PEMERIKSAAN WIDAL

1.1 Tujuan

1. Mahasiswa dapat melakukan pemeriksaan widal untuk menegakkan diagnosis demam

typhoid

2. Mahasiswa mengetahui adanya antibodi spesifik terhadap bakteri Salmonella

1.2 Metode

Metode yang digunakan dalam praktikum ini adalah Rapid Slide Test dan tes

aglutinasi tabung reaksi

1.3 Prinsip

Prinsip dari tes ini adalah reaksi imunologis antara antibodi yang diproduksi oleh

bakteri (agglutinin) dengan jenis lain dari antigen fibril.

1.4 Alat, Bahan, dan Reagen

A. Alat

1. Kaca objek berbentuk cincin

2. Pipet serum

3. Stik pengaduk

4. Tabung reaksi

5. Pengaduk mekanik (jika diperlukan)

B. Bahan

1. Larutan NaCl 0,9%

2. Antigen Fibril

3. Serum

C. Reagen

1. Brucella abortus

2. Brucella melitensis

3. Antigen Salmonella Grup A

4. Antigen Salmonella Grup B

5. Antigen Salmonella Grup C

6. Paratyphoid A (Antigen Salmonella Flagellar a )

7. Paratyphoid B (Antigen Salmonella Flagellar b )

8. Paratyphoid C (Antigen Salmonella Flagellar c )

9. Proteus OX2

10. Proteus OX19

11. Proteus OXK

12. Typhoid O (Salmonella Group D, somatik)

1.5 Langkah Kerja

A. Rapid Slide Test

1. 5 kaca objek disediakan dan masing-masing dibuat lingkaran dengan diameter 1 ½

inci dengan pensil lilin atau sebuah pensil dengan ujung bercahaya. Untuk tujuan

ini bisa juga digunakan kaca jendela yang kecil. Kaca objek berbentuk cincin juga

dianjurkan untuk digunakan.

2. Sejumlah serum yang akan diuji ditambahkan dengan pipet yang sesuai, ke dalam

lingkaran kaca objek dari kiri ke kanan dengan urutan: 0,08 mL, 0,04 mL, 0,02

mL, 0,01 mL, 0,005 mL. Serum harus bersih dan tidak panas. Prosedur ini

diulangi dengan serum kontrol positif dan negatif.

3. Antigen dikocok dengan hati – hati untuk memastikan suspensi tercampur merata.

4. Dengan memegang penetes secara vertikal, ditambahkan satu tetes suspensi

antigen setiap sejumlah serum.

5. Serum dan antigen dicampur menggunakan stik pengaduk. Stik pengaduk yang

berbeda digunakan untuk setiap jumlah serum atau digunakan stick yang sama dan

dikerjakan dari kanan ke kiri. Area yang dibentuk setiap campuran harus

berukuran ½ inci - 1 inch.

6. Slide digoyangkan dengan tangan atau pengocok mekanik pada kecepatan 150

rpm selama 2-3 menit.

7. Aglutinasi diamati dengan pencahayaan tidak langsung berlatar belakang gelap.

8. Serum positif oleh titer yang dikenali dan serum negatif serum harus termasuk ke

dalam control

B. Tes Aglutinasi Tabung Reaksi

1. Sepuluh tabung reaksi berukuran 12 x 75 mm disediakan dan diletakkan di rak

yang sesuai

2. 1,9 mL larutan natrium klorida 0,9% ditambahkan ke tabung pertama

3. 1,0 mL larutan natrium klorida 0,9% ditambahkan ke tabung yang tersisa

4. 0,1 mL serum yang akan diuji ditambahkan ke tabung pertama. 1,0 ml serum yang

diencerkan diaduk rata dan dipindahkan dari tabung pertama ke tabung kedua.

Prosedur ini diulangi sampai kesepuluh tabung mengandung seri pengenceran

serum dua - kali lipat dari 1: 20 sampai 1: 10240. 1,0 mL pengencer serum

diambil dari tabung 10 dan dibuang. Tabung no. 1 dianggap sebagai pengenceran

1:20. Prosedur ini diulangi dengan serum kontrol positif dan negatif.

5. Satu tabung ditempatkan di akhir seri tabung pengenceran dan 1,0 mL larutan

natrium klorida 0,9% ditambahkan untuk mengencerkan serum. Tabung itu

dilabeli dengan nama "Control Saline”

6. Suspensi antigen dihomogenkan dengan mengocok botol hati - hati. Satu tetes

antigen ditambahkan untuk setiap tabung.

7. Rak dikocok untuk mencampur antigen dengan serum dan ditempatkan di

waterbath. Waktu dan suhu inkubasi yang dianjurkan adalah sebagai berikut:

Antigen Temperature Waktu Inkubasi

Salmonella “O” Group A 45°- 50℃ 18 jam

Salmonella “O” Group B 45°- 50 18 jam

Salmonella “O” Group C 45°- 50 18 jam

Salmonella “O” Group D

(Typhoid O)45°- 50 18 jam

Salmonella “H” a 45°- 50 2 jam

Salmonella “H” b 45°- 50 2 jam

Salmonella “H” c 45°- 50 2 jam

Salmonella “H” d

(Typhoid H)45°- 50 2 jam

Brucella abortus dan

Brucella meltonois37 48 jam

Proteus OX2, OX19 dan

OXK37 18 jam

Catatan : Typhoid H dan antigen Salmonella flagellar harus diinkubasi selama 2

jam pada suhu 45°- 50 dilanjutkan dengan inkubasi 10 jam pada suhu 2°- 8

sebelum pembacaan terakhir.

8. Setelah diinkubasi, rak yang berisi tabung reaksi dipindahkan dengan hati-hati dan

diamati aglutinasinya. Menggunakan sumber cahaya tidak langsung dengan latar

belakang hitam akan memberikan kondisi optimal untuk pembacaan tabung

9. Hasil tes dicatat sebagai berikut :

a. 4+ : Semua organisme berkumpul di dasar tabung dan cairan supernatan

bersih

b. 3+ : Sekitar 75% organisme berkumpul dan supernatant sedikit keruh

c. 2+ : Sekitar 50% organisme berkumpul dan supernatant dengan kekeruhan

sedang

d. 1+ : Sekitar 25 % organisme berkumpul dan supernatant keruh

e. - : Tidak ada aglutinasi yang teramati dan muncul kekeruhan pada suspensi

10. Titer dari serum reaktif dicatat sebagai pengenceran terakhir yang memberikan

reaksi 2 +