bab iii n 4 ndak lengkap vince

5/12/2018 Bab III n 4 Ndak Lengkap Vince - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/bab-iii-n-4-ndak-lengkap-vince 1/9

UJI MIKROBIOLOGI PADA BAHAN PANGAN

BAB III

METODE PERCOBAAN

III.1 Alat

Alat yang digunakan dalam percobaan ini yaitu tabung reaksi, tabung durham, labu oven,

erlenmeyer, autoklaf, penangas, cawan petri, bunsen, incubator, spoit steril, neraca ohaus, neraca

analitik, gelas kimia, sendok tanduk, mortar, pastle, botol pengencer, enkas, rak tabung reaksi,

handsprayer, ose bulat, ose lurus, pipet tetes, batang pengaduk, dan kamera.

III.2 Bahan

Bahan yang diguanakan dalam percobaan ini adalah, aquades, aluminium foil, alcohol,

cling wrap, teh pocci, siomay, mie pangsit, pisang ijo, Medium Nutrien Agar (NA), Medium

Eosin Methylen Blue Agar (EMBA), Medium Lactose Broth (LB), Medium Triple Sugar Iron

Agar (TSIA), Sulfide Indool Multility (SIM), Medium Sileni Cystein Broth (SCB), Tiosulfat

Cytrat Bile Salt Agar (TCBSA), Pepton Water (PW), Medium Methyl Red (MR), Medium VP

(Vojes…….), Medium CETA, Salmonella Shigella Agar (SSA), Aquades steril, Alkohol 70% ,

Tissue, sabun sunlight, Alumunium Foil, Kapas, Larutan Spritus.

III.3 Prosedur kerja

Prosedur kerja dari percobaan ini adalah :

A.

Metode Standar Plate Count (SPC) dan Most Probable Number (MPN)

1. Menyiapkan alat dan bahan yang akan digunakan.

2. Menstrilkan alat-alat dan medium yang akan digunakan.



3. Memberisihkan enkas dengan alcohol dan menyalakan api di dalamnya untuk pengerjaan

secara aseptis.

4. Memberikan label pada lima buah botol pengencer yang berisi 9 ml aquades steril dengan

pengenceran 10-1 – 10-6 untuk masing-masing sampel.

5. Untuk bahan padat, menghaluskan bahan makanan padat yakni mie pangsit, siomay dan

pisang ijo dan menimbang bahan secukupnya dan meletakkannya dalam wadah sebagai

pengenceran 10-1 dan untuk bahan cair, the pocci dalam kemasan sebagai pengenceran 10 -1.

6. Memasukkan 1 ml masing-masing sampel (10-1

) kedalam pengenceran 10-2

dan

memasukkannya pula ke dalam 3 buah tabung reaksi yang berisi medium laktosa broth dan

tabung durham masing-masing 1 ml.

7. Mengambil 1ml larutan dari pengenceran 10-2 lalu memasukkan ke botol pengencer 10-3

dan memasukkannya pula ke tiga buah tabung yang berisi laktosa broth masing-masing 1ml

8. Mengambil lagi 1ml larutan dari pengenceran 10-3

dengn spoit steril dan memasukkan

kedalam botol pengencer 10-4 lalu memasukkannya pula ke 3 buah tabung reaksi laktosa

broth masing-masing 1ml.

9. Mengambil lagi 1ml larutan dari pengenceran 10-4 dengn spoit steril dan memasukkan

kedalam botol pengencer 10-5

lalu memasukkannya pula ke 3 buah cawan petri masing-

masing 1ml.

10. Mengambil lagi 1ml larutan dari pengenceran 10-5 dengn spoit steril dan memasukkan

kedalam botol pengencer 10

-6

lalu memasukkannya pula ke 3 buah cawan petri masing-

masing 1ml.

11. Mengambil pula 1 ml larutan dari pengenceran 10-6

dan memasukkannya pula kedalam

cawan petri steril.



12. Memasukkan medium Nutrien Agar ke dalam tiga cawan petri yang berisi pengenceran 10-4

,

10-5, dan 10-6 yang sebelumnya dilidahapikan.

13. Menutup cawan petri dan membiarkannya sampai memadat lalu membungkus dengan cling

wrap.

14. Menginkubasikan cawan petri dan laktosa broth kedalam incubator selama 24 jam pada suhu

37oC.

15. Setelah 24 jam, mengamati pertumbuhan koloni pada cawan petri lalu menghitung nilai SPC

serta mengamati perubahan medium Lactosa Broth lalu menghitung nilai MPN.

B. Uji Mikroba Pada Medium Pengaya dan Medium Selektif

a. Uji Eschericia coli

1. Mengambil 1 ml masing-masing sampel pada medium LB yang telah diinkubasi selama 24

jam menggunakan ose bulat secara aseptis.

2. Menggoresnya pada medium selektif yaitu Medium Eosin Methylen Blue Agar (EMBA).

3. Menginkubasi medium pada incubator selama 24 jam.

4. Setelah inkubasi 24 jam, mengamati pertumbuhan koloni bakteri E.coli yang ditandai

dengan adanya warna hijau metalic.

b. Uji Salmonella thypi

1. Mengambil 1 ml sampel pada pengenceran 10-1

, lalu menanam pada medium Sileni Cystein

Broth (SCB).

2.

Menginkubasi medium Sileni Cystein Broth (SCB) selama 24 jam pada incubator.

3. Setelah 24 jam inkubasi, mengamati kekeruhan lalu menggoresnya pada medium selektif

yaitu Salmonella Shigella Agar (SSA) menggunakan ose bulat secara aseptis.

4. Menginkubasi medium Salmonella Shigella Agar (SSA) selama 24 jam.



5. Setelah inkubasi 24 jam, mengamati bakteri Salmonella typhi yang ditandai dengan adanya

koloni seperti mata ikan, bening dan di tengahnya berwarna hitam.

c. Uji Vibrio chollerae

1. Mengambil 1 ml sampel pada pengenceran 10-1, lalu menanam pada medium Pepton Water

(PW).

2. Menginkubasi medium Pepton Water (PW) selama 24 jam pada incubator.


Tiosulfat Cytrat Bile Salt Agar (TCBSA) menggunakan ose bulat secara aseptis.

4.

Menginkubasi medium Tiosulfat Cytrat Bile Salt Agar (TCBSA) selama 24 jam.

5. Setelah inkubasi 24 jam, mengamati bakteri Vibrio chollerae yang ditandai dengan adanya

koloni berwarna kuning.

d. Uji Staphylococcus sp

1. Mengambil 1 ml sampel pada pengenceran 10-1

, lalu menanam pada medium BHIB.

2. Menginkubasi medium BHIB selama 24 jam pada incubator.


VJA menggunakan ose bulat secara aseptis.

4. Menginkubasi medium VJA selama 24 jam.

5. Setelah inkubasi 24 jam, mengamati bakteri Staphylococcus sp yang ditandai dengan adanya

koloni berwarna hitam.

e.

Uji Pseudomonas sp

1. Mengambil 1 ml sampel pada pengenceran 10-1, lalu menanam pada medium BHIB.

2. Menginkubasi medium BHIB selama 24 jam pada incubator.




CETA menggunakan ose bulat secara aseptis.

4. Menginkubasi medium CETA selama 24 jam.

5. Setelah inkubasi 24 jam, mengamati bakteri Pseudomonas sp.

C. Uji IMVIC

1. Mengamati koloni mikroba pada masing-masing medium selektif, apakah positif terdapat

koloni.

2. Menanam mikroba pada pada masing-masing medium IMVIC yaitu Triple Sugar Iron Agar

(TSIA), Sulfide Indool Multility (SIM), SCA, MR dan VP.

3. Menginkubasi medium pada incubator selama 24 jam.

4. Setelah 24 jam, mengamati perubahan yang terjadi pada medium.

I.2 Tujuan Percobaan

Tujuan dari percobaan ini adalah :

1. Untuk menghitung jumlah mikroba dengan metode hitung cawan (Total Plate Counts ) dan

metode hitung MPN (Most Probable Number).

2. Untuk mendeteksi adanya bakteri pathogen ( E. coli, Salmonella thypi, Staphyllococcus

aureus,Vibrio sp, dan Pseudomonas sp.) pada bahan makanan.

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

IV.1 Hasil

Tabel hasil Pengamatan



A. Most Probable Number (MPN)

Sampel Jumlah tabung positif Nilai MPN

10-1

10-2

10-3

Siomay

Teh Pocci 3 3 2

Mie Pangsit

Pisang ijo

B. Standard Plate Count (SPC)

Sampel Jumlah koloni Nilai SPC

10-4

10-5

10-6

Siomay

Teh Pocci 1 1 0

Mie Pangsit

Pisang ijo

Gambar Hasil Pengamatan

A. Metode Probable Number (MPN)

1. Siomay

2. Teh Pocci

Laboratorium Mikrobiologi

Universitas Hasanuddin



Sebelum inkubasi sesudah inkubasi

1

2

3

4

Keterangan

1. Tabung reaksi2. Medium Lactosa Broth

3. Tabung Durham

4. Gelembung gas

Pengenceran 10-1


Universitas HasanuddinSebelum inkubasi sesudah inkubasi

1

2

3

4

Keterangan

1. Tabung reaksi2. Medium Lactosa Broth

3. Tabung Durham

4. Gelembung gas

Pengenceran 10-2


Universitas Hasanuddin

sebelum inkubasi sesudah inkubasi

2

1

4

3

Keterangan

1. Tabung reaksi

2. Medium Laktosa Broth

3. Tabung Durham

4. Gelembung gas



pengenceran 10-3

B. Metode Plate Count (SPC)

1 1

2 2

3

Keterangan

1. Cawan Petri

2. Medium Nutrien Agar (NA)

3. Koloni mikroba



C. Uji Medium Selektif

a. Escherecia coli

b. Salmonella Thypi

Setelah inkubasiSebelum inkubasi

bab iii n 4 ndak lengkap vince

Documents