Lampiran 11 Grafik Uji Normalitas Berat Badan Tikus Putih

Kelompok I 51

Lampiran 12 Grafik Uji Normalitas Kadar Kolesterol LDL Kelompok I

Sebelum dan Setelah Perlakuan 52

Lampiran 13 Grafik Uji Normalitas Kadar Kolesterol LDL Kelompok II

Sebelum dan Setelah Perlakuan 53

Lampiran 14 Uji Normalitas Berat Badan, Kadar LDL Sebelum dan

Sesudah Perlakuan Tikus Putih 54

Lampiran 15 Uji t Berat Badan Tikus Putih Sebelum Perlakuan 56

Lampiran 16 Uji t Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih Kelompok I dan

Kelompok II Sebelum Perlakuan 58

Lampiran 17 Uji t Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih Kelompok I dan

Kelompok II Sesudah Perlakuan 60

Lampiran 18 Uji t Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih Kelompok I Sebelum

xii

dan Sesudah Perlakuan 62

Lampiran 19 Uji t Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih Kelompok II Sebelum

dan Sesudah Perlakuan 64

Lampiran 20 Dokumentasi Penelitian 66

Lampiran 21 Surat Ijin Penelitian 69

Lampiran 22 Surat Tanda Selesai Penelitian 70

1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang Masalah

Aterosklerosis koroner merupakan penyebab utama terjadinya penyakit

jantung koroner (PJK) (Grundy, 2006). Salah satu faktor risiko utama

aterosklerosis adalah dislipidemia. Dislipidemia merupakan kelainan

metabolisme lipid yang ditandai dengan peningkatan maupun penurunan

fraksi lipid dalam plasma. Kelainan fraksi lipid yang paling utama adalah

kenaikan kadar kolesterol total, kolesterol LDL (Low Density Lipoprotein),

kenaikan kadar trigliserida serta penurunan kadar HDL (High Density

Lipoprotein). Dalam proses terjadinya aterosklerosis semuanya mempunyai

peran yang penting dan sangat berkaitan satu dengan yang lain. Upaya

mengubah gaya hidup (berhenti merokok, memelihara berat badan ideal,

membatasi asupan makanan yang mengandung kolesterol dan lemak jenuh)

akan menurunkan risiko PJK dan dapat menyebabkan perlambatan bahkan

regresi aterosklerosis (Anwar, 2004). Terapi nutrisi medis berperan penting

dalam penatalaksanaan dislipidemia. Pasien dengan kolesterol LDL atau

kolesterol total tinggi dianjurkan untuk mengurangi konsumsi asam lemak

jenuh (saturated fatty acid ; SFA) dan meningkatkan asupan asam lemak

tidak jenuh rantai tunggal (monounsaturated fatty acid ; MUFA) dan majemuk

(polyunsaturated fatty acid ; PUFA) (Adam, 2007).

2

Kandungan MUFA, terutama asam oleat, yang cukup tinggi bisa

didapatkan pada minyak zaitun (Masella et al. cit Parthasarathy et al., 2001).

Sementara kandungan PUFA, terutama asam linoleat, banyak terdapat pada

minyak jagung, kapas, kacang kedelai, wijen, biji jintan hitam, bunga matahari

(minyak biji-bijian), sedangkan asam linolenat banyak terdapat pada minyak

kacang kedelai, kecambah dan gandum (Almatsier, 2006; Kandil, 2005). Biji

jintan hitam atau Nigella sativa termasuk dalam famili Ranunculaceae dan

telah lama digunakan sebagai tanaman obat oleh masyarakat di kawasan

Timur Tengah dan sekitarnya serta Asia Selatan (Gilani et al., 2004). Kandil

(2005) meneliti tentang fraksi lipid dari biji jintan hitam yang ternyata

mengandung PUFA yang cukup tinggi (84%) terutama asam linoleat. PUFA

ini juga berpengaruh terhadap kadar kolesterol LDL melalui mekanisme yang

sama sebagaimana efek MUFA (Botham dan Mayes, 2003c). Diet MUFA dan

PUFA telah terbukti efektif dalam mengurangi kadar kolesterol total dan

kolesterol LDL (Degirolamo et al., 2008).

El Dakha Khani pada tahun 2000 meneliti tentang jintan hitam pada

tikus putih selama 4 minggu dan menunjukkan hasil penurunan yang

signifikan pada kadar kolesterol total, kolesterol LDL, dan trigliserida serta

peningkatan pada kadar kolesterol HDL. Penelitian tentang minyak jintan

hitam yang kaya akan PUFA dalam pengaruhnya terhadap penurunan kadar

kolesterol LDL telah banyak dilakukan, oleh karena itu peneliti mencoba

meneliti tentang pengaruh minyak jintan hitam dari segi pencegahan

peningkatan kadar kolesterol LDL.

3

B. Perumusan Masalah

Apakah minyak jintan hitam dapat mencegah terjadinya peningkatan

kadar kolesterol LDL tikus putih (Rattus norvegicus)?

C. Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh minyak jintan

hitam dalam mencegah peningkatan kadar kolesterol LDL tikus putih (Rattus

norvegicus).

D. Manfaat Penelitian

1. Manfaat teoritis

Untuk memperkaya pengetahuan di bidang biokimia dan berbagai

disiplin ilmu terkait penggunaan minyak jintan hitam untuk mencegah

peningkatan kadar kolesterol LDL.

2. Manfaat aplikatif

Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang

kemungkinan penggunaan minyak jintan hitam dalam diet sehari-hari sebagai

perlindungan terhadap peningkatan kadar kolesterol LDL.

4

BAB II

LANDASAN TEORI

A. Tinjauan Pustaka

1. Kolesterol LDL (Low Density Lipoprotein)

Lemak di dalam plasma diangkut sebagai lipoprotein. Terdapat 4

golongan lipoprotein yang penting dalam diagnosis klinis yang telah

diidentifikasi sampai saat ini yaitu kilomikron, very low density lipoproteins

(VLDL atau pre-β-lipoprotein), low density lipoprotein (LDL atau β-

lipoprotein), dan high density lipoprotein (HDL atau α-lipoprotein).

Lipoprotein terdiri dari inti nonpolar yang terdiri terutama dari triasilgliserol

dan ester kolesterol dan dikelilingi lapisan permukaan tunggal dari fosfolipid

amfipatik dan molekul kolesterol (Botham dan Mayes, 2003b). Penyusunan

molekul yang bersifat hidrofobik di bagian dalam dan molekul hidrofilik di

bagian luar memungkinkan lemak diangkut dalam darah (Almatsier, 2006).

Setengah bagian dari protein pada lipoprotein dikenal dengan nama

apoliporotein. Satu atau lebih apolipoprotein terdapat pada setiap

lipoprotein. Apolipoprotein utama pada LDL adalah apolipoprotein B (B-

100) yang juga terdapat pada VLDL. Hepar dan beberapa jaringan ekstra

hepatik mengekspresikan reseptor LDL (B-100, E). Reseptor ini didesain

spesifik untuk apo B-100 namun juga dapat menangkap lipoprotein yang

banyak mengandung apo E. Kira-kira 30% LDL didegradasi pada jaringan

ekstrahepatik dan 70% pada hepar (Botham dan Mayes, 2003b).

5

G

a

m

b

a

r

Gambar 1. Metabolisme kolesterol very low density lipoprotein (VLDL) dan produksi low density lipoprotein (LDL). (A, apolipoprotein A;B-100,apolipoprotein B-100; ©, apolipoprotein C;E, apolipoprotein E;HDL, high-density lipoprotein;TG, triacylglycerol;IDL, intermediate-density lipopotein;C, cholesterol dan cholesteryl ester;P, phospholipid)

(Botham dan Mayes, 2003b)

Jalur metabolisme lipoprotein dibagi menjadi 3 yaitu jalur

metabolisme eksogen, jalur metabolisme endogen, dan jalur reverse

cholesterol transport. Jalur metabolisme endogen inilah yang berhubungan

dengan kolesterol LDL. Trigliserid dan kolesterol yang disintesis di hati dan

disekresi ke dalam sirkulasi sebagai VLDL. Dalam sirkulasi, trigliserid

dalam VLDL akan terhidrolisis oleh enzim lipoprotein lipase (LPL), dan

VLDL berubah menjadi intermediate density lipoprotein (IDL) yang juga

akan mengalami hidrolisis dan berubah menjadi LDL. LDL adalah

lipoprotein yang paling banyak mengandung kolesterol. Sebagian dari

kolesterol LDL akan dibawa ke hati dan jaringan steroidogenik lainnya

seperti kelenjar adrenal, testis, dan ovarium. Sebagian lagi dari kolesterol

LDL akan mengalami oksidasi dan ditangkap oleh reseptor scavenger-A

(SR-A) di makrofag dan akan menjadi sel busa (foam cell). Makin banyak

6

kolesterol LDL dalam plasma makin banyak yang akan mengalami oksidasi

dan ditangkap oleh sel makrofag (Adam, 2007).

2. Polyunsaturated Fatty Acid (PUFA)

Asam lemak tak jenuh ganda (PUFA) merupakan asam lemak yang

mengandung dua atau lebih ikatan rangkap. Beberapa dari PUFA merupakan

asam lemak esensial yang tubuh tidak dapat mensintesisnya seperti asam

linoleat dan asam linolenat. Kedua jenis asam lemak ini dibutuhkan untuk

perumbuhan dan fungsi normal semua jaringan. Asam linoleat banyak

terdapat pada minyak jagung, kapas, kacang kedelai, wijen, biji jintan hitam,

bunga matahari (minyak biji-bijian), sedangkan asam linolenat banyak

terdapat pada minyak kacang kedelai, kecambah dan gandum (Almatsier,

2006; Kandil, 2005).

Gambar 2. Struktur asam linoleat dan asam linolenat (Botham dan Mayes, 2003c)

3. Minyak Jintan Hitam

Jintan hitam atau Nigella sativa tumbuh di berbagai belahan dunia,

termasuk Saudi, Afrika Utara dan sebagian Asia. Nigella sativa merupakan

bunga fennel dari keluarga Ranunculaceae. Biji-biji Nigella sativa

7

ukurannya kecil dan pendek (panjang antara 1-2mm), hitam, berbentuk

trigonal, memiliki rasa yang kuat dan pedas seperti lada. Jenis Bunga

Nigella sativa ada dua macam, satu berwarna ungu kebiru-biruan dan

lainnya putih. Pertumbuhan bunga terletak pada bagian cabang, sementara

itu daunnya saling tumbuh berseberangan secara berpasangan. Daun

dibagian bawah bentuknya kecil dan pendek, sedangkan daun bagian atas

lebih panjang (6 - 10 cm). Tinggi batang bunga tersebut bisa mencapai 12-

18 inchi. Nigella sativa adalah tumbuhan biseksual artinya dapat

mengembangbiakkan dirinya sendiri, membentuk sebuah kapsul buah yang

mengandung biji. Saat kapsul buah matang, ia akan membuka dan biji yang

ada didalamnya akan mengudara dan berubah menjadi hitam, sehingga

disebut biji hitam (black seed) (Awan, 2008).

Dalam taksonomi tumbuhan, jintan hitam diklasifikasikan sebagai

berikut:

1. Kingdom : Plantae

2. Divisio : Magnoliophyta

3. Kelas : Magnoliopsida

4. Ordo : Ranunculales

5. Famili : Ranunculaceae

6. Genus : Nigella

7. Spesies : Nigella sativa

(Awan, 2008)

8

Penelitian tentang fraksi lemak biji jintan hitam telah dilakukan oleh

Kandil (2005) yang menemukan adanya kandungan PUFA kira-kira sebesar

84% dari total fraksi asam lemak dan kandungan SFA (Saturated Fatty

Acid) kira-kira sebesar 16%. Berikut ini merupakan tabel komposisi fraksi

asam lemak tidak jenuh yang terkandung dalam minyak jintan hitam.

Tabel 1. Komposisi fraksi PUFA minyak jintan hitam Polyunsaturated Fatty Acid Fraction

% by weight in Abbreviated No. IUPAC Name Common fraction Structure

1. cis-9,12-octadecadienoic acid Linoleic acid 60.7-72.6 % C18:2 2. cis-9-octadecenoic acid Oleic acid 23.8-29.7 % C18:1 3. cis-11,14-eicosadienoic acid 1.2-3.1 % C20:2 4. cis-9,12,15-octadecatrienoic Linolenic acid 0.83-2.38 % C18:3 acid 5. cis-9-hexadecenoic acid Palmitoleic acid 0.36-1.2 % C16:1 6. cis-9-tetradecenoic acid Myristoleic acid 0.12-0.25 % C14:1

(Kandil, 2005)

4. Mekanisme Minyak Jintan Hitam dalam Mencegah Peningkatan

Kadar Kolesterol LDL

9

Gambar 3. Mekanisme PUFA dalam menurunkan kadar kolesterol LDL (Fernandez dan West, 2005)

PUFA menginduksi ekspresi reseptor X hepar (liver X receptor ;

LXR), yaitu reseptor yang terdapat pada hepar sebagai sensor terhadap

kadar sterol yang berfungsi membantu organisme mengatasi tingginya kadar

kolesterol (Fernandez dan West, cit Tobin et al., 2005). LXR ini nantinya

akan akan mengatur kadar kolesterol intraselular dengan menginduksi

ekspresi cholesterol 7α-hydroxylase (CYP7), enzim yang menginisiasi

konversi kolesterol menjadi asam empedu. Konversi kolesterol menjadi

asam empedu bersifat ireversibel dan merupakan proses akhir dari

katabolisme kolesterol. Dengan demikian jumlah kolesterol yang digunakan

untuk pembentukan VLDL akan berkurang dan akibatnya VLDL dan LDL

yang terbentuk juga akan berkurang. Selain itu PUFA juga memiliki

mekanisme peningkatan jumlah reseptor (up regulation) dari kolesterol LDL

dan mengurangi konversi VLDL menjadi LDL sehingga nantinya

peningkatan kadar kolesterol LDL dalam plasma dapat dicegah (Fernandez

dan West, 2005).

10

B. Kerangka Pemikiran

Keterangan:

: mekanisme kerja

: memacu peningkatan

: menghambat peningkatan

Makanan tinggi kolesterol akan meningkatkan kadar LDL plasma, sedangkan

PUFA melalui peningkatan jumlah reseptor LDL, penurunan konversi VLDL ke

LDL dan ekspresi LXR akan menghambat peningkatan kadar LDL plasma.

Minyak Jintan Hitam mengandung PUFA

2. PUFA akan menyebabkan penurunan konversi VLDL ke LDL

Kadar LDL plasma

Makanan tinggi kolesterol

Minyak Jintan Hitam Mengandung

PUFA

2. PUFA akan menyebabkan penurunan konversi VLDL ke LDL

1. PUFA meningkatkan jumlah

reseptor LDL

3. PUFA memacu peningkatan ekspresi

Liver X Receptor (LXR) yang akan

meningkatkan sekresi enzim cholesterol 7α-

hydroxylase sehinggga terjadi

peningkatan konversi kolesterol ke asam

empedu

Faktor Lain: 1. Stres

2. Mutasi reseptor LDL

Faktor Lain: 1. Gangguan sintesis kolesterol di hepar 2. Hormon tiroid 3. Kerusakan pankreas

11

C. Hipotesis

Minyak jintan hitam memiliki pengaruh dalam mencegah peningkatan

kadar kolesterol LDL tikus putih (Rattus norvegicus).

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Jenis Penelitian

12

Penelitian ini bersifat eksperimental laboratorik dengan pre and post

test controlled group design.

B. Lokasi Penelitian

Pemberian perlakuan dan pengukuran kadar kolesterol tikus putih akan

dilakukan di Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT)

Universitas Gadjah Mada Yogyakarta (UGM).

C. Subjek Penelitian

Tikus diperoleh dari LPPT UGM berupa Tikus Putih (Rattus

norvegicus) Jantan Strain Wistar sehat dan mempunyai aktivitas normal,

berumur kurang lebih 3 bulan dengan berat badan 180-200 gram.

D. Teknik Sampling

Pengambilan sampel dilakukan secara purposive sampling. Penentuan

besar sampel dilakukan dengan menggunakan rumus Federer (Maryanto dan

Fatimah, 2004). Rumus Federer :

Keterangan:

n= besar sampel tiap kelompok

t= banyaknya kelompok

(n-1) x (2-1) > 15

(n-1) x 1 > 15

n – 1 > 15

n > 16

(n-1) x (t-1) > 15

13

Dengan demikian, setiap kelompok terdapat minimal 17 ekor tikus

putih. Peneliti memilih untuk menggunakan 17 ekor tikus putih tiap

kelompok dengan jumlah kelompok sebanyak 2 kelompok sehingga

jumlah seluruh subjek penelitian sebanyak 34 ekor.

E. Identifikasi Variabel Penelitian

1. Variabel bebas : minyak jintan hitam

2. Variabel tergantung : kadar kolesterol LDL

3. Variabel luar :

a. Dapat dikendalikan : pakan yang diberikan selama perlakuan, faktor

hormonal, stres, umur, dan jenis kelamin

b. Tidak dapat dikendalikan : penyakit hepar, penyakit pankreas, mutasi

reseptor LDL

F. Definisi Operasional Variabel

1. Minyak Jintan Hitam

Minyak jintan hitam adalah minyak yang dihasilkan dari ekstraksi

biji jintan hitam (Nigella sativa) yang sudah dihancurkan kemudian diproses

dengan penguapan, pendinginan dan saponifikasi (Kandil,2005). Minyak

jintan hitam yang digunakan pada penelitian kali ini menggunakan merek Al

Ghuroba’ dan diperoleh dari toko obat-obatan herbal dengan kadar minyak

jintan hitam dalam larutan minyak tidak diketahui.

Pada penelitian kali ini minyak jintan hitam yang diberikan

menggunakan dosis tunggal sebesar 2 ml/kg berat badan atau setara dengan

0,4 ml/ 200 gram BB (Zaoui et al., 2002). Pemberian minyak jintan hitam

14

pada tikus putih dilakukan dengan dosis terbagi menggunakan sonde

lambung pada waktu 1 jam sebelum pemberian pakan hiperkolesterolemik

(Sara,2009) yaitu pada pukul 06.00 pagi dan 14.00 sore selama 4 minggu.

Penelitian ini menggunakan 2 kelompok yaitu kelompok I sebagai kelompok

kontrol dan kelompok II sebagai kelompok perlakuan minyak jintan hitam.

Skala pengukuran yang digunakan adalah skala nominal.

2. Kadar Kolesterol LDL

Variabel tergantung berupa kadar kolesterol LDL. Definisi kadar

kolesterol LDL dalam penelitian ini adalah kadar kolesterol LDL tikus putih

yang diukur setelah 12 jam puasa yang dihitung pada waktu sebelum perlakuan

dan sesudah perlakuan. Pengukuran kadar kolesterol LDL ini menggunakan

metode Direct Homogenous dengan reagen merk Roche Diagnostic. Variabel

ini mempunyai skala pengukuran rasio.

3. Variabel luar yang dapat dikendalikan

a. Pakan yang diberikan selama perlakuan

Pakan yang diberikan selama perlakuan adalah sama untuk setiap

kelompok berupa pakan hiperkolesterolemik dan pakan standar. Pakan

hiperkolesterolemik merupakan pakan yang mengandung kolesterol

dalam jumlah tertentu yang bertujuan untuk membuat keadaan

hiperkolesterolemia pada tikus putih pada penelitian ini tercapai.

15

Komposisi pakan hiperkolesterolemik yang digunakan pada penelitian ini

(Phyto Medica, 1993) :

1) Kuning telur itik 5 ml

2) Minyak babi 10 ml

3) Minyak kelapa 1 ml

4) Kristal kolesterol 0,1 gram

Pakan hiperkolesterolemik berupa minyak babi, minyak kelapa

dan kuning telur itik dapat diperoleh dari LPPT UGM Yogyakarta,

sedangkan kristal kolesterol diperoleh dari Laboratorium Biokimia

Fakultas Kedokteran UNS. Pemberian pakan hiperkolesterolemik force

fed dengan dosis 2,5 ml / 200 gram BB dilakukan pada pukul 07.00 dan

pukul 15.00 selama 4 minggu untuk semua subjek penelitian.

b. Faktor hormonal

Salah satu hormon yang berpengaruh dalam penelitian ini adalah

hormon tiroid. Tikus putih normal bersifat hipertiroid (Mokhtar cit Martin

et al., 2008). Hormon tiroid adalah hormon yang mengatur metabolisme

karbohidrat, protein, dan lemak (Guyton, 1997). Hormon tiroid, terutama

triiodotironin (T3) dapat meningkatkan jumlah reseptor kolesterol LDL di

hepar, dengan demikian, hormon ini dapat menurunkan kadar kolesterol

dalam darah (Ganong, 2003). Keadaan tikus putih yang hipertiroid dapat

diatasi dengan pemberian larutan propiltiourasil (PTU) 0,1 % ad libitum

agar menjadi eutiroid (Mokhtar, 2008). Pemberian PTU ini

mempengaruhi sintesis hormon tiroid terutama T3 , sehingga pengaruh

16

penurunan kolesterol LDL yang terjadi bukan disebabkan oleh aktifitas

tiroid, melainkan disebabkan oleh minyak jintan hitam.

c. Stres

Stres pada penelitian ini dapat disebabkan karena gangguan adaptasi

tikus putih terhadap kondisi lingkungan di tempat penelitian. Stres dapat

meningkatkan kadar kolesterol LDL plasma. Keadaan tersebut

merangsang pelepasan epinefrin. Epinefrin akan merangsang insulin.

Insulin yang dikeluarkan akan merangsang pengeluaran enzim lipoprotein

lipase yang akan meningkatkan kolesterol remnant, kolesterol remnant

ini akan dibawa ke hati dan menghasilkan VLDL yang secara cepat

dikonversi menjadi LDL (Botham dan Mayes, 2003a). Peneliti

mengendalikan faktor stres dengan mengisi setiap kandang 1 ekor tikus

putih dan menjaga suhu kandang tetap 25-27oC (Mokhtar, 2008).

d. Umur

Umur tikus putih berpengaruh pada penelitian ini. Kolesterol tikus

putih meningkat pada umur 4 minggu dan menurun dalam beberapa

minggu. Kadar kolesterol lebih stabil pada usia 11-16 minggu (Uchida,

2008), setelah itu kadarnya meningkat terutama setelah berumur 63

minggu. Peneliti memilih umur tikus putih berusia 3 bulan (12 minggu)

karena pada usia tersebut kadar kolesterol lebih stabil sehingga

memudahkan pemantauan terhadap kadar kolesterol LDL akibat

pemberian pakan hiperkolesterolemik (Saap, 2007). Variabel ini

mempunyai skala interval.

17

e. Jenis kelamin

Jenis kelamin sangat berpengaruh pada penelitian ini yang juga

berkaitan terhadap faktor hormonal. Tikus putih jantan memiliki lebih

sedikit hormon estrogen dibandingkan dengan betina. Hormon estrogen

dapat meningkatkan katabolisme kolesterol LDL sehingga dikhawatirkan

akan menurunkan kadar kolesterol LDL di plasma (Ganong, 2003). Oleh

karena itu peneliti memilih menggunakan tikus putih jantan, strain

Wistar, usia 3 bulan dengan berat badan 180-200 gr sebagai subjek

penelitian. Variabel ini mempunyai skala nominal.

4. Variabel luar yang tidak dapat dikendalikan

a. Penyakit hepar

Kerusakan sel hepar tikus putih merupakan salah satu faktor yang

tidak dapat dikendalikan oleh peneliti karena pendeteksian dini yang sulit

dan biaya pemeriksaan yang mahal (Saap, 2007). Kerusakan sel hepar

akan mengakibatkan defisiensi Microsomal Triacylglycerol Transfer

Protein (MTTP) yang dapat mengurangi sintesis VLDL. Sintesis VLDL

yang berkurang akhirnya membuat kadar LDL juga berkurang. Dengan

demikian, kerusakan sel hepar yang berfungsi mensintesis VLDL dapat

menurunkan kadar kolesterol LDL. Namun, jika kerusakan sel hepar

mengenai bagian reseptor LDL maka kadar kolesterol LDL justru akan

meningkat (Botham dan Mayes, 2003b).

b. Penyakit pankreas

Penyakit pankreas yang dimaksud dalam penelitian ini adalah

18

kerusakan yang terjadi pada sel beta pulau Langerhans pankreas yang

berfungsi memproduksi insulin dan pada penelitian ini merupakan salah

satu faktor yang juga tidak dapat dikendalikan karena kesulitan deteksi

dini dan biaya pemeriksaan yang mahal (Saap, 2007). Kerusakan ini

dapat menyebabkan penurunan produksi insulin. Penurunan produksi

insulin dapat mengakibatkan defisiensi lipoprotein lipase sehingga

menghambat pembentukan kolesterol remnant VLDL. Penghambatan

pembentukan kolesterol remnant VLDL dapat menurunkan kolesterol

LDL (Mokhtar cit Kamaluddin, 2008).

c. Mutasi reseptor LDL

Mutasi reseptor LDL adalah mutasi yang terjadi pada reseptor

LDL di permukaan sel yang menyebabkan berkurangnya jumlah reseptor

LDL pada membran sel dan fungsinya untuk menangkap molekul LDL.

Pemeriksaan adanya mutasi pada reseptor kolesterol LDL pada tikus

putih membutuhkan biaya yang mahal sehingga variabel ini termasuk

variabel yang tidak bisa dikendalikan oleh peneliti (Halim, 2006).

19

G. Alur Penelitian

H. Alat, Bahan dan Cara Kerja

1. Alat yang digunakan :

a. Kandang beserta kelengkapan pemberian makan

b. Sonde lambung

c. Tabung mikro kapiler

d. Spuit needle feeding

Tikus Putih 34

ekor

Analisa data dengan uji statistik

Pengukuran kadar kolesterol LDL sebelum perlakuan (pre test)

Kelompok II (Perlakuan)

(n=17)

Pengukuran kadar kolesterol LDL setelah perlakuan (post test)

Kelompok I Perlakuan kontrol

diberikan PTU 0,1 % ad libitum dan pakan hiperkolesterolemik 2,5 ml/ 200 gram BB force fed pada pukul

07.00 dan 15.00 selama 4 minggu

Kelompok I (Kontrol)

(n=17)

Diadaptasikan selama 7 hari dan diberi pakan standar serta larutan PTU 0,1 % ad libitum

Kelompok II Pemberian PTU 0,1

% ad libitum dan pakan

hiperkolesterolemik 2,5 ml / 200 gram BB force fed pada pukul 07.00 dan 15.00 serta minyak jintan hitam

sebanyak 0,4 ml / 200 gram BB pada pukul

06.00 dan 14.00 selama 4 minggu

Uji normalitas untuk menentukan jenis uji statistik yang sesuai

20

e. Timbangan Sartorius

f. Gelas ukur

g. Alat dan tabung sentrifugasi

h. Rak tabung reaksi

i. Pengaduk

j. Pipet berskala

k. Termometer

l. Spektrofotometer

2. Bahan-bahan yang digunakan :

a. Minyak jintan hitam

b. Akuades

c. Larutan propiltiourasil 0,1 %

d. Pakan standar pellet 21

e. Pakan hiperkolesterolemik (campuran pakan standar, kuning telur itik,

kristal kolesterol, minyak babi, dan minyak kelapa)

f. Reagen pemeriksaan kolesterol LDL (Roche Diagnostic cat.no.

1489232)

3. Cara Kerja

a. Langkah I : Penentuan besar sampel dan adaptasi

Sebanyak 34 ekor tikus putih jantan dibagi menjadi 2

kelompok (berdasarkan Rumus Federer) dan diadaptasikan selama 1

minggu di laboratorium dan diberi pakan standar dan PTU 0,1 % yang

dicampur dengan akuades ad libitum

21

b. Langkah II : Pengukuran kadar kolesterol LDL pretest

Perhitungan kadar kolesterol LDL tikus putih setelah

dipuasakan 12 jam setelah 1 minggu adaptasi. Pengambilan darah

dilakukan melalui vena orbitalis mata dengan tabung mikrokapiler

sebanyak 1 ml setiap ekor, kemudian sampel tersebut dikirim ke LPPT

UGM Yogyakarta untuk mengukur kadar kolesterol LDL untuk

mendapatkan hasil pengukuran kolesterol LDL sebelum perlakuan (pre

test).

c. Langkah III :

1) Kelompok I : Pemberian larutan PTU 0,1 % ad libitum dan pakan

hiperkolesterolemik sebanyak 2,5 ml/ 200 gram BB force fed pada

pagi hari (pukul 07.00) dan sore hari (pukul 15.00) selama 4 minggu.

2) Kelompok II : Pemberian larutan PTU 0,1 % ad libitum dan

pemberian minyak jintan hitam 0,4 ml/ 200 gram BB dengan dosis

terbagi, pada pagi hari sebanyak 0,2 ml/ 200 gram BB (pukul 06.00)

dan sore hari sebanyak 0,2 ml/ 200 gram BB (pukul 14.00) (Sara,

2009) serta pakan hiperkolesterolemik sebanyak 2,5 ml/ 200 gram BB

force fed pada pagi hari (pukul 07.00) dan sore hari (pukul 15.00)

selama 4 minggu (penimbangan dan analisis rerata berat badan tikus

putih juga dilakukan tiap minggu untuk mengetahui perlunya

penyesuaian dosis).

d. Langkah IV : Pengukuran kadar kolesterol LDL setelah mempuasakan

selama 12 jam seluruh subjek dan mendapat hasil kolesterol LDL

22

setelah 4 minggu perlakuan (post test).

e. Langkah V : Analisis hasil pengukuran kolesterol LDL pre test dan

post test secara statistik.

I. Teknik Analisis Statistik

Data berat badan dan kadar kolesterol LDL dari semua subjek penelitian

dianalisis secara statistik dengan uji normalitas data Shapiro Wilk Test

menggunakan program SPSS Window 13.0 yang bertujuan untuk menentukan

uji statistik yang sesuai dengan keadaan distribusi data yang diperoleh peneliti.

Jika distribusi data sesuai dengan kurva Gaussian (kurva normal) maka uji

statistik yang digunakan adalah uji statistik parametrik. Uji statistik parametrik

yang digunakan pada penelitian ini yaitu paired sample t-test untuk

membandingkan kadar kolesterol LDL pretest dan post test, serta independent

t-test untuk menguji perbedaan rata-rata kadar kolesterol LDL dari kedua

kelompok sampel (α = 0.05) (Budi, 2006). Namun jika distribusi data tidak

sesuai dengan kurva Gaussian, maka uji statistik yang digunakan peneliti

adalah uji statistik non-parametrik yaitu uji Wilcoxon (Mokhtar, 2008).

BAB IV

HASIL PENELITIAN

Pada penelitian ini digunakan tikus putih (Rattus norvegicus) jantan

sebanyak 34 ekor dari strain Wistar, berumur kurang lebih 3 bulan dengan berat

badan 180-200 gram dibagi menjadi 2 kelompok. Kelompok I merupakan

23

kelompok kontrol dan kelompok II merupakan kelompok perlakuan, masing-

masing kelompok terdiri dari 17 ekor tikus putih. Kedua kelompok diadaptasikan

dalam lingkungan tempat penelitian selama satu minggu. Setiap kelompok

ditempatkan di kandang yang berbeda yang mempunyai faktor lingkungan (suhu

dan kelembapan) yang sama agar faktor-faktor luar yang menganggu penelitian

dapat dikendalikan seminimal mungkin.

Semua tikus putih ditimbang terlebih dahulu sebelum perlakuan untuk

mengetahui rerata berat badan tikus putih. Hasil penimbangan berat badan tikus

putih diuji normalitasnya dengan Shapiro Wilk Test (lampiran 13) serta Q-Q Plot

(gambar 4).

Gambar 4. Distribusi Data Berat Badan Tikus Putih pada K I (kiri) dan K II (kanan)

Dari uji normalitas Shapiro Wilk Test, didapatkan nilai p: 0,918 (p>0,05)

pada kelompok I (kontrol) dan p: 0,703 (p>0,05) pada kelompok II (perlakuan).

Hal ini menunjukkan bahwa data berat badan tikus putih kedua kelompok dengan

kurva Gaussian (kurva normal) tidak berbeda secara signifikan (lampiran 13).

Karena data berat badan tikus putih kedua kelompok berdistribusi normal, maka

24

dapat dilanjutkan dengan uji t independen untuk mencari rerata berat badan tikus

putih tiap kelompok.

Tabel 2. Rerata Berat Badan Tikus Putih sebelum Perlakuan Kelompok Rerata berat badan sebelum perlakuan

(gram)* p

I (n=17) 196,56 ± 14,9 II (n=17) 189,41 ± 16,7

0,519

*rerata ± simpangan baku

Dari hasil uji t indpenden didapatkan nilai p : 0.519 (p>0,05). Hal tersebut

menunjukkan bahwa berat badan tikus putih antara kelompok I dan II tidak

berbeda secara signifikan (lampiran 14).

Setelah berat badan tikus putih ditimbang, semua subjek penelitian

diberikan pakan standar serta larutan PTU 0,1 % ad libitum selama 1 minggu

untuk masa adaptasi. Setelah 1 minggu, semua subjek penelitian dipuasakan

selama 12 jam kemudian kadar kolesterol LDL diperiksa untuk mendapatkan data

kadar kolesterol LDL sebelum perlakuan. Sampel darah tikus putih diambil

dengan tabung mikrokapiler sebanyak 1 ml melalui vena orbitalis. Pemeriksaan

kadar kolesterol LDL sebelum perlakuan sangat penting agar keseragaman kadar

kolesterol LDL tikus putih dari kedua kelompok dapat diketahui.

Uji normalitas terlebih dahulu dilakukan terhadap data kolesterol LDL

pretest yang diperoleh dari kedua kelompok dengan Shapiro Wilk Test (lampiran

13) dan Q-Q Plot (Gambar 5). Dari uji normalitas dengan Shapiro Wilk Test

didapatkan nilai p: 0,517 (p>0,05) pada kelompok I (kontrol) dan p: 0,983

(p>0,05) pada kelompok II (perlakuan). Hal ini menunjukkan bahwa data kadar

25

kolesterol LDL tikus putih pretest kedua kelompok dengan kurva Gaussian (kurva

normal) tidak berbeda secara signifikan (lampiran 13). Karena distribusi data

normal maka dapat dilanjutkan dengan uji t independen untuk mencari rerata

kadar kolesterol LDL tikus putih pretest tiap kelompok.

Gambar 5. Distribusi Data Kolesterol LDL Pretest pada K I (kiri) dan K II (kanan).

Rerata kadar kolesterol LDL kedua kelompok sebelum perlakuan dapat

dilihat pada tabel 3.

Tabel 3. Rerata Kadar Kolesterol LDL Kedua Kelompok Tikus Putih sebelum Perlakuan

Kelompok Rerata Kadar Kolesterol LDL sebelum p Perlakuan (mg/ dL)* I (n=17) 91,79 ± 16,9 II (n=17) 86,42 ± 11,9

0,138

*rerata ± simpangan baku

26

Dari hasil uji t independen didapatkan nilai p: 0,138 (p > 0,05). Hal

tersebut menunjukkan bahwa kadar kolesterol LDL tikus putih antara kelompok I

dan II sebelum perlakuan tidak berbeda secara signifikan (lampiran 15).

Kemudian kelompok I diberikan larutan PTU 0,1 % ad libitum dan pakan

hiperkolesterolemik sebanyak 2,5 ml/ 200 gram BB force fed pada pagi hari

(pukul 07.00) dan sore hari (pukul 15.00) selama 4 minggu. Sedangkan pada

kelompok II disamping mendapatkan perlakuan yang sama seperti kelompok I

juga diberikan minyak jintan hitam 0,4 ml/ 200 gram BB dengan dosis terbagi,

pada pagi hari sebanyak 0,2 ml/ 200 gram BB (pukul 06.00) dan sore hari

sebanyak 0,2 ml/ 200 gram BB (pukul 14.00). Perlakuan tersebut dilakukan

selama 4 minggu. Kemudian kadar kolesterol LDL diperiksa untuk mendapatkan

kadar kolesterol LDL setelah perlakuan (posttest).

Uji normalitas terlebih dahulu dilakukan terhadap kadar kolesterol LDL

posttest yang diperoleh dari kedua kelompok dengan Shapiro Wilk Test (lampiran

13) dan Q-Q Plot (Gambar 6). Dari uji normalitas Shapiro Wilk Test didapatkan

nilai p: 0,051 (p>0,05) pada kelompok I (kontrol) dan p: 0,116 (p>0,05) pada

kelompok II (perlakuan). Hal ini menunjukkan bahwa data kadar kolesterol LDL

tikus putih posttest kedua kelompok dengan kurva Gaussian (kurva normal) tidak

berbeda secara signifikan (lampiran 13). Karena distribusi data normal maka

dapat dilanjutkan dengan uji t independen untuk mencari rerata kadar kolesterol

LDL tikus putih posttest tiap kelompok.

27

Gambar 6. Distribusi Data Kolesterol LDL Posttest pada K I (kiri) dan K II (kanan).

Rerata kadar kolesterol LDL kedua kelompok setelah perlakuan dapat dilihat pada tabel 4.

Tabel 4. Rerata Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih setelah Perlakuan

Kelompok Rerata Kadar Kolesterol LDL setelah p Perlakuan (mg/dL)*

I (n=17) 105,91 ± 39,8 II (n=17) 117,63 ± 29,1

0,207 *rerata ± simpangan baku

Setelah didapatkan rerata kadar kolesterol LDL tikus putih sebelum dan

setelah perlakuan pada kedua kelompok, dapat dibandingkan rerata kadar

kolesterol LDL sebelum dan sesudah perlakuan pada masing-masing kelompok.

Uji t berpasangan dilakukan terhadap kelompok I (kontrol) terlebih dahulu (tabel

5).

Tabel 5. Rerata Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih sebelum dan setelah Perlakuan pada Kelompok I (Kontrol)

Rerata Kadar Kolesterol LDL (mg/dL)* Kelompok I

Sebelum Perlakuan Setelah Perlakuan p

28

n= 17 91,79 ± 16,9 105,91 ± 39,8 0,218 *rerata ± simpangan baku

Dari hasil uji t berpasangan didapatkan nilai p: 0,218 (p > 0,05) pada

kelompok I (kontrol) sehingga dapat disimpulkan bahwa rerata kadar kolesterol

LDL kelompok I (kontrol) sebelum dan setelah perlakuan tidak berbeda secara

signifikan (lampiran 17).

Kemudian dilakukan uji t berpasangan terhadap kelompok II (perlakuan)

(tabel 6).

Tabel 6. Rerata Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih sebelum dan setelah Perlakuan pada Kelompok II (Perlakuan)

Rerata Kadar Kolesterol LDL (mg/dL)* Kelompok II Sebelum Perlakuan Setelah Perlakuan p n = 17 86,42 ± 11,9 117,63 ± 29,1

0,000 *rerata ± simpangan baku

Dari uji t berpasangan didapatkan nilai p: 0,000 (p < 0,05) pada kelompok

II (perlakuan) sehingga dapat disimpulkan bahwa rerata kadar kolesterol LDL

kelompok II (perlakuan) sebelum dan setelah perlakuan berbeda secara signifikan

(lampiran 18).

Dari uraian di atas dapat diketahui bahwa pada kelompok I sebenarnya

terjadi peningkatan rerata kadar kolesterol LDL dari sebelumnya yaitu 91,79 ±

16,9 mg/dL menjadi 105,91 ± 39,8 mg/dL setelah 4 minggu, namun peningkatan

ini secara statistik tidak signifikan (lampiran 17). Sedangkan pada kelompok II

29

juga terjadi peningkatan rerata kadar kolesterol LDL dari sebelumnya yaitu 86,42

± 11,9 mg/dL menjadi 117,63 ± 29,1 mg/dL. Peningkatan rerata kadar kolesterol

LDL pada kelompok II ini secara statistik signifikan (lampiran 18) sehingga dapat

disimpulkan bahwa pemberian minyak jintan hitam tidak dapat mencegah

peningkatan kadar kolesterol LDL tikus putih.

Gambar 7. Rerata Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih sebelum dan setelah Perlakuan

BAB V

PEMBAHASAN

Dari hasil pengukuran pada kelompok I sebelum perlakuan (pretest),

didapatkan kadar kolesterol LDL tikus putih sebesar 91,79 ± 16,9 mg/dL

sedangkan setelah perlakuan (posttest) sebesar 105,91 ± 39,8 mg/dL. Setelah

kedua data tersebut dianalisis dengan uji t berpasangan, diketahui bahwa kadar

0

20

40

60

80

100

120

140

I II

Kada

r Kol

este

rol L

DL

(mg/

dL)

Kelompok

Rerata Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih

Sebelum Perlakuan

Setelah Perlakuan

30

kolesterol LDL pretest dan posttest pada kelompok I tidak berbeda secara

signifikan dengan nilai p: 0,218 (p>0,05). Tidak terjadinya peningkatan kadar

kolesterol LDL secara signifikan pada kelompok I dapat disebabkan oleh adanya

polimorfisme gen promoter CYP7A1.

Gen promoter CYP7A1 berperan dalam ekspresi enzim cholesterol 7α-

hydroxylase, yaitu enzim yang menginisiasi konversi kolesterol menjadi asam

empedu (Fernandez dan West, 2005). Polimorfisme gen promoter CYP7A1 dapat

mempengaruhi peningkatan enzim cholesterol 7-α-hidroksilase. Enzim tersebut

berpengaruh dalam sintesis asam empedu yang sensitif terhadap peningkatan

kadar kolesterol LDL. Variasi dimer basa nitrogen yang terjadi pada gen promoter

CYP7A1 sangat penting terhadap pengaruh kadar kolesterol LDL saat pemberian

pakan hiperkolesterolemik (Hofman, 2005).

Tikus putih yang mempunyai dimer CC di gen promoter CYP7A1

mempunyai sensitivitas yang tinggi terhadap peningkatan kadar kolesterol LDL

yang diwujudkan dengan peningkatan sintesis enzim 7-α-hidroksilase. Enzim

tersebut meningkatkan produksi asam empedu dari kolesterol LDL yang

mengakibatkan peningkatan jumlah reseptor kolesterol LDL di hepar sehingga

kadar kolesterol LDL plasma menurun (Hofman, 2005). Untuk membuktikan

adanya polimorfisme ini diperlukan pemeriksaan lebih lanjut.

Pada kelompok II terjadi hal yang berbeda dengan kelompok I. Pada

kelompok ini hasil pengukuran kadar kolesterol LDL pretest sebesar 86,42 ± 11,9

mg/dL dan posttest sebesar 117,63 ± 29,1 mg/dL. Dari hasil uji t berpasangan

diketahui bahwa terdapat perbedaan signifikan antara kadar kolesterol LDL

31

pretest dan posttest pada kelompok II dengan nilai p: 0,000 (p<0,05). Hal ini tidak

sesuai dengan hasil penelitian El Dakha et al. (2000) di Mesir dimana setelah 4

minggu terjadi penurunan kadar kolesterol LDL tikus putih secara signifikan

dengan menggunakan jintan hitam sebanyak 800 gram/kg berat badan. Terjadinya

peningkatan kadar kolesterol LDL secara signifikan pada kelompok II

kemungkinan disebabkan oleh beberapa hal. Antara lain:

A. Minyak jintan hitam yang kadar dan kemurniannya tidak diketahui

Minyak jintan hitam yang digunakan pada penelitian ini merupakan

produk beli jadi dan kadar kemurniannya juga tidak diketahui secara pasti.

Komposisi asam lemak jenuh dan tak jenuh juga tidak dapat diketahui dengan

pasti apakah sama seperti pada hasil ekstraksi biji jintan hitam yang dilakukan

oleh Kandil (2005). Oleh karena itu tidak menutup kemungkinan adanya kadar

asam lemak jenuh yang cukup tinggi pada minyak jintan hitam yang digunakan

pada penelitian ini serta jika dikombinasikan dengan pakan

hiperkolesterolemik akan menyebabkan peningkatan kadar kolesterol LDL

secara signifikan.

B. Efek pakan hiperkolesterolemik

Pemberian pakan hiperkolesterolemik dapat meningkatkan aktivitas

Acyl CoA Transferase (ACAT) secara signifikan (Asahina et al, 2008; Salter et

al, 1991). ACAT berfungsi mengubah kolesterol bebas di retikulum

endoplasma menjadi ester kolesterol. Peningkatan aktivitas ACAT berdasarkan

penelitian Dolphin (2008) akan menyebabkan peningkatan sintesis ester

kolesterol LDL di sisterna golgi, vesikel hepar serta plasma.

32

C. Mutasi reseptor kolesterol LDL

Mutasi reseptor kolesterol LDL sangat berpengaruh terhadap kadar

kolesterol LDL. Mutasi tersebut dapat meningkatkan kadar kolesterol LDL

(Halim, 2006). Menurut Halim (2006) terdapat 5 macam mutasi reseptor

kolesterol LDL:

1. Mutasi Null (R0) menyebabkan sintesis protein reseptor kolesterol LDL di

retikulum endoplasmik berkurang atau tidak terbentuk

2. Mutasi yang menyebabkan kelainan transpor intraseluler dan kelainan

kolesterol LDL di apparatus golgi

3. Mutasi yang menyebabkan kelainan ligan ekstraseluler dan kelainan

pengikatan kolesterol LDL

4. Mutasi (R+) menyebabkan kelainan endositosis

5. Mutasi yang menyebabkan kegagalan pelepasan kolesterol LDL dari

lisosom (kelainan mutasi resiklus).

Dari kelima jenis mutasi tersebut memang sulit dibuktikan berapa

jumlah tikus putih di kelompok II yang mengalami mutasi karena biaya

pemeriksaan yang mahal. Selain itu juga tidak menutup kemungkinan adanya

mutasi reseptor LDL pada kelompok I.

Dari ketiga kemungkinan di atas, minyak jintan hitam yang kadar dan

kemurniannya tidak diketahui merupakan salah satu alasan yang paling kuat

karena bisa saja minyak jintan hitam yang digunakan mengandung asam lemak

jenuh yang cukup tinggi dan jika dikombinasikan dengan pakan

hiperkolesterolemik akan meningkatkan kadar kolesterol LDL secara signifikan.

33

Selain itu, satu-satunya perlakuan yang berbeda antara kelompok I dan II adalah

pemberian minyak jintan hitam, maka kemungkinan pemberian minyak jintan

hitam pada kelompok II inilah yang dapat menyebabkan peningkatan kadar

kolesterol LDL.

BAB VI

SIMPULAN DAN SARAN

A. Simpulan

Pemberian oral minyak jintan hitam sebanyak 0,4 ml/200 gram BB/hari

selama 4 minggu tidak terbukti dapat mencegah peningkatan kadar kolesterol

LDL tikus putih (Rattus norvegicus).

B. Saran

34

1. Untuk penelitian mendatang perlu digunakan minyak jintan murni, bukan

produk kemasan yang kandungan minyak jintan hitamnya tidak diketahui.

2. Dilakukan penelitian dengan menggunakan hewan coba yang mempunyai

kondisi kadar hormon tiroid yang normal (eutiroid) agar peningkatan

kadar kolesterol LDL akibat pemberian pakan hiperkolesterolemik dapat

terlihat secara nyata.

3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui dosis konsumsi

minyak jintan hitam yang aman bagi manusia dan tidak menimbulkan efek

samping.

KELEMAHAN PENELITIAN

Kelemahan penelitian ini adalah menggunakan minyak jintan hitam yang

tidak diketahui kandungan serta kadar kemurniannya dengan jelas. Hal ini

menyebabkan komposisi asam lemak jenuh dan tak jenuh juga tidak dapat

diketahui dengan pasti apakah sama seperti pada hasil ekstraksi biji jintan hitam

yang dilakukan oleh Kandil (2005). Oleh karena itu tidak menutup kemungkinan

adanya kadar asam lemak jenuh yang cukup tinggi pada minyak jintan hitam yang

digunakan pada penelitian ini serta jika dikombinasikan dengan pakan

35

hiperkolesterolemik akan menyebabkan peningkatan kadar kolesterol LDL secara

signifikan.

DAFTAR PUSTAKA

Adam J.M.F. 2007. Dislipidemia. In : Sudoyo A.W., Setiyohadi B., Alwi I., Simadibrata M., Setiati S. (eds). Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam. Jakarta : Pusat Penerbitan Ilmu Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Indonesia, pp: 1927-30

Almatsier S. 2006. Prinsip Dasar Ilmu Gizi. Jakarta : Gramedia Pustaka Utama, pp: 52-69

Asahina M., Sato M., and Imaizumi K. 2008. Genetic analysis of diet-induced hypercholesterolemia in exogenously hypercholesterolemic rats. J Nutr

Anwar T.B. 2004. Dislipidemia sebagai faktor resiko penyakit jantung koroner. e-USU Repository, p: 2

36

Awan. 2008. Nigella Sativa (Habbatussauda atau Jintan Hitam). http://www.healindonesia.wordpress.com (4 Maret 2009).

Botham M.K. and Mayes P.A. 2003a. Cholesterol Synthesis, Transport, and Excretion. In : Murray R.K., Granner D.K., Mayes P.A., Rodwell V.W. Harper,s Illustrated Biochemistry. 26th ed. New York : McGraw-Hill, p: 219-27

Botham M.K. and Mayes P.A. 2003b. Lipid Transport and Storage. In : Murray R.K., Granner D.K., Mayes P.A., Rodwell V.W. Harper,s Illustrated Biochemistry. 26th ed. New York : McGraw-Hill, pp: 205-10

Botham M.K. and Mayes P.A. 2003c. Metabolism of Unsaturated Fatty Acids and Eicosanoids. In : Murray R.K., Granner D.K., Mayes P.A., Rodwell V.W. Harper,s Illustrated Biochemistry. 26th ed. New York : McGraw-Hill, p: 190

Budi T.P. 2006. SPSS 13.0 Terapan Riset Statistik Parametrik. Yogyakarta : Penerbit Andi, p: 177-89

Degirolamo C., Shelness G.S., Rudel L.L. 2008. LDL cholesteryl oleate as a predictor for atherosclerosis: evidence from human and animal studies on dietary fat. J Lipid Res.

Dolphin P.J. 2008. Serum and hepatic nascent lipoproteins in normaland hypercholesterolemic rats. J Lipid Res.

El Dakha Khani M., Mady N.L and Halim M.A. 2000. Nigella sativa L. oil protects against induced hepatotoxicity and improves serum lipid profile in rats. Arzneimittelforschung. 50(9): 832-6

Fernandez M.L. and West K.L. 2005. Mechanisms by which dietary fatty acids modulate plasma lipids. J Nutr. 135: 2075-8

Ganong W.F. 2003. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. 20th ed. Editor Bahasa Indonesia: Wijayakusumah D. Jakarta : EGC, pp: 293-6

Gilani A.H., Jabeen Q., Khan M.A.U. 2004. A review of medicinal uses and pharmalogical activities of Nigella sativa. Pak J Biol Sci. 7: 441

Grundy M.S. 2006. Nutrition in the Management of Disorders of Serum Lipid and Lipoproteins. In : Shils M.E., Shike M., Ross A.C., Cousins R.J. (eds). Modern Nutrition in Health and Disease. 10th ed. Philadelphia : Lippincott William and Wilkins, p: 1077

Gunawan S.G., Setiabudy R., Nafrialdi, Elysabeth (eds). 2007. Farmakologi dan Terapi. Edisi 5. Jakarta : Gaya Baru, p: 441

37

Guyton A.C., Hall J.E. 1997. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. 9th ed. Editor Bahasa Indonesia: Setiawan I. Jakarta : EGC, p:1077

Halim H. 2006. Mutasi reseptor LDL penyebab hiperkolesterolemia familier. Majalah Kedokteran Damianus. 5:171-6

Hofman. 2005. Genetic variations in bile metabolism. Implications for lipoproteins homeostasis. p:15

Kandil O. 2005. Lipid fraction of Nigella sativa L. seeds. United States Patent Application Publication, p: 1-2

Maryanto dan Fatimah. 2004. Pengaruh pemberian jambu biji (Psidium guajava L) pada lipidemia serum tikus (Sprague Dawley) hiperkolesterolemia. Media Medika Indonesia. 39: 105-111

Masella R., Giovannini C., Vari R., Di Bendetto R., Coni E., Volpe R., Fraone N., Bucci A. 2001. Effect of dietary virgin olive oil phenols on LDL oxidation in hyperlipidemic patients. Lipids. 36 : 1195

Mokhtar M.U.A. 2008. Pengaruh Pemberian Jus Tomat (Lycopersicum esculentum Mill.) Terhadap Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih (Rattus norvegicus). Skripsi FK UNS: Surakarta

Ngatidjan. 1991. Petunjuk Laboratorium Metode Laboratorium dalam Toksikologi. Bandung: ITB, p: 152

Phyto Medica. 1993. Anti Hiperlipidemia, Penapisan Farmakologi, Pengujian Fitofarmaka dan Pengujian Klinik. Jakarta, p:38-45

Saap E.M,. 2007. Perbedaan Penurunan Kadar LDL Kolesterol tikus putih (Rattus norvegicus) Pada Pemberian Bawang Putih (Allium sativum Linn.) Mentah dan Dimasak. Skripsi FK UNS: Surakarta

Salter A.M., Hayash R., Al-Senni M. and Brown N.F. 1991. Effects of hypothyroidism and high fat feeding on mRNA concentrations for the low density lipoproteins receptor and on acyl-coA : cholesterol acyltransferase activities in rat liver. Biochem J. 276:825-32

Sara. 2009. Re: Side Effects of Black Seed Oil. http://www.curezone.com (21 Mei 2009)

Smith J.B and Mangkoewidjojo S. 1988. Pemeliharaan, Pembiakan dan Penggunaan Hewan Percobaan di Daerah Tropis. Jakarta: UI, p: 37-57

Soehardjono D. 1993. Percobaan Hewan Laboratorium. Yogyakarta: Gadjah Mada University Press, p:207

38

Uchida K., Nomura Y., Kodowaki., Takase H., Takano K., Takeuchi N. 2008. Age-Related changes in cholesterol and bile acid metabolism in rats. The J Lipid Res.

USDA. 2010. Nutrient Data Laboratory. http://www.nal.usda.gov (6 Juni 2010) Zaoui A., Cherrah Y., Mahassini N., Alaoui K.,Hassar M. 2002. Acute and

chronic toxicity of Nigella sativa fixed oil. Phytomedicine. 9 :69-74

41

LAMPIRAN 1 Konversi Perhitungan Dosis untuk Berbagai Jenis Hewan dan Manusia Menci

t 20 g

Tikus

200 g

Marmut

400 g

Kelinci

2 kg

Kucing

2 kg

Kera

4 kg

Anjing

12 kg

Manusia

70 kg Mencit

20 g 1,0 7,0 12,25 27,8 29,7 64,1 124,4

2 387,9

Tikus 200 g

0,14 1,0 1,74 3,9 4,2 9,2 17,8 56,0

Marmut

400 g

0,08 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5

Kelinci 2 kg

0,04 0,25 0,44 1,0 1,08 2,4 4,5 14,2

Kucing 2 kg

0,03 0,23 0,41 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0

Kera 4 kg

0,016 0,11 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1

Anjing 12 kg

0,008 0,06 0,10 0,22 0,24 0,52 1,0 3,1

Manusia

70 kg

0,0026 0,018 0,031 0,07 0,076 0,16 0,32 1,0

(Soehardjono, 1993) LAMPIRAN 2

Kadar Kolesterol LDL Berdasarkan Umur Tikus Putih No. of Rats Chylo VLDL LDL HDL Total

µg/ml serum Total cholesterol 4 wk 2 34 103 208 464 808 11-16 wk 6 14±4.1 194±21.2 113±42.6 560±93.4 881±114.0 63-99 wk 11 12±2.3 140±12.3 351±23.8 643±45.1 1146± 69.8 Phospholipid 4 wk 2 87 149 183 1054 1472

42

11-16 wk 6 55±10 354±44.0 120±31.8 1140±46.9 1655±109.6 63-99 wk 11 48±9.7 239±30.8 350±37.8 1213±68.4 1849±92.1 Triglyceride 4 wk 2 46 258 59 58 422 11-16 wk 6 87±18.0 793±72.1 40±8.1 68±26.3 989±90.0 63-99 wk 11 24±5.9 378±40.4 50±6.4 25± 3.3 477±48.1 (Uchida, 2008) LAMPIRAN 3

Cara Pembuatan Pakan Hiperkolesterolemik

Pembuatan pakan hiperkolesterolemik dilakukan dengan cara mencampur

5 ml kuning telur itik, 10 ml minyak babi, 1 ml minyak kelapa, dan 0,1 gram

kristal kolesterol sehingga didapatkan suatu campuran berbentuk cair. Pakan

hiperkolesterolemik diberikan secara oral menggunakan sonde lambung dua kali

sehari pada pukul 07.00 dan pukul 15.00, masing-masing subjek penelitian

sebanyak 2,5 ml.

43

LAMPIRAN 4

Komposisi Pellet

No. Macam Bahan Konsentrasi (%) Takaran (kg/L)

1. Dedak halus (bekatul) 40 10

2. Tepung ikan 15 15

3. Bungkil kedelai 25 25

4. Tepung jagung 20 20

5. Aquamik - 0,05

6. Vitamin C dan B-kompleks - 0,01

Komposisi per 100 gram

Air : max. 12 %

Protein kasar : min. 15,5 %

Lemak kasar : min. 4 %

Serat kasar : max. 6 %

Abu : max. 7 %

Fosfor : 0,6-0,8 %

Antibiotik : +

Coccistat : +

LAMPIRAN 5

Daftar Volume Maksimal Bahan Uji pada Pemberian Per Oral

Jenis Hewan Berat Rerata (gram) Volume Maksimal (ml)

Mencit 20-30 1,0

44

Tikus Putih 100 5,0

Hamster 50 2,5

Marmot 250 10,0

Kelinci 2500 20,0

Kucing 3000 50,0

Anjing 5000 100,0

(Ngatidjan, 1991)

LAMPIRAN 6

Data Biologis Tikus

Lama hidup

Lama produksi ekonomis

Lama bunting

Siklus kelamin

Siklus estrus

Lama estrus

Ovulasi

Fertilisasi

Implantasi

Suhu (rektal)

2-3 tahun, dapat sampai 4 tahun

1 tahun

20-22 hari

Poliestrus

4-5 hari

9-20 jam

8-11 jam setelah estrus

7-10 jam setelah kawin

5-6 hari setelah fertilisasi

36-39o C

45

Pernapasan

Denyut jantung

Tekanan darah sistolik

Tekanan darah diastolik

Konsumsi oksigen

Volume darah

Protein plasma

ALT (SGPT)

AST (SGOT)

Kecepatan tumbuh

Aktivitas

Berat dewasa

65-115/ menit

330-480/ menit

90-180 mmHg

60-145 mmHg

1,29-2,68 ml/gram/jam

57-70 ml/ kg

4,7-8,2 gram/100 ml

17,5-30,2 IU/ liter

45,7-80,8 IU/ liter

5 gram/hari

Nokturnal

300-400 gram jantan; 250-300 gram

betina

(Smith dan Mangkoewidjojo, 1988)

LAMPIRAN 7

Kandungan Nutrisi per 100 gram Jintan Hitam

Energi

Karbohidrat

Gula

Serat

Lemak total

Lemak jenuh

Protein

Air

Vitamin A

Riboflavin

Niacin

375 kkal

44.24 gram

2.25 gram

10.5 gram

22.27 gram

1.535 gram

17.81 gram

8.06 gram

64 µg (7%)

0.327 mg (22%)

4.579 mg (31%)

46

Vitamin B6

Folat

Vitamin B12

Vitamin C

Vitamin E

Vitamin K

Kalsium

Besi

Magnesium

Fosfor

Kalium

Natrium

Seng

0.435 mg (33%)

10 µg (3 %)

0 µg (0 %)

7.7 mg (13 %)

3.33 mg (22 %)

5.4 µg (5 %)

931 mg (93 %)

66.36 mg (531 %)

366 mg (99 %)

499 mg (71 %)

1788 mg (38 %)

168 mg (7 %)

4.8 mg (48 %)

(USDA, 2010)

LAMPIRAN 8

Hasil Pengukuran Berat Badan Tikus Putih Sebelum Perlakuan (Gram)

No. Kelompok I (Kontrol) Kelompok II (Perlakuan)

1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10.

11.

12.

208.6

215.4

190.4

193.6

209.5

225.7

204.6

184.1

177.9

207.8

187.3

197.6

181.2

191.0

200.5

207.2

199.2

174.2

175.6

216.1

203.1

184.4

182.0

188.7

47

13.

14.

15.

16.

17.

184.3

196.6

170.5

179.7

207.9

208.3

210.0

167.8

171.2

159.6

Rerata 196.56 189.41

(Data primer, 2009)

LAMPIRAN 9

Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih Sebelum Perlakuan

(mg/dL)

No. Kelompok I (Kontrol) Kelompok II (Perlakuan)

1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10.

11.

12.

13.

14.

90.0

87.7

109.5

95.8

98.7

116.5

118.9

62.9

105.9

101.5

74.4

64.5

87.4

96.7

93.2

71.4

78.5

86.3

85.7

92.5

89.7

111.4

87.6

78.1

93.7

88.2

72.9

82.3

48

15.

16.

17.

85.6

97.0

67.5

61.0

101.3

95.4

Rerata 91.79 86.42

(Data primer, 2009)

LAMPIRAN 10

Hasil Pengukuran Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih Setelah Perlakuan

(mg/dL)

No. Kelompok I (Kontrol) Kelompok II (Perlakuan)

1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10.

11.

12.

13.

14.

15.

16.

17.

163.8

183.5

91.2

102.7

90.5

79.5

93.9

51.5

64.3

83.0

86.9

171.3

141.5

103.4

73.7

145.1

74.6

99.0

90.9

113.2

132.3

130.7

157.8

170.6

171.7

131.7

94.7

122.8

98.6

90.1

98.7

93.0

74.9

129.0

49

Rerata 105.91 117.63

(Data primer, 2009)

LAMPIRAN 11

Grafik Uji Normalitas Berat Badan Tikus Putih Kelompok I

Grafik Uji Normalitas Berat Badan Tikus Putih Kelompok II

50

LAMPIRAN 12

Grafik Uji Normalitas Kadar Kolesterol LDL Kelompok I Sebelum

Perlakuan

Grafik Uji Normalitas Kadar Kolesterol LDL Kelompok I Setelah Perlakuan

51

LAMPIRAN 13 Grafik Uji Normalitas Kadar Kolesterol LDL Kelompok II Sebelum

Perlakuan

Grafik Uji Normalitas Kadar Kolesterol LDL Kelompok II Setelah Perlakuan

52

54

54LAMPIRAN 14

Uji Normalitas Berat Badan, Kadar LDL Sebelum dan Sesudah Perlakuan Tikus Putih

55

55LAMPIRAN 15

Uji t Berat Badan Tikus Putih Sebelum Perlakuan

56

56

57

57LAMPIRAN 16

Uji t Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih Kelompok I dan Kelompok II Sebelum Perlakuan

58

58LAMPIRAN 17

Uji t Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih Kelompok I dan Kelompok II Sesudah Perlakuan

59

59LAMPIRAN 18

Uji t Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih Kelompok I Sebelum dan Sesudah Perlakuan

60

60LAMPIRAN 19

Uji t Kadar Kolesterol LDL Tikus Putih Kelompok II Sebelum dan Sesudah Perlakuan

66

66

LAMPIRAN 20

Dokumentasi Penelitian

67

67

LAMPIRAN 21 Surat Ijin Penelitian

68

68

LAMPIRAN 22

Surat Tanda Selesai Penelitian

69

69