TUGAS BIOTEKNOLOGI FARMASIOptimization and Production of Neomycin from Different Agro Industrial Wastes in Solid State Fermentation

OLEHLUNGGUHAN SIREGAR1011014063

FAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS ANDALASPADANG2014Optimasi dan Produksi Neomycin dari Berbagai Agro Limbah industri di Solid State FermentasiBM Vastrad1, SE Neelagund2*1Department of Pharmaceutical Biotechnology, S. E. T`s College of Pharmacy, Dharwad, Karnataka, India2Department of PG Studies in Biochemistry, Jnana Sahayadri Kuvempu University, Shankarghatta, Shivamogga -577 451,IndiaABSTRAKBiaya produksi neomisin dapat menurun secara signifikan dengan menggunakan substrat karbon murah seperti pertanianresidu . Namun, informasinya susah ditemukan dalam literatur tentang pemanfaatan selulosa dan lignoselulosaresidu untuk mendapatkan neomycin . Biasanya residu pertanian memproduksi berbagai senyawa beracun ke atmosfer , sehingga ,sebagai alternatif menarik untuk pemanfaatan limbah pertanian (seperti apple pomace , makan biji kapas , kedelai bubukdan dedak gandum ) untuk produksi neomycin simultan . Produksi tertinggi neomycin ( 2.765 mg / g substrat ) adalahdicapai dengan pomace apel fermentasi solid-state . Optimalisasi parameter fisik seperti ukuran inokulum ,ukuran partikel substrat , suhu inkubasi , pH awal , tingkat kelembaban awal , masa inkubasi dan parameter kimiaseperti karbon dan nitrogen sumber tambahan dipelajari untuk produksi neomisin dalam fermentasi solid-statemenggunakan Streptomyces fradiae NCIM 2418 . Nilai-nilai optimum dari komponen kritis ditentukan maksimumproduksi neomisin adalah ukuran inokulum 2 106 CFU / g substrat kering awal , substrat ukuran partikel 1,2 mm , inkubasi30oC suhu , pH awal 8 , tingkat kelembaban awal 70 % , fruktosa ( 1 % b / v ) , ( NH4 ) 2HPO4 ( 1 % b / v ) , L - glutamine ( 1 % b / v )dan masa inkubasi 10 hari . Perbaikan 2.6 kali lipat keseluruhan produksi neomycin dicapai karena optimasi .

PENDAHULUANNeomycin adalah antibiotik aminoglikosida penting, yang efektif terhadap bakteri gram positif dan gram - negatif, dan mikobakteri . Banyak mikroorganisme telah dievaluasi untuk produksi neomisin termasuk streptomyces strain seperti Streptomyces marinensi , [ 1 ] Streptomyces fradiae . [ 2 ] Namun , biaya tinggi dan hasil yang rendah dari neomycin telah menjadi masalah utama bagi perusahaan industry produksi . [ 3 ] Oleh karena itu , ada kebutuhan besar untuk mengembangkan medium fermentasi baru dengan substrat yang murah memberikan hasil neomycin tinggi .Hal ini juga diketahui bahwa 30-40 % dari biaya produksi antibiotik diambil oleh biaya medium pertumbuhan . [ 4 ] Karbon dan nitrogen sumber bersama-sama dengan waktu fermentasi telah dilaporkan untuk memainkan peran penting dalam penentuan morfologi akhir budaya . [ 5 ] Di antara teknologi yang sudah ada dalam industri fermentasi , fermentasi solid-state ( SSF ) menunjukkan banyak keuntungan overfermentation dengan budaya terendam , seperti biaya yang lebih rendah dan volume reaktor yang jauh lebih tinggi . [ 6 ] Penerapan SSF Proses memiliki potensi ekonomi yang cukup besar dalam makanan , pakan , farmasi , dan industri pertanian . Ada sejumlah besar literatur dilaporkan menggunakan proses SSF untuk memproduksi antibiotik dengan kepentingan industri, seperti penisilin , oxytetracycline , tetrasiklin , cephamycin C , cephalosporin C , meroparamycin , rifamycin B , neomycin , iturin A dan tylosin . [ 7-16 ] Namun, belum dilaporkan menggunakan SSF untuk produksi neomycin menggunakan apel mengkal dan kapas makan biji .India memiliki produksi terbesar dari apel , kapas , kacang kedelai dan gandum di dunia. Jutaan ton apel pomace , makan biji kapas , kedelai bubuk dan Whet juga diproduksi setiap tahun . Pada tahun 2009 , hasil panen apel pomace dan kapas makan biji sekitar 1 dan 6 juta ton , masing-masing. Ini residu industri agro yang relatif murah, mengandung nutrisi berlimpah ( selulosa hemiselulosa , protein dan pati ) , memiliki potensi besar untuk dimanfaatkan sebagai substrat fermentasi alternatif . Oleh karena itu , dalam hal ini penelitian , apel pomace , makan biji kapas , kedelai bubuk dan dedak gandum dipilih dan digunakan sebagai dasar karbon dan sumber nitrogen untuk produksi neomycin.In penelitian ini , produktivitas neomycin oleh Streptomyces fradiae 2418 menggunakan padat agro industry residu seperti pomace apel , makan biji kapas , kacang kedelai bubuk dan gandum dedak dievaluasi . Selain itu, kondisi budaya sebagai kadar air awal , pH awal , ukuran inokulum , suhu inkubasi , dan substrat partikel ukuran serta suplementasi ekstra karbon dan sumber nitrogen yang dioptimalkan untuk memaksimalkan antibiotic menghasilkan . Untuk yang terbaik dari pengetahuan kami , tidak ada yang dilaporkan publikasi berurusan dengan produksi neomisin oleh Streptomyces fradiae 2418 di bawah fermentasi solid state .BAHAN DAN METODEMedia kultur dan kondisi kulturStreptomyces fradiae NCIM 2418 adalah actinomycetes digunakan dalam penelitian ini . Strain ini disediakan oleh National Collection of Industrial Mikroorganisme , Pune , India . Spora strain ini telah diawetkan dalam keadaan tidak aktif dalam kentang miring agar. Spora yang dihidupkan kembali ke keadaan aktif pertumbuhan dengan mentransfer sebagai berikut medium pertumbuhan ( g l - 1 ) : glukosa 4 , ekstrak ragi 5 , pepton 10.Inocula disusun oleh mentransfer satu ose penuh benih budaya ke dalam 50 ml medium inokulum dalam 250 ml Erlenmeyer . Komposisi media inoculum adalah sebagai berikut ( g l - 1 ) : pati terlarut 20 , tryptone kedelai kaldu 20 , ekstrak ragi 3 , CaCO3 3 , K2HPO4 1 , MgSO4.7H2O 0.025 , dan pH disesuaikan menjadi 7,2 . Termos yang diinkubasi pada rotary shaker pada 170 rev min - 1at 30oC . setelah 3 hari , seluruh budaya dipanen dengan sentrifugasi pada 7826 g selama 10 menit , dan pelet sel dicuci secara menyeluruh dengan larutan garam . Staphylococcus epidermidis NCIM 2493 [ 17 ] digunakan organisme indicatorsubstratApple pomace diperoleh dari jus apel local berkonsentrasi perusahaan di Dharwad , India . Itu dikeringkan dalam oven pada suhu 60oC dan tanah di hammer mill . tanah materi dilewatkan melalui 30 - dan 50 - saringan mesh. Itu Fraksi yang melewati saringan 30 mesh tetapi tetap dengan saringan 50 mesh dikumpulkan dan digunakan sebagai dasar Media fermentasi . The makan biji kapas diperoleh dari pasar lokal di Dharwad , India . Makanan ini dibuat setelah ekstraksi minyak biji kapas menggunakan metode kompresi dan adalah pra - diperlakukan dengan cara yang sama seperti apel pomace . kedelai bubuk kacang dan dedak gandum diperoleh dari pasar local pra diperlakukan sama seperti untuk pomace apel .Fermentasi solid stateSepuluh gram substrat padat , dalam labu Erlenmeyer 250 ml , yang dibasahi dengan larutan garam mineral ( g l - 1 : KH2PO4 , 1 ; MgSO4 , 0,4 ; pH 7,0 ) , benar-benar dicampur dan diautoklaf pada 121oC selama 30 menit . Media didinginkan diinokulasi dengan Inokulum 48 h ( 2,0 106 CFU / g substrat kering awal ) dan diinkubasi pada suhu 30oC selama 5 hari . Kadar air dari media setelah inokulasi adalah 50 % . kecuali ditentukan , kondisi fermentasi tersebut dipertahankan selama percobaan .Pengukuran pH dan Moisture ContentPH ditentukan dengan menggunakan 1.0 g bahan fermentasi di 10 ml air suling , dan kemudian campuran gelisah . Setelah 10 menit , pH diukur dalam supernatan menggunakan pH meter . Kadar air medium diperkirakan dengan mengeringkan 5 g sampel basah sampai berat konstan pada 105 C dan berat kering tercatat . [ 18 ] ekstraksi antibiotic Pada akhir fermentasi , biomassa dipanen dirawat dengan 50 ml buffer fosfat dan gelisah secara menyeluruh pada pengocok magnetik selama 30 menit . Seluruh isi disaring melalui kain muslin steril , dan residu yang lagi dirawat dengan alikuot lain dari 50 ml buffer fosfat sebagai sebelumnya dan kemudian disaring . Filtrat yang dikumpulkan kemudian disentrifugasi , dan supernatan yang jelas akhir adalah digunakan sebagai sumber antibiotik .assay antibiotikDisk difusi metode bioassay yang memanfaatkan properti antibakteri neomycin ne untuk menghasilkan zona penghambatan terhadap Staphylococcus epidermidis digunakan . itu metode yang digunakan menggunakan cakram kertas filter yang mengandung 10 ml supernatan dari kaldu fermentasi Streptomyces fradiae NCIM 2418 dan kontrol negatif . Disk ini adalah dikeringkan dan ditempatkan pada permukaan pelat agar unggulan dengan spora Staphylococcus epidermidis NCIM 2493 regangan . Kontrol positif yang terdiri dari disk dengan jumlah yang diketahui neomycin . Pelat ini diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam . Zona inhibisi diukur dalam mm . semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga , dan rata-rata dari tiga adalah direpresentasikan sebagai gram mikro neomycin diproduksi per gram substrat . [ 19 ]Optimasi kondisi budaya untuk neomycin produksiParameter fisikokimia yang berbeda untuk memaksimalkan hasil neomycin oleh Streptomyces fradiae NCIM 2418 bawah fermentasi solid state diselidiki . itu parameter dioptimalkan didirikan pada tingkat yang dioptimalkan dalam percobaan optimasi berikutnya . Dampak kadar air awal ( 20-90 % ) , pH awal ( 3-11 , disesuaikan dengan 1N HCl atau NaOH 1N ) , suhu inkubasi ( 20 - 40 C ) , masa inkubasi ( 4-12 hari ) , ukuran partikel dan ukuran inokulum pada produksi neomycin menggunakan solid state fermentasi Streptomyces fradiae NCIM 2418 adalah dievaluasi . Selain itu , efek dari penggabungan tambahan sumber karbon ( glukosa , arabinosa , mannitol , sorbitol , dan fruktosa pada 1 % b / v ) , senyawa nitrogen tambahan ( NaNO3 , NH4Cl , ( NH4) 2SO4 , ( NH4 ) 2HPO4 ekstrak ragi , kasein , ekstrak daging sapi , L - asparagine , L - metionin , ekstrak malt dan L - glutamine pada 1 % b / v ) , ke media produksi yang dipelajari . Semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga dan nilai rata-rata dianggap . Setelah inkubasi masing-masing sampel fermentasi , ekstrak kasar disiapkan .HASIL DAN PEMBAHASANEvaluasi berbeda agro - industri bahan produksi neomisinProfil fermentasi produksi neomycin di SSF bervariasi dengan jenis bahan agro yang digunakan . antibiotik tertinggi produksi ( 4567 mg / g substrat ) diamati dengan apple pomace dan sedikit ( 2.765 mg / g substrat ) dengan dedak gandum . Sebuah variasi 2 kali lipat itu melihat dengan bahan-bahan tersebut ( Gambar 1 ) . Hal ini dapat dikaitkan dengan bahan padat ganda peran pasokan nutrisi dan pelabuhan dengan budaya mikroba tumbuh yang mempengaruhi pertumbuhan mikroba dan selanjutnya produksi metabolit . Substrat seperti mikroba tergantung variasi hasil produk juga dilaporkan dalam literatur . [ 20 ] Hasil ini menggambarkan bahwa pemilihan agrobiotech yang ideal sumber untuk produksi neomisin terutama tergantung pada ketersediaan karbon dan sumber nitrogen dan dengan demikian skrining beberapa residu agro - industri sangat penting . Ellaiah et al . , ( 2004) [ 14 ] bekerja dengan Streptomyces . marinensis NUV 5 , melaporkan bahwa dedak gandum adalah padat lebih baik bahan pendukung untuk produksi neomycin bawah SSF . Namun, dalam penelitian ini , di antara semua bahan belajar , dedak gandum didukung sedikitnya produksi neomycin produksi . Hal ini mungkin disebabkan fakta bahwa strain digunakan oleh mereka dapat bervariasi dalam pola metabolisme mereka dibandingkan ke Streptomyces fradiae NCIM 2418 digunakan di masa kini belajar atau sumber bahan karbon yang terkait dengan dedak gandum tidak dapat dimanfaatkan oleh Streptomyces fradiae NCIM 2418 . Untuk mengevaluasi sama, hemiselulosa dan selulosa kemampuan hidrolisis strain diselidiki . Data ini lebih lanjut mengkonfirmasi bahwa titer antibiotik tinggi yang terkait dengan apple pomace adalah karena produksi maksimum hemiselulosa dan hidrolisis selulosa oleh enzim saring dan sebagai galur Streptomyces fradiae NCIM 2418 adalah hemicellulases positif maka bisa memanfaatkan hemiselulosa sebagai sumber karbon . Oleh karena itu , dapat disimpulkan bahwa yang dipilih regangan memerlukan substrat yang menyediakan hemiselulosa sebagai yang mesin enzimatik yang menghidrolisis polisakarida hadir dalam substrat .Pengaruh ukuran partikel substratDalam proses fermentasi solid-state , ketersediaan permukaandaerah memainkan peran penting untuk lampiran mikroba , perpindahan massa berbagai nutrisi dan substrat dan pertumbuhan selanjutnya mikroba regangan dan produksi produk . Ketersediaan luas permukaan pada gilirannya tergantung pada ukuran partikel substrat / support matrix . Data percobaan menunjukkan bahwa produksi neomisin dipengaruhi oleh ukuran partikel . Produksi antibiotik Maksimum ( 4567 mg / g substrat ) adalah melihat dengan 1,2 mm ukuran partikel substrat gram kulit hijau material ( Gambar 4 ) . Mengubah ukuran partikel substrat baik sisi ini mengakibatkan pengurangan produksi neomycin . Pengurangan diamati produksi neomisin dengan diubah ukuran partikel dapat dikaitkan dengan intra - partikulat yang terkait aerasi , luas permukaan yang tersedia untuk lampiran mikroba dan perpindahan massa substrat dan pertumbuhan berikutnya dan antibiotikproduksi . Hasil ini sesuai dengan literaturdata pada ukuran partikel - dimediasi pengaruh terhadap mikrobaproduksi antibiotik di S. marinensis Nuv5 [ 14 ] dan di Amycolatopsis sp . RSP 3 . [ 13 ]Pengaruh tingkat kelembabanTingkat kelembaban dalam fermentasi solid-state kritis mempengaruhi proses karena gangguan dalam fisik sifat partikel padat . Peningkatan kelembaban diyakini untuk mengurangi porositas substrat [ 21 ] , sehingga membatasi mentransfer oksigen . [ 22-23 ] Penurunan kadar air menyebabkan ketersediaan yang lebih rendah nutrisi media untuk para Streptomyceats [ 14 ] sehingga menjadi tingkat produksi yang lebih rendah . Gambar 5 menunjukkan pengaruh kadar air total terhadap produksi neomisin 20 % , 30 % , 40 % , 50 % , 60 % , 70 % , 80 % dan 90 % kelembaban . Hasil penelitian menunjukkan bahwa 70 % kelembaban memberikan produksi neomisin tinggi selama fermentasi dibandingkan pengobatan lain . Hasil maksimal neomycin produksi ( 5356 mg / g substrat ) diperoleh dari 70 % kelembaban pada hari ke 8 . Hasil dari studi sebelumnya yang menyatakan bahwa kadar air yang ideal adalah 80 % dan penurunan Hasil antibiotik bisa terjadi dengan rendah dan kelembaban yang lebih tinggi tingkat . [ 14 ]Pengaruh pH awal medium pada produksi antibioticPH awal media fermentasi dapat berubah selama fermentasi karena substrat yang digunakan dalam SSF biasanya memiliki paling tidak buffering. Beberapa sampel dari fermentasi massal aseptik ditarik , homogen dan pH diperiksa . PH medium selama fermentasi ditemukan antara 3,0 dan 11,0 , yaitu sekitar asam untuk kondisi alkali . PH awal merupakan faktor penting yang mempengaruhi pertumbuhan dan produksi antibiotik selama fermentasi solid-state . [ 24 ] Substrat telah disesuaikan untuk pH awal yang berbeda menggunakan 1N HCl dan NaOH 1N sebelum inokulasi . Gambar . 3 menunjukkan bahwa produksi neomisin baik ( 5923 mg / g substrat ) diamati pada pH 8,0 . Pengaruh suhu Pemeliharaan suhu proses yang optimal adalah salah satu faktor utama dalam ekonomi dari sebuah proses . suhu mempengaruhi pertumbuhan sel mikroba , pembentukan spora , perkecambahan dan fisiologi mikroba , sehingga mempengaruhi produk formasi pada gilirannya . 30oC ditemukan menjadi optimal suhu dalam hal ini (Gambar 5 ) . Ellaiah et al . , ( 2004) [ 14 ] melaporkan suhu optimum 30oC untuk neomycin produksi SSF menggunakan Streptomyces . marinensis NUV 5 , sementara Howard TD ( 1952) [ 2 ] melaporkan 28oC dengan sebagai optimum untuk produksi neomisin fermentasi terendam ( SMF ) menggunakan Streptomyces Fradiae .Pengaruh ukuran inokulumUkuran inokulum optimum untuk produksi neomisin ( 4673 ug / g substrat ) oleh Streptomyces fradiae NCIM 2418 adalah 2 106 CFU / g substrat kering awal (Gambar 6 ) . memadai inokulum dapat memulai pertumbuhan miselium cepat dan produk pembentukan , sehingga mengurangi pertumbuhan kontaminan . A penurunan produksi antibiotik diamati ketika ukuran inokulum meningkat melampaui tingkat optimum . Produksi antibiotik mencapai puncaknya saat memadai nutrisi yang tersedia untuk biomassa . Kondisi dengan misbalance antara nutrisi dan biomassa berkembang biak mengakibatkan sintesis antibiotik menurun . [ 13 ] Pengaruh masa inkubasi Proses Solid-state dilakukan untuk berbagai inkubasi periode . Hebatnya tingkat produksi yang lebih tinggi neomycin diamati setelah 6-10 hari dari proses dan tingkat maksimal ( 6453 mg / g substrat ) ) dicapai pada Hari ke-12 fermentasi ( Gbr.7 ) . Ascend penting dalam Hasil neomycin dengan peningkatan biomassa diamati selama Hari ke-8 - 10 dari siklus fermentasi . Variasi yang signifikan dalam produksi neomisin diamati selama berbeda periode fermentasi . Pengaruh sumber nitrogen pada produksi neomisin Umumnya , konsentrasi tinggi sumber nitrogen di media efektif dalam meningkatkan produksi neomisin oleh Streptomyces fradiae . [ 2 , 25 ] Kandungan protein dalam apel pomace sangat

rendah sehingga tingkat nitrogen serta nilai komersial semua menurun sangat . [ 26 ] Oleh karena itu, Selain eksogen dari berbagai tingkat nitrogen ke padat media dipelajari . Pengaruh suplementasi menggunakan anorganik yang berbeda dan sumber nitrogen organik pada produksi neomisin adalah diilustrasikan pada Gambar . 8 dan Gambar 9 . NaNO3 , NH4Cl , ( NH4) 2SO4 , ( NH4 ) 2HPO4 ekstrak sebagai anorganik dan ragi , kasein , daging sapi ekstrak , L - asparagine , L - metionin , ekstrak malt dan Lglutamine digunakan sebagai sumber nitrogen organik kompleks , untuk suplementasi tambahan nitrogen . Berdasarkan hasil ditemukan bahwa L - glutamin adalah nitrogen organik terbaik sumber dan suplementasi yang menyebabkan peningkatan lebih lanjut dalam produksi neomisin ke 7432 mg / g substrat (Gambar 9 ) , sumber nitrogen whileinorganic seperti ( NH4 ) 2HPO4 ditemukan produksi terbaik neomycin ( 4342 mg / g substrat ) (Gambar 8 )Pengaruh sumber karbon pada produksi neomisinMeskipun apel pomace dapat mendukung pertumbuhan Streptomyces fradiae NCIM 2418 dan produksi neomisin , mungkin tidak memberikan sumber karbon yang cukup diperlukan [ 27 ] oleh organisme untuk produksi antibiotik maksimal. Oleh karena itu, Selain eksogen dari berbagai sumber karbon untuk media dapat meningkatkan pertumbuhan sel dan produksi antibiotik . Umumnya , konsentrasi tinggi sumber karbon dalam media efektif dalam meningkatkan produksi neomisin oleh mikroorganisme . [ 2 , 25 ]Dampak suplementasi sumber karbon eksternal pada produksi neomisin dipelajari dan hasilnya ditampilkan pada Gambar 10 . Penambahan sumber karbon dengan 1 % b / v konsentrasi ke media menunjukkan efek yang berbeda pada produksi neomycin . The Streptomyces fradiae NCIM 2418 ditumbuhkan pada media dengan sumber karbon lebih cepat pada 8-10 hari pertama , tapi beralih ke autolisis segera , mengakibatkan kurang miselia dan kemudian kurang neomycin pada hari ke 12 . Jadi di antara semua senyawa yang diuji , fruktosa menghasilkan neomisin tertinggi produksi ( 7432 mg / g substrat ) , diikuti oleh sorbitol ( 6632 ug / g substrat ) , manitol ( 6532 mg / g substrat ) , arabinose ( 5456 mg / g substrat ) dan glukosa ( 2,17 mg / g substrat ) . jadi fruktosa dan sorbitol dapat ditambahkan sebagai suplementasi sumber karbon dalam substrat basal untuk memperpanjang pertumbuhan sel dan / atau untuk meningkatkan sekresi neomycin .Hasil yang diperoleh dalam penelitian ini menunjukkan bahwa di antara berbagai residu agro - industri yang diteliti , apple pomace adalah substrat yang cocok untuk sintesis neomycin oleh Streptomyces fradiae NCIM 2418 di SSF . SSF menunjukkan nya keunggulan untuk produksi antibiotik dan juga mengungkapkan kemungkinan pemanfaatan yang efektif dari apple pomace ( dan mungkin residu industri agro lainnya ) untuk penambahan nilai melalui cara-cara bioteknologi . Kondisi optimal untuk produksi neomycin menggunakan SSF untuk apple pomace pH awal ( 8 ) , tingkat awal kelembaban ( 70 % ) , ukuran partikel substrat ( 1,2 mm ) , ukuran inokulum ( 2 x 106 CFU / g ) , inkubasi suhu ( 30oC ) , masa inkubasi ( hari 10 ) , fruktosa ( 1 % w / v ) , ( NH4 ) 2HPO4 ( 1 % b / v ) , L - lutamine ( 1 % b / v ) masing-masing. Proses tersebut tidak hanya akan membantu dalam mengurangi biaya produksi , tetapi juga membuka jalan dalam efektif padat pengelolaan limbah . Dengan di atas mendorong lead , itu akan menarik untuk mempelajari pomace apel sebagai substrat untuk produksi antibiotik dari mikroba lain yang berbeda .UCAPAN TERIMA KASIHKami berterima terima College SET farmasi , Dharwad , India untuk dukungan teknis dari penelitian ini .REFERENCE1. Sambamurthy K, Ellaiah P. A new Streptomycete producingneomycin (B&C) complex-S. marinensis (part I). Hind AntibiotBull. 1974; 17: 24.2. Howard TD.The Production of Neomycin by Streptomyces fradiae in Synthetic Media. Appl Microbiol. 1953; 2: 103.3. Mudgetti RE. In: Demain Arnolds L, Solmen Nadine A. Editors.Manual of industrial biotechnology. Washington, DC: AmericanSociety for Microbiology. 1986; 66.4. Barrios-Gonzalez J, Fernandez FJ, Tomasini A, Mejia A. Secondary metabolisum by solid state fermentation. Malaysian journal of microbiology. 2005; 1:1.5. Papagianni M. Fungal morphology and metabolite production insubmerged mycelial processes. Biotechnol Adv. 2004; 22: 189.6. Grajek W. Comparative studies on the production of cellulases by thermophilic fungi in submerged and solid state fermentation. Appl Microbiol Biotechnol. 1987; 26: 126.7. Barrios-Gonz~tlez J., Tomasini A Viniegra-Gonz~lez G. penicillin production by solid state fermentation. Biotechnology Letters. 1988; 10: 793-798.8. Yang SS, Yuan SS. Oxytetracycline production by Streptomycesrimosus in solid state fermentation of sweet potato residue. WorldJournal of Microbiology and Biotechnology 1990; 6: 236.9. Agenes EA, Abiodun IS, Olusola BO. Solid state fermentationproduction of tetracycline by streptomyces strains using some agricultural wastes as substrate. World journal of microbiology andbiotechnology, 2005; 21: 107-114.10. Bussari B, Saudagar PS, Shaligram NS, Survase SA, Singhal RS. Production of cephamycin C by Streptomyces clavuligerus NT4 using solid state fermentation. J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 2008; 35: 4958.11. Cuadra T, Fernandez FJ, Tomasini A, Barrios-Gonzalez J. Influence of pH regulation and nutrient content on cephalosporin Cproduction in solid-state fermentation by Acremonium chrysogenum C10. Letters in Applied Microbiology. 2008; 46: 216.12. El-Naggar, Moustafa Y, Samy AE, Sahar MA. Solid-State Fermentation for the Production of Meroparamycin by Streptomyces sp. strain MAR01 J. Microbiol. Biotechnol. 2009; 19: 468.13. Mahalaxmi Y, Sathish T, Subba Rao C, Prakasham RS. Corn husk as a novel substrate for the production of rifamycin B by isolated Amycolatopsis sp. RSP 3 under SSF. Process Biochemistry. 2010; 45: 47.14. Ellaiah P, Srinivasulu B, Adinarayana K. Optimisation studies on neomycin production by a mutant strain of Streptomyces marinensis in solid state fermentation. Process Biochemistry. 2004; 39: 529.15. Shinji M, and Makoto S. Medium optimization of antifungallipopeptide, iturin A, production by Bacillus subtilis in solid-statefermentation by response surface methodology. Appl Microbiol Biotechnol. 2007; 76: 101.16. Shazia K, Nosheen R, Kalsoom A, Muhammad AG. Production of tylosin in solid-state fermentation by Streptomyces fradiae NRRL- 2702 and its gamma-irradiated mutant. Letters in Applied Microbiology. 2009; 49: 635.17. Grove DC, Randall WA. Assay Methods of Antibiotics: A Laboratory Manual. New York: Medical Encyclopedia, Inc.1955: 91.18. Willian H. Association of Official Analytical Chemists (AOAC). Official Methods of Analysis International.Washington, DC. 17th ed 2000.19. Indian Pharmacopoeia, Ministry for Health and Welfare, Government of India. New Delhi, The Controller of Publications, 1996; 2: 100.20. Cheng L, Zhong-T, Jin-Hua D, Jian W. Response surface optimization of fermentation conditions for producing xylanase byAspergillus niger SL-05. J Ind Microbiol Biotechnol. 2008; 35: 703.21. Kumar D, Jain VK, Shanker G, Srivastava A. Citric acid production by solid-state fermentation using sugarcane bagasse. Proc. Biochem. 2003; 38: 1731.22. Carrizales V, Rodriguez H, Sardina. Determination of specificgrowth rate of molds as semi solid culture. Biotechnol. Bioeng. 1981; 23: 321.23. Pandey A, Soccol CR, Mitchell D. New developments in solid state fermentation: I- bioprocess and products. Proc. Biochem. 2000; 35: 1531169.24. Raimbault M. General and microbiological aspects of solid substrate fermentation. Electron. J. Biotechnol. 1998. .25. Bhadra R, Goswami SK, Majumdar SK. Effect of different complex nutrients on neomycin production by Streptomyces fradiae. H Folia Microbiologica.1973; 18: 300.26. Villas-Boas SG, Esposito E, Matos de mendona M, Bioconversion of apple pomace into a nutritionally enriched substrate by Candida utilis and Pleurotus ostreatus. World Journal of Microbiology and Biotechnology. 2003; 19: 461.27. Haiyan S, Xiangyang G, Zhikui H, Ming P. Cellulase production by Trichoderma sp. on apple pomace under solid state fermentation. African Journal of Biotechnology.2010; 9: 163.