praktikum blok digestivus (1)

8/18/2019 Praktikum Blok Digestivus (1)

1/9

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI

KUMAN PATOGEN PADA SISTEM DIGESTIF

BAKTERI DAN JAMUR YANG DIPERIKSA

A. Food Poisoning

1. Bacillus cereus 2. Aspergillus flavus

B. Food Borne Deseases

1. Salmonella

2. Shigella

SPESIMEN

a. Makanan, minuman, muntahan

b. Kacang tanah, tempe.

A. FOOD POISONING

A.1. Bacillus cereus

B. cereus menghasilkan berbagai zat ekstraseluler, mempunai kemampuan !

a. Melisiskan lipid "os"at

b. Mengkeruhkan kuning telur

c. #emolisa sel darah merah

d. Mematikan he$an percobaan %intra&ena'

e. (eaksi nekrosis hi)au %kulit'

". Merubah permiabilitas dinding pembuluh darahg. Menebabkan muntah dan diare

h. *ekrosis pada mukosa usus

+ipe keracunan makanan oleh B. cereus !

a. +oksin

b. n"eksi

+oksin ang dihasilkan oleh B. cereus adalah enterotoksin.

+ipe keracunan makanan tipe toksin mempunai $aktu inkubasi lebih pendek

daripada tipe in"eksi, aitu 1- )am.

(ute keracunan !

/nterotoksin saluran pencernaan diserap dinding usus sel

epitel ganglion rangsangan

(angsangan keracunan !

a. Mual

b. Muntah

c. Diare

Pengendalian dan Pencegahan !

A. Pengendalian!a. Mencegah makanan supaa tidak tercemar B. cereus


2/9

b. Menghentikan B. cereus untuk produksi zat ekstraseluler

c. Mengusahakan )umlah produk ekstraseluler B. cereus tetap diba$ah ambang

batas

B. Pencegahan!

0angan membiarkan makanan terlalu lama tidak di makan $alaupun selalu

dipanaskan berulang-ulang sebab toksin emetik tahan terhadap panas.Pada suhu rendah %+ kamar setelah dipanaskan', dapat memberi kesempatan

spora B. cerues untuk tumbuh dan menghasilkan toksin, sehingga toksin dapat

melebihi ambang batas.

solasi dan denti"ikasi !

Morfologi ! gram positi", basil, besar-besar, bentuk batang persegi atau cekung

u)ungna, sendiri-sendiri, berpasangan atau membentuk rantai pendek, tidak

bergerak, spora o&al ang letakna sentral, kadang-kadang berkapsul.

Isolasi da Diagosa !

#ari !

a. pesimen di lakukan pengenceran sampai tingkatan tertentu

b. Pengenceran terakhir dilakukan pemanasan pada air mendidih %membunuh

bakteri selain Bacillus'

c. Dilakukan penanaman pada media Agar plate

d. nkubasi selama 2 23 )am pada suhu 45 67

#ari !

a. Koloni ang tersangka Bacillus kemudian dilakukan pe$arnaan gram. Apabila

di)umpai gram positi" berbentuk batang dilan)utkan ke media u)i

b. nkubasi pada suhu 45 67 selama 1 23 )am

#ari !

a. Dibaca dan dicatat pertumbuhan pada media u)i

b. Dicocokan dengan table ciri-ciri Bacillus

+abel denti"ikasi Bacillus !

*o. pesies B Mo 8ec 9lu 8ac Man Mal uc 9 : ta *it An62 98

1

24

3

B. antrachis

B. cereusB. subtilis

B. thuringensis

6*

6*6*

6*

-

;;


3/9

A.!. Aspergillus s".

Aspergillus sp. Adalah )amur ang termasuk ke dalam kelas Ascomcetes.

Biasana tumbuh sebagai sapro"it pada tumbuh-tumbuhan ang membusuk, tanah,

debu organik, makanan. Aspergillus merupakan kontaminan ang lazim ditemukan di

rumah sakit dan laboratorium.Aspergillus adalah )amur ang membentuk "ilamen-"ilamen pan)ang

bercabang dan dalam media biakan membentuk miselia dan konidiospora.

Aspergillus berkembangbiak dengan pembentukan hi"a atau tunas dan menghasilkan

konidio"ora pembentuk spora. porana dapat tersebar bebas di udara terbuka,

sehingga inhalasina tidak dapat dihindarkan dan masuk melalui pernapasan ke

dalam paru.

Morfologi

Aspergillus mempunai hi"a selebar 2,=-> ?m, bercabang seperti pohon atau

kipas dan miselium bercabang, sedangkan hi"a ang muncul diatas permukaan

merupakan hi"a "ertil, kolonina berkelompok, konidio"ora berseptat atau nonseptat

ang muncul dari sel kaki, pada u)ung hi"a muncul sebuah gelembung keluar darigelembung ini muncul sterigma, pada sterigma muncul konidium-konidium ang

tersusun berurutan mirip bentuk untaian mutiara, konidiumm ini ber$arna %hitam,

coklat, kuning tua dan hi)au' ang memberi $arna tertentu pada )amur.

Bia#a da sifa$ "%r$&'(&)a

Koloni ber$arna putih pada Potato Detrose Agar %PDA' 2= 7 dan berubah

men)adi hitam ketika konidia terbentuk. uhu optimum 4=-45 7, aerob.

P%'%ri#saa Mi#ros#o"i# Lags&g

pesimen diberi K6# 1@: dan tinta Parker kemudian dilakukan pe$arnaan

gram. #asilna ditemukan hi"a bersepta.

Pemeriksaan Kultur

pesimen ditumbuhkan di media abaroud Detrose Agar. Koloni tumbuh

cepat, dapat ber$arna putih, kuning kecoklatan, coklat kehitaman atau hi)au.


4/9

B. FOOD BORNE DISEASE

INFEKSI ENTEROBACTERIACEAE

%Salmonella typhi'

/nterobacteriaceae adalah kelompok besar batang gram negati" ang

heterogen, ang habitatna adalah saluran usus manusia dan he$an. Famili ini

mencakup banak spesies % Escherichia coli, Shigella, Salmonella, Enterobacter,

Klebsiella, Serratia dan Proteus'. Beberapa organisme enterik, misalna E. coli

merupakan "lora normal dan kadang-kadang menebabkan penakit, sementara lainna

Salmonella dan Shigella selalu bersi"at patogen untuk manusia.

Salmonella sering bersi"at patogen pada manusia atau he$an apabila masuk

melalui mulut. Bakteri ini ditularkan dari he$an atau roduk he$an kepada manusia dan

dapat menebabkan enteritis, in"eksi sistemik dan demam enterik. Salmonella resisten

terhadap zat-zat kimia tertentu %misalna brilliant green, natrium tetrationat, dan

natrium deoksikolat' ang menghambat bakteri enterik lainna karena itu sena$a ini

berman"aat untuk dimasukkan dalam perbenihan ang dipakai untuk mengisolasi

Salmonella dari tin)a. Berdasarkan mor"ologi selna, ukuran Salmonella sangat

ber&ariasi pan)angna.

Meski pada a$alna Salmonella dideteksi berdasarkan si"at-si"at biokimiana,

golongan dan spesiesna harus diidenti"ikasi dengan analisis antigen. Salmonella

memiliki beberapa antigen 6 %dari keseluruhan ang ber)umlah lebih dari @' dan

anigen # ang berbeda pada salah satu atau kedua "ase. Beberapa Salmonella

mempunai antigen simpai %K' ang disebut i ang dapat mengganggu aglutinasi

melalui antiserum 6 antigen ini dihubungkan dengan si"at in&asi" ang dimilikina.

+es aglutinasi dengan antiserum serapan untuk antigen 6 dan # ang berbedamerupakan dasar untuk klasi"ikasi almonella secara serologik.

Salmonellla typhi terutama menebabkan in"eksi pada manusia in"eksi oleh

organisme ini ditularkan dari sumber manusia. +etapi, sebagain besar Samonella

terutama bersi"at patogen bagi he$an ang merupakan reser&oir untuk in"eksi manusia.

6rganisme ini hampir selalu masuk melalui mulut, biasana bersama makanan dan

minuman ang tercemar %kontaminasi'. Bagi manusia, dosis in"ekti" rata-rata untuk

menimbulkan in"eksi klinik atau sub-klinik adalah 1@= - 1@> bakteri %tetapi mungkin

cukup dengan 1@4 organisme Salmonella'. Faktor inang ikut berperan dalam resistensi


5/9

terhadap in"eksi Salmonella adalah keasaman lambung, "lora normal usus, dan daa

tahan usus.

Pada manusia, Salmonella menebabkan penakit deman enterik %demam

ti"oid'. 9e)ala deman ti"oid ditimbulkan oleh beberapa almonella, tetapi ang

terpenting adalah S. typhi. Salmonella ang termakan mencapai usus halus dan masuk

ke saluran getah bening lalu ke aliran darah. Kemudian baktei diba$a oleh darah

menu)u berbagai organ, termasuk usus. 6rganisme ini berkembang biak dalam )aringan

lim"oid dan diekskresi dalam tin)a.

etelah masa inkkubasi 1@ C 13 hari, timbul demam, lemah, sakit kepala,

konstipasi, bradikardia dan mialgia. Demam sangat tinggi dan lim"a serta hati

membesar. ebelum masa antibiotika, komplikasi utama demam enterik adalah

perdarahan usus dan per"orasi angka kematianna 1@ C 1= :. Pengobatan dengan

kloram"enikol, ampisilin atau trimetoprim-sul"ametoksazol mengurangi angka kematian

men)adi kurang dari 1 :.

Penegakan diagnosis demam ti"oid harus dilakukan dengan cepat dan akurat.

Diagnosis pasti demam ti"oid ditegakan bila ditemukan bakteri Salmonella typhi dalam

biakan darah, urin, "eses atau sumsum tulang. Pemeriksaan laboratorium dapat

digunakan untuk membantu menegakkan diagnosis demam ti"oid dengan cara

pemeriksaan darah tepi, kultur atau biakan dan u)i serologis. Pemeriksaan kultur atau

biakan memang paling akurat karena langsung mendeteksi Salmonella typhy, namun

memerlukan $aktu ang lama %=-5 hari' dan mahal.

ISOLASI da IDENTIFIKASI Salmonella

a. ampel mutahan, "eses, makanan diambil 1 gram dan dihaluskan atau darah, urin,

minuman, air diambil 1 ml

b. Masukkan dalam medium 8actose Broth %8B' dan diinkubasi selama 1 23 )am, 45

67

c. etelah inkubasi selesai, masukkan dalam medium elenith Broth %B' dan

diinkubasi selama 1 23 )am, 45 67

d. etelah inkubasi selesai !

d.1. dengan menggunakan )arum ose, inokulasikan pada medium A secara streak

atau kuadran atau


6/9

d.2. @,1 ml dengan mikropipet masukkan dalam medium A dan diratakan

dengan drugalsk

e. nkubasi pada suhu 45 67 selama 1-2 23 )am

". Amati pertumbuhan koloni ang terbentuk ! koloni $arna merah atau bening keruh

dan pada bagian tengahna ber$arna hitam menun)ukkan adana koloni

Salmonella.

g. Koloni ang diduga Salmonella kemudian dilakukan pe$arnaan gram dengan cara !

• Buat preparat ulas dari suspensi kuman ang diduga S. typhi.

• 8akukan "iksasi dengan hati-hati

• 9enangi preparat dengan kristal ungu dan dibiarkan selama 4@ detik

•7uci dengan air mengalir dan dikeringkan

• 9enangi preparat dengan kalium iodida dan dibiarkan selama 3= detik

• 7uci dengan air mengalir

• 7uci dengan alkohol aseton sampai $arna ungu hilang dan dikeringkan

• 9enangi preparat dengan sa"ranin dan dibiarkan selama 4@ detik

• 7uci dengan air mengalir dan dikeringkan

• Amati preparat dengan mikroskop.

h. Koloni tersebut )uga ditumbuhkan pada media tegak miring +A %goresan dan

tusukan', MA %tusukan' dan EA %tusukan' untuk identi"ikasi )enis almonella.

nkubasi pada suhu 4= 67 selama 1 23 )am.

i. Amati pertumbuhan koloni dan perubahan media identi"ikasi. %1'. +A lereng

merah %alkalis', dasar kuning %asam' dan gas %; < -', %2'. MA ! hidrogen sul"ida

%#2' positi", indole %-' dan motiliti %akti" < ;', %4'. EA negati" %tidak ter)adi

perubahan $arna media'.

Koloi Salmonella "ada '%dia Sal'o%lla S)ig%lla Agar


7/9

UJI SEROLOGI


8/9

erologi adalah telaah ilmu tentang reaksi antara antigen dengan antibodi di

dalam serum. (eaksi serologi dapat digunakan sebagai !

1. Menentukan antigen atau antibodi apabila salah satu dari hal tersebut telah diketahui

2. Mengukur titer atau kadar

+es serologi berdasarkan pada ter)adina ikatan antigen antibodi. erum penderita ang diduga mengandung suatu antibodi, direaksikan dengan antigen ang

sudah diketahui )enisna. Apabila ter)adi reaksi %reaksi positi"', berarti penderita

sebelumna telah pernah terin"eksi oleh antigen tersebut. 0umlah antibodi %titer

antibodi' ang terdapat di dalam serum penderita dapat dipakai sebagai dasar untuk

diagnosa penakitna.

Beberapa u)i serologis ang dapat digunakan pada demam ti"oid, aitu u)i

idal, tes +EB/GH , metode enzme immunoassa %/A', metode enzme-linked

immunosorbent assa %/8A', dan pemeriksaan dipstik. E)i $idal saat ini masih

digunakan secara luas, terutama di berbagai daerah endemik ti"oid. *amun u)i ini

memiliki banak kelemahan seperti rendahna sensiti&itas dan spesi"isitas, karena dapat

memberikan hasil negati" sampai 4@: dari sampel biakan positi" penakit ti"oid.Akhir-akhir ini sudah banak ditemukan u)i-u)i serologis baru ang lebih cepat

dan akurat dalam mendiagnosis demam ti"oid. +es +EB/G, aitu pemeriksaan gM anti

almonella merupakan salah satu dari u)i serologis tersebut ang memiliki sensiti&itas

dan spesi"isitas ang lebih baik daripada u)i idal. +es ini dapat men)adi pemeriksaan

ang ideal dan dapat digunakan untuk pemeriksaan secara rutin karena cepat, lebih

akurat, mudah dan sederhana.

Salmonella typhi mempunai tiga macam antigen, aitu ! O antigen %somatik

antigen', antigen %"lagellar antigen' dan !i antigen %&irulensi antigen' ada )uga

pustaka menambahkan " antigen %kapsul antigen'.

Pada reaksi aglutinasina !1. Aglutinasi 6 berbentuk butir-butir pasir ang tidak hilang apabila dikocok

2. Aglutinasi # berbentuk butir-butir pasir ang hilang apabila dikocok

4. Aglutinasi i berbentuk a$an

(eaksi idall adalah reaksi serum %sero-test' untuk mengetahui ada tidaknna

antibodi terhadap Salmonella typhi, dengan )alan mereaksikan serum seseorang dengan

antigen 6, #, dan i dari laboratorium. Apabila ter)adi aglutinasi, dikatakan reaksi

idall positi" berarti serum orang tersebut mempunai antibodi terhadap S. typhi, baik

setelah &aksinasi, setelah sembuh dari penakit ti"us ataupun sedang menderita ti"us.

(eaksi idall negati" artina tidak memiliki antibodi terhadap S. typhi.

(eaksi idall dipakai untuk menegakkan diagnosis peneakit ti"us

abdominalis. Peninggian titer aglutinin 6 menun)ukkan adana in"eksi ang akti", peninggian titer aglutinin # disebabkan &aksinasi dan peninggian titer aglutinin i

menun)ukkan karier.

stilah (eaksi Antigen dengan Antibodi

A$ig% A$i(odi R%a#si

Aglutinogen

Precipinogen

el bakteri

+oksin

Aglutinin

Precipitin

Bakteriolsin

Antitoksin

Aglutinasi

Precipitasi

Bakteriolisis

Flokulasi

eil Feli %1I51' menemukan bah$a antigen badan kuman %antigen 6,

antigen somatik' berlainan dengan antigen dari "lagel %antigen #' dan hasilaglutinasina )elas berbeda.


9/9

Antibodi #, didapat dengan cara menuntikan kuman ang masih bergerak

dalam bentuk suspensi kuman hidup atau dimatikan dan antigen somatikna dirusak

dengan "ormalin, ke dalam tubuh binatang percobaan. +iter ang didapat biasana

tinggi karena antibodi # mempunai a"initas tinggi terhadap "lagela dan mudah

menebabkan bergerombolna "lagela. Pada manusia, titer ang tinggi menun)ukkan

adana in"eksi atau pernah di&aksinasi, tetapi tidak ada hubunganna dengan dera)atkekebalan tubuh karena antigen # tidak berhubungan dengan &irulensi.

Antibodi 6, didapat dengan cara menuntikan kuman ang "lagelana telah

dirusak dengan mencampur alkohol dan dieram pada suhu 45 67 selama 23-4 )am.

Biasana titer ang diperoleh tidak begitu tinggi karena aglutinasi sel kuman diperlukan

lebih banak molekul antibodi.

Antibodi i, hana terdapat pada kuman ang baru diasingkan dan terbatas

pada almonella tphi serta beberapa )enis salmonella lainna dan kuman enterik non

patogen. i, kependekan dari &irulensi, pada mulana dianggap sebagai "aktor penting

untuk menentukan &irulensi kuman, tetapi kemudian ternata antigen i tidak sepenting

reaksi aglutinasi dengan serum ang mengandung antibodi 6. Antigen i dapat

dihilangkan dengan cara pembiakkan berulangkali.

+u)uan ! Mengu)i secara serologi mikroba patogen ang menebabkan penakit

Bahan ! Antigen Salmonella typhi #, serum darah penderita t"us

Alat ! 6b)eck glass, mikropipet segala ukuran, pipet tetes

Prosedur !

1. Ti$%r 1*+,

Ambil 2@ Jl serum %antibodi' ; 3@ Jl %1 tetes' reagen idall %antigen S. typhi #'

!. Ti$%r 1*1-,

Ambil 1@ Jl serum %antibodi' ; 3@ Jl %1 tetes' reagen idall %antigen S. typhi #'

. Ti$%r 1*!,Ambil = Jl serum %antibodi' ; 3@ Jl %1 tetes' reagen idall %antigen S. typhi #'

3. Amati masing-masing, apabila ter)adi aglutinasi maka reaksi positi", dan apabila

tidak ter)asi aglutinasi %tidak ada antigen Salmonella typhi # pada serum penderita'

maka reaksi negati"

=. Peker)aan diteruskan hingga reksi negati". Entuk titerna dihitung kelipatanna.

T&gas

Mahasis$a mengamati, mencatat dan menggambar semua preparat ang telah

disediakan.

/asil

7atat dan gambar semua hasil praktikum

praktikum blok digestivus (1)

Documents