Tugas Ujian Akhir SemesterPraktikum Fitokimia IIReview JurnalTHE IDENTIFICATION OF CHLOROPHYLL AND ITS DERIVATIVES IN THE PIGMENT MIXTURES:HPLC-CHROMATOGRAPHY, VISIBLE AND MASS SPECTROSCOPY STUDIES

O L E H :NAMA: WA ODE MARFIAH SAFITRINIM: F1F1 12 130KELAS: FARMASI C

JURUSAN FARMASIFAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS HALU OLEOKENDARI

2014

Teknologi canggih1(1) (2012), 16-24

THE IDENTIFICATION OF CHLOROPHYLL AND ITS DERIVATIVES IN THE PIGMENT MIXTURES:HPLC-CHROMATOGRAPHY, VISIBLE AND MASS SPECTROSCOPY STUDIESSanja M. Milenkovi, Jelena B. Zvezdanovi, Tatjana D. Andjelkovic.Dejan Z. MarkoviFakultas Teknologi, Universitas Ni, Leskovac, SerbiaFakultas Ilmu, Departemen Kimia, Universitas Nis di Nis, Serbia

ABSTRACKSpectrometry analisis untuk identifikasi klorofil dan turunannya, pheophytindan chlorophyllide, dalam campuran dimurnikan mereka (klorofil, pheophytin dan fraksi chlorophyllide, masing-masing).Klorofil, pheophytin dan kloroform fraksi phyllide diperoleh dengan menggunakan ekstraksi pigmen dari tanaman bahan(SpinaciaoleraceaL), ditambah dengan kromatografi kolom.Komponen utama dalam klorofil, pheophytin dan chlorophyllide pecahan diidentifikasi sebagai klorofil a &b, Pheophytin a & bdan chlorophyllide a Spektrofotometri ditentukan rasio konsentrasi utama pigmen diidentifikasi, klorofil cchl a / cChl b (di fraksi klorofil), cPheo a / cPheo b (dalam fraksi pheophytin) dan c cChli a / cChlid b (di fraksi chlorophyllide) adalah: 4.95 / 1, 1,05 / 1 dan 6.89 / 1, berturut-turut.

Keywords: chlorophyll, pheophytin, chlorophyllide, VIS, HPLC, ESI-MS.

PengantarKlorofil termasuk dalam kelompok yang paling penting dalam molekul bioorganik;mereka adalah pigmen utama dalam fotosintesis, mampu menyerap energi cahaya dan mengubahnya menjadi "energi kimia" dengan pembentukan senyawa kimia yang kaya akan energi (diperlukan untuk biosintesis karbohidrat dan senyawa lain dalam fotosintesis organisme seperti tanaman, alga dan bakteria fotosintesis pigmen utama fotosintesis, klorofil (Chl) adalah klorin (porfirin derivatif) dalam hal kimia, sebuah tetrapyrrole siklik dengan isocyclic cincin siklopentanon, menyatu di tepi kanan-dasar air pirol cincin [1- 2], Gambar 1.Klorofil (A), pheophytin (B) dan chlorophyllide (C) struktur.C-atom numerated menurut IUPAC aturan tata nama.Dalam berbagai fotosintesis "mata pelajaran" (tanaman, alga, bakteri), klorofil sering disertai dengan tekanan yang ence berbagai turunannya, seperti pheophytins (Pheo), chlorophyllides (Chlid), dan banyak lainnya.Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mewakili salah satu metode untuk cepat dan sederhana isolasi, persiapan dan identifikasi klorofil dan turunannya (pheophytin dan chlorophyllide) dari bahan tanaman (seperti bayam dari pasar lokal) dengan menggunakan metode ekstraksi dan kromatografi kolom serta VIS, HPLC dan E (elektron) S (Semprot) I (Ionisasi) - pengukuran MS.

EksperimentalSemua percobaan dilakukan di bawah cahaya redup selama mungkin, dan di dalam wadah dan peralatan ditutupi dengan aluminium foil atau kain hitam, mencegah pigmen terpapar cahaya.Ekstraksi pigmen tumbuhan Ekstraksi pigmen tanaman dari daun bayam, Spinacia oleracea L. (ditemukan di pasar lokal), dilakukan pertama-tama Daun bayam segar n dicuci dengan air dingin. Campuran ekstraksi dan re-ekstraksi yang methanol dan petroleum eter dalam rasio 2: 1, dan petroleum eter dan dietil eter (1: 1), berturut-turut. Metanol kembali menggerakkan air dari material tanaman dan petroleum eter mengambil pigmen sebelum mengalami reaksi ary kedua. Dietil eter meningkatkan kelarutan pigmen dalam fase organik. Ekstrak terakhir adalah campuran pigmen yang mengandung sejumlah besar berbagai bentuk klorofil, serta pigmen aksesori, karotenoid (karoten dan xanthophylls).Fraksi klorofil. Fraksi klorofil campuran yang dimurnikan dari berbagai bentuk klorofil (misalnya CHL dan Chl b) - diisolasi dari ekstrak pigmen dengan menggunakan kromatografi kolom dengan silika gel sebagai adsorben (silika gel 60, Merck, 0,063-0,200 mm) dan n -hexane / ACE campuran nada sebagai eluen [15, 18]. N-heksana rasio / aseton diubah dari awal 1: 0 untuk akhir 1: 1, untuk memungkinkan elusi lebih mudah dari fraksi polar. Fraksi klorofil dielusi pada komposisi eluen 1: 0.1 (n-heksana / aseton, masing-masing), dan kemudian ditransfer dalam aseton.Fraksi pheophytin. Fraksi pheophytin - campuran dari berbagai bentuk pheophytin (misalnya Pheo dan Pheo b) - dibuat dari fraksi klorofil dikumpulkan dengan penambahan drop-bijaksana 1,0 M HCl. Perubahan dari klorofil ke pheophytin selesai pada sekitar 2 jam dalam gelap, diamati sebagai perubahan warna dari hijau menjadi coklat zaitun. Baru dibuat Pheo-hal kemudian diekstraksi dengan n-heksana dan kemudian dilarutkan dalam aseton.Ekstraksi chlorophyllides. Ekstrak chlorophyllides diperoleh dari daun bayam kering (pertama habis dari pertengahan tulang rusuk). Ekstraksi chlorophyllides dilakukan oleh aksi enzim chlorophyllase endogen pada klorofil, dengan menginkubasi 5 g bayam kering dengan 100 mL aseton / 0,2 M Tris-HCl penyangga (pH 8,0, 1: 1 v: v) selama 2 jam di gelap pada 40 0C. Ekstrak chlorophyllide terakhir adalah campuran pigmen yang mengandung ing jumlah besar berbagai bentuk chlorophyllide, serta turunannya, dalam jumlah yang lebih kecil.Fraksi Chlorophyllide. Fraksi chlorophyllide - campuran dimurnikan dari bentuk chlorophyllide (misalnya Chlid a dan Chlid b) - diisolasi dari ekstrak chlorophyllide dengan kromatografi kolom dengan silika gel sebagai adsorben (silika gel 60, Merck, 0,063-0,200 mm) dan campuran N-heksana / aseton sebagai eluen. rasio N -heksana / aseton berubah dari awalnya 1: 0 untuk akhir 1:10, untuk memungkinkan elusi lebih mudah dari fraksi polar. Fraksi chlorophyllide dielusi pada komposisi eluen 1: 3.3 (n-hex- ane / aseton, masing-masing).VIS spektroskopi. Pengukuran spektrofotometri dilakukan pada spektrofotometer Varian Cary-100 dilengkapi dengan sel quartz 1,0 cm. Semua spektrum direkam 350-800 nm dengan 1,0 bandwidth. Spektrum semua senyawa dicatat dalam aseton. Isi pigmen diselidiki dalam pecahan klorofil, pheophytin dan chlorophyllide ditentukan seperti yang dilaporkan [22, 23], dalam aseton. Konsentrasi pigmen dalam aseton berada di kisaran antara 10-4 dan 10-5 mol / dm3 an rasio molar pigmen diselidiki: cchl a / cChl b (di fraksi klorofil), cPheo a / cPheo b (dalam fraksi pheophytin) dan c cChli a / cChlid b (di fraksi chlorophyllide) adalah: 4.95 / 1, 1,05 / 1 dan 6.89 / 1, berturut-turut.Analisis HPLC. Analisis kromatografi cair tekanan tinggi dari fraksi klorofil, klorofil dan pheophytin terisolasi dilakukan di bawah kondisi isokratik pada aparatur: Agilent 1100 Series, Waldbronn, Jerman, kolom: Zorbax Eclipse XDB-C18, dengan menggunakan detektor iode array yang diatur pada panjang gelombang deteksi (det.): 430 dan 660 nm; kondisi isokratik adalah: fase gerak asetonitril / metanol / etil asetat dengan perbandingan 60:20:20, masing-masing, laju alir - 0,5 cm3 / min, dan suhu: 25 0C. Konsentrasi pigmen berada di kisaran antara 10-4 dan 10-5 mol / dm3. ESI-MS spektrometri. Fraksi pigmen yang telah dianalisis oleh aliran-injeksi metode ESI-MS / MS (spektrometri Electronspray massa ionisation), menggunakan metanol sebagai fase pembawa. ESI-MS / MS pemeriksaan telah dilakukan pada LCQ Deca Ion trap Mass Spectrometer (Thermo Finnigan, USA) dengan peralatan tambahan, dengan kemungkinan menggunakan tuning otomatis pada setiap ion molekul dalam keadaan yang bisa; nilai energi tabrakan meningkat 20-35% hingga fragmentasi terlihat dari nilai-nilai yang lebih kecil dari m / z, sehingga awalnya "Induk" ion masih bisa dilihat dalam spektrum. Optimasi parameter sumber ESI- dilakukan untuk mengakui aspirasi detektor cahaya dicapai oleh aliran gas memobilisasi (10 L / min), diangkut di bawah tekanan 30 psi. Usia voltase terendah (50 V) diterapkan untuk memastikan transportasi yang efisien ion yang dihasilkan ke modul analisis.

Hasil dan DiskusiPenyerapan (VIS) spektrum klorofil, pheophytin dan chlorophyllide fraksi. Spektrum penyerapan klorofil (A), chlorophyllide (B) dan pheophytin (C) tion fraktur di aseton ditunjukkan pada Gambar 2.Klorofil sebagai turunan porfirin memiliki dua pita penyerapan utama dalam kisaran terlihat, karena diperpanjang -delokalisasi di tepi tetrapyrrole siklik (pita '' merah '' (Q) dan pita ''biru' '(Soret atau B-) "Merah" dan "biru" band Chl sebuah (ditugaskan sebagai Qy- dan Soret-) terletak di 662 dan 430 nm untuk larutan aseton, masing-masingseperti yang ditunjukkan pada Gambar 2A untuk klorofil fraksi (terdiri dari Chl a dan Chl b dalam rasio 4,95 / 1) di aseton. Band yang sesuai (Soret- dan Qy-) untuk Chl b dalam aseton terletak di 645,5 dan 456,9 nm, masing-masing. Kecil "bahu" di 457 nm (mungkin karena adanya Chl b dalam campuran) hadir dalam spektrum penyerapan fraksi klorofil dalam aseton (Gambar 2A). Di sisi lain, rasio intensitas absorbansi untuk Soret- dan Qy-band (ASoret /AQy) adalah 1,23 untuk Chl a, dan 2,82 untuk Chl b; sesuai rasio ASoret/AQy untuk fraksi klorofil dalam aseton adalah 1,30 (Gambar 2A). Penyerapan Maksimal Soret- dan Qy-band terletak di 409,5 dan 665,5 nm untuk Pheo di aseton, mirip dengan yang ditunjukkan pada Gambar 2B untuk fraksi pheophytin (terdiri dari Pheo a dan Pheo b rasio 1,05 / 1) dalam aseton. Dibandingkan dengan klorofil, "merah" maksimum penyerapan ab dari pheophytins dalam aseton digeser ke panjang gelombang yang lebih panjang. Namun, maximum dalam "biru" daerah spektral dialihkan ke panjang gelombang yang lebih pendek. Suatu rasio dari Soret- dan Qy- penyerapan band (ASoret/AQy) jauh lebih tinggi daripada yang ke klorofil. Untuk Pheo a dan Pheo b dalam aseton, ASoret / AQy = 2.26 dan 5.30, masing-masing dan untuk fraksi pheophytin dalam aseton, sesuai rasio ASoret/AQy 2.33 (Gambar 2B).

Gambar 2. Spektrum penyerapan klorofil (A), pheophytin (B) dan chlorophyllide (C) fraksi dalam aseton. Posisi dari maksimal penyerapan (Soret dan Qy) ditampilkan dalam spektrum yang sesuai. Posisi beberapa band penyerapan kecil yang diamati (antara Soret- dan Qy-) juga ditampilkan dalam spektrum yang sesuai. Konsentrasi Chl dan turunannya dalam pecahan yang sesuai adalah di kisaran 10-4-10-5 mol / dm3. Spektrofotometri ditentukan rasio konsentrasi pigmen utama dalam fraksi (CHL a & b di Chl-, Pheo a & b di Pheo- dan Chlid a & b di fraksi Chlid- juga ditampilkan pada Gambar 2 (A, B dan C, masing-masing).Chlorophyllide juga memiliki sistem chlorin ditandai dengan pita absorpsi di sekitar 440 dan 660 nm (dalam pelarut organik) dari intensitas hampir sama ( 100.000) [3, 5-6, 8], sama dengan yang ditunjukkan pada Gambar 2C untuk fraksi chlorophyllide (terdiri dari Chlid dan Chlid b rasio 6.89 / 1) di aseton. Karena phytil ekor - faktor struktural utama yang membedakan CHL dan Chlid memiliki kontribusi penyerapan yang sangat diabaikan dibandingkan dengan struktur klorin, posisi maksimum penyerapan (AQy dan ASoret) yang hampir sama - 662,0-664,0 nm dan 431 nm aseton, untuk "merah" Qy- dan "biru" band Soret-, masing-masing, untuk kedua Child a & Chlid sebuah. Pita yang sesuai (Soret- dan Qy-) Untuk Child b di aseton terletak di 457,5 dan 645,7 nm, masing-masing. Kecil "shoulder" pada 460 nm (mungkin karena hadirat dari Chlid b dalam campuran) hadir dalam spektrum penyerapan fraksi chlorophyllide dalam aseton (Gambar 2C). Rasio intensitas absorbansi untuk Soret- dan Qy- Band (ASoret/AQy) adalah 1,14 Untuk child a pada aseton dan 1,46 untuk fraksi chlorophyllide dalam aseton (Gambar 2C). Band kecil yang diamati terletak di kisaran spektral antara Soret- dan Qy- band untuk fraksi chlorophyllide dalam aseton (di 581 nm dan 614 nm - Gambar 2C) yang sesuai dengan data literatur yang sesuai Untuk child yang dilarutkan dalam asetonAnalisis HPLC-VIS klorofil, klorofil dan pheophytin fraksi. Bagian ini menggambarkan kemungkinan menerapkan HPLC berbasis silika (dengan silika oktadesil, atau C-18 kolom) ditambah dengan pengukuran penyerapan, untuk pemisahan dan identifikasi, Chl, Pheo dan Anak, di campuran yang sesuai, klorofil, pheophytin dan chlorophyllide fraksi, masing-masing. HPLC-kromatogram dari fraksi klorofil, pheophytin dan chlorophyllide ditunjukkan pada Gambar 3 (A, B dan C), masing-masing. Spektrum penyerapan senyawa utama dalam campuran eluen (fasa gerak) diamati dalam HPLC-kromatogram pada waktu retensi, tret = 13,6 & 9 min (ditugaskan sebagai CHL a & b), 30,5 & 19 menit (ditugaskan sebagai Pheo sebuah & b) dan 2,7 menit (ditugaskan sebagai Chlid a), ditunjukkan dalam kelipatan Gambar 3 (A, B dan C), masing-masing.Kromatografi cair tekanan tinggi (HPLC) telah dianggap sebagai yang tercepat, metode yang paling sederhana dan paling direproduksi untuk menganalisis campuran kompleks pigmen dalam makanan dan sumber-sumber lain. Misalnya, pemisahan klorofil dan turunannya oleh re- berpengalaman fase HPLC menggunakan silika oktadesil (C-18) kolom dan 100% metanol sebagai elusi pelarut diusulkan.Tabel 2. Tinjauan paralel data spektral yang paling penting yang diperoleh dari spektrum penyerapan yang sesuai dari senyawa yang diamati (Chl a & b, Pheo a & b dan Chlid a) - dari HPLC-VIS sistem (kiri) dan literatur yang sesuai data yang dilaporkan untuk senyawa yang sama (kanan).

HPLC-kromatogram dari fraksi klorofil menunjukkan empat puncak diselesaikan baik di waktu retensi, 9.0, 9.8, 13.6, dan 16.0 menit (Gambar 3A). Dua puncak utama di tret. 9,0 dan 13,6 menit sesuai dengan Chl b dan CHL, masing-masing. Penggantian-CH3 kelompok (pada CHL) dengan -CHO kelompok (pada Chl b) pada posisi C-7 (Gambar 1A) meningkatkan polaritas b klorofil [26]; sejak lebih polar dari CHL a, b Chl muncul pada waktu retensi lebih pendek, mengingat sebagian besar non-polar C-18 jenis kolom. Spektrum penyerapan senyawa yang sesuai dalam fase gerak (diambil dari puncak di tret yang = 9,0 dan 13,6 menit dengan menggunakan HPLC-VIS - fotodioda pengukuran ray - kenaikan Gambar 3A) menunjukkan kesepakatan yang baik dengan data literatur untuk Chl b dan Chl, masing-masing [30-31, 34-35] serta dengan data literatur yang diberikan dalam Tabel 2. dua komponen yang diamati lain di retensi kali 9,8 dan 16 menit adalah C-132 epimer dari Chl b dan - Chl b 'dan a'.Demikian pula untuk diamati HPLC-kromatogram dari fraksi klorofil (Gambar 3A), kromatogram HPLC- dari fraksi pheophytin juga terdiri dari empat ulang baik diselesaikan puncak (tetapi pada waktu retensi lebih lama daripada yang diamati untuk Chl-fraksi) di 19,0, 21,7, 30,5 dan 34,0 menit, diharapkan pada non-polar C-18 jenis kolom, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3 (A, B). Dua peak utama di tret. 19,0 dan 30,5 menit sesuai dengan Pheo b dan Pheo a, masing-masing. HPLC-kromatogram dari fraksi chlorophyllide menunjukkan dua puncak diselesaikan baik pada waktu retensi 2,7 menit dan 3,0 menit (Gambar 3C). Puncak pertama (2,7 menit) adalah Chlid a dan kedua (di 3.0) bisa menjadi Chlid a'- spektrum penyerapan kedua senyawa dalam fase gerak (diambil dari sistem HPLC-VIS) adalah sama, yaitu arang - acteristic dari epimer

Gambar 3. Profil HPLC klorofil (A), pheophytin (B) dan chlorophyllide (C) fraksi. Isi pigmen dinyatakan sebagai rasio konsentrasi senyawa utama dalam fraksi, cchl a / b cChl (pada fraksi klorofil), cPheo a / b cPheo (dalam fraksi pheophytin) dan cChli a / b cChlid (dalam fraksi chlorophyllide) adalah: 4.95 / 1, 1,05 / 1 dan 6.89 / 1, masing-masing. Deteksi dilakukan pada 660 nm. Kondisi kromatografi dijelaskan di bagian Eksperimental. Spektrum serapan yang sesuai dari Chl a & b, Pheo a & b dan Chlid dalam fase gerak, diambil dari puncak pada waktu retensi 9,0 & 13,6, 19,0 & 30,5 dan 2,7 menit (dari data photodiode array), yang ditampilkan dalam kelipatan Gambar 3 (A, B dan C), masing-masing.

Chlorophyllide dengan kelompok asam propionat unesterified pada C-17 Gambar 1C jauh lebih polar daripada klorofil yang sesuai; mereka pertama dielusi dari non-polar C-18 kolom (Gambar 3). Chlorophyllide sebuah (puncak pada 2,7 menit) adalah dominan dalam fraksi chlorophyllide, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 3C. Data spektral (dari spektrum penyerapan senyawa dalam fase gerak di tret ini. = 2,7 menit) telah menunjukkan kesepakatan yang baik.MS spektrum klorofil, pheophytin dan fraksi kloroform phyllide.Electronspray-ionisasi spektrometri massa, ESI-MS digunakan untuk deteksi dan karakterisasi dari satu atau lebih spesies ion dalam larutan, dan dikonfirmasi sebagai sangat berguna dalam studi tentang berbagai system. ESI-MS memungkinkan akuisisi spektrum massa langsung dari sampel cair. Tergantung pada muatan ion dalam larutan, modus ion positif atau negatif dapat diterapkan (ESI + atau ESI-, masing-masing) untuk mendapatkan hasil optimates ibu. Jika ada ambiguitas dalam interpretasi spektrum, sebuah spektrometri massa resolusi tinggi dan analisis MS / MS mengarah ke identifikasi hampir tegas. Di sisi lain, komposisi larutan mengalami analisis dikondisikan oleh keterbatasan yang signifikan: tidak menerapkan kekuatan ion yang tinggi karena bahkan relativitas konsentrasi relatif rendah komponen mudah menguap (misalnya ion Na +) dapat mengganggu.Dalam MS spektrum klorofil, pheophytin dan chlorophyllide pecahan (tidak ditampilkan), puncak molekuler di nilai m / z yang sesuai dengan berat molekul dari senyawa yang ditemukan dari hasil HPLC-VIS yang diamati: CHL a (893,8), Pheo a (871,7), Chlid a (614,2) antara Chl b, Pheo b dan Chlid b. Radikal ion molekul cals, [M] +, untuk semua campuran pigmen yang digunakan dalam pekerjaan ini (pecahan Chl-, Pheo-, dan Chlid-) yang diamati dalam spektrum massa ion positif. MS / MS spektrum Chl sebuah, Pheo dan Chlid dari fraksi klorofil, pheophytin dan chlorophyllide ditunjukkan pada Gambar 4 (A, B dan C), masing-masing. Ion-ion fragmen yang paling melimpah di positif spektrum massa ion klorofil dan turunannya spond biasanya corre- untuk fragmentasi dengan hilangnya kelompok dari C-17 dan C-132 posisi (Gambar 1) [26, 30, 39, 42- 43]. Mantan orang dapat menjadi hasil dari hilangnya rantai phytil (sebagai phytadiene, C20H38) atau kelompok CH3COOC20H39 - (C-17 posisi pada Gambar 1) - yang muncul dalam spektrum massa pada m nilai / z yang sesuai dengan [M -C20H38] + = [M 278] + dan [M-CH3COOC20H39] + = [M-338] +. Yang terakhir dapat hasil dari hilangnya CH3OH (di C-133 posisi) atau seluruh ester-kelompok (COOCH3 di C-132 posisi) - (Gambar 1) - yang muncul dalam spektrum massa pada m / z sesuai dengan [M-CH3OH] = [M-32] + dan [M COOCH3] = [M-59] +.

Gambar 4. Full scan MS / MS spektrum yang sesuai [M] + ion dari klorofil a (A), pheophytin a (B) dan chlorophyllide a (C) diambil dari MS spektrum klorofil, pheophytin dan fraksi chlorophyllide, masing-masing.Dalam spektrum massa fraksi klorofil, puncak diamati pada m / z 893,8 ditunjuk sebagai ion-peak molekul Chl (tidak ditampilkan). Fragmentasi kedua puncak yang sama ditemukan pada m / z 893,8 memberi spektrum MS / MS khas untuk CHL, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4A. Dalam spektrum massa yang sesuai dari Chl, dua-ion fragmentasi yang paling penting yang jelas diamati: pada m / z 555,7 dan 639,0, di antara yang paling melimpah, molekul ion-puncak pada 893,8 (Gambar 4A). Puncak pada m / z 555,7 sesuai dengan fragmentasi Chl molekul di C-17 posisi (Gambar 1A) dengan hilangnya CH3COOC20H39 ([M 338] +) yang sesuai dengan literatur [26]. Yang kedua, ion fragmen lebih berlimpah dalam spektrum massa Chl sebuah diamati pada m / z 639,0, sesuai dengan [M - (C20H38) + Na] +: kehadiran Na + di ESI-MS fragmentasi bukan merupakan fenomena yang tidak biasa.Adanya puncak pada m/z 871,7 (ditugaskan untuk ion molekul Pheo a) dan tidak adanya m / z 893,8 (untuk CHL a ) dalam spektrum massa fraksi pheophytin (tidak ditampilkan). Fragmentasi kedua puncak yang sama ditemukan pada m / z 871,7 memberi spektrum MS / MS khas untuk Pheo, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4B.Dalam spektrum massa fraksi chlorophyllide, puncak diamati pada m / z 614,2 ditugaskan sebagai puncak ion- molekul Chlid (tidak ditampilkan). Fragmentasi kedua puncak yang sama ditemukan pada m / z 614,2 memberi spektrum MS / MS khas untuk Chlid, seperti yang ditunjukkan pada Gambar 4C. Ion fragmen sesuai dengan [M - CH30H] + dan [M - COOCH3] +, di 583,1 dan 555,2 m / z masing-masing ditemukan.

KesimpulanPenggunaan VIS spektrometri, HPLC-VIS dan analisis ESI-MS / MS digunakan untuk identifikasi klorofil dan turunannya pheophytin dan chlorophyllide dalam campuran murni mereka (fraksi klorofil, pheophytin dan chlorophyllide, masing-masing). Seperti yang diharapkan, komponen utama dalam pecahan klorofil, pheophytin dan chlorophyllide diidentifikasi sebagai klorofil a & b, pheophytin a & b dan chlorophyllide, masing-masing.