Modul Inti 2: Pemeriksaan HIV

Pemeriksaan HIV BALAI BESAR LABORATORIUM KESEHATAN SURABAYAPemeriksaan Laboratorium HIVBiakan virus Deteksi antigen: p24Deteksi materi genetik: DNA provirus / RNA

Deteksi antibodi: penyaring & konfirmasi

Pemakaian Strategi Penyaring

STRATEGI PEMERIKSAANSerial - Sampel diperiksa dengan reagen 1 yang mempunyai sensitifitas tinggi utk mengurangi hasil negatif palsu- Tes pertama menentukan apakah di perlukan tes tambahanParalel - Sampel diperiksa sekaligus atau secara bersamaan dgn 2 atau 3 tes / reagen yang berbeda - Salah satu tes memiliki sensitifitas tinggi dan yang lain memiliki spesifisitas tinggi- Tes pararel tidak dianjurkan karena biaya meningkat

Penyaring : EIA, aglutinasi, dot-blot immunobinding assay, imunokromatografiKonfirmasi : Western blot, Lineimmunoassay, imunofluoresensi, Radioimmunoprecipitation assayDeteksi Antibodi

5Alur Pemeriksaan Anti-HIV untuk DiagnosisA1A1 positifA1 negatifLapor sebagai Non-reaktifA2

A1 pos A2 posA2A3Alur Pemeriksaan Anti-HIV untuk DiagnosisA1 pos A2 negUlangi A1&A2A1 pos A2 posA1 pos A2 negLapor sebagai Non-reaktifA1 neg A2 negLapor sebagai reaktifA1 pos A2 pos A3 pos

A1 posA2 posA2A3Alur Pemeriksaan Anti-HIV untuk DiagnosisA1 pos A2 negUlangi A1&A2A1 pos A2 posA1 pos A2 negLapor sebagai Non-reaktifA1 neg A2 negA1 pos A2 neg A3 posA1 pos A2 pos A3 negLapor sebagai Indeterm

A1 pos A2 posA2A3Alur Pemeriksaan Anti-HIV untuk DiagnosisA1 pos A2 negUlangi A1&A2A1 pos A2 posA1 pos A2 negLapor sebagai Non-reaktifA1 neg A2 negA1 pos A2 neg A3 neg

Alur Pemeriksaan Anti-HIV untuk DiagnosisA1 pos A2 neg A3 negRisiko tinggiRisiko rendahLapor sebagai Non-reaktifLapor sebagai Indeterm

ALUR STRATEGI IIIPositifNegatifP I positifP II positifP I positifP II negatifP I positifP II positifPemeriksaan IPemeriksaan IIUlang Pemeriksaan I dan Pemeriksaan IINON REAKTIFP I negatif P II negatifP I negatifP II positifPemeriksaan IIINON REAKTIFP I positifP II negatifP I positifP II positifP III positifREAKTIFP I positifP II positifP III negatifP I negatifP II positifP III positifP I positifP II negatifP III positifINDETERMINATEP I positifP II negatifP III negatifRisiko tinggiRisiko rendahRujuk ke Laboratorium ....11Hasil PositifBila hasil A1 reaktif, A2 reaktif dan A3 ReaktifHasil NegatifBila Hasil A1 non reaktifBila hasil A1 reaktif tapi pada pengulangan A1 dan A2 non reaktifBila salah satu reaktif tapi tidak beresikoHasil IndeterminateBila dua hasil tes reaktifBila hanya 1 tes reaktif tapi beresiko atau pasangan beresikoInterpretasi Hasil Pemeriksaan HIV

Tindak lanjut hasil positif :Rujuk ke Pengobatan HIVTindak lanjut hasil negatifBila hasil negatif dan beresiko dianjurkan pemeriksaan ulang minimal 3 bulan , 6 bulan dan 12 bulan dari pemeriksaan pertama sampai satu tahunBila hasil negatif dan tidak beresiko dianjurkan prilaku hidup sehatTindak lanjut hasil indeterminateTes perlu diulang dengan spesimen baru minimum setelah 2 minggu dari pemeriksaan pertamaBila hasil tetap indeterminate, dilanjutkan dengan pemeriksaan PCRBila sarana pemeriksaan PCR tidak memungkinkan, rapid tes di ulang 3 bulan, 6 bulan dan 12 bulan dari pemeriksaan yang pertama. Bila sampai 1 tahun hasil tetap indeterminate dan faktor resiko rendah , hasil dapat dinyatakan sebagai negatifTindak Lanjut Pemeriksaan Anti HIV

Pemilihan ReagensiaDiagnosis:Reagen Pertama : sensitivitas tertinggi (>99 %)Reagen kedua : spesifisitas > 98 % atau lebih besar dari reagen > 1Reagen ketiga : spesifisitas > 99 % atau lebih besar dari reagen > 2Asal antigen atau prinsip tes berbedaHasil diskordan < 5%Western BlotLIARIPAPemeriksaan KonfirmasiCDC: 2 di antara p24, gp41 atau gp120/160

WHO: 2 pita envelope

USFDA: p24, p31 & gp41 atau gp120/160Imunofluoresensi15Western Blot

gp160gp120p66p51/55gp41p39p31p24p17HIV-216Aglutinasi

Imunokonsentrasi (Flow-through)

Immunocomb

Imunokromatografi (Lateral flow)Berbagai Teknik Cara Diagnosis Cepat (simple/rapid = S/R)17Cepat

Tidak perlu listrik

Kebaikan Aglutinasi

18Pembacaan secara visual (subjektivitas)Waktu pembacaan harus tepatEfek Prozone dan Post-zonePerlu cahaya cukupHarus disimpan pada suhu 2-8C, tidak dapat pada suhu kamar (25C)Tidak dapat menyimpan bukti pemeriksaanKeterbatasan Aglutinasi19Imunokonsentrasi (Flow-through)KonjugatAgMembranabsorbenSpesimen20Cepat

Tidak memerlukan alat listrik

Kebaikan Imunokonsentrasi

21Pembacaan secara visual (subjektivitas)Waktu pembacaan harus tepatPerlu cahaya cukupHarus disimpan pada suhu 2-8C, tidak dapat pada suhu kamar (25C) Umumnya masih memerlukan 2 atau lebih tahap pengerjaanTidak dapat menyimpan bukti pemeriksaanKeterbatasan Imunokonsentrasi22ImmunocombAgKonjugat23Cepat

Tidak memerlukan alat listrik

Kebaikan Immunocomb

24Pembacaan secara visual (subjektivitas)Waktu pembacaan harus tepatPerlu cahaya cukupHarus disimpan pada suhu 2-8C, tidak dapat pada suhu kamar (25C) Umumnya masih memerlukan 2 atau lebih tahap pengerjaan, beberapa tahap pencucianTidak dapat menyimpan bukti pemeriksaanKeterbatasan Immunocomb25ImunokromatografiAntibodiKoloid emas26Cepat

Tidak memerlukan alat listrik

Reagensia dapat disimpan pada suhu kamar (maksimal 25C)Kebaikan Imunokromatografi

27Pembacaan secara visual (subjektivitas)Waktu pembacaan harus tepatPerlu cahaya cukupSpesimen gagal mengalir ke sampingTidak dapat menyimpan bukti pemeriksaanKeterbatasan Imunokromatografi28Umumnya tidak disertai bahan kontrol positif maupun negatifHanya dapat dipakai untuk jumlah spesimen 20 untuk tiap kali pengerjaan. Bila terlalu banyak, berisiko menimbulkan kesalahan lebih besar.Keterbatasan Lain Cara Diagnosis Cepat29Subyektivitas:Hasil dibaca oleh 3 orang secara terpisah, dilaporkan hasil yang sama dari 2 orang pembaca

Efek prozone/post-zone:Pengenceran spesimen

Cara Mengatasi Keterbatasan30Indirect EIA

Competitive EIA

Antigen sandwich EIA

Capture EIA Enzyme Immunoassay (EIA)31Indirect EIAAgAntibodiEAnti-human Ig+enzymesubstratBLK SUBCompetitive EIAAgAgAgAntibodiEAntibodi + enzymesubstratBLK SUBAntigen sandwich EIAAgAntibodisubstratEAntigen + enzymeBLK SUBCapture EIAEAntigen + enzymeAntibodisubstratAnti-human Ig G / MBLK SUBTahapan proses EIAPersiapan reagensiaPenambahan spesimen / bahan pemeriksaanInkubasiPencucianPenambahan konjugatInkubasiPencucianPenambahan substratInkubasiPenghentian reaksiPembacaan hasil

Kelebihan Pemeriksaan Rapid & EIANoParameterKelebihanRapidELISA1.KegunaanMeningkatkan akses untuk upaya pencegahan (VCT/PITC) dan intervensi (PMTCT)Mendukung peningkatan jumlah klinik HIVKonseling dan diagnosis di hari yang samaLebih akurat untuk kegunaan diagnosa2.Ruang pemeriksaanTidak memerlukanl laboratorium khususBisa dilakukan di lapanganMemenuhi kaidah laboratorium pemeriksaan sehingga diharapkan kemungkinan risiko kontaminasi lebih rendah3.PrasaranaRelatif tidak memerlukan sumber listrik dan air untuk pengerjaan pemeriksaan4.Peralatan Kebanyakan tidak membutuhkan peralatan penyimpanan dan pelaksanan pemeriksaanSudah tersedia peralatan otomatik yang akan memudahkan pengerjaan5.KetenagaanKeahlian teknis minimalJika digunakan peralatan ELISA otomatik kebutuhan tenaga minimal6.Jumlah spesimenEfisien untuk jumlah spesimen sedikitEfisien untuk jumlah spesimen banyakKelebihan Pemeriksaan Rapid & EIANoParameterKelebihanRapidELISA7.ReagensiaReagensia bisa disimpan pada suhu kamarKarena komponen reagensia kebanyakan dalam keadaan kering, maka masa kadaluwarsa umunya lebih dari 1 tahunMampu mendeteksi varian virusBisa sekaligus mendeteksi keberadaan antibodi dan antigen (ELISA kombinasi)8.Prosedur Mudah digunakanBanyak pemeriksaan rapid yang hanya memerlukan prosedur satu langkahWaktu pemeriksaan dibawah 30 menitSaat ini sudah tersedia banyak peralatan ELISA yang otomatik sehingga prosedur lebih mudah dan akurat9.Pembacaan atau interpretasiRelatif mudahRelatif lebih akurat karena dibaca oleh alat10.DokumentasiHasil print out pembacaan dapat didokumentasikanKekurangan Pemeriksaan Rapid & EIANoParameterKekuranganRapidELISA1.KegunaanEfektif untuk layanan satu hari selesai misalnya layanan VCT atau PITC yang terintegrasiTidak efektif dan efisien untuk tujuan pencegahan, misalnya di VCT atau PITC2.Ruang pemeriksaanJika pemeriksaan dilakukan di lapangan kemungkinan risiko kontaminasi lebih tinggiMemerlukan laboratorium khusus yang memenuhi standarTidak dapat dilakukan di lapangan3.PrasaranaOleh karena pembacaan hasil tanpa alat, dibutuhkan sumber cahaya yang memadaiMemerlukan sumber listrik yang stabil dan sumber air yang memenuhi persyaratan prosedur pemeriksaan untuk menghindari hasil yang tidak diinginkan4.Peralatan Dropper atau pipet disediakan pabrik sulit distandarisasiMembutuhkan peralatan penyimpanan reagen dan pelaksanaan pemeriksaan (inkubator, washer dan reader)5.KetenagaanKarena kesederhanaan prosedur cenderung pelatihan tenaga dilakukan minimalKeahlian teknis harus optimalKekurangan Pemeriksaan Rapid & EIANoParameterKekuranganRapidELISA6.Jumlah spesimenTidak efisien untuk jumlah spesimen banyakTidak efisien untuk jumlah spesimen sedikit7.ReagensiaTidak mampu mendeteksi varian virusBelum bisa sekaligus mendeteksi keberadaan antibodi dan antigenReagensia harus disimpan pada suhu 2 80 CKarena komponen reagensia kebanyakan dalam bentuk cairan, maka masa kadaluwarsa umumnya kurang dari 1 tahun8.Prosedur Karena kesederhanaan dan kecepatan prosedur, kecenderungan kesalahan manusia relatif lebih besarTidak terlalu mudah untuk digunakanWaktu pemeriksaan rata rata 2 jam dalam satu kali pengerjaan oleh karena ada langkah inkubasi dan pencucian9.Pembacaan atau interpretasiPerlu pendapat orang kedua untuk menghindari kesalahan pembacaanInterpretasi relatif lebih sulit, khususnya terkait dengan pembacaan nilai ratio dan nilai grey zone10.DokumentasiDokumentasi merupakan hasil pencatatan petugas yang berisiko atas terjadinya kesalahan pencatatanViral load (RNA HIV)Jumlah sel CD4+Pemantauan infeksi HIVAmplifikasi target:Polymerase chain reaction (PCR)Nucleic acid sequence-based amplification (NASBA)Amplifikasi signal:Branched deoxyribo nucleic acid (bDNA)Reverse transcriptase activityMetoda Pemeriksaan Viral LoadFlowcytometrySingle platform:Microbead-basedVolumetric-basedDual platform:T-cell gatingCD45 gatingPanleukogatingMetoda Pemeriksaan Jumlah Sel CD4+Non-flowcytometricMicroscope-based:RosetteImmunomagnetic cell isolationELISAMicrochipMetoda Pemeriksaan Jumlah Sel CD4+No.KitManufacturerType of kit Sensitivity Specificity Month1Enzygnost anti-HIV 1/2 PlusDade BehringEIA 99,34 98,30 December 20012Murex HIV-1.2.OAbbottEIA 100,00 97,16 December 20013HIV Uniform II Ag.AbOrganon TeknikaEIA 98,68 96,59 December 20014Vidas HIV DuoBioMerieuxEIA 98,68 97,16 December 20015Immunocomb II HIV 1&2 BiSpotPBS OrgenicsRapid 98,68 99,43 December 20016HIV SpotGenelabs DiagnosticsRapid 94,70 100,00 December 20017Hexagon HIVHumanRapid 97,37 100,00 December 20018Eucardio HIV EIALab IncEIA 49,34 98,30 December 20019dBest One Step HIV-1/HIV-2 Test StripAmeriTekRapid 98,03 80,11 December 200110Capillus HIV-1/HIV-2Trinity BiotechRapid 96,05 99,43 December 200111Genie II HIV-1/HIV-2BioRadRapid 95,39 99,43 December 200112SD HIV 1/2 ELISA 3.0Standard DiagnosticsEIA 98,03 98,86 August 200213Rapid HIV 1&2 Double SpotBiotech AtlanticRapid 95,97 100,00 August 200214Vironostika Uniform II HIV Plus OOrganon Teknika/BioMerieuxEIA 100,00 99,43 August 200215Virolisa HIV 1 + 2Index Union DiagnosticsEIA 99,40 100,00 27 December 200216HIV TridotJ MitraRapid 95,36 100,00 31 December 200217Ortho HIV-1/HIV-2 Antibody CaptureOrtho DiagnosticsEIA 98,68 99,43 28 February 2003HASIL EVALUASI REAGEN HIV DARI RSCM (Per Mei 2010)4518Biotest Anti-HIV Tetra ELISABiotestEIA 100,00 100,00 17 June 200319Human HIV-1+ 2HumanEIA 98,68 97,16 30 June 200320HIV Combi EIARoche DiagnosticsEIA 98,03 100,00 2 July 200321Hexagon HIV 3rd generationHumanRapid 99,34 98,30 30 July 200322Advance Quality Rapid HIV testIntecRapid 98,68 98,86 6 August 200323Acon HIV 1/2AconRapid 99,34 97,73 25 August 200324Detect HIVAdaltisEIA 98,68 94,32 31 August 200325Entebe anti-HIV CassetteHepatika LaboratoriesRapid 98,68 98,86 31 August 200326Entebe anti-HIV StripHepatika LaboratoriesRapid 98,03 98,30 31 August 200327Diaspot HIV 1/2?Rapid 98,68 89,20 23 February 200428Vironostika HIV Uniform II Ag/Ab (2004)BioMerieuxEIA100,00 100,00 30 September 200429Uni-Gold Recombigen HIVTrinity BiotechRapid 98,00 98,86 24 November 200430HIV 1/2 Human Immunodeficiency Virus Rapid Test Single Use KitElitzmediRapid 97,33 99,43 19 January 200531Architect HIV Ag/Ab ComboAbbott DiagnosticsEIA 100,00 99,43 18 February 200532Instant Chek HIVEY LaboratoriesRapid 95,33 86,36 22 March 200533Elecsys HIV CombiRoche DiagnosticsEIA 100,00 93,75 30 May 200534Genedia HIV 1/2 Rapid 3.0Green CrossRapid 99,33 98,30 30 May 2005HASIL EVALUASI REAGEN HIV DARI RSCM (Per Mei 2010)4635Vitros HIV ECIOrtho DiagnosticsEIA 100,00 98,30 1 July 200536Onsight HIV Stat Rapid HIV-1/2 Serum/Plasma TestAmgenixRapid 97,33 99,43 1 July 200537Master Screen Rapid Screen Test for HIV 1 and HIV 2Masters Health LabsRapid 99,33 100,00 4 July 200538Axsym HIV 1/2 ComboAbbott DiagnosticsEIA 100,00 100,00 16 September 200539Wantai Screening HIV 1+2Beijing Wantai Biolocical Pharmacy EnterpriceEIA 100,00 94,89 5 October 200540Murex HIV Ag/Ab CombinationAbbott DiagnosticsEIA 100,00 99,43 5 October 200541HIV 1&2 Antibody Rapid Test 4th generationOncoprobeRapid 100,00 100,00 26 October 200542Genscreen Ultra HIV Ag-AbBioRadEIA 100,00 97,16 8 April 200643Vidas HIV Duo UltraBioMerieuxEIA 98,68 98,30 10 February 200644Advance HIV 1&2 ELISA Test kit (3rd generation)InTec Product IncEIA 100,00 99,43 2 March 200645Microlisa HIVJ MitraEIA 96,67 96,02 13 March 200646Bioelisa HIV 1+2BiokitEIA 98,67 98,30 5 May 200647Carestart TM HIV 1/2Access BioRapid 98,67 99,43 5 May 200648Virolisa anti-HIV 1+2Indec DiagnosticaEIA 100,00 89,20 23 June 200649Anti-HIV 1+2 ELISAAxiomEIA 99,33 96,02 23 June 200650HIVase 1+2General BiologicalsEIA 99,33 98,86 10 July 200651Rapid HIV 1+2 Blood Test? (Distributed by PT Asia Agrindo Internasional)Rapid 82,67 100,00 27 November 200652Core HIV 1 & 2Core DiagnosticsRapid 96,67 98,86 27 November 200653Foresight HIV 1/2/O EIAAconEIA 100,00 96,59 18 June 200754Immunocomb II HIV 1&2 TriSpot Ag-AbOrgenicsRapid 96,71 98,86 3 September 20074755Serodia HIV-1/2FujirebioRapid 99,33 90,91 29 November 200756Signal HIV-1/2Span DiagnosticsRapid 98,67 99,43 7 January 200857AIM HIV 1/2 Rapid CardAkurat Intan MadyaRapid 94,00 99,43 9 January 200858Vikia HIV 1/2BioMerieuxRapid 100,00 100,00 1 February 200859One Step Cassette Style Anti HIV 1+2 2 linesIND Diagnostics IncRapid 99,33 99,43 18 April 200860HIV 1/2 Ultra RapidFastRapid 89,12 99,43 15 May 200861Determine HIV 1/2Inverness MedicalRapid 99,33 97,73 26 May 200862Mirawell Rapid HIV TestMedmiraRapid 95,33 98,30 26 May 200863Fokus Diagnostic Rapid Test Anti-HIV 1/2 CassetteFokus DiagnosticRapid 100,00 98,86 14 July 200864Entebe HIV DipstickHepatika LaboratoriesRapid 98,00 98,86 6 October 200865SFD HIV 1/2 PAFujirebio-BioradRapid 100,00 78,98 10 November 200866One Step Anti-HIV (1&2) Tri-line TestInTec Product IncRapid 99,34 100,00 22 December 200867Axsym HIV 1/2 gOAbbott DiagnosticsEIA 100,00 99,43 2 March 200968Oraquick Advance Rapid HIV-1/2 Antibody TestOrasureRapid 98,00 99,43 22 May 200969Insti HIV 1+2BiolyticaRapid 99,33 100,00 22 June 200970Uji HIVPakar BiomedikaRapid 99,33 94,89 22 June 200971Doublecheck HIV-1 & HIV-2OrgenicsRapid 99,33 99,43 6 August 20094872Determine 1/2 HIV Ab/Ag ComboInverness MedicalRapid 98,00 98,30 7 December 200973Vironostika HIV Ag/AbBioMerieuxEIA 100,00 100,00 7 December 200974Acon HIV 1/2/O TrilineAconRapid 99,33 100,00 5 May 201075New Virolisa HIV 1+2 Ab/AgIndecEIA 99,33 98,29 31 August 201076Visitec HIV TrioIndecRapid 98,00 100,00 31 August 201077HIV Ab & AgDia.Pro Diagnostic Bioprobes SriEIA 98,67 97,73 8 September 201078SD Bioline HIV-1/2 3.0Standard DiagnosticsRapid 98,03 100,00 "4 June 200949

Tujuan tesPrevalensiStrategi

Darah donor + transplantasisemua prevalensiI

Surveilans> 10 %I

( 10 %II

Diagnosissimtomatik> 30 %I

( 30 %II

asimtomatik> 10 %II

( 10 %III