percobaan 2 teknik solasi kultur murni

5/19/2018 Percobaan 2 Teknik Solasi Kultur Murni

1/16

PERCOBAAN 2

TEKNIK ISOLASI KULTUR NUTRISI

BAGIAN A : ISOLASI KOLONI DARI KULTUR CAMPURAN

A. TUJUAN

Memisahkan koloni dari kultur campuran dengan menggunakan metode tuang, gesek, dan

sebar

B. PRINSIP

Metode spread, streak, dan pour plate diharapkan dapat mengisolasi koloni yang telah

terpisah sehingga didapatkan jumlah organisme inokulum yang tereduksi, sehingga koloni yang

terbentuk lebih terpisah.

C. TEORI DASAR

Populasi mikroba di alam sekitar sangat kompleks dan terdapat dalam jumlah yang

banyak sekali serta sangat beraneka ragam. Maka dari itu diperlukan teknik yang dapat

memisahkan populasi campuran yang kompleks ini dan membuat biakan campuran menjadi

biakan murni yang terdiro dari suatu populasi sel yang semuanya berasal dari satu sel induk.

Mikroorganisme yang dibiakkan di laboratorium biasanya menggunakan bahan nutrient

yang disebut medium. Medium ini terbagi menjadi tiga bentuk yaitu kaldu/cairan, padatan, dan

setengah padatan (semisolid). Media untuk biakan murni yang solid dapat berupa agar miring,

agar tegak, maupun agar plate.

Dalam pemisahan biakan murni, tidak hanya membutuhkan medium untuk tempat

pertumbuhannya tetapi juga diperlukan teknik isolasi. Teknik isolasi yang paling umum

digunakan adalah metode gores (streak plate), metode tuang (pour plate), dan metode sebar

(spread plate).


2/16

TEKNIK PENJELASAN PENYAJIAN SKEMATIS

Metode Gores

(streak plate)

Inokulum digoreskandi permukaan medium

agar nutrient kedalam cawan petri dengan

jarum inokulasi. Di antara garis-garis

goresan akan terdapat sel-sel yang cukup

terpisah-pisah sehingga dapat tumbuh

menjadi koloni-koloni terpisah.

Metode Tuang

(pour plate)

Metode ini dapat menumbuhkan

mikroorganisme di dalam media agar

dengan cara mencampurkan media agar

yang masih cair dengan stok kultur bakteri

(agar) sehingga sel-sel tersebut tersebar

merata dan diam baik di permukaan agar

atau di dalam agar.pour plate

memindahkan kultur biakan dari satu

tabung ke tabung lainnya dan

menuangkannya ke cawan petri, sehingga

setelah masa inkubasi, dapat terlihat

perbedaan jumlah bakteri pada masing-

masing cawan petri.

Metode Sebar

(spread plate).

Setetes inokulum diletakkan di tengah-

tengah medium agar nutrient dalam cawan

petri. Dengan menggunakan batang kaca

berbentuk L, inokulum disebarka di

permukaan medium. Batang yang sama

dapat digunakan menginokulasi pinggan

kedua untuk menjamin penyebaran sel-

selnya dengan baik. Pada beberapa pinggan

akan muncul koloni yang terpisah-pisah.


3/16

D. ALA T DAN BAHAN

ALAT : 1. Pembakar Bunsen

2. Jarum inokulasi

3. Batang gelas berbentuk L

4. Tiga buah cawan petri

BAHAN : 1. Kultur campuran berumur 24-48 jam

2. Biakan murni untuk media sebar pada OD 0,1, 600 m

3. Media nutrient agar

4. Alkohol 95%

E. HASIL PENGAMATAN

Metode Gores (streak plate)

Teknik Sebelum inkubasiSetelah inkubasi

selama 2 hariKeterangan

Quadran A Jenis Bakteri:

Bacillus sp

Sebelum

diinkubasi:

Tidak tampak

hasil goresan

Setelah

diinkubasi:

Bakteri tumbuh

mengikuti pola

tipe goresan

kuadran A


4/16

Quadran B Jenis Bakteri:

Bacillus sp

Sebelum

diinkubasi:

Tidak tampak

hasil goresan

Setelah

diinkubasi:

Bakteri tumbuh

mengikuti pola

tipe goresan

kuadran B

Radian

Streak

Jenis Bakteri:

Bacillus sp

Sebelum

diinkubasi:

Tidak tampak

hasil goresan

Setelahdiinkubasi:

Bakteri tumbuh

mengikuti pola

tipe goresan

Radiant Streak

Continuos

Streak

Jenis Bakteri:

Bacillus sp

Sebelum

diinkubasi:

Tidak tampak

hasil goresan

Setelah


5/16

diinkubasi:

Bakteri tumbuh

mengikuti pola

tipe goresan

Continuos

Streak

Metode Tuang(pour plate)

Teknik Sebelum inkubasi Setelah inkubasi

selama 2 hari

Keterangan

Pour plate

1

Bakteri:Kulturcair

Bentuk

pinggiran: Bulat

Warna: putih

Jumlah koloni;

Paling sedikit

dibandingkan

pour plate 2dan

pour plate 3

Pour plate

2

Bakteri:Kultur

cair

Bentuk

pinggiran: Bulat

Warna: putih

Jumlah koloni;

Lebih banyak

dibandingkan

pour plate 1 dan

danpour plate 3


6/16

Pour plate

3

Bakteri:Kultur

cair

Bentuk

pinggiran: Bulat

Warna: putih

Jumlah koloni;

Lebih banyak

dibandingkan

pour plate 1dan

lebih sedikit

daripour plate

3

Metode Sebar(spread plate).

Sebelum

inkubasi

Setelah inkubasi

selama 2 hari

Keterangan

Bakteri:Kultur

campuran

Sebelum inkubasi:

Bakteri belum

terlihat

Setelah inkubasi:

Bakteri tumbuh dan

menyebar di

sekeliling cawan

petri

F. ANALISIS

Tujuan pada percobaan ini adalah memisahkan biakan campuran menjadi biakan murni

dengan berbagai metode. Metode pertama adalah dengan cara streak plate atau metode gores.


7/16

Pada metode ini biakan campuran diinokulasikan dengan cara menggores pada cawan yang telah

berisi agar nutrisi. Hal ini bertujuan agar setelah masa inkubasi, kita dapat melihat pertumbuhan

bakteri pada cawan tersebut. Sebelum masa inkubasi, bakteri yang ditanam bakteri Bacillus sp

dengan metode streak plate belum terlihat secara kasat mata. Namun, setalah masa inkubasi,

bakteri yang berada pada cawan petri dapat terlihat dengan mata telanjang. Bakteri tumbuh

mengikuti pola goresan yang dibuat, baik itu dengan tipe goresan quadrant A, quadrant B,

radiant streak , ataupun continuos streak. Untuk metode streak dengan goresan quadrant A

biasanya digunakan untuk lebih memurnikan mikroorganisme yang ditanam, semakin jauh

goresannya, koloni-koloni yang terbentuk semakin terpisah dan dapat dilihat dari semakin

sedikitnya koloni pada goresan-goresan terakhir. Jika terdapat koloni di luar pola goresan,

terdapat kemungkinan bahwa koloni yang terbentuk adalah kontaminan yang berasal dari udara

yang mengandung banyak jenis mikroorganisme sehingga menyebabkan mikroorganisme yang

tidak diinginkan ikut masuk dan tumbuh pada cawan petri.

Berbeda dengan metode streak plate, bakteri yang dihasilkan dari metode spread plate

tidak membentuk goresan, namun koloni yang terbentuk tersebar secara merata pada media

nutrien agar. Hal ini disebabkan karena bakteri ditanam dengan cara memutar batang gelas L ke

seluruh permukaan cawan. Sedangkan hasil pengamatan pada pour plate seharusnya cawan I

memiliki jumlah koloni yang terbentuk lebih banyak dari cawan II dan cawan II memiliki jumlah

koloni yang lebih banyak juga dibandingkan cawan III (Jumlah bakteri: cawan I > cawan II >

cawan III), karena apabila dituang langsung dari biakan nya konsentrasi mikroba pada tabung I

lebih banyak dibandingkan dengan tabung yang lainnya. Namun pada percobaan yang kami

lakukan, hasilnya adalah cawan II>cawan III>cawan I. Pada cawan I tidak terlihat pertumbuhan

bakteri. Ada banyak faktor yang dapat menyebabkan tidak tumbuhnya bakteri, seperti agar

nutrien yang tidak higienis, tata cara inokulasi yang tidak benar, mulut tabung dan cawan yang

tidak didekatkan pada pembakar Bunsen, atau keadaan agar yang belum cair kemudian sudah

dimasukkan ke dalam cawan petri.

G. KESIMPULAN

Untuk memisahkan koloni bakteri dari kultur campuran, dapat digunakan tiga jenis teknik

biakan murni, yaitu metode streak plate, spread plate, dan pour plate. Setelah masa inkubasi,

biakan murni akan terlihat secara kasat mata dan dapat diidentifikasi dengan melihat bentuk,


8/16

ukuran dan warna koloni serta cembung atau tidaknya koloni. Kontak dengan udara sangat

berpengaruh pada pertumbuhan koloni di media agar ini, sehingga ketika menginokulasikan

biakan murni ke dalam cawan petri, seharusnya dilakukan berdekatan dengan pembakar Bunsen.

H.

DAFTAR PUSTAKA

Krisno, Agus. 2011. Teknik Membuat Biakan Murni.http://aguskrisnoblog.wordpress.com.Diakses pada

9 Februari 2014. 22:26

Pelczar, Michael J. dan E.C.S Chan. 2006.Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta: Universitas Indonesia (UI-

Press)

Sterritt, Robert M. dan John N. Lester. 1988. Microbiolgy for Environmental and Public Health

Engineers. USA: E.&F.N.SPON

Suriawiria, Unus. 1985.Pengantar Mikrobiologi Umum. Bandung: Angkasa
http://aguskrisnoblog.wordpress.com/http://aguskrisnoblog.wordpress.com/http://aguskrisnoblog.wordpress.com/http://aguskrisnoblog.wordpress.com/


9/16

BAGIAN C: MENENTUKAN KARAKTERISTIK BIAKAN MIKROORGANISME

A. TUJUAN

1. Menentukan karakteristik biakan mikroorganisme

2.

Mengidentifikasi dan mengklasifikasi organism sesuai kelompok taksonomi

B. PRINSIP

Mikroorganisme akan memperlihatkan penampakan makroskopis yang tidak sama saat

tumbuh pada medium yang berbeda. Karakteristik biakan adalah sebagai dasar pemisahan

mikroorganisme dan dimasukkan ke dalam taksonominya sesuai dengan karakteristiknya. Hal ini

ditentukan dengan agar nutrisi miring yang ditanam oleh suatu organisme.

C. TEORI DASAR

Untuk keperluan hidupnya, semua makhluk hidup memerlukan bahan makanan. Bahan

makanan ini diperlukan untuk sintesis bahan sel dan untuk mendapatkan energi. Demikian juga

dengan mikroorganisme, untuk kehidupannya membutuhkan bahan-bahan organik dan anorganik

dari lingkungannya. Bahan-bahan tersebut disebut dengan nutrient (zat gizi), sedang proses

penyerapanya disebut proses nutrisi (Suriawiria, 1985).

Mikroba sama dengan makhluk hidup lainnya, memerlukan suplai nutrisi sebagai

sumber energi dan pertumbuhan selnya. Unsur-unsur dasar tersebut adalah : karbon, nitrogen,

hidrogen, oksigen, sulfur, fosfor, zat besi dan sejumlah kecil logam lainnya. Ketiadaan atau

kekurangan sumber-sumber nutrisi ini dapat mempengaruhi pertumbuhan mikroba hingga pada

akhirnya dapat menyebabkan kematian. Kondisi tidak bersih dan higienis pada lingkungan

adalah kondisi yang menyediakan sumber nutrisi bagi pertumbuhan mikroba sehingga mikroba

dapat tumbuh berkembang di lingkungan seperti ini. Oleh karena itu, prinsip daripada

menciptakan lingkungan bersih dan higienis adalah untuk mengeliminir dan meminimalisir

sumber nutrisi bagi mikroba agar pertumbuhannya terkendali (Anonymous, 2006).

Menurut Waluyo (2005), peran utama nutrien adalah sebagai sumber energi, bahan

pembangun sel, dan sebagai aseptor elektron dalam reaksi bioenergetik (reaksi yang

menghasilkan energi). Oleh karenanya bahan makanan yang diperlukan terdiri dari air, sumber


10/16

energi, sumber karbon, sumber aseptor elektron, sumber mineral, faktor pertumbuhan, dan

nitrogen. Selain itu, secara umum nutrient dalam media pembenihan harus mengandung seluruh

elemen yang penting untuk sintesis biologik oranisme baru (Jawetz, 2001).

Pertumbuhan mikoorganisme tergantung dari tersedianya air. Bahan-bahan yang terlarut

dalam air, yang digunakan oleh mikroorganisme untuk membentuk bahan sel dan memperoleh

energi, adalaah bahan makanan. Tuntutan berbagai mikroorganisme yang menyangkt susunan

larutan makanan dan persyaratan lingkungan tertentu, sangat berbeda-beda. Oleh sebab itu

diperkenalkan banyak resep untuk membuat media biak untuk mikroorganisme. Pada dasarnya

sesuatu larutan biak sekurang-kurangnya harus memenuhi syarat-syarat berikut. Di dalamnya

harus tersedia semua unsur yang ikut serta pada pembentukan bahan sel dalam bentuk berbagai

senyawa yang dapat dioloah (Schlegel, 1994).

D. ALAT DAN BAHAN

ALAT: 1.Pembakar Bunsen

2. Jarum inokulasi.

BAHAN: 1. Agar nutrisi

2. Kaldu nutrisi

3. Gelatin nutrisi

4. Dua koloni yang berbeda dari percobaan 2

E. HASIL PENGAMATAN

Biakan dari Streak Plate

Media Sebelum inkubasi Setelah inkubasiselama 2 hari

Keterangan


11/16

Agar Miring

Sebelum

inkubasi:Agar

belum terlihat

bakterinya

Setelah

inkubasi:Agar

miring terlihat

ada goresan

berbentuk

zigzag, namun

tidak merata,

koloninya

menyebar.

Gelatin Sebelum

inkubasi:

Belum ada

endapan

Setelah

inkubasi:Terdapat

endapan pada

permukaan

gelatin

Agar Tegak Sebelum

inkubasi:Garis

pada agar

miring akibat

inokulasi tidak

terlalu terlihat

Setelah

inkubasi:


12/16

Terdapat garis

sepanjang agar

tegak dan

bakteri bersifat

aerob

NB Sebelum

inkubasi:

Kaldu nutrisi

masih bening

Setelah

inkubasi:

Kaldu nutrisi

jadi berwarna

keruh akibat

adanya

pertumbuhan

bakteri dan

terdapat

endapanberwarna putih

pada dasar

tabung

Biakan dari Pour PlateCampuran

Teknik Sebelum inkubasi

Setelah inkubasi

selama 2 hari Keterangan


13/16

Agar Miring

Sebelum

inkubasi: Pola

zigzag belum

terlihat

Setelah

inkubasi:

Bakteri tumbuh

mengikuti pola

zigzag

Gelatin Sebelum

inkubasi:

Belum ada

endapan

Setelah

inkubasi:

Tidak terlihat

endapan pada

permukaan

gelatinAgar Tegak Sebelum

inkubasi:Garis

pada agar

miring akibat

inokulasi tidak

terlalu terlihat

b Terdapat

garis sepanjang

agar tegak dan

bakteri bersifat

aerob


14/16

NB Sebelum

inkubasi: Kaldu

nutrisi masih

bening

Setelah

inokulasi:

Kaldu nutrisi

jadi berwarna

keruh akibat

adanya

pertumbuhan

bakteri dan

terdapat

endapanberwarna putih

pada dasar

tabung

F. ANALISIS

Pada percobaan karakteristik biakan mikroorganisme, kami mengambil koloni dari

biakan bakteri pada streak plate dan dari pour plate. Media berupa agar miring, gelatin, agar

tegang, dan kaldu nurtisi, semuanya diberi biakan bakteri dengan cara yang berbeda-beda. Agar

miring diberi koloni dengan cara zigzag, gelatin dan kaldu nutrisi dengan cara mengocokkan

koloni menggunakan jarum inokulasi, dan agar tegak diberi bakteri dengan memasukkan jarum


15/16

inokulasi yang lurus. Setelah proses inokulasi, keempat media tersebut diinkubasi selama 3 hari,

dan setelah masa inkubasi terlihat perubahan yang terjadi pada masing-masing media.

Agar miring yang telah mengalami masa inkubasi, terlihat ada koloni yang mengikuti

pola garis zigzag setelah dilakukan inokulasi baik yang berasal dari koloni streak platemaupun

pour plate. Namun, koloni ini sangat menyebar, hal ini dapat terjadi karena ketika proses

inokulasi, mulut tabung tidak didekatkan dengan pembakar Bunsen sehingga mengakibatkan

terjadinya kontaminan dan menimbulkan koloni lain yang menyebar di luar pola garis.

Gelatin yang diinokulasikan bakteri dari streak plate yang semula tidak terlihat apa-apa

dan hanya berupa cairan saja, setelah masa inkubasi terdapat endapan putih yang mendekati

permukaan gelatin, sehingga bakteri ini diklasifikasikan pada bakteri aerob karena ia mendekati

datangnya oksigen dan berada di permukaan.

Pada kaldu nutrisi, cairan berubah menjadi berwarna keruh setelah mengalami masa

inkubasi baik kaldu nutrisi yang berasal dari koloni streak plate maupun pour plate. Hal ini

menandakan bahwa telah terjadi pertumbuhan bakteri selama proses inkubasi yang mempunyai

temperature370C. Karena bakteri ini dapat tumbuh pada suhu ruang, maka bakteri ini termasuk

kelompok bakteri mesofilik yaitu kelompok yang tumbuh pada rentang suhu 10-45oC dan

optimum pada 20-40oC. Selain itu, pada media ini terdapat endapan putih pada dasar tabung dan

bakteri ini diklasifikasikan bakteri anaerob karena endapan tersebut terdapat pada dasar tabung

dan tidak naik ke permukaan tabung.

Pada agar tegak terlihat bahwa bakteri hanya tumbuh di permukaan sehingga dapat

diketahui bahwa bakteri pada percobaan ini adalah Bacillus sp yang bersifat obligate aerobe

yaitu bakteri yang membutuhkan oksigen untuk mempertahankan hidupnya.

G. KESIMPULAN

Bakteri dapat tumbuh pada suhu ruang antara rentang suhu 10-45oC dan optimum pada

20-40oC. Kelompok bakteri jenis ini adalah bakteri mesofilik. Media yang telah diinokulasikan

bakteri dan memiliki endapan di permukaan menunjukan bakteri tersebut adalah bakteri aerob

yang membutuhkan oksigen, sedangkan jika endapan berada pada dasar cairan, menunjukkan

bahwa bakteri tersebut termasuk bakteri anaerob.


16/16

H. DAFTAR PUSTAKA

M. Madigan, et al. 2012.Biology of Microorganisms 13th

ed. San Fransisco : Pearson.

Pelczar, Michael J.Jr dan E.C.S Chan. 1986.Dasar-dasar Mikrobiologi 1.Penerbit Universitas

Indonesia : Jakarta.

Salle, A. J. 1961.Fundamental Principle of Bacteriology. 5th

edition. New York: McGraw-Hill

Zaif 2009. Nutrisi Mikroba Sebuah Esensi Dasar untuk Kehidupan Mikroba.

http://zaifbio.wordpress.com/. Diakses hari Senin, 10 Februari 2014

percobaan 2 teknik solasi kultur murni

Documents