penelitian sod vco ipb

GAMBARAN IMUNOHISTOKIMIA ANTIOKSIDAN SUPEROKSIDA

DISMUTASE PADA JARINGAN HATI TIKUS DIABETES MELLITUS

YANG DIBERI VIRGIN COCONUT OIL (VCO)

SERINA HANARYA DJAJAKIRANA

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

2009

ABSTRAK

SERINA HANARYA DJAJAKIRANA. Gambaran Imunohistokimia Antioksidan

Superoksida Dismutase pada Jaringan Hati Tikus Diabetes Mellitus yang diberi

Virgin Coconut Oil (VCO). Dibimbing oleh TUTIK WRESDIYATI

Virgin coconut oil atau minyak kelapa murni saat ini umum digunakan antara lain

untuk pengobatan beberapa penyakit. Secara empiris dilaporkan, minyak kelapa

murni bermanfaat dalam menurunkan kadar glukosa darah. Penelitian ini

bertujuan untuk melihat pengaruh pemberian minyak kelapa murni/VCO terhadap

profil antioksidan intraseluler copper,zinc-superoxide dismutase (Cu, Zn-SOD)

pada jaringan hati tikus diabetes mellitus. Kondisi diabetes mellitus didapat

dengan cara induksi alloxan yang dapat merusak sel Pulau Langerhans.

Sebanyak 25 ekor tikus jantan galur Sprague dawley dikelompokkan menjadi 5

kelompok, yaitu (1) kelompok kontrol negatif (K-), (2) kelompok kontrol

positif/diabetes (K+), (3) kelompok diabetes dengan pemberian VCO A (VA), (4)

kelompok diabetes dengan pemberian VCO B (VB), (5) kelompok diabetes

dengan pemberian minyak goreng (MG). Dosis aquadest, VCO, dan minyak

goreng yang diberikan 5ml/ekor/hari selama 28 hari. Jaringan hati diambil di

akhir perlakuan lalu diproses dengan metode embedding paraffin. Potongan

jaringan hati diwarnai dengan Hematoxylin Eosin (HE) dan imunohistokimia

terhadap Cu,Zn-SOD. Pemberian VCO menunjukkan gambaran morfologi hati

yang lebih baik dibandingkan dengan kelompok kontrol positif dan kelompok

minyak goreng. Pemberian VCO dapat meningkatkan kandungan Cu,Zn-SOD

pada jaringan hati tikus diabetes mellitus dibandingkan dengan kelompok kontrol

positif dan minyak goreng. Pemberian VCO A menunjukkan profil antioksidan

Cu,Zn-SOD yang lebih baik dibandingkan kelompok perlakuan VCO B.

GAMBARAN IMUNOHISTOKIMIA ANTIOKSIDAN SUPEROKSIDA

DISMUTASE PADA JARINGAN HATI TIKUS DIABETES MELLITUS

YANG DIBERI VIRGIN COCONUT OIL (VCO)

SERINA HANARYA DJAJAKIRANA

Skripsi

Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Kedokteran Hewan Pada

Fakultas Kedokteran Hewan

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

2009

Judul Skripsi : Gambaran Imunohistokimia Antioksidan

Superoksida Dismutase pada Jaringan Hati

Tikus Diabetes Mellitus yang diberi Virgin

Coconut Oil (VCO)

Nama Mahasiswa : Serina Hanarya Djajakirana

Nomor Pokok : B04104161

Telah diperiksa dan disetujui

Oleh

Pembimbing

drh. Tutik Wresdiyati, Ph.D NIP: 131878930

Mengetahui,

Wakil Dekan

Dra. Nastiti Kusumorini NIP: 131669942

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Bogor, Jawa Barat pada tanggal 24 Juli 1985, sebagai

anak perempuan tertua dari tiga bersaudara pasangan Gunawan Djajakirana dan

Septiana Ismantyo.

Pendidikan Sekolah Dasar ditempuh penulis di SD Budi Mulia Bogor

(1992-1998), SLTP Budi Mulia Bogor (1998-2001), kemudian SMU Budi Mulia

Bogor (2001-2004). Penulis diterima di Fakultas Kedokteran Hewan Institut

Pertanian Bogor pada tahun 2004 melalui jalur Seleksi Penerimaan Mahasiswa

Baru (SPMB).

Selama menjadi mahasiswa penulis menjadi anggota di Himpunan Minat

Hewan Kesayangan dan Satwa Akuatik.

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa untuk

segala hal baik dan berkat yang telah dikaruniakan sehingga penulis dapat

menyelesaikan skripsi yang berjudul Gambaran Imunohistokimia

Antioksidan Superoksida Dismutase pada Jaringan Hati Tikus Diabetes

Mellitus yang diberi Virgin Coconut Oil (VCO). Skripsi ini merupakan salah

satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Hewan pada Fakultas

Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor.

Pada kesempatan ini penulis menyampaikan terima kasih yang tulus

kepada:

1. drh. Tutik Wresdiyati, Ph.D selaku dosen pembimbing yang telah memberikan

bimbingan dan pengarahan selama penelitian berlangsung hingga akhir

penulisan skripsi ini.

2. Dr. drh. Damiana R. Ekastuti selaku dosen penguji yang telah memberikan

banyak masukan bagi penulis.

3. Pak Dadang Supriatna atas kerja sama dan bantuan selama melakukan

penelitian di laboratorium hewan percobaan SEAFAST Center.

4. Dr. drh. Adi Winarto, drh I Ketut Mudite Adyane, MSi serta Pak Maman

yang membantu penulis selama melakukan penelitian di laboratorium

Histologi.

5. drh Rr. Soesatyoratih selaku dosen pembimbing akademik atas bimbingannya

selama penulis melakukan studi di Fakultas Kedokteran Hewan.

6. Papa dan Mama, Stephen, Stephanie, dan Remy atas doa, kasih sayang,

perhatian dan dukungannya sehingga menjadi kekuatan, semangat, dan

kebahagiaan bagi penulis.

7. Sahabat-sahabatku: Resty, Piping, Ci Rita, Tante Erna, Hendra atas

kesediaannya menjadi tempat curahan hati, teman seperjuangan, dan tempat

berbagi suka-duka.

8. Teman-teman: Dika, Adit, Amoy, Novi, Oki, Bagus, Heryu, Janto dan juga

seluruh Asteroidea 41 atas kebersamaan yang indah selama empat tahun ini.

.

9. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu.

Semoga skripsi ini dapat bermanfaat dan menjadi berkat bagi banyak

pihak yang membacanya.

Bogor, November 2008

Serina Hanarya Djajakirana

DAFTAR ISI

DAFTAR ISI vi

DAFTAR TABEL . vii

DAFTAR GAMBAR viii

DAFTAR LAMPIRAN . ix

PENDAHULUAN . 1 Latar Belakang 1 Tujuan Penelitian . 2

TINJAUAN PUSTAKA . 3 Organ Hati ... 3 Alloxan ... 4 Diabetes Mellitus . 4 Superoksida Dismutase (SOD) . 6 Virgin Coconut Oil (VCO) .. 6

METODE PENELITIAN 8 Waktu dan Tempat Penelitian .. 8 Materi Penelitian .. 8 Metode Penelitian 8 Pembuatan Tikus Diabetes Mellitus 8 Persiapan Hewan Coba 8 Pewarnaan Hematoxylin Eosin 9 Pewarnaan Imunohistokimia ... 10 Parameter . 10 Analisis Data 10

HASIL .. 11 Morfologi Hati .. 11 Profil Cu,Zn-SOD . 11

PEMBAHASAN .. 18 Morfologi Hati .. 18 Profil Cu,Zn-SOD . 19 KESIMPULAN DAN SARAN ... 22 DAFTAR PUSTAKA 23 LAMPIRAN .. 25

DAFTAR TABEL

Halaman

1. Rata-rata jumlah inti sel hati yang bereaksi pada berbagai tingkat kandungan Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tikus perlakuan perlapang pandang pada pembesaran 40x. 12

DAFTAR GAMBAR

Halaman

1. Fotomikrograf jaringan hati tikus perlakuan pewarnaan Hematoxylin Eosin. 13 2. Fotomikrograf jaringan hati tikus perlakuan pewarnaan Imunohistokimia Cu,Zn-SOD 14 3. Persentase jumlah inti sel hati yang bereaksi positif dan negatif terhadap Cu,Zn-SOD. 16

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

1. Proses Preparasi Jaringan. 26

2. Proses Pewarnaan Hematoxylin eosin (HE) 27

3. Prosedur Pewarnaan Imunohistokimia terhadap Cu,Zn- SOD. 28

4. Analisis Sidik Ragam (ANOVA) dengan uji lanjutan Duncan yang memberikan reaksi positif kuat, positif sedang, positif lemah, dan negatif terhadap kandungan Cu,Zn-SOD. 29

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Penderita kencing manis (diabetes mellitus) dari tahun ke tahun semakin

meningkat. Saat ini diperkirakan 45% dari jumlah penduduk dunia sangat

berisiko terserang penyakit diabetes (Rindengan dan Novarianto 2005). Dengan

perubahan pola hidup dan pola makan, jumlah penderita diabetes di Indonesia

semakin meningkat. Indonesia sendiri merupakan negara urutan keempat dengan

penderita penyakit kencing manis terbanyak.

Diabetes mellitus sendiri adalah suatu kelainan metabolisme ditandai

dengan hiperglikemia, defisiensi sekresi insulin, resistensi insulin, atau bahkan

keduanya (Gardner dan Shoback 2007). Kekurangan insulin, menyebabkan otot,

lemak, serta sel hati tidak dapat mengambil glukosa dari darah ke bagian

intraseluler. Terjadinya kelaparan pada intraseluler menyebabkan sel mencari

sumber energi lain, yaitu lemak (Chausmer 1998). Proses pemecahan lemak,

selain menghasilkan energi juga menghasilkan produk sampingan, yaitu radikal

bebas.

Radikal bebas adalah produk antara yang terbentuk dalam berbagai proses

reaksi dari metabolisme sel. Radikal bebas adalah suatu atom, gugus atom atau

molekul yang memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan pada

orbital paling luarnya. Adanya elektron yang tidak berpasangan menyebabkan

radikal bebas secara kimiawi sangat reaktif. Substansi ini mampu merusak

berbagai komponen sel sehingga dapat menyebabkan kerusakan bahkan kematian

sel dan berbagai kelainan tubuh. Meskipun demikian, fisiologi normal tubuh

memiliki mekanisme proteksi terhadap efek radikal bebas dengan adanya enzim-

enzim dan antioksidan (Gitawati 1995).

Antioksidan adalah suatu zat yang dapat menetralisir radikal bebas atau

kerja radikal bebas dan dapat bekerja pada tahap-tahap yang berbeda.

Antioksidan sebagai sistem perlindungan tubuh dapat dibedakan atas antioksidan

eksogen yang diperoleh dari bahan makanan seperti askorbat, tokoferol, karoten,

dan lain-lain serta antioksidan endogen yang terdiri dari enzim-enzim yang

disintesis tubuh seperti superoksida dismutase (SOD), katalase, dan glutation

peroksidase (Devasagayam et al. 2004).

Superoksida dismutase (SOD) adalah enzim yang mengkatalase dismutasi

superoksida radikal (O2-) menjadi oksigen (O2) dan hidrogen peroksida (H2O2).

Senyawa hidrogen peroksida (H2O2) masih berbahaya sehingga enzim katalase

berfungsi memecah H2O2 menjadi air (Devasagayam et al. 2004). Copper,zinc-

superoxide dismutase (Cu,Zn-SOD) adalah salah satu jenis SOD yang paling

stabil karena tiap sub unit tergabung oleh ikatan non-kovalen dan terangkai oleh

ikatan sulfida. Enzim ini memiliki peranan penting dalam pertahanan tubuh

melawan radikal bebas O2-. Telah dilaporkan oleh Wresdiyati et al. (2003) bahwa

Cu,Zn-SOD menurun pada jaringan hati Macaca fascicularis diabetes mellitus.

Minyak kelapa murni atau lebih dikenal dengan Virgin Coconut Oil (VCO)

dilaporkan secara empiris memiliki berbagai manfaat antara lain untuk komestika

dan untuk pengobatan penyakit. Minyak kelapa murni juga dipercaya dapat

mencegah serta mengobati berbagai macam penyakit, antara lain kanker, hepatitis,

penyakit jantung, diabetes, dan lain-lain. Penderita diabetes mellitus dianjurkan

mengkonsumsi minyak kelapa murni (VCO) karena dapat membantu

menstabilkan kadar glukosa darah (Rindengan dan Novarianto 2005). Tetapi

secara ilmiah, khasiat minyak kelapa murni ini belum banyak dilaporkan,

terutama pengaruhnya terhadap kandungan antioksidan superoksida dismutase

(SOD) pada jaringan hati tikus diabetes mellitus.

Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk melihat pengaruh pemberian minyak kelapa

murni (VCO) terhadap profil antioksidan copper,zinc-superoxide dismutase

(Cu,Zn-SOD) pada jaringan hati tikus dalam kondisi diabetes mellitus.

TINJAUAN PUSTAKA

Organ Hati

Hati adalah organ terbesar dalam tubuh, yaitu sekitar 2.5% dari berat

badan orang dewasa (Rodney dan Tanner 2004). Hati terletak di rongga perut

sebelah kanan, tepat di bawah diafragma dan berwarna coklat kemerahan. Suplai

darah ke organ hati didapat dari dua pembuluh darah, antara lain vena porta yang

membawa darah dari lambung, usus, dan limpa yang terdiri dari berbagai hasil

digesti dan sejumlah sel darah putih. Sedangkan, arteri hepatika membawa darah

yang kaya oksigen untuk sel-sel hati (Dellman dan Eurell 1998).

Hati tikus terletak sangat dekat dengan tulang rusuk. Hati tikus terdiri dari

empat lobus, yaitu lateral kiri, lateral kanan, medial dan lobus kanan. Permukaan

viscera berdekatan dengan lambung, duodenum, colon, jejunum dan pankreas.

Tikus tidak memiliki kantung empedu. Saluran empedu bersatu membentuk

saluran hati (hepatic duct) yang melewati pankreas. Cairan empedu dan pankreas

akan masuk melalui suatu saluran umum yang kemudian masuk ke proksimal dari

duodenum yang letaknya berdekatan dengan pilorus (OMalley 2005).

Unit fungsional dasar hati adalah lobulus hati, yang berbentuk silindris

dengan panjang beberapa milimeter dan berdiameter 0,8 sampai 2 milimeter.

Lobulus sendiri dibentuk dari banyak sel hati. Ruangan di antara sel hati disebut

sinusoid. Sinusoid dilapisi oleh sel endotel dan sel Kupffer yang merupakan

makrofag jaringan yang dapat memfagositosis bakteri dan benda asing dalam

darah. Di antara sel endotel dan sel hati terdapat ruang yang sangat sempit yaitu

ruang Disse yang menghubungkan pembuluh limfe di dalam septum interlobularis

(Guyton dan Hall 1997).

Hati mempunyai banyak fungsi fisiologis dalam tubuh, yakni sebagai

tempat metabolisme karbohidrat, protein dan lemak, detoksifikasi racun, tempat

pembentukkan sel darah merah serta penyaring darah dan berperan dalam

penggumpalan darah, menghasilkan empedu, dan sebagai tempat penyimpanan

vitamin dan zat besi (Guyton dan Hall 1997).

Alloxan Alloxanberbentukkristal,berwarnaputih,danmudah larutdalamair. Dalam

bentuk larutan, apabila terkena kulit alloxan akan berubah warna menjadi merah.

Alloxandigunakanantara lainuntukmenghasilkankondisidiabetespadahewancoba,

eksperimennutrisi,dansintesaorganik(Windholz1983).

Pada hewan yang diberi alloxan terjadi defisiensi insulin (Thurston et al.

1975). Alloxan dan hasil dari reduksinya, asam dialurat, menghasilkan suatu

siklus redoks dengan pembentukkan radikal superoksida. Radikal superoksida

mengalami dismutase menjadi hidrogen peroksida (H2O2) (Szkudelski 2001).

Alloxan menghasilkan efek diabetogeniknya dengan produksi hidrogen peroksida

(Drews et al. 2000). Dengan adanya Fe2+ dan hidrogen peroksida terbentuklah

radikal hidroksil bereaktivitas tinggi oleh reaksi Fenton. Hal ini menimbulkan

gangguan dalam sistem homeostasis kalsium intraseluler, yaitu terjadi

peningkatan konsentrasi kalsium intraseluler yang menyebabkan kerusakan pada

sel pulau Langerhans (Szkudelski 2001). Dunn et al. (1943) dalam Szkudelski

(2001) melaporkan mekanisme alloxan secara singkat dalam merusak sel

pankreas, antara lain dengan oksidasi komponen sel bergugus SH-, menghambat

aktivitas glukokinase, pembentukkan radikal bebas, dan merusak sistem

homeostasis intraseluler kalsium.

Pemberian alloxan menyebabkan terjadinya degenerasi dari sel pulau

Langerhans pankreas sehingga menyebabkan terjadinya penurunan produksi

insulin yang mengakibatkan kondisi diabetes mellitus tipe 1.

Diabetes Mellitus

Diabetes mellitus adalah suatu kelainan metabolisme ditandai dengan

hiperglikemia, defisiensi sekresi insulin, resistensi insulin, atau bahkan keduanya

(Gardner dan Shoback 2007). Hiperglikemia terjadi karena penyerapan glukosa

ke dalam sel terhambat serta metabolismenya diganggu. Dalam keadaan normal,

kira-kira 50% glukosa yang dimakan mengalami metabolisme sempurna menjadi

CO2 dan air, 5% diubah menjadi glikogen dan lemak. Pada diabetes mellitus

seluruh proses tersebut terganggu, glukosa tidak dapat masuk ke dalam sel

sehingga energi terutama diperoleh dari metabolisme protein dan lemak

(Ganiswarna 1995).

Penderita diabetes mellitus biasanya mengalami gejala antara lain sering

haus, poliuria, pandangan yang memudar serta penurunan berat badan (WHO

1999). Pada waktu kadar glukosa dalam ginjal berlebih, glukosa akan keluar

melalui urin yang disebut glukosuria. Pada hewan yang menderita diabetes terjadi

penurunan pertahanan tubuh terhadap infeksi bakterial dan fungal serta seringkali

menjadi kronis sehingga mengarah kepada cystitis, prostatitis, bronchopneumonia

dan dermatitis (Kahn 2005).

Komplikasi yang mungkin timbul akibat diabetes mellitus yang

berkepanjangan antara lain komplikasi retinopathy yang dapat menyebabkan

kebutaan dan nephropathy yang dapat berlanjut menjadi gagal ginjal (WHO

1999). Penyakit lain yang dapat timbul juga adalah penyakit jantung, tekanan

darah tinggi, stroke, katarak, kerusakan saraf, dan kehilangan pendengaran

(Rindengan dan Novarianto 2005).

Penyakit diabetes mellitus dibagi menjadi dua jenis utama, yaitu:

a. Diabetes mellitus tipe 1 (DM Tipe 1)

Diabetes mellitus tipe 1 diperkirakan sebagai T-lymphocyte-dependent

autoimmune disease yang dicirikan dengan perusakkan sel-sel beta pulau

Langerhans. Tipe ini disebut juvenile diabetes karena kebanyakan penderitanya

adalah anak-anak dan remaja, tetapi kelainan metabolik ini dapat juga diderita

seseorang dalam segala usia. Nama lain untuk tipe diabetes ini adalah Insulin

Dependent Diabetes Mellitus (IDDM). Terjadinya kerusakan dari sel Pulau

Langerhans pankreas, seringkali secara autoimun, menghasilkan terhentinya

produksi insulin. Penderita IDDM bergantung pada insulin untuk hidup, yaitu

untuk menjaga kestabilan kadar glukosa darah (Chausmer 1998). b. Diabetes mellitus Tipe 2 (DM Tipe 2)

Diabetes mellitus tipe 2 atau dikenal dengan Non Insulin Dependent

Diabetes Mellitus (NIDDM) biasanya diderita orang dewasa di atas 40 tahun

yang menderita obesitas (Gardner and Shoback 2007). Pada NIDDM, pankreas

mampu menghasilkan insulin, kelainan terjadi karena terjadinya keterlambatan

respon sekresi insulin terhadap kelebihan glukosa (Ganong 2002).

Superoksida Dismutase (SOD)

Famili dari enzim-enzim yang dikenal dengan superoksida dismutase

ditemukan dalam organisme pengguna oksigen dan sangat penting dalam

pertahanan dari sel melawan radikal bebas oksigen (Chang et al. 1988). Sebagai

suatu enzim, SOD memiliki fungsi sebagai antioksidan, yaitu dapat melindungi

dari kerusakan sel dengan menetralisasi superoksida, salah satu senyawa radikal

bebas yang bersifat merusak di alam. SOD mengkatalisa dismutasi anion

superoksida radikal (O2) menjadi hidrogen peroksida (H2O2) dan katalase

memecah H2O2 menjadi air (Devasagayam et al. 2004).

SOD adalah suatu metaloenzim, dalam arti, selain asam amino, juga

mengandung ion logam. Ada beberapa jenis SOD, antara lain Mn-SOD yang

mengandung ion Mangan dan ditemukan di mitokondria, ekstraseluler SOD (EC-

SOD), dan Cu,Zn-SOD yang terdapat di sitoplasma sel dan memegang peranan

penting pada pertahanan tubuh (Cohen dan Nyska 2002). Cu,Zn-SOD memiliki

151 monomer asam amino dan berat 32 KDa. Kubisch et al. (1994) melaporkan

bahwa Cu,Zn-SOD dapat melindungi sel pankreas dari kerusakan akibat zat

diabetogenik, antara lain alloxan. Hati memiliki kandungan Cu,Zn-SOD yang

tinggi, karena itu pengamatan terhadap enzim ini pada hewan yang terpapar zat

diabetogenik (alloxan) diharapkan dapat memberikan gambaran perubahan

kandungan enzim tersebut pada kondisi sebelum dan sesudah diberi minyak

kelapa murni (VCO).

Virgin Coconut Oil (VCO)

Virgin Coconut Oil atau minyak kelapa murni adalah minyak yang

diperoleh dari daging buah kelapa tua yang segar yang proses produksinya tanpa

atau dengan pemanasan. Saat ini, minyak kelapa murni umum digunakan untuk

pengobatan penyakit.

Manfaat kelapa murni untuk kesehatan di antaranya ialah mengurangi

risiko atherosklerosis, menurunkan risiko kanker, membantu mencegah infeksi

virus, mendukung sistem kekebalan tubuh, membantu mencegah osteoporosis,

dan mengontrol diabetes mellitus (Rindengan dan Novarianto 2005).

Minyak kelapa murni mengandung vitamin E dan polifenol (antioksidan)

serta asam laurat (Subroto 2006). Asam laurat merupakan asam lemak jenuh

dengan rantai sedang karena jumlah karbonnya 12 dan lebih dikenal dengan nama

medium chain fatty acid (MCFA). Dalam tubuh, asam laurat diubah menjadi

monolaurin yang bermanfaat sebagai antivirus, antibakteri, dan antiprotozoa

(Rindengan dan Novarianto 2005). Selain itu, asam laurat memiliki efek yang

sangat potensial dalam menstimulir sekresi insulin oleh sel beta pulau Langerhans

(Garfinkel et al. 1992). Dengan demikian, penderita diabetes mellitus dianjurkan

untuk mengkonsumsi minyak kelapa murni karena bermanfaat dalam

menstabilkan glukosa darah (Rindengan and Novarianto 2005).

METODE PENELITIAN

Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilaksanakan pada bulan Juli 2007 sampai dengan bulan Juli

2008 di Laboratorium Bersama Hewan Percobaan Departemen Ilmu dan

Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian dan SEAFAST Center serta di

Laboratorium Histologi Departemen Anatomi, Fisiologi dan Farmakologi,

Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. .

Materi Penelitian

Penelitian ini menggunakan 25 ekor tikus jantan galur Sprague dawley

(Rattus norvegicus) dengan berat badan berkisar antara 150-250 gram. Semua

tikus diadaptasikan selama 1 minggu dengan diberi ransum standar sebelum

dilakukan penelitian. Tikus-tikus tersebut kemudian dibagi menjadi 5 kelompok

perlakuan, yaitu kelompok kontrol negatif (K-), kelompok kontrol positif (K+),

kelompok diabetes yang dicekok VCO A (VA), kelompok diabetes yang dicekok

VCO B (VB), serta kelompok diabetes yang dicekok minyak goreng (MG).

Metode Penelitian

Pembuatan Tikus Diabetes Mellitus

Pertama-tama, tikus percobaan diadaptasikan selama 6 hari. Sehari

sebelum diinjeksi alloxan tikus-tikus dipuasakan. Hari berikutnya, yaitu setelah

dipuasakan tikus-tikus ditimbang berat badannya agar dapat menghitung dosis

alloxan yang tepat. Dosis alloxan yang digunakan adalah 110 mg/kg berat badan

tikus. Tikus diinjeksi alloxan secara intraperitoneal. Setelah dua hari, tikus

diukur glukosa darahnya menggunakan glukometer. Tikus dengan kadar glukosa

darah di atas 200 mg/dL dinyatakan menderita diabetes.

Persiapan Hewan Coba

Penelitian ini menggunakan tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur

Sprague dawley sebanyak 25 ekor tikus yang dibagi dalam lima kelompok, yaitu:

a. Kelompok kontrol negatif (K-) adalah tikus yang tidak diinduksi alloxan;

b. Kelompok kontrol positif (K+) adalah tikus diabetes mellitus dan dicekok

aquadest;

c. Kelompok VCO A adalah tikus diabetes mellitus yang dicekok dengan

VCO A, yaitu VCO yang pembuatannya tanpa panas;

d. Kelompok VCO B adalah tikus diabetes mellitus yang dicekok dengan

VCO B, yaitu VCO yang pembuatannya dengan panas terkendali;

e. Kelompok MG, adalah tikus diabetes mellitus yang dicekok dengan

minyak goreng.

Dosis aquadest, VCO, dan minyak goreng kelapa yang diberikan

5ml/ekor/hari. Seluruh tikus dalam setiap kelompoknya diberi perlakuan selama

28 hari. Di akhir perlakuan dilakukan pengambilan organ hati. Organ hati

difiksasi dengan larutan Bouin selama 24 jam kemudian masuk dalam alkohol

70%. Setelah itu, dipotong-potong dan dimasukkan dalam tissue cassette untuk

melewati proses dehidrasi dalam seri alkohol bertingkat yaitu mulai dari alkohol

80% sampai alkohol absolut. Penjernihkan jaringan hati dilakukan dalam xylol

lalu di-embedding dalam parafin. Blok jaringan dipotong menggunakan

mikrotom (5 m) dan potongan jaringan dilekatkan pada gelas objek.

Pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE) (Kiernan, 1990)

Pewarnaan Hematoxylin Eosin dilakukan untuk mengamati struktur umum

jaringan. Tahapan yang dilakukan dalam pewarnaan ini dimulai dengan

deparafinisasi, yaitu penghilangan parafin dengan memasukkan preparat ke dalam

seri larutan xylol III, II, I. Tahap selanjutnya adalah rehidrasi, yaitu dengan

memasukkan preparat ke dalam seri larutan alkohol absolut sampai alkohol 70%.

Preparat direndam dalam air keran, kemudian dalam aquadest. Preparat diwarnai

dengan pewarna hematoxylin dilanjutkan lagi dengan perendaman dalam

aquadest. Setelah itu, preparat diwarnai menggunakan eosin alkohol diikuti

perendaman kembali dalam aquadest. Kemudian dilakukan proses dehidrasi

dengan alkohol bertingkat serta penjernihan (clearing) dengan menggunakan

xylol. Sediaan ditutup dengan cover glass (mounting).

Pewarnaan Immunohistokimia

Pewarnaan immunohistokimia dilakukan untuk mengamati kandungan

enzim Cu,Zn-SOD pada jaringan hati. Langkah awal pewarnaan ini adalah

deparafinisasi, rehidrasi, dan preparat direndam dalam distiled water (DW).

Langkah selanjutnya adalah preparat dicelupkan dalam larutan 30 ml methanol

yang dicampur dengan 0,3 ml H2O2 dalam gelap. Kemudian, preparat direndam

kembali dalam DW dan selanjutnya dicuci dengan phosphate buffer saline (PBS).

Preparat kemudian diinkubasi dalam normal serum selama 1 jam pada suhu 37C.

Setelah itu, preparat dicuci kembali menggunakan PBS. Lalu preparat

diinkubasikan antibodi monoklonal Cu,Zn-SOD (Sigma S2147) pada suhu 4C

selama dua malam. Preparat dicuci sebanyak tiga kali menggunakan PBS dan

diinkubasi dalam antibodi sekunder, yaitu Dako Envision Peroxidase System pada

suhu 37C. Selanjutnya, dicuci dengan PBS, visualisasi dilakukan dengan

diaminobenzidin (DAB) dalam tris buffer dan H2O2. Untuk perbandingan dengan

reaksi negatif, dilakukan counterstain dengan hematoxylin. Langkah akhir

pewarnaan ini adalah dehidrasi, clearing, dan mounting.

Parameter

Hasil pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE) pada potongan jaringan hati

tikus semua kelompok diamati terhadap morfologi umum sel dan jaringan

termasuk kerusakan sel dan jaringan.

Pengamatan terhadap potongan jaringan hati yang diwarnai dengan teknik

imunohistokimia dilakukan secara kualitatif dan kuantitatif. Pengamatan secara

kualitatif dilakukan dengan cara melihat intensitas warna jaringan hati yang

terwarnai, sedangkan secara kuantitatif dengan menghitung jumlah inti sel hati

pada berbagai tingkat kandungan Cu,Zn-SOD dan menghitung persentase jumlah

inti sel hati yang bereaksi positif dan negatif terhadap Cu,Zn-SOD.

Analisis Data

Hasil pengamatan terhadap jumlah sel inti sel hati pada berbagai tingkat

kandungan Cu, Zn-SOD disusun sebagai Rancangan Acak Lengkap (RAL) dan

dianalisis dengan sidik ragam (ANOVA) dan uji lanjut Duncan.

HASIL

Morfologi Hati

Pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE) dilakukan untuk mewarnai morfologi

sel atau jaringan hati. Hematoxylin bersifat basa akan mewarnai unsur jaringan

yang bersifat asam (basofilik), yaitu inti sel. Sedangkan eosin bersifat asam

sehingga berfungsi mewarnai sitoplasma yang bersifat basa (asidofilik).

Jaringan hati pada kelompok kontrol positif dan kelompok minyak goreng

menunjukkan terjadinya kerusakan-kerusakan sel seperti degenerasi dan nekrosa.

Terdapat beberapa sel dengan inti dan sitoplasma yang membesar dan berwarna

lebih pucat. Nekrosa sel hati ditandai dengan inti sel yang pecah.

Pada kelompok perlakuan VCO A dan VCO B ditemukan degenerasi dan

nekrosa namun tidak sebanyak yang tampak pada kelompok kontrol positif

maupun kelompok perlakuan minyak goreng.

Pada kelompok kontrol negatif ditemukan degenerasi dan nekrosa pada

beberapa bagian sel tetapi masih dalam batas yang normal karena di dalam

jaringan yang normal pasti terdapat beberapa sel yang mengalami degenerasi dan

nekrosa (Gambar 1).

Profil Cu, Zn-SOD

Pewarnaan imunohistokimia dilakukan dengan tujuan untuk mendeteksi

kandungan atau komponen aktif yang ada dalam jaringan atau sel yang melibatkan

penggunaan antibodi. Prinsip dasar pewarnaan ini adalah adanya ikatan antara

antigen dan antibodi. Pewarnaan imunohistokimia pada penelitian ini dilakukan

untuk melihat adanya kandungan Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tikus kelompok

kontrol, kelompok diabetes, dan kelompok perlakuan (VA, VB, dan MG).

Pengamatan secara kualitatif dilakukan pada jaringan hati dengan cara

mengamati intensitas warna yang terjadi. Semakin tua warna coklat pada jaringan

hati, semakin tinggi kandungan Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tersebut. Pada

kelompok diabetes (K+) dan kelompok minyak goreng (MG) kandungan Cu,Zn-

SOD pada jaringan hati lebih rendah dibandingkan dengan kontrol negatif (K-).

Kandungan antioksidan Cu,Zn-SOD kelompok VA lebih tinggi dibanding

kelompok K+, namun kandungan Cu,Zn-SOD kelompok VA masih lebih rendah

dibanding kelompok K-. Pada kelompok VB, kandungan Cu,Zn-SOD lebih tinggi

dibanding kelompok K+, namun kandungan Cu,Zn-SOD pada kelompok VB lebih

rendah dibanding kelompok VA (Gambar 2).

Pengamatan kuantitatif kandungan Cu,Zn-SOD pada jaringan hati

dilakukan dengan menghitung jumlah inti sel hati yang bereaksi pada berbagai

tingkat kandungan Cu,Zn-SOD. Reaksi tersebut dapat terlihat dengan adanya

perbedaan intensitas warna pada inti sel hati, antara lain warna untuk reaksi

positif, yaitu positif kuat yang ditunjukkan dengan warna coklat tua (+++), positif

sedang yang ditunjukkan dengan warna coklat muda (++), positif lemah yang

ditunjukkan dengan warna coklat sangat muda (+) dan untuk reaksi negatif

ditunjukkan dengan warna biru (-). Hasil penghitungan jumlah inti sel hati pada

berbagai tingkat kandungan Cu,Zn-SOD dapat dilihat pada Tabel 1.

Tabel 1. Rata-rata jumlah inti sel hati yang bereaksi pada berbagai tingkat kandungan Cu,Zn-SOD pada jaringan hati tikus perlakuan perlapang pandang pada pembesaran 40x

Jumlah Inti Sel Hati

Kelompok +++ ++ + -

K- 71.7 5.5e 47.5 5.9d 26.1 4.7a 27.9 5.6b

K+ 30.2 14.1b 35.2 12.3b 55.9 8.6d 57.1 10.0c

VA 48.6 6.6d 44.3 7.9cd 29.3 4.0a 20.5 5.2a

VB 38.1 4.0c 41.1 4.7c 35.3 2.8b 28.3 3.6b

MG 21.5 2.6a 29.3 3.4a 44.5 3.2c 57.9 15.2c

Keterangan : Superscript yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan nilai yang berbeda nyata (p

Gambar 1. Fotomikrograf jaringan hati tikus perlakuan K-: kontrol negatif, K+: kontrol positif, VA: diabetes + VCO A, VB: diabetes + VCO B, MG: diabetes + minyak goreng. Pewarnaan Hematoxylin Eosin skala 5m.

Gambar 2. Fotomikrograf jaringan hati tikus perlakuan K-: kontrol negatif, K+: kontrol positif, VA: diabetes + VCO A, VB: diabetes + VCO B, MG: diabetes + minyak goreng. Pewarnaan imunohistokimia Cu,Zn-SOD skala 5m.

Hasil uji statistik terhadap jumlah inti sel hati terhadap berbagai tingkat

kandungan Cu,Zn-SOD menunjukkan kandungan Cu,Zn-SOD pada jaringan hati

pada kelompok K+ lebih rendah dibanding kelompok K-. Hal ini terlihat pada

jumlah inti sel yang bereaksi positif kuat dan positif sedang lebih rendah secara

nyata (p

0102030405060708090

K K+ VA VB MG

KELOMPOK

%JU

MLA

H

+

Gambar 3. Persentase jumlah inti sel hati yang bereaksi positif dan negatif terhadap Cu,Zn-SOD. + : Positif; - : Negatif.

Hasil persentase jumlah inti sel hati yang bereaksi positif dan negatif

terhadap Cu,Zn-SOD menunjukkan kandungan Cu,Zn-SOD lebih rendah pada

kelompok K+ dan MG dibandingkan dengan kelompok K-. Hal ini terlihat dari

persentase jumlah inti sel hati yang memberikan reaksi positif lebih rendah pada

kelompok K+ (67,9%) dan MG (62,1%) dibanding kelompok K- (83,9%).

Rendahnya kandungan antioksidan Cu,Zn-SOD juga terlihat dari persentase

jumlah inti sel hati yang memberikan reaksi negatif lebih tinggi pada kelompok

K+ (32%) dan MG (37,8%) dibanding kelompok K- (16%).

Kandungan antioksidan Cu,Zn-SOD pada kelompok VA lebih tinggi

dibanding kelompok K+. Hal ini terlihat dari persentase jumlah inti sel hati yang

memberikan reaksi positif lebih tinggi pada kelompok VA (85,6%) dibanding

kelompok K+ (67,9%). Tingginya kandungan antioksidan Cu,Zn-SOD juga

terlihat dari persentase jumlah inti sel hati yang memberikan reaksi negatif lebih

rendah pada kelompok VA (14,4%) dibanding kelompok K+ (32%).

Kandungan antioksidan Cu,Zn-SOD kelompok VB lebih tinggi dibanding

kelompok K+. Hal ini dapat dilihat dari persentase jumlah inti sel hati yang

memberikan reaksi positif lebih tinggi pada kelompok VB (80,2%) dibanding

kelompok K+ (67,9%). Tingginya kandungan antioksidan Cu,Zn-SOD juga

terlihat dari persentase jumlah inti sel hati yang memberikan reaksi negatif lebih

rendah pada kelompok VB (19,8%) dibanding kelompok K+ (32%). Jika

kelompok VA dan kelompok VB dibandingkan, kandungan antioksidan Cu,Zn-

SOD kelompok VA lebih tinggi dibanding kelompok VB. Hal ini terlihat dari

persentase jumlah inti sel hati pada reaksi positif lebih tinggi pada kelompok VA

(85,6%) dibanding kelompok VB (80,2%). Tingginya kandungan Cu,Zn-SOD

juga terlihat dari persentase jumlah inti sel hati yang memberikan reaksi negatif

lebih rendah pada kelompok VA (14,4%) dibanding kelompok VB (19,8%).

PEMBAHASAN

Morfologi Hati

Hati merupakan organ yang sangat penting untuk proses fisiologi normal

sistem dalam tubuh. Hampir seluruh proses metabolisme terjadi di hati. Hati

berperan penting dalam mengatur metabolisme lemak, protein, karbohidrat dan

juga mempertahankan kadar glukosa darah normal (Rodney dan Tanner 2004).

Apabila terjadi gangguan pada proses metabolisme tersebut maka akan

menyebabkan gangguan pada fungsi hati.

Jaringan hati kelompok diabetes mellitus (K+) yang diinduksi alloxan dan

hanya dicekok aquadest dengan pewarnaan Hematoxylin Eosin (HE) terlihat

mengalami beberapa perubahan patologis. Perubahan patologis yang terjadi

berupa degenerasi dan nekrosa sel-sel hati. Kondisi diabetes mellitus

menyebabkan tubuh tidak dapat menggunakan glukosa sebagai sumber energi

akibat defisiensi insulin sehingga tubuh mencari sumber energi lain, antara lain

dengan pemecahan glikogen, protein, dan lipid. Proses pemecahan glikogen,

protein dan lipid, selain menghasilkan energi juga menghasilkan produk

sampingan, yaitu radikal bebas. Bila proses ini berlangsung secara terus-menerus,

jumlah radikal bebas yang terbentuk semakin banyak. Jumlah radikal bebas yang

tinggi dalam tubuh menyerang biomakromolekul yang merupakan komponen

dinding sel. Akibatnya, fungsi dinding sel menurun sehingga menimbulkan

kerusakan sel berupa degenerasi dan nekrosa seperti terlihat pada kelompok K+

pada penelitian ini (Halliwell dan Gutteridge 1999).

Jaringan hati kelompok K- mengalami degenerasi sampai dengan nekrosa

terendah. Hal ini disebabkan kelompok K- tidak diinduksi alloxan sehingga tidak

timbul kondisi diabetes mellitus.

Jaringan hati kelompok MG yang diinduksi alloxan dan dicekok minyak

goreng terlihat mengalami perubahan patologis berupa degenerasi sampai dengan

nekrosa yang menyebar pada sel-sel hati. Pada kondisi diabetes mellitus, tubuh

harus mencari sumber energi lain, antara lain dengan peroksidasi lipid.

Peroksidasi lipid menghasilkan produk sampingan berupa radikal bebas. Proses

ini berlangsung secara terus-menerus sehingga jumlah radikal bebas dalam tubuh

bertambah banyak dan berakibat pada kerusakan sel. Jumlah radikal bebas yang

tinggi pada kondisi diabetes mellitus akan bertambah dengan perlakuan cekok

minyak goreng. Minyak goreng mengandung asam lemak tak jenuh tinggi yang

memicu peroksidasi lipid dan hasil sampingannya berupa radikal bebas bertambah

banyak. Jumlah radikal bebas yang tinggi menyebabkan penyerangan terhadap

biomakromolekul, yang merupakan komponen dinding sel, lebih tinggi sehingga

menimbulkan kerusakan sel berupa degenerasi dan nekrosa yang lebih parah.

Pemberian minyak kelapa murni (VCO) pada perlakuan VA dan VB

menunjukkan bahwa kerusakan sel berupa degenerasi dan nekrosa yang terjadi

lebih rendah dibandingkan dengan kelompok diabetes (K+) dan kelompok

perlakuan minyak goreng (MG). Hal ini disebabkan VCO mengandung asam

laurat yang cukup tinggi, mencapai 53% (Rindengan dan Novarianto 2005).

Asam laurat atau lebih dikenal dengan nama medium chain fatty acid (MCFA)

mudah diserap ke dalam mitokondria sel sehingga metabolisme meningkat.

Dengan adanya peningkatan metabolisme maka sel-sel bekerja lebih efisien untuk

membentuk sel-sel baru serta mengganti sel-sel yang rusak lebih cepat. VCO juga

mengandung vitamin E dan polifenol yang merupakan antioksidan kuat. Polifenol

dan vitamin E berperan sebagai antioksidan yang membantu antioksidan endogen

dalam menetralisir radikal bebas. Radikal bebas yang lebih sedikit mengurangi

penyerangan terhadap biomakromolekul sehingga kerusakan pada dinding sel

yang dapat menyebabkan penurunan fungsi sel tidak terjadi dan kerusakan sel

berupa degenerasi dan nekrosa dapat dicegah. Hal inilah yang menyebabkan

kelompok VA dan VB menunjukkan kerusakan sel berupa degenerasi dan nekrosa

lebih sedikit dibandingkan kelompok K+ dan MG.

Profil Cu,Zn-SOD

Pada kondisi diabetes mellitus terjadi gangguan pada metabolisme,

terutama metabolisme karbohidrat. Hal ini disebabkan oleh defisiensi sekresi

insulin, resistensi insulin, atau bahkan keduanya di dalam tubuh sehingga kadar

glukosa dalam darah meningkat dan menimbulkan hiperglikemia. Pada kondisi

diabetes, tubuh tidak dapat menggunakan glukosa sebagai sumber energi sehingga

tubuh mencari sumber energi lain, yaitu lemak. Tubuh akan melakukan proses

lipolisis di dalam hati, yaitu pemecahan lemak sebagai sumber energi. Proses

pemecahan lemak, selain menghasilkan energi juga menghasilkan produk

sampingan, yaitu radikal bebas. Bertambahnya jumlah radikal bebas akibat proses

pemecahan lemak secara terus-menerus untuk menghasilkan energi pada kondisi

diabetes mellitus akan menyebabkan antioksidan tubuh tidak dapat mengatasi

kelebihan radikal bebas tersebut sehingga menimbulkan stres oksidatif di mana

jumlah oksidan melebihi jumlah antioksidan.

Pada kelompok diabetes (K+) dan perlakuan minyak goreng (MG) terlihat

kandungan Cu,Zn-SOD lebih rendah dibanding kelompok K-. Hal ini terjadi

karena pada kondisi diabetes, jumlah radikal bebas dalam tubuh tinggi sehingga

antioksidan tidak mampu mengatasi kelebihan radikal bebas tersebut dan

menghasilkan stres oksidatif. Keadaan stres oksidatif menyebabkan kandungan

antioksidan, seperti Cu,Zn-SOD, lebih rendah. Wresdiyati et al. (2003) telah

melaporkan bahwa pada kondisi diabetes kandungan antioksidan-superoksida

dismutase (SOD) dalam jaringan hati Macaca fascicularis lebih rendah akibat

jumlah radikal bebas yang tinggi dalam tubuh. Sedangkan pada kelompok MG,

minyak goreng mengandung asam lemak tak jenuh tinggi yang dapat

meningkatkan peroksidasi lipid sehingga jumlah radikal bebas yang dihasilkan

lebih tinggi. Jumlah radikal bebas yang tinggi dalam tubuh menyebabkan

antioksidan tubuh tidak mencukupi untuk melawan radikal bebas sehingga

kandungan antioksidan Cu,Zn-SOD pada kelompok MG lebih rendah dibanding

kelompok K-.

Pemberian VCO pada jaringan hati tikus yang mengalami diabetes dapat

memberikan pengaruh nyata terhadap penambahan kandungan antioksidan dalam

tubuh. Hal ini disebabkan VCO mengandung asam laurat yang tinggi. Menurut

laporan Garfinkel et al. (1992), asam laurat memiliki efek yang sangat potensial

dalam menstimulir sekresi insulin oleh sel beta pulau Langerhans pankreas.

Dengan dihasilkannya insulin, pembentukkan radikal bebas yang lebih banyak

dapat dicegah sehingga jumlah antioksidan untuk menetralisir radikal bebas lebih

sedikit dan sisa antioksidan yang dipertahankan lebih banyak. VCO juga

memiliki kandungan antioksidan berupa vitamin E dan polifenol (Subroto 2006).

Vitamin E dan polifenol membantu kerja Cu,Zn-SOD sebagai antioksidan

endogen dalam menahan serangan dari radikal bebas. Akibatnya semakin sedikit

antioksidan Cu,Zn-SOD yang melakukan perlawanan terhadap radikal bebas

sehingga sisa antioksidan Cu,Zn-SOD yang dipertahankan lebih banyak. Hal

tersebut yang menyebabkan kandungan antioksidan endogen pada kelompok

perlakuan diabetes yang diberi VCO lebih tinggi dibandingkan dengan kelompok

diabetes.

Kandungan antioksidan Cu,Zn-SOD pada kelompok VA lebih tinggi

dibandingkan kelompok VB. Hal ini disebabkan oleh perbedaan proses produksi

minyak kelapa murni kedua kelompok tersebut. VA atau minyak kelapa murni A

diproduksi tanpa panas, sedangkan VB atau minyak kelapa murni B dengan panas

terkendali. Menurut Subroto (2006), tinggi rendahnya kandungan vitamin E dan

polifenol dalam VCO ditentukan oleh kualitas bahan bakunya dan proses produksi

yang digunakan. Proses produksi yang menerapkan penggunaan panas dapat

menurunkan kadar vitamin E dan polifenol sekitar 25%, bahkan dapat hilang sama

sekali dengan pemanasan berlebihan. VA memiliki kandungan asam laurat,

vitamin E dan polifenol yang lebih tinggi dibanding VB sehingga lebih efektif

dalam membantu kerja antioksidan Cu,Zn-SOD untuk menetralisir radikal bebas.

Jumlah radikal bebas pada VA lebih sedikit sehingga jumlah antioksidan Cu,Zn-

SOD untuk menangkap radikal bebas pun lebih sedikit dan sisa Cu,Zn-SOD yang

dipertahankan pada kelompok VA lebih banyak dibanding pada kelompok VB.

KESIMPULAN DAN SARAN

Kesimpulan

1. Minyak kelapa murni (VCO) mampu meningkatkan kandungan

antioksidan copper,zinc superoxide dismutase (Cu,Zn-SOD) dan

menurunkan jumlah kerusakan sel pada jaringan hati tikus dalam kondisi

diabetes mellitus.

2. Pengaruh pemberian minyak kelapa murni (VCO) terhadap peningkatan

antioksidan copper,zinc superoxide dismutase (Cu,Zn-SOD) lebih efektif

pada kelompok yang diberi VCO yang diproduksi tanpa panas.

Saran

Disarankan kepada masyarakat, khususnya penderita diabetes mellitus,

untuk mengatur pola makan dan mengkonsumsi antioksidan eksogen, seperti

VCO, secara teratur.

DAFTAR PUSTAKA

Chang, L, LW. Slot, HJ. Geuze, JD. Crapo. 1988. Molecular

immunocytochemistry of the cu,zn-superoxide dismutase in rat hepatocytes. J.

Cell Biol. 107(6):2169-2179

Chausmer, AB. 1998. Zinc, insulin, and diabetes. J. Am. Coll. Nut. 17(2):109

115

Cohen, K, A. Nyska. 2002. Oxidation of biological system: oxidative stress

phenomena, antioxidants, redox reaction, and methods for their

quantifications. Toxicologic Path. 30(6):620-650

Dellman, HD, J. Eurell. 1998. Textbook of Veterinary Histology 5th ed. Baltimore,

Maryland USA: Lippincott Williams and Wilkins. Pp. 194-199

Devasagayam, TPA, JC. Tilak, KK. Boloor, KS. Sane, SS. Ghaskadbi, RD. Lele.

2004. Free radicals and antioxidants in human health: Current status and

future prospects. JAPI. 52(10):794-804

Drews, G, C. Krmer, M. Dfer, P. Krippeit-Drews . 2000. Contrasting effects of alloxan on islets and single mouse pancreatic Cells. Biochem J. 352:389-397

Ganiswarna, SG. 1995. Farmakologi dan Terapi Ed. 4. Jakarta: Bagian

Farmakologi FKUI. Pp. 471

Ganong, WF. 2002. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Jakarta: Penerbit Buku

Kedokteran AGC. Penerjemah: Brahm U Pendit. Terjemahan dari: Review of

Medical Physiology. Pp. 340-341; 481-482

Gardner, DG, D. Shoback. 2007. Greenspans Basic and Clinical Endocrinology.

USA: The McGraw-Hill Companies. Pp. 18-19

Garfinkel, M, S. Lee, SC Opera, OE Akwari. 1992. Insulinotropic potency of

lauric acid, a metabolic rationale for Medium Fatty Acid (MCF) in TPN

formulation. J. Surg 52(4) : 328-333

Gitawati, R. 1995. Radikal bebas, sifat dan peranan dalam menimbulkan

kerusakan atau kematian sel. Cermin Dunia Kedokteran 102:33-36

Guyton, AC, JE. Hall. 1997. Textbook of Medical Physiology. Penerjemah Irawati

Setiawan dkk. Jakarta: EGC Penerbit Buku Kedokteran. Pp. 1103-1107

Halliwell BJ, MC. Gutteridge. 1999. Free Radical in Biology and Medicine. 3rd

Ed. Oxford: University Press. Pp. 107-113; 561-562

Kahn, C. 2005. The Merck Veterinary Manual 9th ed. Philadelphia: Merck & Co.

Inc. Pp. 439-441

Kiernan, JA. 1990. Histological and Histochemical Methods: Theory and

Practice. 2nd Ed. Oxford: Pergamont Press. Pp. 96-97

Kubisch, HM, J. Wang, R. Luche, E. Carlson, TM. Bray, CJ. Epstein, JP. Phillips.

1994. Transgenic copper,zinc superoxide dismutase modulates susceptibility

to type I diabetes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9956-9959

OMalley, B. 2005. Clinical Anatomy and Physiology of Exotic Species. London:

Elseviers Saunders. Pp. 217

Rindengan, B, H. Novarianto. 2005. Pembuatan dan Pemanfaatan Minyak Kelapa

Murni. Jakarta: Penebar Swadaya. Pp. 55-63

Rodney, A, GA. Tanner. 2004. Medical Physiology. USA: Lippincott Williams

and Wilkins. Pp. 514-523

Subroto, A. 2006. Antibakteri dan Antioksidan di Minyak Perawan. Trubus. Pp.

36-37 [April 2006]

Szkudelski, T. 2001. The mechanism of alloxan and streptozotocin in cells of

the rat pancreas. Physiol. Res. 50:536-546

Thurston, JH, RE. Hauhart, EM. Jones, JL. Ater. 1975. Effects of alloxan

diabetes, anti-insulin serum diabetes, and non-diabetic dehydration on brain

carbohydrate and energy metabolism in young mice. J. Biol. Chem.

250(8):1751-1758

WHO. 1999. Definition, Diagnosis, and Classification of Diabetes Mellitus and

Its Compilcation. Geneva: WHO. Pp. 14-18

Windholz, M. 1983. The Merck Index 10th ed. USA: Merck and Co. Inc. Pp. 43-44

Wresdiyati T, RPA. Lelana, IKM. Adyane, K. Noor. 2003. Immunohistichemical

study of superoxide dismutase in the liver of alloxan diabetes mellitus

macaques. Hayati : 61-65A

LAMPIRAN

Dehidrasi, Clearing, Mounting

Lampiran 4. Analisis Sidik Ragam dengan uji lanjutan Duncan terhadap Jumlah Inti Sel Hati

Jumlah Inti Sel Hati

Kelompok +++ ++ + -

K- 71.7 5.5e 47.5 5.9d 26.1 4.7a 27.9 5.6b

K+ 30.2 14.1b 35.2 12.3b 55.9 8.6d 57.1 10.0c

VA 48.6 6.6d 44.3 7.9cd 29.3 4.0a 20.5 5.2a

VB 38.1 4.0c 41.1 4.7c 35.3 2.8b 28.3 3.6b

MG 21.5 2.6a 29.3 3.4a 44.5 3.2c 57.9 15.2c

Sumber

Keragaman JK db KT F

hitung Sig. PositifKuat Perlakuan 22458.987 4 5614.747 94.524 .000

Galat 4158.000 70 59.400 Total 26616.987 74

PositifSedang Perlakuan 3166.987 4 791.747 13.926 .000 Galat 3979.733 70 56.853 Total 7146.720 74

PositifLemah Perlakuan 8828.880 4 2207.220 84.602 .000 Galat 1826.267 70 26.090 Total 10655.147 74

Negatif Perlakuan 18957.200 4 4739.300 58.764 .000 Galat 5645.467 70 80.650 Total 24602.667 74

PositifKuat

Perlakuan N Subset untuk alfa 0.05

a b c d e MG 15 21.5333 K+ 15 30.2000 VB 15 38.0667 VA 15 48.6000 K- 15 71.6667 Sig. 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000

PositifSedang Perlakuan N

Subset untuk alfa 0.05 a b c d

MG 15 29.3333 K+ 15 35.2000 VB 15 41.0667 VA 15 44.3333 44.3333 K- 15 47.4667 Sig. 1.000 1.000 .239 .259

PositifLemah Perlakuan N

Subset untuk alfa 0.05 a b c d

K- 15 26.1333 VA 15 29.2667 VB 15 35.2667 MG 15 44.5333 K+ 15 55.9333 Sig. .097 1.000 1.000 1.000

Negatif Perlakuan N

Subset untuk alfa 0.05 a b c

VA 15 20.4667 K- 15 27.9333 VB 15 28.2667 K+ 15 57.0667MG 15 57.9333Sig. 1.000 .919 .792

Keterangan: K- : Kontrol negatif K+ : Kontrol positif VA : VCO A (VCO yang diproduksi dengan pemanasan) VB : VCO B (VCO yang diproduksi tanpa panas) MG : Minyak goreng +++ : Positif kuat ++ : Positif sedang + : Positif lemah

- : Negatif

penelitian sod vco ipb

Documents