toksisitas subkronis ekstrak etanol 70% daun wungu ... · bahan dan alat ... 4 histopatologi ginjal...
TRANSCRIPT
TOKSISITAS SUBKRONIS EKSTRAK ETANOL 70% DAUN
WUNGU (Graptophyllum pictum (L.) Griff) PADA MENCIT
REZANA FALACHI
DEPARTEMEN BIOKIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2012
ii
ABSTRAK
REZANA FALACHI. Toksisitas Subkronis Ekstrak Etanol 70% Daun Wungu
(Graptophyllum Pictum (L.) Griff) pada mencit. Dibimbing oleh EMAN
KUSTAMAN dan DIMAS ANDRIANTO.
Daun wungu (Graptophyllum pictum (L.) Griff) merupakan salah satu
tanaman dari famili Acanthaceae. Tanaman ini mengandung senyawa alkaloid,
flavonoid, saponin, tanin, dan steroid, serta memiliki aktivitas antidiabetes.
Namun keamanan pengonsumsian tanaman ini belum diuji, sehingga perlu
dilakukan uji toksisitas subkronis secara in vivo dan pengamatan histopatologi.
Toksisitas subkronis daun wungu dilakukan selama 3 bulan. Selama perlakuan
mencit dicekok ekstrak daun wungu tiap hari dengan dosis 100 mg/kg, 500 mg/kg,
dan 1000 mg/kg, serta akuades sebagai normal. Pengukuran berat badan mencit
dan pengamatan kematian dilakukan selama penelitian. Bobot badan mencit
selama perlakuan mengalami kenaikan. Ekstrak daun wungu pelarut etanol 70%
tidak diperoleh nilai LD50 toksisitas subkronis. Jumlah kematian kelompok normal
sebanyak 4 ekor, kelompok 100 mg/kg 3 ekor, kelompok 500 mg/kg 2 ekor, dan
kelompok 1000 mg/kg 1 ekor. Pemberian ekstrak daun wungu pelarut etanol 70%
dosis 100 mg/kg dan 500 mg/kg memberikan kerusakan yang cukup parah pada
organ ginjal, jantung, dan paru-paru, serta dosis 1000 mg/kg memberikan
kerusakan pada organ ginjal. Pemberian ekstrak daun wungu pelarut etanol 70%
memberikan efek kerusakan pada beberapa organ.
Kata kunci: Daun wungu, Toksisitas subkronis, Ekstrak etanol, Histopatologi
iii
ABSTRACT
REZANA FALACHI. Subchronic Toxicity of 70% Ethanol Extracts
(Graptophyllum Pictum (L.) Griff) leaf in mice. Under the direction of EMAN
KUSTAMAN dan DIMAS ANDRIANTO.
Graptophyllum pictum (L.) Griff is one of the family Acanthaceae. This
plant contains alkaloid compounds, flavonoids, saponins, tannins, and steroids, as
well as having antidiabetic activity. But consume this plant safely has not been
test, so it needs subchronics toxicity test and histopathological observations. The
subchronics toxicity of Graptophyllum pictum (L.) Griff leaf will do for 3 months.
During the treatment of mice give peroral Graptophyllum pictum (L.) Griff
extract daily and divide into 4 doses, they are 100 mg/kg, 500 mg/kg, 1000
mg/kg, and distilled water as control. Measurements of mice body weight and
mortality observations made during the study. Mice body weight has increase
during the study. Graptophyllum pictum (L.) Griff leaf ethanol extract doesn’t
give number of LD50 subchronic toxicity. Number of death mice in normal groups
is 4 mice, 100 mg/kg groups is 3 mice, 500 mg/kg group is 2 mice, and 1000
mg/kg is one mice. Graptophyllum pictum (L.) Griff leaf ethanol extract for dose
100 mg/kg and 500 mg/kg give damage in histopathology of kidney, heart, and
lung, for dose 1000 mg/kg give damage in histopathology of kidney.
Graptophyllum pictum (L.) Griff leaf ethanol extract give damage effect in organs.
Keyword: Graptophyllum pictum (L.) Griff leaf, Subchronic toxicity, Ethanol
extract, Histopathology
iv
TOKSISITAS SUBKRONIS EKSTRAK ETANOL 70% DAUN
WUNGU (Graptophyllum pictum (L.) Griff) PADA MENCIT
REZANA FALACHI
Skripsi
sebagai salah satu syarat memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Biokimia
DEPARTEMEN BIOKIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2012
5
Judul : Toksisitas Subkronis Ekstrak Etanol 70% Daun Wungu (Graptophyllum
Pictum (Linn) Griff) pada Mencit.
Nama : Rezana Falachi
NIM : G84070069
Disetujui
Komisi Pembimbing,
Ir. Eman Kustaman Dimas Andrianto, M.Si
Ketua Anggota
Diketahui,
Dr. I Made Artika, M. App. Sc
Ketua Departemen Biokimia
Tanggal Lulus:
i
PRAKATA
Puja puji serta syukur penulis ucapkan pada Allah SWT yang telah menjadi
motivasi terbesar penulis untuk menyelesaikan usulan penelitian ini dengan
menciptakan dunia dan semesta alam yang melimpah akan ilmu pengetahuan ini.
Tak lupa pula shalawat serta salam kepada Nabi Muhammad SAW yang telah
menjadi panutan serta pemimpin di dunia ini sehingga penulis dapat termotivasi
dan lancar dalam penyelesaian usulan penelitian ini.
Terima kasih juga penulis ucapkan pada Ir. Eman Kustaman dan Dimas
Andrianto, M.Si atas bantuan dan bimbingannya sehingga penulis dapat
menyelesaikan usulan penelitian ini sebaik mungkin. Penulis juga mengucapkan
terima kasih yang sangat besar pada kedua orang tua penulis yaitu Bapak
Muhammad Tauchid dan Ibu Sofiatul Hanani atas doa dan motivasinya untuk
kelancaran serta kesuksesan penulis. Penulis juga mengucapkan terimakasih
sebesar-besarnya kepada Rama Andhita, Muhammad Taufan, Rezsa Berri, Ganep,
Fitri, Fajri, Ayu dan seluruh sahabat yang telah mendukung dan mendoakan
penelitian penulis, serta Pak Nana, Pak Yadi, Pak Arya, Bu Tini, Bu Tuti, Bu
Merry dan seluruh staf Biokimia IPB yang setia membantu dan memberikan
semangat kepada penulis.
Bogor, Juni 2012
Rezana Falachi
ii
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Kota Sidoarjo, Provinsi Jawa Timur pada tanggal 12
Juni 1989 sebagai anak sulung dari 3 bersaudara, pasangan Muhammad Tauchid
dan Sofiatul Hanani.
Penulis lulus dari SMA Negeri 6 kota Bogor tahun 2007 dan pada tahun
yang sama lulus seleksi masuk IPB lewat jalur Seleksi Penerimaan Mahasiswa
Baru (SPMB). Penulis kemudian memilih Mayor Biokimia, FMIPA IPB pada
tahun berikutnya.
Selama perkuliahan, penulis pernah aktif dalam organisasi kemahasiswaan
sebagai staff komisi 3 Dewan Perwakilan Mahasiswa (DPM) FMIPA periode
2008-2009 dan staff departemen sosial dan lingkungan Badan Eksekutif
Mahasiswa (BEM) FMIPA periode 2009-2010. Penulis pernah pula melakukan
praktik lapangan di Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan
Sumber Daya Genetik Pertanian Jl. Tentara Pelajar No. 3A Bogor. Praktik lapang
dilakukan mulai bulan Juli hingga Agustus 2010 dan membuat karya ilmiah yang
diberi judul Penapisan Padi Transgenik Penanda Aktivasi Varietas Taipei 309
Untuk Toleransi Cekaman Kekeringan.
iii
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL .............................................................................................. iv
DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... iv
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ v
PENDAHULUAN ............................................................................................... 1
TINJAUAN PUSTAKA
Daun Wungu .................................................................................................... 2
Metode Ekstraksi dan Pelarut ........................................................................... 2
Uji Toksisitas ................................................................................................... 3
Hati .................................................................................................................. 3
Ginjal ............................................................................................................... 4
Histopatologi .................................................................................................... 4
BAHAN DAN METODE
Bahan dan alat .................................................................................................. 5
Metode ............................................................................................................. 5
HASIL DAN PEMBAHASAN
Keadaan Hewan Coba ...................................................................................... 6
Potensi toksisitas subkronis (LD50) ................................................................... 7
Gambaran Histopatologi Ginjal ........................................................................ 8
Gambaran Histopatologi Hati ........................................................................... 9
Pengamatan Histopatologi Organ Pendukung ................................................. 10
SIMPULAN DAN SARAN ............................................................................... 14
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 14
LAMPIRAN ...................................................................................................... 18
iv
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Klasifikasi toksisitas ......................................................................................... 3
2 Bobot badan, konsumsi pakan, dan efisiensi ...................................................... 6
3 Hasil pengamatan histopatologi ginjal ............................................................... 8
4 Hasil pengamatan histopatologi hati ................................................................ 10
5 Hasil Pengamatan histopatologi otak ............................................................... 11
6 Hasil pengamatan histopatologi usus ............................................................... 11
7 Hasil pengamatan histopatologi limpa ............................................................. 13
8 Hasil pengamatan histopatologi jantung .......................................................... 12
9 Hasil pengamatan histopatologi paru-paru ....................................................... 13
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Daun wungu (Graptophyllum pictum (L) Griff) ................................................. 2
2 Bobot badan mencit selama penelitian ............................................................... 7
3 Jumlah kematian mencit selama perlakuan ........................................................ 7
4 Histopatologi ginjal mencit bulan pertama ........................................................ 9
5 Histopatologi hati mencit bulan pertama ......................................................... 10
6 Histopatologi otak bulan pertama .................................................................... 11
7 Histopatologi usus bulan pertama .................................................................... 11
8 Histopatologi jantung bulan pertama ............................................................... 12
9 Histopatologi paru-paru bulan pertama ............................................................ 13
v
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Gambaran umum penelitian ............................................................................ 19
2 Diagram alir uji toksisitas subkronis ................................................................ 20
3 Diagram alir histopatologi organ ..................................................................... 21
4 Redemen ekstrak daun wungu pelarut etanol 70% ........................................... 22
5 Nilai LD50 toksisitas subkronis ........................................................................ 22
6 Bobot badan mencit selama perlakuan ............................................................. 23
7 Pembuatan larutan cekok ................................................................................ 29
1
PENDAHULUAN
Pengobatan secara modern dirasa sangat
mahal, efek samping cukup tinggi dan
hasilnya pun belum tentu memuaskan.
Keadaan semacam ini memacu pemanfaatan bahan alami untuk memperoleh bahan obat
alternatif, salah satunya obat tradisional
(Soedibyo 1998). Tanaman merupakan
sumber utama dalam penemuan obat baru dan
alam Indonesia menyediakan sumber alamiah
yang belum dimanfaatkan. Penggunaan obat
tradisional yang dapat diperoleh dari alam
menjadi alternatif penting dalam mencapai
kualitas kesehatan masyarakat yang lebih baik
(Wahyono 2003). Masyarakat di Indonesia
telah lama mengenal dan menggunakan tanaman berkhasiat obat sebagai salah satu
upaya menanggulangi masalah kesehatan.
Pengetahuan tentang tanaman berkhasiat obat
berdasarkan pada pengalaman dan
keterampilan yang secara turun temurun telah
diwariskan dari satu generasi ke generasi
berikutnya (Kumalasari 2006). Indonesia
memiliki sekurang-kurangnya 9600 spesies
tumbuhan berkhasiat sebagai obat dan kurang
lebih 300 spesies telah digunakan sebagai
bahan obat tradisional oleh industri obat
tradisional (Depkes 2007). Menurut Badan POM (2006), 283 spesies tanaman telah
diregistrasi untuk penggunaan obat
tradisional/jamu. Kelebihan dari pengobatan
dengan menggunakan ramuan secara
tradisional tersebut ialah mempunyai efek
samping kecil dibandingkan dengan
pengobatan kimiawi, mudah diperoleh, dan
harganya relatif lebih murah (Thomas 1989).
Penyembuhan penyakit menggunakan ramuan
tradisional membutuhkan waktu yang lama,
tetapi efek yang diberikan bersifat perlindungan, membangun dan berimplikasi
positif terhadap organ lain yang lemah atau
yang kuat. Hal ini berbeda dengan
penyembuhan menggunakan obat kimia,
proses kerja lebih cepat sehingga bersifat
merusak terhadap organ-organ yang sakit
maupun normal (Soenanto 2005).
Salah satu tanaman yang dapat digunakan
sebagai obat tradisional adalah tanaman
wungu (Graptophyllum pictum (L.) Griff).
Tumbuhan wungu merupakan salah satu
tanaman asli Papua. Tumbuhan wungu sering ditemukan tumbuh liar di pedesaan atau
ditanam sebagai tanaman hias dan tanaman
pagar. Tumbuh baik pada tempat-tempat
terbuka yang terkena sinar matahari, dengan
iklim kering atau lembab. Tumbuhan wungu
pada bagian daun berkhasiat sebagai peluruh
kencing, mempercepat pemasakan bisul,
pencahar ringan, dan pelembut kulit. Hal ini
dikarenakan daun wungu mengandung
senyawa alkaloid yang tidak beracun,
glikosida, steroid, dan saponin (Dalimartha
1999). Ekstrak daun wungu pelarut etanol
70% memiliki inhibisi α-glukosidase sebesar
66,11%, serta mengandung senyawa alkaloid,
flavonoid, saponin, tanin, dan steroid (Irwan
2011).
Keamanan daun wungu jika digunakan sebagai pengobatan belum banyak diteliti,
sehingga diperlukan uji toksisitas yang
dibedakan menjadi uji toksisitas akut,
subkronis, dan kronis. Tujuan uji toksisitas
adalah untuk mengetahui spektrum efek
toksik serta hubungan dosis dan toksisitas
pada pemberian berulang dalam jangka waktu
tertentu. Umumnya pengukuran toksisitas
dapat dilakukan secara in vivo yang
menggunakan hewan percobaan. Ekstrapolasi
hasil uji dari hewan percobaan ke manusia sulit dilakukan namun penggunaan hewan
percobaan mempunyai beberapa keuntungan
antara lain mudah dilakukan, harganya murah,
dan dapat dikontrol (dosis dan lama
percobaan), serta pengamatan lebih rinci
terhadap semua jaringan (melalui operasi).
Pengamatan dapat dilakukan terhadap
kerusakan hati dan ginjal (Ganong 2003).
Pengujian toksisitas akut ekstrak daun wungu
tidak memberikan efek yang berbahaya
hingga dosis 4000 mg/kg (Olagbende-Dada et al. 2011). Namun pengujian toksisitas
subkronis ekstrak daun wungu belum pernah
dilakukan. Pemeriksaan toksisitas subkronis
penting dilakukan terutama terhadap
pemakaian obat tradisional atau tanaman obat
yang sering digunakan dalam jangka waktu
lama (Wahjoedi et al. 1996).
Evaluasi tidak hanya melalui LD50, tetapi
juga dilengkapi dengan pemeriksaan
laboratorium klinik dan pembuatan preparat
histopatologi dari organ yang dianggap
memperlihatkan kelainan (Darmansjah 1995). Hati dan ginjal merupakan organ yang rentan
terhadap pengaruh zat kimia. Kerentanan ini
terjadi karena erat fungsinya dalam proses
sirkulasi darah. Hati dapat mudah
berhubungan dengan zat yang diserap dari
saluran pencernaan dan ginjal melalui vena
porta (Koeman 1987).
Penelitian ini bertujuan untuk menguji
toksisitas subkronik serta mengamati
histopatologi hati dan ginjal, serta organ
pendukung mencit pada ekstrak daun wungu pelarut etanol 70%. Hipotesis penelitian ini
yaitu daun wungu dengan menggunakan
2
Gambar 1 Daun wungu (Graptophyllum
pictum (L) Griff)
pelarut etanol 70% aman dikonsumsi setelah
melewati uji toksisitas subronik. Hal ini
diharapkan sebagai informasi awal mengenai
keamanan pengonsumsian daun wungu untuk
obat yang berkhasiat.
TINJAUAN PUSTAKA
Daun Wungu
Tanaman wungu memiliki sistematika
taksonomi yang terdiri dari kingdom Plantae,
divisi Spermatophyta, kelas Dicotyledonae,
ordo Tubiflorae, famili Acanthaceae, genus
Graptophyllum, spesies Graptophyllum
pictum (Linn) Griff (Syamsuhidayat dan
Hutapea 1991). Tanaman wungu berasal dari
Irian dan Polynesia, dapat ditemukan dari dataran rendah sampai pegunungan dengan
ketinggian 1250 meter di atas permukaan laut
(Heyne 1987). Tanaman wungu sering
ditemukan tumbuh liar di pedesaan atau
ditanam sebagai tanaman hias dan tanaman
pagar. Tumbuh baik pada tempat-tempat
terbuka yang terkena sinar matahari, dengan
iklim kering atau lembab. Tanaman wungu
merupakan tanaman perdu atau pohon kecil,
dengan tinggi 1.5-3 m, batang berkayu. Kulit
dan daun berlendir dan baunya kurang enak.
Wungu memiliki daun yang letaknya berhadap-hadapan. Perbungaan majemuk dan
tersusun dalam rangkaian berupa tandan yang
berwarna merah tua. Tanaman ini memliki 3
varietas, yaitu yang berdaun ungu, hijau, dan
belang-belang putih. Namun yang digunakan
sebagai obat adalah varietas yang berdaun
ungu (Wijayakusuma et al. 1996).
Secara tradisional daun wungu telah
dimanfaatkan sebagai obat luar untuk
mengobati borok, bisul dan kudis. Air rebusan
daunnya dapat diminum untuk mengobati penyakit wasir, batu empedu dan penyakit
hati. Bunganya bermanfaat sebagai pelancar
haid (Wijayakusuma et al. 1996). Daun
tumbuhan ini mengandung alkaloida yang
tidak beracun, glikosida, steroida, dan
saponin. Batang daun tumbuhan wungu
mengandung kalsium oksalat, asam format,
dan lemak (Dalimartha 1999).
Metode Ekstraksi dan Pelarut
Ekstraksi merupakan proses pemisahan
senyawa campuran dengan menggunakan
pelarut yang sesuai. Ekstraksi digunakan
untuk mengisolasi produk alam dari jaringan
asli kering tumbuh-tumbuhan. Produk alam
volatil diisolasi dengan cara distilasi uap,
sedangkan produk non volatil diisolasi dengan
cara perendaman atau maserasi dalam satu
pelarut (Kusnaeni 2008). Secara umum
ekstraksi senyawa metabolit sekunder menggunakan metode maserasi dengan
pelarut polar atau nonpolar.
Maserasi merupakan proses perendaman
sampel pelarut organik yang digunakan pada
temperatur ruangan. Proses ini sangat
menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan
alam karena dengan perendaman sampel
tumbuhan akan terjadi pemecahan dinding dan
membran sel akibat perbedaan tekanan antara
di dalam dan di luar sel sehingga metabolit
sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut organik dan ekstrak
senyawa akan sempurna karena dapat diatur
lama perendaman yang dilakukan. Pemilihan
pelarut untuk proses maserasi akan
memberikan efektivitas yang tinggi dengan
memperhatikan kelarutan senyawa bahan
alam pelarut tersebut. Prinsip dari ekstraksi
maserasi adalah penyarian zat aktif yang
dilakukan dengan cara merendam serbuk
dalam cairan penyari yang sesuai selama
sehari atau beberapa hari pada suhu kamar dan terlindung dari cahaya (Sudjadi 1986).
Keuntungan dari metode ini adalah
peralatannya yang sederhana, sedang
kerugiannya antara lain, waktu yang
diperlukan untuk mengekstrak sampel cukup
lama, cairan penyari yang digunakan lebih
banyak, tidak dapat digunakan untuk bahan-
bahan yang mempunyai tekstur keras seperti
benzoin, tiraks, dan lilin (Taofik 2010).
Kepolaran suatu pelarut menunjukkan
tingkat kelarutan pelarut air ataupun pelarut
organik terhadap suatu bahan. Kepolaran ini timbul dari perbedaan dua kutub kelarutan.
Kecenderungan suatu bahan yang lebih larut
dalam air disebut memiliki sifat yang polar
dan sebaliknya yang cenderung lebih larut
dalam pelarut organik disebut nonpolar
(Sudarmadji et al. 2003). Pemilihan pelarut
merupakan salah satu faktor yang dapat
menentukan kesempurnaan proses ekstraksi.
Pelarut yang digunakan pada proses ekstraksi
harus dapat menarik komponen aktif dari
campuran dalam sampel (Gamse 2002). Faktor-faktor yang harus diperhatikan
dalam memilih pelarut diantaranya,
3
Tabel 1 Klasifikasi toksisitas
Dosis
(mg/kg)
Tingkat Keracunan
<5 Supertoksik
5-50 Amat sangat toksik
50-500 Sangat toksik 500-5000 Toksik sedang
5000-15000 Toksik ringan
>15000 Praktis non toksis
Sumber: (Lu 1995)
selektivitas, sifat pelarut dan kemampuan
pelarut untuk mengekstraksi, tidak bersifat
racun, mudah diuapkan, dan relatif murah
(Gamse 2002). Pelarut yang digunakan dalam
proses ekstraksi dapat menembus pori-pori
bahan padat sehingga bahan yang ingin
diekstrak dapat dengan mudah tertarik. Pelarut
yang umum digunakan diantaranya, etil asetat,
heksana, eter, benzena, toluena, etanol,
isopropanol, aseton dan air (Simpen 2008).
Uji Toksisitas
Toksisitas merupakan suatu sifat relatif
dari zat kimia dan sejauh menyangkut diri
manusia secara langsung atau tidak langsung,
mungkin diperlukan atau tidak diperlukan.
Namun, toksisitas selalu menunjuk ke suatu
efek berbahaya atas mekanisme biologi
tertentu (Loomis 1978).
Menurut Loomis (1978), pada umumnya
uji toksisitas dapat dibagi menjadi dua
golongan yaitu uji toksisitas umum dan toksisitas spesifik. Uji toksisitas umum
meliputi uji toksisitas akut, toksisitas
subkronis, serta toksisitas kronis. Uji
tokisisitas spesifik meliputi uji potensi,
teratogenik, reproduksi, mutagenik, dan uji
prilaku. Sedangkan Lu (1995) menggolongkan
uji toksisitas menjadi tiga jenis berdasarkan
lama masa pajanan dengan toksikan, yakni
toksisitas akut, toksisitas jangka pendek, dan
toksisitas jangka panjang.
Toksisitas subkronik adalah pengaruh yang merugikan pada hewan percobaan yang
timbul sebagai akibat pemberian takaran
harian berulang dari bahan kimia atau bahan
lain, dengan periode pemaparan selama 3
bulan (Deptan 2007). Sekurang-kurangnya
digunakan tiga kelompok dosis dan satu
kelompok kontrol. Batas uji dosis toksisitas
subkronis sebesar 1000 mg/kg bobot badan
(Harmita & Radji 2008). Menurut
Environmental Protection Agency (EPA
1998), LD50 digunakan untuk mengetahui
kematian 50% hewan percobaan dalam 24-96 jam. Pengaruh LD50 secara umum diukur
menggunakan dosis bertingkat. Kisaran
tingkat dosis yang digunakan yaitu dosis
terendah yang hampir tidak mematikan
seluruh hewan percobaan dan dosis tertinggi
yang dapat menyebabkan kematian seluruh
atau hampir seluruh hewan percobaan. Setiap
hewan percobaan akan memberikan reaksi
yang berbeda pada dosis tertentu. Perbedaan
reaksi akibat pemberian suatu zat diakibatkan
oleh perbedaan tingkat kepekaan setiap hewan (Guyton dan Hall 1997). Faktor-faktor
yang berpengaruh terhadap LD50 adalah
spesies, strain, jenis kelamin, umur, berat
badan, cara pemberian, faktor lingkungan,
kesehatan hewan, dan diet (Balls et al. 1991)
Tingkat keracunan senyawa kimia
berdasarkan nilai LD50 dapat diklasifikasikan
seperti pada tabel 1.
Hati
Hati merupakan kelenjar terbesar dan
mempunyai fungsi yang penting bagi
kehidupan. Hati terletak di dalam rongga
abdomen sebelah kanan atas di bawah
diafragma. (Dyce et al. 2002). Organ ini
diselubungi oleh kapsula fibrosa yang dilindungi peritoneum visceral (Martini 1992).
Hati mencit terdiri dari 4 lobus yang menyatu
pada bagian dorsal, yaitu lobus median yang
dibagi menjadi kiri dan kanan oleh bifukatio,
lobus lateral kiri, lobus lateral kanan yang
dibagi secara horisontal menjadi anterior dan
posterior dan lobus kaudal yang terdiri dari
bagian dorsal dan ventral (Harada et al. 1999).
Secara garis besar, fungsi hati dapat
digolongkan menjadi lima besar, yaitu
detoksifikasi, sekresi, penyimpanan cadangan makanan, hematologis, proteksi, dan juga
berperan dalam proses metabolisme
biomolekul (karbohidrat, lipid, asam amino,
hormon, dan bilirubin) (Kaplan & Pesce
1998). Hati dapat mensintesis lebih dari 1000
protein plasma, seperti albumin dan globulin
secara de novo dari asam amino esensial dan
non esensial. Hati juga dapat mensintesis
asam lemak, trigliserida, kolesterol,
apolipoprotein, lipoprotein, dan kolesterol
ester dalam fosfolipid. Beberapa bahan hasil
metabolisme ini dapat tersimpan dalam hati, seperti glikogen, trigliserida, Fe, dan Cu
(Stockham & Scott 2002).
Hati merupakan salah satu organ yang
terlibat dalam metabolisme zat makanan serta
sebagian besar obat dan toksikan. Hepatosit
merupakan sel utama yang bertanggung jawab
terhadap peran sentral hati dalam
metabolisme. Organ ini paling umum
mengalami kerusakan karena racun. Hal ini
disebabkan hati menerima suplai darah dari
vena porta sekitar 80% yang mengalir dari
4
saluran pencernaan (Maclachlan & Cullen
1995). Sebagian besar toksikan memasuki
tubuh melalui sistem gastrointestinal, dan
setelah diserap toksikan dibawa oleh vena
porta ke hati. Hati memiliki enzim yang
mampu memetabolisme xenobiotik (terutama
sitokrom P-450). Hal ini menyebabkan
sebagian besar toksikan menjadi kurang toksik
dan mudah larut air, sehingga lebih mudah
diekskresikan. Toksikan dapat menyebabkan
berbagai perubahan pada berbagai organel sel hati, sehingga mengakibatkan perlemakan
hati, nekrosis hati, kolestasis, dan sirosis (Lu
1995).
Nekrosis hati adalah kematian sel hati.
Nekrosis dapat bersifat fokal (sentral,
pertengahan, dan perifer) atau masif. Pada
umumnya nekrosa toksopatik hanya
memerlukan waktu singkat untuk
menimbulkan gejala klinis. Biasanya secara
histopatologi terlihat nekrosa berkelompok,
teratur, dan tersebar di seluruh hati, akan tetapi bila racun sangat kuat maka akan
terlihat gambaran nekrosa terpencar. Sirosis
hati adalah suatu keadaan yang
menggambarkan pengerasan hati. Sirosis
dapat disebabkan oleh berbagai hal tetapi
penyebabnya belum diketahui secara pasti.
Pada umumnya bahan-bahan toksik dan
parasit dapat menyebabkan sirosis hati
(Ressang 1984, Price & Wilson 1995).
Ginjal Ginjal merupakan organ utama yang
berperan terhadap homeostatis air dan
elektrolit. Ginjal juga merupakan organ utama
yang terkena efek toksisitas jika tubuh
terpapar zat toksik. Fungsi utama ginjal adalah
mengeluarkan limbah metabolisme,
memusnahkan bahan toksik, mengatur cairan,
garam, keseimbangan asam basa, serta
mengatur tekanan darah (Dellmann & Brown
1992). Selain itu ginjal berfungsi memekatkan
toksikan pada filtrat dan membawa toksikan
melalui tubulus. Ginjal juga memiliki fungsi sebagai penyingkir buangan metabolisme
normal dan mengekskresikan xenobiotik dan
metabolitnya (Lu 1995). Ginjal juga memiliki
fungsi sebagai organ endokrin yang dapat
menghasilkan hormon-hormon eritropoetin,
renin, dan prostaglandin (Huminto et al.
1995). Ginjal terletak di retroperitoneum
vertebralis lumbalis, dibungkus oleh kapsula
yang normalnya dapat bergerak bebas pada
permukaannya (Maxie 1993), berpasangan
dan berwarna merah kecoklatan. Pada umumnya ginjal berbentuk seperti kacang
dengan hillus renalis yaitu tempat masuknya
pembuluh darah dan keluarnya ureter
(Hartono 1992). Ginjal terbagi menjadi dua
bagian, yaitu korteks dan medula, dengan
perbandingan rata-rata 1 banding 2 atau 1
banding 3 (Maxie 1993), dan ukuran ginjal
dalam berbagai spesies sangat ditentukan oleh
jumlah nefron (Ganong 2003). Ginjal mencit
bertekstur lembut, berwarna coklat
kemerahan, berada di dorsal dinding tubuh,
dikelilingi jaringan lemak dan termasuk
unilobular dengan papilla tunggal. Ginjal kanan normalnya berada lebih anterior
daripada ginjal kiri dan pada kelamin jantan
lebih berat dibandingkan pada kelamin betina
(Seely 1999).
Kerusakan yang terjadi pada ginjal dapat
bersifat akut atau kronis karena kerusakan
permanen (Huminto et al. 1995). Gangguan
pada ginjal seperti infeksi ginjal atau
masuknya bahan-bahan racun, polutan, dan
obat-obatan yang merusak ginjal dapat
menyebabkan terhambatnya proses pembentukan urin. Gangguan yang paling
jelas pada kasus gagal fungsi ginjal adalah
kemampuan filtrasi glomerulus menurun.
Akibatnya, jumlah urin berkurang, tekanan
darah meningkat dan timbul racun
metabolisme dalam darah, terutama limbah
metabolisme nitrogen seperti urea dan
kreatinin.
Histopatologi
Histopatologi adalah pemeriksaan morfologi sel atau jaringan pada sediaan
mikroskopik dengan proses pewarnaan untuk
menetapkan diagnosis kelainan degenerasi,
radang atau infeksi dan neoplasma (Rahayu et
al. 2006). Histopatologi merupakan cara
utama untuk diagnosis tumor dan juga
memberikan informasi tentang prognosisnya
dengan cara penilaian tingkat dan stadium
spesimen hasil pembedahan. Diagnosis
histopatologi sebagian besar dilakukan dari
potongan jaringan blok parafin dengan pewarnaan hematoksilin dan eosin
(Underwood 1999).
Jaringan yang berasal dari hasil biopsi atau
eksisi bedah yang dimasukkan dalam larutan
fiksasi (biasanya formaldehid) dan dikirimkan
ke laboratorium histopatologi untuk ditangani
staf medis yang terlatih dan mengenal dengan
baik bentuk makroskopik anatomi. Sampel
jaringan diproses untuk menyiapkan sediaan
histopatologi sesuai prosedur yang digunakan.
Pewarna hematoksilin dan eosin merupakan
pewarna yang paling sering digunakan tetapi ada beberapa pewarnaan lain yang dapat
digunakan untuk menemukan gambaran
5
spesifik dari jaringan. Pewarnaan yang
digunakan pada histopatologi seperti
pewarnaan hematoksilin dan eosin untuk
pewarnaan rutin untuk histologi, Masson’s
trikhrom untuk jaringan ikat, Perls’ untuk
hemosiderin, Ziehl-Neelsen untuk basil tahan
asam, Grocott’s silver untuk jamur, dan
sebagainya (Underwood 1999).
BAHAN DAN METODE
Bahan dan alat
Bahan-bahan yang digunakan dalam
penelitian ini adalah daun wungu yang
diperoleh dari Pusat Studi Biofarmaka (PSB)-
IPB Bogor, akuades, etanol 70%, Buffer
Neutral Formaline (BNF) 10%, etanol 80%, etanol 95%, etanol absolut, xilol, Mayer’s
Haematoxylin, LiCl, pewarna Eosin, dan
permounting medium.
Alat-alat yang dipakai adalah corong kaca,
kertas saring, labu Erlenmeyer, gelas piala,
pipet mikro, pipet volumetrik, pipet tetes,
rotavapour, Tissue Tec, oven, preparat,
mikroskop cahaya, dan kamera.
Metode
Ekstraksi Daun Wungu (BPOM 2005)
Daun wungu yang telah didapat, diproses dengan dua tahapan, preparasi dan ekstraksi.
Daun wungu (Graptophyllum pictum (L.)
Griff) dikeringkan dalam oven dengan suhu
40-50°C selama 5 hari. Simplisia daun wungu
yang sudah kering kemudian digiling hingga
berukuran 100 mesh dan berbentuk serbuk
(dengan kadar air ≤ 10 %). Sampel yang
berbentuk serbuk dilanjutkan dengan metode
ekstraksi yang mengacu pada Badan
Pengawas Obat dan Makanan atau BPOM
(2005) yaitu maserasi. Maserasi sampel dilakukan dengan merendam sampel dalam
etanol 70% dengan perbandingan 1:10, proses
ini dilakukan dalam maserator selama 6 jam
dan sesekali diaduk. Kemudian sampel
tersebut didiamkan selama 24 jam, maserat
yang didapat, dipisahkan. Keseluruhan sampel
dihilangkan pelarutnya dalam rotavapour
pada suhu 40°C dan dihasilkan ekstrak kering.
Ekstraksi maserasi penelitian ini (lampiran 4)
diperoleh rendemen rata-rata ekstrak kering
daun wungu pelarut etanol 70% sebesar
5,14% ± 1,31.
Uji Toksisitas Subkronik (Gad 2007)
Toksisitas subkronis dilakukan dengan
menggunakan mencit galur ddY dengan umur
2 bulan, selama 3 bulan yang terdiri dari 4
kelompok. Mencit dikelompokkan secara acak
dengan mempertimbangkan keseragaman
bobot badan. Jumlah ulangan uji toksisitas
subkronik setiap kelompok terdiri atas 10
mencit jantan (Gad 2007). Kelompok normal
yaitu tanpa menerima ekstrak daun wungu dan
hanya diberi akuades. Kelompok perlakuan
memperoleh cekokan ekstrak daun wungu
pelarut etanol 70% dengan dosis 100 mg/kg,
dosis 500 mg/kg, dan dosis 1000 mg/kg
(lampiran 7). Perlakuan tersebut dilakukan
setiap hari. Kerusakan hati, ginjal dan organ-organ pendukung akan diuji setiap bulan
terhadap kerusakan secara histopatologi. Air
minum diberikan secara ad libitum dan
dilakukan pengukuran bobot badan dan
konsumsi pakan selama perlakuan diberikan.
Pembuatan Preparat Histopatologi Hati,
Ginjal, Jantung, Otak, Limpa, Paru-paru,
dan Usus (Humason 1972; Kiernan 1990)
Metode yang digunakan adalah metode
Humason (1972) dan Kiernan (1990) yang terdiri atas 4 tahap, yaitu fiksasi, dehidrasi,
pencetakan (embedding), dan pewarnaan
(staining). Tahap fiksasi dilakukan dengan
memotong organ hati dan ginjal dengan
ukuran 2x2x1 cm, dimasukkan ke dalam
buffer neutral formalin (BNF) 10% selama
3x24 jam, kemudian dipotong lagi dengan
ukuran lebih tipis. Potongan-potongan hati
tersebut dilanjutkan ke tahap dehidrasi, yaitu
dengan perendaman menggunakan etanol
bertingkat (etanol 70%, 80%, 96%, absolut I, absolut II). Kemudian etanol dihilangkan
dengan xilol I, II, dan III masing-masing
selama 40 menit. Infiltrasi menggunakan
parafin cair dilakukan pada suhu 60°C selama
4 kali masing-masing selama 30 menit.
Sebelum pencetakan cetakan dicuci dengan
campuran etanol 96%, xilol, dan air.
Pencetakan dilakukan dengan penuangan
parafin panas dalam blok cetakan sebanyak
setengah cetakan dengan alat Tissue Tec.
Potongan hati dan ginjal dimasukan ke
dalamnya perlahan agar tidak menyentuh dasar cetakan lalu ditutup lagi dengan parafin
cair. Setelah beku organ dalam parafin
tersebut dipotong dengan alat mikrotom
setebal 4-5 um. Potongan yang diperoleh
dimasukkan ke dalam air hangat (40°C) untuk
melelehkan parafin, kemudian diletakkan
dalam kaca objek. Potongan tadi dikeringkan
dalam oven inkubator bersuhu 56°C selama
satu malam.
Tahap pewarnaan Haematoxylin Eosin
(HE) dilakukan setelah parafinisasi, yaitu preparat direndam menggunakan xilol I dan
xilol II masing-masing 2 menit, rehidrasi
6
Tabel 2 Bobot badan, konsumsi pakan, dan efisiensi
Kelompok Pertambahan bobot
badan (gram/har)i
Konsumsi pakan
(gram/hari)
Efisiensi (%)
Normal 0,15 3,59 4,17 100 mg/kg 0,09 3,66 2,45
500 mg/kg 0,14 3,69 3,8
1000 mg/kg 0,16 3,81 4,2
dengan etanol absolut selama 2 menit,
kemudian dengan etanol 95% dan 80%
masing-masing selama 1 menit, dan dicuci
dengan air mengalir. Kemudian preparat
direndam dalam pewarnaan Mayer’s
Haemotoxylin selama 8 menit, dicuci dengan
air mengalir, dimasukkan ke dalam LiCl
selama 30 detik, dan dicuci kembali dengan
air mengalir. Kemudian irisan preparat diberi
pewarna eosin selama 2-3 menit, lalu dicuci.
Setelah itu, irisan hati dicelupkan dalam etanol 95% dan absolut I masing-masing
sebanyak 10 kali dan diteruskan dengan etanol
absolut II selama 2 menit, xilol I selama 1
menit dan xilol II selama 2 menit. Setelah
diangin-anginkan beberapa saat, preparat yang
telah diwarnai tersebut kemudian diberi
permounting medium dan ditutup dengan kaca
penutup. Setelah terbentuk sediaan histologi,
kemudian dilakukan analisis dan pengamatan
terhadap perubahan yang terjadi pada sel-sel
hati dengan menggunakan mikroskop cahaya dan difoto hasil pengamatannya. Pembuatan
dan pengamatan histopatologi organ
dilakukan oleh BALITVET.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Keadaan Hewan Coba Selama perlakuan secara in vivo, salah satu
syarat pada perlakuan hewan coba adalah
kondisi hewan harus dalam keadaan sehat.
Beberapa parameter yang mudah diamati
untuk mengetahui kesehatan hewan coba
adalah dengan mengamati peningkatan bobot
badan dan konsumsi pakan (Lu 1995).
Kondisi tikus yang sehat ini menjadi faktor
yang penting karena dapat memperkecil nilai
galat percobaan yang terukur ketika memasuki
tahap percobaan. Gambar 2 menunjukkan grafik bobot badan hewan coba pada masa
adaptasi dan masa perlakuan. Selama masa
adaptasi, hewan coba memiliki bobot badan
18 gram hingga 20 gram. Memasuki masa
perlakuan terjadi kenaikan bobot badan
mencit seluruh kelompok. Pada kelompok 500
mg/kg dan 1000 mg/kg mengalami kenaikan
yang signifikan pada bulan kedua. Kenaikan
bobot badan mencit seluruh kelompok selama
masa perlakuan merupakan respon
pertumbuhan, khususnya kelompok perlakuan
yang mengalami kenaikan lebih tinggi
dibandingkan kelompok normal. Hal ini
dipengaruhi pula pada konsumsi pakan dan air
minum. Tabel 2 menunjukkan pertambahan
bobot badan seluruh kelompok mencit per hari
selama masa perlakuan, kelompok dosis 500
mg/kg dan 1000 mg/kg mengalami
pertambahan bobot badan sebesar 0,14 gram/
hari dan 0,16 gram/ hari, hal ini tidak berbeda nyata dengan kelompok normal yang memiliki
pertambahan bobot badan sebesar 0,15 gram/
hari. Namun kelompok 100 mg/kg mengalami
pertambahan bobot badan paling kecil, hal ini
dapat dipengaruhi oleh faktor lingkungan dan
kondisi mencit tersebut yang menyebabkan
naik turunnya bobot mencit per hari. Menurut
Smith dan Mangkoewidjojo (1988), bahwa
rata-rata pertumbuhan bobot mencit sebesar 1
gram/hari. Hasil penelitian Hadian (2004)
menunjukkan rata-rata pertambahan bobot badan mencit umur 3-8 minggu sebesar 0,49
g/hari.
Kenaikan bobot badan mencit dipengaruhi
oleh konsumsi pakan yang meningkat tiap
bulannya. Pakan yang digunakan adalah
pakan standar tikus berasal dari perusahaan
Indofeed Bogor. Menurut Priambodo (1995),
kebutuhan pakan bagi seekor tikus putih
setiap harinya kurang lebih sebanyak 10%
dari bobot tubuhnya, jika pakan tersebut
merupakan pakan kering. Konsumsi pakan mencit perhari berdasarkan tabel 2 sebesar 3,8
gram. Menurut Smith dan Mangkoewidjojo
(1988), bahwa seekor mencit dewasa dapat
mengkonsumsi pakan 3-5 gram/hari. Malole
dan Pramono (1989) menyatakan bahwa
tingkat konsumsi makanan dan minuman pada
seekor mencit akan bervariasi menurut suhu
kandang, kelembaban, kualitas makanan,
kesehatan dan kadar air dalam makanan.
Efisiensi penggunaan pakan merupakan
perbandingan antara pertambahan bobot
badan dengan jumlah konsumsi pakan dalam jangka waktu tertentu. Semakin tinggi
pertambahan bobot badan dengan konsumsi
pakan yang sedikit akan meningkatkan nilai
efisien pakan tersebut, artinya dengan pakan
7
Gambar 2 Bobot badan mencit selama penelitian, (----) normal, (----) 100 mg/kg, (----) 500 mg/kg, (----) 1000 mg/kg, (A) masa adaptasi, (B) masa perlakuan
0
5
10
15
20
25
30
35
40
-2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Bob
ot
Ba
da
n (
g)
Minggu Ke-
Gambar 3 Jumlah kematian mencit selama
perlakuan, ■ bulan ke-1, ■ bulan ke-2,
■ bulan ke-3
0
10
20
30
40
Normal 100 500 1000
Ju
mla
h k
em
ati
an
men
cit
(%
)
Dosis (mg/kg)
yang sedikit akan dihasilkan pertambahan
bobot badan yang tinggi. Keefisienan pakan
mencit berdasarkan tabel 2, kelompok normal
sebesar 4,17%, kelompok 100 mg/kg memiliki
efisiensi terendah sebesar 2,45% dan
kelompok 1000 mg/kg memiliki efisiensi
tertinggi sebesar 4,2%. Keefisienan pakan
dipengaruhi oleh kondisi mencit, pakan, dan
lingkungan.
Potensi toksisitas subkronis (LD50)
Ekstrak daun wungu pelarut etanol 70%
memiliki kandungan senyawa alkaloid,
flavonoid, saponin, tanin, dan steroid (Irwan
2011). Uji toksisitas akut ekstrak daun wungu
tidak memberikan efek racun hingga dosis
4000 mg/kg. Nilai LD50 toksisitas akut tidak
dapat dihitung, hal ini dikarenakan tidak
adanya kematian hewan coba seluruh
kelompok selama masa perlakuan
(Olagbende-Dada et al. 2011). Sehingga
diperlukan uji toksisitas subkronis untuk mengetahui efek racun yang terdapat pada
tanaman obat dalam jangka waktu lama.
Gambar 3 menunjukkan jumlah kematian
mencit selama masa perlakuan, kelompok
normal memiliki jumlah kematian lebih
banyak dibandingkan dengan kelompok
perlakuan. Kondisi beberapa organ mencit
kelompok normal pada masa perlakuan
berdasarkan hasil histopatologi mengalami
gangguan yaitu pada organ ginjal, jantung,
dan paru-paru. Organ ginjal mengalami gangguan kongesti dan nekrosis tubulus.
Organ jantung mengalami gangguan
degenerasi serabut otot dan kongesti. Dan
organ paru-paru mengalami gangguan
bronkopneumonia dan infiltrasi sel
mononuklear. Gangguan yang terjadi pada
organ ginjal dan jantung disebabkan oleh zat
toksik (Lu 1995), sedangkan gangguan pada
organ paru-paru disebabkan oleh virus
(Hunter 2006). Kematian kelompok normal
dapat disebabkan oleh kerusakan yang terjadi
pada organ jantung dan paru-paru. Kerusakan yang terjadi dapat diakibatkan oleh faktor
lingkungan. Menurut Malole dan Pramono
(1989) bahwa temperatur kandang yang ideal
untuk mencit adalah 18-29oC dengan rataan
22oC dan kelembaban relatif 30-70%.
Kandang tidak boleh ditempatkan pada area
B
A
A
8
Tabel 3 Hasil pengamatan histopatologi
ginjal untuk berbagai kelompok
Kelompok Bulan Ke-
1 2 3
Normal Kongesti Nekrosis tubulus
Kongesti
100 mg/kg TAKS TAKS Kongesti
500 mg/kg Kongesti Nekrosis tubulus
Kongesti
1000 mg/kg
Kongesti Nekrosis tubulus
Kongesti
TAKS: Tak ada kelainan spesifik
yang bising dan harus memiliki pertukaran
udara yang baik, kelembaban yang baik serta
bebas dari debu. Mencit lebih menyukai
tempat yang gelap (Rakhmadi 2008). Alas
kandang berupa serbuk kayu merupakan salah
satu faktor berkembang baiknya mencit
selama penelitian karena alas kandang harus
non alergi, bebas debu, nontoksik dan kering
untuk mencegah timbulnya gangguan berupa
bau dan iritasi selaput lendir. Alas kandang
pada mencit berfungsi sebagai tempat untuk melakukan aktivitas sehari-hari seperti tempat
tidur, tempat beranak dan tempat membuang
kotoran (Malole dan Pramono 1989). Menurut
Rakhmadi (2008), bahwa penyediaan sekat
alas kandang atau roda kawat pada kandang
dapat melatih mencit untuk lebih aktif
bergerak dan bermain. Sebaliknya, kondisi
mencit pada kandang tanpa sekat terlihat tidak
terlalu aktif. Kegiatan mencit lebih banyak
digunakan untuk makan dan tidur. Bulu
terlihat agak kusam karena bersentuhan langsung dengan alas yang sudah kotor
bahkan ada beberapa mencit yang menjadi
rontok bulu. Menurut Blackley dan David
(1991), kondisi lingkungan yang baik dan
sesuai dengan kebutuhan ternak dapat
menurunkan angka mortalilas. Mortalitas
mencit dipengaruhi oleh kualitas pakan,
kepekaan terhadap penyakit, suhu,
kelembaban, dan manajemen pemeliharaan
mencit.
Gambar 3 juga menunjukkan bahwa jumlah kematian kelompok dosis 100 mg/kg
lebih banyak dibandingkan dengan kelompok
dosis 1000 mg/kg. Hal ini tidak sesuai dengan
pernyataan Guyton dan Hall (1997) bahwa
kisaran tingkat dosis yang digunakan yaitu
dosis terendah yang hampir tidak mematikan
seluruh hewan percobaan dan dosis tertinggi
yang dapat menyebabkan kematian seluruh
atau hampir seluruh hewan percobaan. Hasil
histopatologi menunjukkan bahwa terdapat
kerusakan pada organ ginjal, paru-paru, dan
jantung khususnya pada kelompok 100 mg/kg dan 500 mg\/kg, yang menyebabkan jumlah
kematiannya lebih banyak dibandingkan
kelompok 1000 mg/kg. Perhitungan LD50
berdasarkan persamaan garis diperoleh nilai
LD50 toksisitas subkronis ekstrak daun wungu
pelarut etanol 70% sebesar 0,04 mg/kg
(lampiran 5), namun hasil perhitungan ini
tidak dapat dijadikan acuan. Hal ini
dikarenakan jumlah kematian pada kelompok
100 mg/kg lebih banyak dibandingkan dengan
kelompok 1000 mg/kg, serta kelompok normal yang memiliki jumlah kematian lebih
banyak dibandingkan kelompok perlakuan.
Sehingga nilai LD50 toksisitas subkronis
ekstrak daun wungu pelarut etanol 70% tidak
dapat diperoleh.
Gambaran Histopatologi Ginjal
Ginjal merupakan organ utama yang
terkena efek toksisitas jika tubuh terpapar zat
toksik. Fungsi utama ginjal adalah
mengeluarkan limbah metabolisme,
memusnahkan bahan toksik, mengatur cairan
garam, keseimbangan asam basa, serta mengatur tekanan darah (Dellmann & Brown
1992). Hasil pengamatan histopatologi ginjal
mencit selama masa perlakuan berdasarkan
tabel 3 menunjukkan bahwa kondisi ginjal
pada kelompok normal mengalami kongesti
dan nekrosis tubulus. Kongesti adalah suatu
keadaan adanya darah yang berlebihan di
dalam pembuluh pada daerah tertentu.
Kongesti pada pembuluh darah dapat
berlangsung sesaat atau kongesti akut, atau
dapat berlangsung lama atau kongesti kronis. Jika kongesti berlangsung sesaat, maka tidak
ada pengaruh pada jaringan tersebut. Kongesti
kronis, terdapat perubahan-perubahan yang
permanen dalam jaringan. Keadaan tersebut
memungkinkan terjadinya hipoksia jaringan
yang dapat mengakibatkan penyusutan atau
hilangnya sel-sel dari jaringan (Price and
Wilson 1988). Masuknya suatu substansi
toksik ke dalam tubuh dalam waktu yang lama
akan menyebabkan nekrosis tubulus ginjal
(Runnels et al. 1965). Tubulus proksimal merupakan bagian yang paling mudah
mengalami perlukaan akibat iskemia dan zat
toksik. Hal ini dikarenakan pada tubulus
proksimal terjadi proses absorbsi dan sekresi
(Lu 1995).
Kondisi ginjal pada kelompok perlakuan
tidak berbeda nyata dengan kondisi ginjal
kelompok normal (Gambar 4), terjadi kongesti
dan nekrosis tubulus selama perlakuan.
Kongesti dan nekrosis tubulus dapat
disebabkan oleh perlakuan dengan sediaan uji.
Kelompok 100 mg/kg tidak ada kelainan spesifik pada organ ginjal hingga bulan kedua
9
Gambar 4 Histopatologi ginjal mencit bulan pertama, (1) glomerulus, (2) tubulus proksimal,
() kongesti
masa perlakuan, pada bulan ketiga terjadi
kongesti. Kelompok 500 mg/kg dan 1000
mg/kg mengalami kongesti dan nekrosis
tubulus, nekrosis tubulus organ ginjal
diindikasikan sebagai salah satu faktor
penyebab kematian mencit, hal ini
ditunjukkan pada gambar 3 bahwa jumlah
kematian terbanyak terjadi pada bulan kedua
masa perlakuan. Pada kerusakan sel epitel
tubuli terjadi akibat masuknya toksin yang
menyebabkan kerusakan membran sel, yang
ditandai dengan penurunan ATP untuk penyediaan energi. Dalam hal ini ATP
dibutuhkan untuk proses reabsorpsi zat-zat
dan cairan dalam tubulus. Kerusakan pada
membran sel akan menurunkan produksi ATP
yang dihasilkan di mitokondria dan
pengurangan pompa sodium, sehingga
keseimbangan pengaturan ion sodium-
potasium intraselular terganggu (Cheville
2006). Kegagalan dalam mengatur
keseimbangan ion sodium intraselular
mengakibatkan masuknya sejumlah cairan secara berlebih ke dalam sel. Peningkatan
cairan intraselular tersebut menyebabkan
kebengkakan pada sel, termasuk mitokondria
dan retikulum endoplasmik kasar (Jones et al.
2006). Pada sel yang mengalami kerusakan
tersebut dinamakan degenerasi hidropis epitel
tubuli. Adanya gangguan pada tubuli
mengakibatkan daya selektifitas tubuli
menurun sehingga mempengaruhi
homeostasis tubuh (Hatzios 2005). Sehingga,
semakin lama pemberian ekstrak daun wungu
dan semakin besar dosis yang digunakan, akan
memberikan efek kerusakan pada organ
ginjal.
Gambaran Histopatologi Hati
Hati merupakan salah satu organ yang
terlibat dalam metabolisme zat makanan serta
sebagian besar obat dan toksikan. Organ ini
paling umum mengalami kerusakan karena
racun. Hal ini disebabkan hati menerima
suplai darah dari vena porta sekitar 80% yang
mengalir dari saluran pencernaan (Maclachlan
& Cullen 1995). Hasil uji histopatologi hati
mencit selama perlakuan berdasarkan tabel 4 menunjukkan bahwa kondisi hati kelompok
normal tidak mengalami kelainan spesifik
Normal
10
Tabel 4 Hasil pengamatan histopatologi
hati untuk berbagai kelompok
Kelompok Bulan ke-
1 2 3
Normal TAKS TAKS TAKS
100 mg/kg PMN TAKS PMN
500 mg/kg PMN TAKS TAKS
1000 mg/kg PMN TAKS TAKS
TAKS : Tak ada kelainan spesifik
PMN : Polimorfonuklear
Gambar 5 Histopatologi hati mencit bulan pertama, (1) polimorfonuklear, (2) vena centralis, (3) portal tract
selama perlakuan. Kondisi hati pada kelompok perlakuan tidak memberikan
kerusakan yang berarti terhadap organ, namun
terjadi efek yang diakibatkan pemberian
ekstrak daun wungu, yaitu terdapatnya sel
polimorfonuklear (Gambar 5). Bulan pertama
perlakuan pada seluruh kelompok perlakuan
terdapat sel polimorfonuklear. Sel ini timbul
diakibatkan oleh masuknya zat asing ke dalam
tubuh seperti ekstrak daun wungu yang
menyebabkan terjadinya radang akut hingga
terjadinya luka pada organ hati. Sel
polimorfonuklear termasuk sel neutrofil, yaitu sel pertahanan pertama terhadap kontaminasi
mikroba pada peradangan. Fungsi neutrofil
adalah membersihkan daerah luka dari benda
asing, bakteri (Singer dan Clark 1999) fungi,
protozoa, virus dan sel-sel yang rusak atau
mati (McGavin dan Zachary 2007). Neutrofil
dibentuk di dalam sumsum tulang belakang
(Tizard 1988). Bulan kedua dan ketiga seluruh
kelompok perlakuan tidak ada kelainan
spesifik pada organ hati. Pemberian ekstrak
daun wungu pelarut etanol 70% tidak memberikan kerusakan yang berarti pada
organ hati, hal ini didukung dengan kondisi
organ hati kelompok normal yang tidak
mengalami kelainan spesifik.
Pengamatan Histopatologi Organ
Pendukung
Otak adalah bagian dari susunan saraf
pusat yang terletak di dalam cavum cranii (rongga tengkorak). Berdasarkan strukturnya,
fungsi otak secara umum berkaitan dengan
fungsi vital somatik, otonomik, reflek, dan
suatu fungsi vegetatif agar dapat bertahan
hidup dan memelihara kehidupan (Mardiati
1996). Hasil pengamatan histopatologi otak
mencit berdasarkan tabel 5 menunjukkan
bahwa kondisi otak pada kelompok normal
Normal
11
Gambar 6 Histopatologi otak bulan pertama, (1) nefron.
Gambar 7 Histopatologi usus bulan pertama, (1) sel goblet, (2) vili mukosa
Tabel 6 Hasil pengamatan histopatologi usus untuk berbagai kelompok
Kelompok Bulan ke-
1 2 3
Normal Sel
goblet TAKS (-)
100 mg/kg Sel
goblet
Payer
patches TAKS
500 mg/kg Sel
goblet TAKS (-)
1000 mg/kg Sel
goblet TAKS
Payer patches
TAKS: Tak ada kelainan spesifik
(-): Tidak dilakukan
Tabel 5 Hasil Pengamatan histopatologi
otak untuk berbagai kelompok
Kelompok Bulan ke-
1 2 3
Normal TAKS TAKS TAKS
100 mg/kg TAKS TAKS TAKS 500 mg/kg TAKS TAKS TAKS
1000 mg/kg TAKS TAKS TAKS
TAKS: Tak ada kelainan spesifik
tidak mengalami kelainan spesifik selama perlakuan. Kondisi otak pada kelompok
perlakuan tidak berbeda nyata dengan
kelompok normal (gambar 6). Pemberian
ekstrak daun wungu pelarut etanol 70% tidak
memberikan kerusakan yang berarti terhadap
organ otak.
Usus halus merupakan bagian dari sistem
pencernaan yang berfungsi mencerna dan
menyerap zat-zat makanan seperti asam
amino, lipid dan monosakarida (Banks 1993).
Fungsi utama usus halus adalah absorbsi mikronutrien, mineral dan vitamin. Beda
lokasi usus halus, berbeda pula jenis
mikronutrien yang diabsorbsi (Kandi 2008).
Pengamatan histopatologi organ usus mencit
kelompok normal selama perlakuan
berdasarkan tabel 6, timbulnya sel goblet pada
bulan pertama, dan tidak ada kelainan spesifik
pada bulan kedua dan ketiga.
Kondisi usus pada kelompok perlakuan
tidak mengalami kerusakan yang berarti,
namun terjadi beberapa efek yang diakibatkan pemberian ekstrak daun wungu pelarut etanol
70% (gambar 7). Efek yang ditimbulkan
seperti terjadinya sel goblet dan payer
patches. Kelompok perlakuan di bulan
pertama terdapat banyak sel goblet. Sel goblet
timbul akibat dari pemberian ekstrak daun
wungu pelarut etanol 70%. Salah satu
komponen pertahanan usus halus dan usus besar adalah sel goblet, yang menghasilkan
mukus dan berfungsi untuk mengeluarkan
benda atau zat asing yang masuk (Ardyanti
2006). Bulan kedua pada kelompok 100
mg/kg terdapat payer patches. Payer patches
adalah sekelompok sel goblet yang berada
pada folikel getah bening dan membentuk
daun payer (Murray et al. 1999). Bulan ketiga
pada kelompok 100 mg/kg tidak ada kelainan
spesifik. Sel Goblet dan payer patches
merupakan respon usus terhadap senyawa toksik, hal ini bersifat sementara, karena pada
bulan ketiga tidak terdapat sel goblet dan
12
Tabel 7 Hasil pengamatan histopatologi
jantung mencit untuk berbagai
kelompok
Kelompok Bulan ke-
1 2 3
Normal
De-generasi
serabut
otot
Kongesti
De-generasi
serabut
otot
100
mg/kg TAKS
De-
generasi
serabut
otot
De-
generasi
serabut
otot
500
mg/kg
De-
generasi
serabut
otot
De-
generasi
serabut
otot
De-
generasi
serabut
otot 1000
mg/kg TAKS TAKS TAKS
TAKS: Tak ada kelainan spesifik
Gambar 8 Histopatologi jantung bulan pertama, (1) degenerasi serabut otot, (2) serabut otot
payer patches. Bulan kedua dan ketiga
kelompok 500 mg/kg tidak mengalami
kelainan spesifik pada organ usus. Kelompok
1000 mg/kg tidak mengalami kelainan
spesifik pada bulan kedua dan pada bulan
ketiga terjadi payer patches di organ usus.
Pemberian ekstrak daun wungu pelarut etanol
70% berbagai dosis tidak memberikan
kerusakan yang berarti pada usus namun
memberikan efek dari pemberian ekstrak, hal
ini mengakibatkan munculnya sel goblet dan payer patches yang sifatnya sementara.
Jantung adalah sebuah organ berotot
dengan empat ruang yang terletak di rongga
dada, dibawah perlindungan tulang iga, sedikit
ke posisi kiri sternum. Jantung terdapat di
dalam sebuah kantong longgar berisi cairan
yang disebut perikardium. Keempat ruang
jantung adalah atrium kiri dan kanan serta
ventrikel kiri dan kanan (Corwin 2001).
Pengamatan histopatologi jantung mencit
berdasarkan tabel 7 menunjukkan bahwa kondisi jantung kelompok normal mengalami
degenerasi serabut otot dan kongesti (gambar
8). Degenerasi merupakan perubahan
morfologi tidak berakibat fatal dan masih
dapat pulih. Degenerasi menyebabkan
gangguan pada metabolisme karbohidrat,
protein, dan lemak pada sel (MacKenzie &
Alison 1990). Kongesti adalah keadaan di
mana terdapat darah secara berlebihan di
dalam pembuluh darah pada daerah tertentu
(Ressang 1984). Kondisi jantung pada kelompok 100
mg/kg dan 500 mg/kg mengalami degenerasi
serabut otot selama perlakuan, namun
kelompok 1000 mg/kg tidak mengalami
kelainan spesifik pada organ jantung.
Pemberian ekstrak daun wungu pelarut etanol
70% dapat menyebabkan terjadinya kerusakan
pada organ jantung. Jantung yang mengalami
kelemahan karena degenerasi otot tidak dapat
berkontraksi secara normal sehingga
menyebabkan pemompaan darah tidak
sempurna. Akibatnya, pembuluh darah jantung tidak terisi cukup darah sehingga
tekanan darah turun. Penurunan tekanan darah
secara cepat mengakibatkan berkurangnya
suplai darah sehingga menimbulkan kondisi hipoksia, yang akhirnya menyebabkan daya
kerja jantung semakin melemah (Carlton &
McGavin 1995). Menurut Lu (1995), jantung
mudah dirusak oleh berbagai jenis zat kimia
karena merupakan salah satu organ sasaran.
Zat kimia bekerja secara langsung atau tidak
langsung pada otot jantung melalui susunan
saraf atau pembuluh darah. Suatu toksikan
dapat mempengaruhi salah satu dari pembuluh
darah dan akibat yang ditimbulkan tergantung
dari seberapa penting organ yang disuplai darah oleh pembuluh darah yang terkena.
Limpa adalah jaringan limfoid yang
membentuk organ paling besar dalam tubuh
hewan (Hartono 1992). Fungsi utama limpa
ialah menyimpan darah yang tidak ikut dalam
peredaran darah (Ressang 1984). Pengamatan
histopatologi limpa mencit berdasarkan tabel
8 menunjukkan kondisi limpa kelompok
normal tidak ada kelainan spesifik selama
masa perlakuan. Kondisi limpa kelompok
perlakuan juga tidak ada kelainan spesifik,
namun pada kelompok 500 mg/kg di bulan ketiga terjadi deplesia. Deplesia pulpa merah
adalah nekrosis yang terjadi pada bagian
pulpa merah. Kondisi limpa kelompok
13
Gambar 9 Histopatologi paru-paru bulan pertama, (1) alveol, (2) pneumonia dan infiltrasi sel mononuklear, (3) infiltrasi sel mononuklear
Tabel 9 Hasil pengamatan histopatologi paru-paru mencit untuk berbagai kelompok
Kelompok Bulan ke-
1 2 3
Normal TAKS
Bronko pneumonia
dan infiltrasi sel
mononuklear
TAKS
100 mg/kg
Pneumonia dan
infiltrasi sel
mononuklear
Pneumonia dan
infiltrasi sel
mononuklear
Edema, hiperemia,
dan infiltrasi sel
mononuklear
500 mg/kg Infiltrasi sel
mononuklear Edema pulmonum
Edema pulmonum
dan infiltrasi sel
mononuklear
1000 mg/kg TAKS TAKS Edema
TAKS: Tak ada kelainan spesifik
Tabel 8 Hasil pengamatan histopatologi
limpa mencit untuk berbagai
kelompok
Kelompok Bulan ke-
1 2 3
Normal TAKS TAKS TAKS
100 mg/kg (-) TAKS TAKS
500 mg/kg (-) TAKS
Deplesia
pulpa
merah
1000 mg/kg
(-) TAKS TAKS
TAKS : Tak ada kelainan spesifik
(-) : Tidak dilakukan
perlakuan tidak berbeda nyata dengan
kelompok normal yang tidak ada kelainan
spesifik. Pemberian ekstrak daun wungu
pelarut etanol 70% tidak memberikan efek
kerusakan yang berarti terhadap organ limpa.
Pengamatan histopatologi organ paru-paru
mencit berdasarkan tabel 9 menunjukkan bahwa kondisi paru-paru kelompok normal
mengalami bronkopneumonia dan infiltrasi sel
mononuklear. Bronkopneumonia adalah
terjadinya pneumonia pada bagian
bronkiolitis. Pneumonia terjadi akibat respon
inflamasi terhadap mikroorganisme pada
parenkim paru normal (Hunter 2006).
Infiltrasi sel mononuklear merupakan salah
satu sistem pertahanan dari zat asing yang
dimiliki organ paru-paru. Infiltrasi sel
mononuklear muncul akibat adanya
bronkopneumonia.
Kondisi paru-paru kelompok perlakuan
mengalami pneumonia, infiltrasi sel
mononuklear, edema, dan hiperemia (gambar
9). Efek kerusakan yang terjadi pada
kelompok perlakuan dapat disebabkan oleh
pemberian ekstrak daun wungu pelarut etanol 70%. Kelompok 100 mg/kg mengalami
pneumonia hingga bulan kedua perlakuan.
Mikroorganisme pneumonia akan merusak
kapiler alveolar, sehingga dapat menyebabkan
kesulitan bernapas. Hal ini dapat diperparah
oleh kelemahan jantung, sehingga paru-paru
semakin kekurangan oksigen dan dapat
menyebabkan kematian. Bulan ketiga pada
kelompok 100 mg/kg mengalami edema dan
hiperemia. Edema merupakan pengumpulan
cairan abnormal pada kompartemen ekstrasel yang ditandai dengan meningkatnya volume
cairan ekstraseluler dan ekstravaskuler disertai
dengan penimbunan cairan di sela-sela
jaringan atau rongga serosa (Spector dan
Spector 1993). Hiperemia adalah keadaan di
mana terdapat darah secara berlebihan di
dalam pembuluh darah pada daerah tertentu
14
(Ressang 1984). Adanya edema dan hiperemia
menyebabkan terjadinya infiltrasi sel
mononuklear, sel ini merupakan sel
pertahanan paru-paru untuk membersihkan
luka yang diakibatkan oleh zat asing.
Kelompok 500 mg/kg mengalami edema
selama masa perlakuan. Edema terjadi akibat
dari kongesti yang berkelanjutan, saat kondisi
vena yang terbendung (kongesti), maka terjadi
peningkatan tekanan hidrostatik intravaskular
yang menimbulkan perembesan cairan plasma ke dalam ruang interstitium. Cairan
plasma ini akan mengisi pada sela-sela
jaringan ikat longgar dan rongga badan,
sehingga terjadi edema (Marchelinda 2011).
Pemberian ekstrak daun wungu pelarut 70%
menyebabkan kongesti hingga terjadi edema.
Edema juga terjadi pada kelompok 1000
mg/kg pada bulan ketiga. Pemberian ekstrak
daun wungu pelarut etanol 70% dalam waktu
lama akan memberikan efek kerusakan pada
organ paru-paru. Pemberian ekstrak daun wungu pelarut
etanol 70% memberikan efek kerusakan pada
beberapa organ pendukung. Kelompok 100
mg/kg dan 500 mg/kg mengalami kerusakan
pada organ jantung dan paru-paru. Sedangkan
kelompok 1000 mg/kg tidak memberikan efek
kerusakan yang berarti terhadap histopatologi
beberapa organ pendukung.
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Ekstrak daun wungu pelarut etanol 70%
tidak diperoleh nilai LD50 toksisitas subkronis.
Pemberian ekstrak daun wungu pelarut etanol
70% dosis 100 mg/kg dan 500 mg/kg
memberikan kerusakan pada organ ginjal,
jantung, dan paru-paru, serta dosis 1000 mg/kg hanya memberikan kerusakan pada
organ ginjal. Pemberian ekstrak daun wungu
pelarut etanol 70% memberikan kerusakan
pada beberapa organ.
Saran
Perlu dilakukan penelitian lanjutan untuk
mengetahui tingkah laku, berat organ, nilai
LD50, dan menggunakan hewan coba
terstandar, serta fasilitas kandang yang lebih
baik.
DAFTAR PUSTAKA
[BPOM RI] Badan Pengawas Obat dan
Makanan Republik Indonesia. 2005.
Gerakan Nasional Minum Temulawak.
Jakarta : BPOM RI.
[BPOM RI] Badan Pengawasan Obat dan
Makanan Republik Indonesia. 2006.
Monograf Ekstrak Tanaman Obat
Indonesia. Jakarta: BPOM RI.
[Depkes] Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. 2007. Keputusan Menteri
Kesehatan Republik Indonesia nomor
381/Menkes/SK/III/2007 tentang
Kebijakan Obat Tradisional Nasional
tahun 2007. Jakarta: Depkes.
[Deptan] Departemen Pertanian Republik
Indonesia. 2007. Peraturan Menteri
Pertanian Nomor
07/Permentan/SR.140/2/2007 tentang
Syarat dan Tatacara Pendaftaran
Pestisida. Jakarta: Deptan
Ardyanti FJ. 2006. Perbandingan gambaran
histopatologi, gambaran darah dan
kimia darah kambing pasca pemberian
daun lamtoro merah (Acacia villosa)
dan kalliandra (Calliandra calothyrsus)
[skripsi]. Bogor: Fakultas Kedokteran
Hewan Institut Pertanian Bogor.
Balls, James M, Jacqueline B. 1991. Animals and Alternatives in Toxicology.
Cambridge: Great Britain at the
University Press.
Banks WJ. 1993. Applied Veterinary
Histology. 3rd Edition. Philadelphia:
Mosby.
Blackley J dan HB David. 1991. Ilmu
Peternakan. Edisi ke-4. Yogyakarta:
Gadjah Mada University Press.
Carlton WW, McGavin MD. 1996. Thomson's
Spesial Veterinary Pathology ed ke-2. St Louis: Mosby.
Cheville NF. 2006. Cell Death and Cell
Recovery. In: Introduction to
Veterinary Pathology Edisi 3. USA:
Blackwell Publishing.
Corwin EJ. 2001. Buku Saku Patofisiologi.
Pendit UB, penerjemah; Endah P,
editor. Jakarta: EGC. Terjemahan dari:
Handbook of pathophysiology.
15
Dalimartha. 1999. Ramuan Tradisional untuk
Pengobatan Hepatitis. Jakarta: Penebar
Swadaya.
Darmansjah I. 1995. Toksikologi. Di dalam:
Ganiswarna SG, editor. Farmakologi
dan Terapi. Jakarta: Bagian
Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Dellmann HD, dan Brown EM. 1992. Buku
teks Histologi Veteriner. Ed ke-3.
Hartono R, penerjemah. Jakarta: UI
Press. Terjemahan dari: Textbook of
veterinary histology.
Dyce KM, Sack WO, Wensing CJG. 2002.
Textbook of Veterinary Anatomy. Ed
ke-3. Philadelphia: Elsevier.
Environmental Protection Agency (EPA).
1998. Health effect Test Guidlines. OPPTS 870.1100. Acute Toxicity
Testing- Acute Oral Toxicity. EPA
712-C-98-190.
Gad S.C. 2007. Animal Models in Toxicology.
Ed ke-2. Taylor & Francais: Boca
Raton.
Gamse T. 2002. Liquid-liquid Extraction and
Solid-Liquid Extraction. New York:
Graz Pr.
Ganong WF. 2003. Buku Ajar Fisiologi
Kedokteran. Jakarta: EGC.
Guyton AC, Hall JE. 1997. Buku Ajar
Fisiologi Kedokteran. Ed ke-9.
Setiawan I, Tengadi KA, Santoso A,
penerjemah; Setiawan I, editor.
Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran,
EGC.
Hadian S. 2004. Performa Hasil Silangan
Mencit Agouti dan Mencit Putih pada
Penambahan Tepung Kunyit (Curcuma
Domestica) dalam Ransum [skripsi].
Bogor: Fakultas Peternakan Institut
Pertanian Bogor
Harada T, Akiko E, Gary AB, Robert RM.
1999. Liver and Gallblader. Di dalam:
Maronpot RR, Gary AB, Beth WG,
editor. Pathology of The mouse. USA:
Cache River Press.
Harmita & Radji M. 2008. Buku Ajar Analisis
Hayati Ed. 3. Jakarta: EGC.
Hartono. 1992. Histologi Veteriner. Bogor:
FKH-IPB.
Hatzios KK. 2005. Metabolism and
Elimination of Toxicants. Di dalam:
Hock B dan Elstner EF. Plant
Toxicology. Edisi ke-4. Marce Dekker.
New York.
Heyne K. 1987. Tumbuhan Berguna
Indonesia. Jilid III. Badan Litbang
Kehutanan. Departemen Kehutanan,
Jakarta.
Humason GL. 1972. Animal Tissue
Techniques. Ed ke-3. San Fransisco:
WH Freeman.
Huminto H, Bahagia S, Estuningsih S,
Koesharto FX. 1995. Patologi Gizi.
Jakarta: Departemen Pendidikan dan
Kebudayaan Direktorat Jendral Pendidikan Dasar dan Menengah
Kejuruan. Proyek Peningkatan
pendidikan dan Kejuruan Non Teknik
II.
Hunter JD. 2006. Ventilator associated
pneumonia. Postgrad Med J 82: 172-8
Irwan F. 2011. Aktivitas Antidiabetes dan
Analisis Fitokimia Ekstrak Air Dan
Etanol Daun Wungu (Graptophyllum
pictum (L.) Griff) [skripsi]. Bogor:
Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam Institut Pertanian
Bogor.
Jones TC, Ronald DH, Norval WK. 2006.
Veterinary Pathology. Edisi ke-6.
USA: Blackwell Publishing.
Kandi MM. 2008. Gambaran Histologis Usus
Tikus Putih (Rattus norvegicus) yang
Diberi Ransum Daging Hasil Fermentasi dengan Lactobacillus
plantarum 1B1 [skripsi]. Bogor:
Fakultas Peternakan Institut Pertanian
Bogor.
Kaplan LA & Pesce JA. 1998. Clinical
Chemistry: Theory Analysis and
Correlation. Ed ke-3. New York:
Mosby Year Book.
Kiernan JA. 1990. Histological and
Histochemical Methods: Theory and
Practice. 2nd Ed. Pengamon:
16
Departement of Anatomy The
University of Western Ontario.
Koeman JH. 1987. Pengantar Umum
Toksikologi (terjemahan).Yogyakarta :
Gajah Mada University Press.
Kumalasari. LOR. 2006. Pemanfaatan Obat
Tradisional dengan Pertimbangan
Manfaat dan Keamanannya. Majalah
Ilmu Kefarmasian, Vol. III, No. 1,
April 2006, 01-07
Kusnaeni V. 2008. Isolasi dan Karakterisasi Senyawa Fraksi n-Heksana dari
ekstrak kulit batang Angsret
(Spathoda campanulata Beauv)
[skripsi]. Malang: Jurusan Kimia.
Fakultas MIPA. Universitas Brawijaya.
Loomis TA. 1978. Essential Of Toxicology.
3rd ed. Philadelphia: Lea & Febiger.
Lu FC. 1995. Toksikologi Dasar : Asas,
Organ, Sasaran, dan Penilaian Resiko.
Ed 2. Jakarta: UI Press.
Maclachlan NJ, Cullen JM. 1995. Liver, Billiary System, and Exocrine
Pancreas. Di dalam: Carlton WW,
McGavin MD, editor. Thomson’s
Special Veterinary Pathology. Ed ke-2.
New York: Mosby Yearbook.
MacKenzie WF, Alison R. 1990. Heart. Di
dalam: Pathology of the Fischer Rat
Reference and Atlas. Australia: Academic Press
Malole MBM dan Pramono CS. 1989.
Penggunaan Hewan-hewan Percobaan
Laboratorium. Departemen Pendidikan
dan Kebudayaan. Direktorat Jendral
Pendidikan Tinggi Pusat Antar
Universitas Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Marchelinda C. 2011. Kajian Histopatologi
Paru-Paru Ayam Broiler yang Diuji
Tantang Virus Avian Infulenza (H5N1)
setelah Pemberian Ekstrak Tanaman
Sirih Merah (Piper Crocatum)
[skripsi]. Bogor: Fakultas Kedokteran
Hewan Institut Pertanian Bogor
Mardiati R. 1996. Buku Kuliah Sistem Otak
Manusia. Edisi ke-1. Jakarta: CV
Agung Seto
Martini F. 1992. Fundamental of Anatomy
and Physiology. Ed ke-2. USA : A
Simon and Schuster Company.
Maxie MG. 1993. The Urinary System. Di
dalam: Jubb KVF, Peter CK and Nigel
P, editor. Pathology of Domestic
Animal. Ed ke-4. Volume ke-2. London: Academic Press.
McGavin D dan Zachary J. 2007. Pathologic
Basic Veterinary Disease . Philadelpia:
Elsevier Inc.
Murray RK, Daryl KG, Peter AM, Viktor
WR. 1999. Biokimia Harper, ed 24.
Jakarta: EKG
Olagbende-Dada SO, Ukpo GE, Coker
HAB, Adesina SA. 2011. Blood
glucose lowering effect of aqueous
extract of Graptophyllum pictum (Linn) Griff. on alloxan-induced
diabetic rats and its acute toxicity in
mice. African Journal of Biotechnology
10(6), pp. 1039-1043
Priambodo S. 1995. Pengendalian Tikus
Terpadu. Seri PHT. Jakarta: Penebar
Swadaya.
Price SA and Wilson LM. 1988.
Pathophysiology Clinical Concepts of
Diseases Processes Ed 2. Jakarta:
EGC.
Price SA, Wilson LM. 1995. Fisiologi Proses-proses Penyakit. Alih bahasa:
Anugerah P. Edisi empat . Jakarta.
Rahayu L, Damayanti R, Wikanta T. 2006.
Gambaran histopatologi pankreas tikus
hiperglikemia setelah mengkomsumsi
k-karagenan dan i-karagenan. Jurnal
Ilmu Kefarmasian Indonesia 4(2): 96-101.
Rakhmadi I. 2008. Performa Mencit Jantan
(Mus Musculus) Umur 28-63 hari pada
Kandang tanpa Sekat dan Bersekat
dengan Alas Kandang yang Berbeda
[skripsi]. Bogor: Fakultas Peternakan
IPB
Ressang AA. 1984. Patologi khusus veteriner. Ed ke-2. Bali: Percetakan Bali.
Runnels RA, WS Monlux & AW Monlux.
1965. Principles of Veterinary
17
Pathology. Ed 7. Iowa: The Iowa State
University Press.
Seely JC. 1999. Kidney. Di dalam: Maronpot
RR, Gary AB, Beth WG, editor.
Pathology of The mouse. USA: Cache
River Press.
Simpen I. 2008. Isolasi cashew nut shell liquid
dari kulit jambu mete (Anarcadium
occidentalle L) dan kajian beberapa
sifat fisiko-kimianya. J Kimia 2:71-76.
Singer AJ dan Clark RAF. 1999. Cutaneus Wond Healing. N England J Med.
341:738-154.
Smith JB dan Mangkoewidjojo. 1988.
Pemeliharaan Pembiakan dan
Penggunaan Hewan Percobaan di
Daerah Tropis. Jakarta: UI press.
Soedibyo M. 1998. Alam Sumber Kesehatan,
Manfaat dan Kegunaan. Jakarta: Balai
Pustaka.
Soenanto H. 2005. Musnahkan Penyakit
dengan Tanaman Obat. Jakarta: Puspa Swara.
Spector WG, Spector TD. 1993. Pengantar
Patologi Umum. ED ke 3. Soetjipto
NS,Harsoyo,Hana A,Astuti P,
penerjemah: Moelyono MPE, editor.
Yogyakarta: Gajah Mada University
Press. Terjemahan dari: An
Introduction to General Pathology. 3th Edition.
Stockham SL, Scott MA. 2002. Fundamentals
of Veterinary Clinical Pathology. Ed
ke-1. Iowa state Pr. Blackwell
Publishing Co.
Sudarmadji S, Haryono B dan Suhardi. 2003.
Prosedur Analisa Bahan Makanan dan
Pertanian. Yogyakarta: Liberty.
Sudjadi 1986. Metode Pemisahan.
Yogyakarta: UGM-Press.
Sudono A. 1981. Pengaruh Interaksi antara
Genotipe dan Lingkungan terhadap
Pertumbuhan, Keefisienan Makanan,
Daya Reproduksi, dan Produksi Susu
Mencit [Desertasi]. Bogor: Pasca
Sarjana Institut Pertanian Bogor.
Syamsuhidayat SS dan Hutapea R. 1991.
Inventaris Tanaman Obat Indonesia (I).
Badan Penelitian dan Pengembangan
Kesehatan. Departemen Kesehatan RI.
Taofik M. 2010. Isolasi dan Identifikasi
Senyawa Aktif Ekstrak Air Duan
Paitan (Thitonia diversifolia) sebagai Bahan Insektisida Botani Untuk
Pengendalian Hama Tungau
Eriohyidae [skripsi]. Malang: Fakultas
Sains dan Teknologi Universitas Islam
Negeri Malang
Thomas ANS. 1989. Tanaman Obat
Tradisional I. Yogyakarta: Kanisius.
Tizard I. 1988. Pengantar Imunologi
Veteriner. Surabaya: Airlangga
University Press.
Underwood JCE. 1999. Patologi Umum dan Sistematik. Sarjadi, penerjemah.
Jakarta: EGC. Terjemahan dari:
General and systematic pathology.
Wahjoedi B, Astuti YN, Winarno W,
Pudjiastuti, Nuratmi B. 1996.
Penelitian Toksisitas Subkronik Infus
Daun Johar (Cassia Slamea Lamk.)
pada Tikus Putih. Bul. Penelitian
Kesehatan vol 24(4)
Wahyono, Hakim L, Wahyuono, S, Mursyidi
A, Verpoorte R., Timmerman H. 2003.
Isolation of Tracheospasmolytic
Compounds From Piper cubeba
Fruits. Ind. J. of Pharm., 14 (3), 119-23
Wijayakusuma H, S Dalimartha dan AS Wirian. 1996. Tanaman Berkhasiat
obat di Indonesia. Jilid ke-4. Jakarta:
Pustaka Kartini.
18
LAMPIRAN
19
Lampiran 1 Gambaran umum penelitian
Preparasi sampel
Ekstraksi etanol 70%
Uji Toksisitas Subkronis
Simplisia
Ekstrak kasar
Histopatologi Hati, Ginjal, dan Organ
pendukung
Daun Wungu
(Graptophyllum pictum (L.)
Griff)
20
Lampiran 2 Diagram alir uji toksisitas subkronis
Ekstrak Etanol 70%
Dosis 100
mg/kg
Dosis 1000
mg/kg
Dosis 500
mg/kg
Pencekokan
mencit
kelompok II
Pencekokan
mencit kelompok
III
Pencekokan
Mencit kelompok
IV
Pencekokan
mencit
kelompok I
(@10 ekor)
Selama 3 bulan
Pengamatan LD50
Akuades
21
Lampiran 3 Diagram alir histopatologi organ
Sampling Organ
Fiksasi
Dalam BNF 10% selama 6-48 jam
Dehidrasi
(Penghilangan air dengan etanol 70%, 80%, 90%, 95% etanol absolut I
dan etanol absolut II masing-masing selama 2 jam)
Clearing
(Pembersihan dengan Xilol I dan Xilol II)
Embedding
(Penanaman jaringan dalam parafin)
Sectioning
(Pengirisan dengan menggunakan mikrotom setebal 5μm)
Mounting
(Penempelan sediaan pada gelas obyek)
Staining
(Pewarnaan Hematoksilin-Eosin )
22
Lampiran 4 Redemen ekstrak daun wungu pelarut etanol 70%
Bobot Sampel (g) Rendemen
Awal Ekstrak (% b/b)
140 9,19 6,56
140 9,15 6,53
210 11,23 5,34
240 13,31 5,54
160 8,14 5,08
240 10,33 4,30
400 21,33 5,33
160 3,96 2,47
Rata-rata : 5,14% ± 1,31
Contoh perhitungan: 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑎𝑤𝑎𝑙× 100% =
9,19 𝑔𝑟𝑎𝑚
140 𝑔𝑟𝑎𝑚× 100% = 6,56%
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑎𝑤𝑎𝑙× 100% =
11,23 𝑔𝑟𝑎𝑚
210 𝑔𝑟𝑎𝑚× 100% = 5,34%
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙
𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑎𝑤𝑎𝑙× 100% =
3,96 𝑔𝑟𝑎𝑚
160 𝑔𝑟𝑎𝑚× 100% = 2,47%
Lampiran 5 Nilai LD50 toksisitas subkronis
Kelompok Dosis
(mg/kg BB)
Log Dosis Jumlah kematian % kematian
100 mg/kg 100 2 3 30
500 mg/kg 500 2,69 2 20
1000 mg/kg 1000 3 1 10
Ket: y: %kematian
x: Log dosis
y = -19,08x + 68,91R² = 0,954
0
5
10
15
20
25
30
35
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5
%kem
atia
n
Log dosis
y = -19,08x + 68,91
jika y = 50
50 = -19,08x + 68,91
x = 1,04
x = Log Dosis
Dosis = ln 1,04
= 0,04
Dosis LD50 =
0,04mg/kg BB
23
Lampiran 6 Bobot badan mencit selama perlakuan
Dosis No
kandang
Bobot badan mencit pada bulan Agustus (gram)
Tanggal
10 11 12 13 14 18 24 28 30
100 mg/kg 1a 20 21 22 23 24 24 25 27 27
1b 21 21 21 22 24 25 27 29 31
2a 22 23 24 24 25 27 26 29 29 2b 21 22 22 20 20 19 18 17 23
3a 22 23 22 23 24 24 24 26 24
3b 23 23 23 24 24 27 28 32 31
4a 23 22 21 22 23 28 30 31 31
4b 24 23 23 24 24 27 26 29 26
5a 21 22 23 24 23 29 30 32 31
5b 20 21 22 23 25 25 27 28 27
500 mg/kg 1a 22 23 23 22 23 24 24 26 26
1b 23 23 24 24 22 24 25 26 26
2a 21 21 21 22 23 25 25 27 30
2b 22 21 22 22 24 25 26 29 26
3a 20 21 20 21 22 27 30 33 33
3b 21 22 22 23 24 28 34 36 36 4a 22 23 24 23 24 28 31 33 32
4b 21 22 22 23 24 25 27 30 27
5a 22 23 23 mati
5b 21 22 23 20 Mati
1000
mg/kg
1a 22 22 23 24 23 26 27 30 30
1b 21 22 23 25 24 27 29 32 32
2a 23 22 22 22 23 27 30 33 34
2b 22 20 21 22 22 27 30 31 32
3a 24 23 23 24 25 25 28 31 30
3b 21 22 23 23 24 27 29 31 31
4a 23 24 24 23 23 27 30 31 33
4b 20 22 23 24 23 25 26 29 29 5a 22 22 22 24 24 25 27 28 27
23
24
5b 21 21 22 24 23 24 25 27 26
Normal 1a 21 22 23 23 23 26 28 30 28
1b 20 21 21 22 23 25 28 31 32
2a 22 22 21 24 24 27 29 31 31
2b 21 22 21 21 24 29 34 38 34
3a 21 22 20 22 23 25 30 34 32
3b 21 20 22 23 24 25 28 30 29
4a 20 23 21 23 22 21 21 23 21
4b 20 21 21 20 20 20 20 19 21
5a 20 22 23 23 21 20 24 23 28
5b 21 21 23 mati
Dosis No
kandang
Bobot badan mencit pada bulan September (gram)
Tanggal
2 3 4 5 8 12 14 16 17 18 19 20 23 29
100
mg/kg
1a 28 30 30 30 30 29 32 33 31 32 33 32 30 32
1b 34 37 37 37 36 37 38 39 38 40 39 40 37 38 2a 30 31 29 29 28 29 29 30 29 27 24 25 22 20
2b 38 28 32 31 30 27 28 26 25 26 28 27 26 27
3a 26 28 29 28 27 25 26 26 27 29 29 30 31 30
3b 34 33 34 31 28 27 26 24 25 23 mati
4a 26 31 31 30 31 30 31 32 30 29 30 histopat
4b 20 16 15 15 21 21 20 19 18 mati
5a 26 30 30 29 28 29 mati
5b 30 30 30 31 34 37 36 38 36 37 35 34 37 35
500
mg/kg
1a 30 37 34 34 36 41 39 38 39 41 41 40 40 41
1b 26 30 29 29 30 32 33 34 32 33 32 33 34 33
2a 30 35 36 35 36 38 36 35 37 36 38 38 39 38
2b 34 38 38 36 38 41 40 41 43 40 41 42 42 41 3a 26 29 29 29 30 30 31 32 34 35 34 33 33 35
3b 30 33 32 32 33 34 33 34 32 36 35 34 34 35
4a 26 28 29 28 30 30 31 32 33 31 32 30 32 33
4b 24 28 29 28 31 33 33 32 31 32 30 histopat
24
Lanjutan Lampiran 6
25
5a
5b
1000
mg/kg
1a 26 28 28 28 29 28 30 31 35 34 33 35 28 30
1b 26 30 29 29 28 31 30 28 Mati
2a 30 35 33 31 32 33 33 32 35 32 33 34 34 34
2b 28 35 33 32 32 36 35 34 35 36 36 35 37 37
3a 30 34 34 34 36 36 35 34 33 36 37 36 36 38
3b 30 34 35 34 33 34 32 33 35 33 34 36 36 37
4a 32 36 35 34 35 35 34 33 36 34 33 histopat
4b 28 35 35 35 36 36 36 34 36 36 37 38 38 39
5a 28 31 32 32 35 37 36 37 38 40 39 40 41 41
5b 30 34 34 34 32 33 34 33 32 34 32 31 31 33
Normal 1a 28 25 24 25 21 31 30 27 27 26 38 26 26 27
1b 32 31 31 30 24 mati 2a 31 34 34 33 33 36 34 34 35 35 34 histopat
2b 34 37 36 35 35 35 35 35 36 37 36 35 35 36
3a 32 36 38 37 36 38 37 36 36 37 35 34 33 35
3b 29 32 33 31 30 34 36 38 40 39 40 42 40 43
4a 21 16 mati
4b 31 18 18 17 18 18 18 17 18 18 19 17 18 19
5a 28 26 26 26 26 28 29 28 27 29 30 32 30 31
5b
Dosis No
kandang
Bobot badan mencit pada bulan Oktober (gram)
Tanggal
4 14 15 18 19 20 21 23 24 25 26 29 31
100
mg/kg
1a 33 34 33 33 33 33 32 33 33 34 34 33 33
1b 40 41 42 42 41 41 40 40 41 39 39 39 38
2a 22 histopat 2b 28 28 28 28 29 27 27 29 30 28 28 28 28
3a 31 33 34 29 34 33 32 30 30 31 26 30 29
3b
4a
25
Lanjutan Lampiran 6
26
4b
5a
5b 36 40 41 39 39 39 39 38 37 41 39 38 37
500
mg/kg
1a 39 42 42 40 40 40 39 39 38 39 38 39 38
1b 34 37 37 36 35 35 35 35 36 35 34 34 34
2a 39 histopat
2b 44 41 42 41 40 41 40 40 39 40 39 39 39
3a 34 35 35 35 35 34 34 33 32 32 34 33 33
3b 36 36 36 34 34 34 33 32 33 34 34 33 33
4a 31 32 32 33 32 32 32 31 31 32 31 31 31
4b
5a
5b
1000 mg/kg
1a 29 30 30 31 31 32 32 33 32 34 34 32 32 1b
2a 35 39 41 39 38 38 38 36 35 38 36 37 36
2b 37 40 39 39 38 38 38 36 36 38 36 36 35
3a 37 37 38 39 39 35 38 36 37 36 37 36 36
3b 36 36 36 37 36 39 35 36 36 36 33 33 33
4a
4b 39 39 39 39 39 38 39 39 39 38 37 36 36
5a 41 41 41 41 40 41 39 39 38 39 38 38 37
5b 31 histopat
Normal 1a 28 26 27 26 26 25 25 24 22 23 24 23 22
1b
2a 2b 35 36 37 36 34 35 34 38 38 37 38 37 37
3a 34 41 40 39 37 39 39 37 37 36 36 36 38
3b 42 40 42 40 39 39 40 38 38 39 39 38 39
4a
4b 19 histopat
5a 32 33 30 31 31 29 29 31 31 30 30 31 30
5b
26
26
Lanjutan Lampiran 6
27
Dosis No kandang
Bobot badan mencit pada bulan Nopember (gram)
Tanggal
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
100 mg/kg 1a 33 34 33 34 34 33 34 33 34 34 1b 37 37 37 35 36 38 37 36 36 35
2a
2b 28 28 28 28 29 28 29 30 29 29
3a 28 30 30 29 28 29 32 30 31 30
3b
4a
4b
5a
5b 36 37 37 37 38 36 39 38 38 38
500 mg/kg 1a 38 39 38 38 38 36 41 38 38 39
1b 34 33 33 34 32 32 34 33 34 33
2a
2b 39 38 38 40 38 38 39 38 39 39 3a 33 33 33 34 33 34 34 35 34 34
3b 32 33 33 34 33 33 35 34 34 34
4a 31 31 31 31 31 31 33 31 31 31
4b
5a
5b
1000
mg/kg
1a 33 32 33 32 33 32 33 32 33 33
1b
2a 36 36 36 37 36 35 37 36 36 36
2b 35 35 35 37 35 34 37 36 36 35
3a 36 36 36 37 38 36 34 37 36 38
3b 32 34 33 33 35 34 36 34 35 35 4a
4b 36 37 36 37 37 36 38 38 38 38
5a 37 39 36 38 38 37 43 40 39 38
5b
Normal 1a 22 22 22 23 22 21 22 21 21 20
27
Lanjutan Lampiran 6
28
1b
2a
2b mati
3a 36 35 34 34 35 32 34 34 34 33
3b 38 37 37 38 37 37 42 39 40 38
4a
4b
5a 31 31 31 30 31 31 35 32 33 31
5b
28
Lanjutan Lampiran 6
29
Lampiran 7 Pembuatan larutan cekok
Hewan coba yang digunakan adalah mencit dengan berat 20 gram. Mencit
dicekok larutan sebanyak 0,1 ml / 20 gram.
Dosis 100 mg/kg
100 mg/kg(BB mencit) = (100 mg/50) / (1000 g/50)
= 2 mg/ 20 g
Mencit dicekok larutan sebanyak 0,1 ml / 20 gram
= 2 mg/ 20 g
= 2 mg / 0,1 ml
= 0,02 g / ml
Dosis 500 mg/kg
500 mg/kg(BB mencit) = (500 mg/50) / (1000 g/50)
= 10 mg/ 20 g
Mencit dicekok larutan sebanyak 0,1 ml / 20 gram
= 10 mg/ 20 g
= 10 mg / 0,1 ml
= 0,1 g / ml
Dosis 1000 mg/kg
1000 mg/kg(BB mencit) = (1000 mg/50) / (1000 g/50)
= 20 mg/ 20 g
Mencit dicekok larutan sebanyak 0,1 ml / 20 gram
= 20 mg/ 20 g
= 20 mg/ 0,1 ml
= 0,2 g/ ml