ANALISIS DNA MITOKONDRIA DI

LABORATORIUM FBI

Disusun oleh :Maria ulfa

Pembimbing :Dr. Feryal basbeth , Sp.F

Pendahuluan Laboratorium FBI mulai melakukan studi kelayakan pada mitokondria

DNA (mtDNA) analisis untuk pengujian identitas manusia di akhir 1980-an. Laboratorium penelitian dimulai pada sebuah protokol untuk menggunakan mtDNA sequencing dalam kerja kasus forensik pada tahun 1992. Setelah teknik sekuensing divalidasi, pemeriksaan pada sampel pembuktian dimulai pada bulan Juni 1996.

MtDNA sequencing sering digunakan dalam kasus-kasus dimana bukti biologis mungkin menurun atau kecil dalam kuantitas. Kasus di mana rambut, tulang, atau gigi adalah satu-satunya bukti yang diambil dari TKP sangat sangat cocok untuk analisis mtDNA. Hilang kasus orang bisa mendapatkan keuntungan dari pengujian mtDNA ketika sisa-sisa skeletonized pulih dan dibandingkan dengan sampel dari kerabat ibu atau efek pribadi individu hilang. Juga, rambut pulih di TKP sering dapat digunakan untuk menyertakan atau mengecualikan individu menggunakan pengujian mtDNA. Ulasan ini akan memeriksa proses mitokondria DNA mengetik, termasuk interpretasi hasil, fenomena heteroplasmi, database penduduk mtDNA, penyajian statistik mtDNA penduduk, masalah jaminan kualitas, dan pengalaman testimonial

Mitokondria DNA Latar Belakang

DNA mitokondria berbeda dari DNA nuklir lokasi, urutannya, kuantitas dalam sel, dan modus warisan. Inti sel berisi dua set kromosom 23-satu set ayah dan satu set ibu. Namun, sel-sel dapat berisi ratusan hingga ribuan mitokondria, yang masing-masing dapat berisi beberapa salinan mtDNA. DNA nuklir memiliki banyak basis dari mtDNA, tapi mtDNA hadir dalam banyak salinan dari DNA nuklir.

Karakteristik ini mtDNA adalah berguna dalam situasi di mana jumlah DNA dalam sampel sangat terbatas. Sumber khas DNA pulih dari TKP termasuk rambut, tulang, gigi, dan cairan tubuh seperti air liur, air mani, dan darah.

Pada manusia, DNA mitokondria diwariskan ketat dari ibu (Kasus dan Wallace 1981; Giles et al 1980;.. Hutchison et al 1974). Dengan demikian, urutan mtDNA yang diperoleh dari individu maternal terkait, seperti kakak dan adik atau ibu dan seorang putri, justru akan cocok satu sama lain dengan tidak adanya mutasi.

Karakteristik ini mtDNA menguntungkan dalam kasus hilangnya orang sebagai sampel referensi mtDNA dapat diberikan oleh kerabat ibu dari individu hilang (Ginther et al 1992;. Holland et al 1993;.. Stoneking et al 1991). Namun, analisis mtDNA terbatas jika dibandingkan dengan analisis DNA nuklir yang tidak dapat membedakan antara individu-individu dari keturunan ibu yang sama.

The genom mtDNA manusia adalah sekitar 16.569 basis panjang dan memiliki dua bagian utama: daerah pengkode dan daerah kontrol. Daerah pengkode bertanggung jawab untuk produksi berbagai molekul biologis yang terlibat dalam proses produksi energi dalam sel. Daerah kontrol bertanggung jawab untuk regulasi dari molekul mtDNA. Dua wilayah mtDNA dalam wilayah kontrol telah ditemukan sangat polimorfik, atau variabel, dalam populasi manusia (Greenberg et al. 1983).

Kedua daerah ini disebut hypervariable Wilayah I (HV1), yang memiliki panjang perkiraan dari 342 pasangan basa (bp), dan hypervariable Region II (HV2), yang memiliki panjang perkiraan dari 268 bp. MtDNA pemeriksaan forensik yang dilakukan dengan menggunakan dua daerah ini karena tingginya tingkat variabilitas ditemukan di antara individu.

Sekitar 610 bp mtDNA saat ini diurutkan dalam analisis mtDNA forensik. Pencatatan dan membandingkan urutan mtDNA akan sulit dan berpotensi membingungkan jika semua pangkalan yang terdaftar. Dengan demikian, informasi urutan mtDNA dicatat dengan daftar hanya perbedaan sehubungan dengan urutan DNA referensi. Dengan konvensi, urutan mtDNA manusia dijelaskan menggunakan lengkap pertama urutan mtDNA diterbitkan sebagai referensi (Anderson et al. 1981).

Urutan ini sering disebut sebagai urutan Anderson. Hal ini juga disebut referensi urutan Cambridge atau urutan Oxford. Setiap pasangan basa dalam urutan ini diberikan nomor. Penyimpangan dari ini urutan referensi dicatat sebagai jumlah posisi yang menunjukkan perbedaan dan surat penunjukan dari basis yang berbeda. Sebagai contoh, sebuah transisi dari A sampai G di Posisi 263 akan dicatat sebagai 263 G. Jika penghapusan atau sisipan dari basis yang hadir dalam mtDNA, perbedaan ini ditandai juga.

Analysis Procedures

Presently, the forensic analysis of mtDNA is rigorous and labor-intensive. Several molecular biological techniques are combined to obtain a mtDNA sequence from a sample. The steps of the mtDNA analysis process include primary visual analysis, sample preparation, DNA extraction, polymerase chain reaction (PCR) amplification, postamplification.

Langkah 1: Analisis Visual Primer Langkah pertama dalam analisis rambut adalah perbandingan mikroskopis rambut pembuktian dan populasi sampel rambut referensi. Sampel dipasang pada slide mikroskop kaca dan dilihat di bawah mikroskop perbandingan untuk mengamati karakteristik mikroskopis dari sampel dibandingkan dengan standar rambut dikenal . Jika rambut tidak menunjukkan karakteristik mikroskopis yang sama dengan standar yang dikenal, analisis mtDNA umumnya tidak dilakukan. Jika rambut dari sumber mempertanyakan menunjukkan karakteristik mikroskopis yang sama seperti rambut dari sumber yang diketahui, bagaimanapun, analisis mtDNA dilakukan untuk menentukan pada tingkat molekuler jika rambut konsisten dengan standar referensi dari individu tertentu. Pada saat ini, rambut tidak mikroskopis dibandingkan sebelum analisis mtDNA karena mereka tidak cocok untuk perbandingan mikroskopis. Rambut yang tidak cocok untuk tujuan perbandingan signifikan disaring mikroskopis, dan informasi terbatas dinilai sebagai dasar untuk kemungkinan pengecualian. Jika rambut tidak dapat dikesampingkan mengikuti pemeriksaan ini terbatas, analisis mtDNA dapat dilakukan.

Dalam kasus di mana tulang atau bahan gigi dikumpulkan, jaringan pertama kali diperiksa oleh seorang antropolog atau odontologist forensik. Jika jaringan ini berasal dari manusia, analisis mtDNA dapat digunakan dalam hubungannya dengan pemeriksaan medis, antropologi, dan odontological untuk membantu dalam proses identifikasi

Sampel pembuktian dibersihkan sebelum proses sekuensing mtDNA untuk menghapus bahan sekitarnya mencemari atau mengikuti sampel. Langkah ini penting untuk memastikan bahwa urutan DNA yang diperoleh dari sampel berasal dari sampel dan bukan dari DNA manusia eksogen.

Untuk sampel rambut, langkah pembersihan terdiri dari pengobatan deterjen dalam air mandi ultrasonik. Proses ini menghilangkan kemungkinan residu mencemari dari rambut. Sampel rambut kemudian ditempatkan dalam larutan ekstraksi dan tanah menggunakan mortir dan alu kecil. DNA dilepaskan dari bahan selular, sehingga dalam homogenat yang mengandung kedua bahan seluler dan DNA dirilis.

Tulang dan gigi sampel juga menjalani proses pembersihan. Untuk membersihkan tulang atau gigi, eksterior diampelas untuk menghapus materi asing yang mungkin mengikuti ke permukaan. Sebuah sampel kecil jaringan ini kemudian dihapus dan ditumbuk menjadi bubuk halus. Gigi adalah cross-belah, dan dentin dan pulpa (lapisan dalam) digunakan untuk ekstraksi DNA.

Pada gigi segar, DNA umumnya diekstraksi dari pulp berdaging. Dalam gigi sangat tua, pulp dehidrasi dan DNA dapat diekstraksi dari lapisan dentin kompak. Bubuk tulang dan gigi juga ditempatkan dalam larutan untuk melepaskan DNA dari sel.

Langkah 3: Ekstraksi DNA Untuk mengekstrak DNA, homogenat selular dari langkah persiapan sampel terkena campuran bahan kimia organik yang memisahkan DNA dari molekul biologis lainnya, seperti protein. Campuran berputar dalam centrifuge, dan DNA tetap larut dalam lapisan berbasis air atas.

Sisa dari komponen seluler yang larut dalam lapisan organik bawah atau di antarmuka antara dua lapisan. Lapisan atas disaring dan terkonsentrasi. Sampel DNA kini dimurnikan dan siap untuk proses amplifikasi PCR.

Langkah 4: Amplifikasi oleh Polymerase Chain Reaction Reaksi berantai polimerase (PCR) adalah prosedur yang membuat banyak salinan sejumlah kecil DNA (Gambar 5). Pada langkah pertama dari proses PCR, dua untai heliks ganda DNA dipisahkan dengan memanaskan sampel.

Kedua untai dipisahkan disebut untai Template. Sebuah untai DNA yang baru ini kemudian dibuat dari setiap template menggunakan enzim yang salinan molekul DNA yang ada. Proses penyalinan diulang beberapa kali, dan selama setiap siklus berulang, jumlah DNA dalam tabung reaksi secara teoritis dua kali lipat. Pada akhir proses ini, jutaan salinan DNA ditargetkan asli dalam ekstrak hadir.

Langkah 5: Postamplification Pemurnian dan Kuantifikasi DNA yang dihasilkan oleh PCR dimurnikan dan dihitung sebelum proses sequencing. Pemurnian dilakukan dengan menggunakan perangkat filtrasi yang menghilangkan kelebihan reagen yang digunakan dalam PCR dari sampel. Kuantifikasi Langkah ini dilakukan dengan menggunakan elektroforesis kapiler (CE).

Teknik ini membandingkan jumlah DNA dalam produk PCR untuk DNA yang dikenal standar untuk menentukan konsentrasi DNA dalam sampel PCR-diperkuat (Gambar 6). Sampel kosong diperkuat dan diukur (kontrol negatif) dan DNA yang dikenal (kontrol positif) juga disertakan untuk menunjukkan apakah DNA eksogen hadir dan apakah amplifikasi berhasil. Jika PCR gagal untuk menghasilkan produk, sampel dapat reextracted dan reamplified. Jika PCR berhasil, produk yang disiapkan untuk sequencing DNA.

Langkah 6: Sequencing Metode terminator dideoksi, juga disebut Metode Sanger (Sanger et al 1977.), Digunakan untuk mtDNA siklus sequencing. Proses sekuensing siklus (Carothers et al 1989;. Murray 1989) mirip dengan PCR, tetapi bahan kimia yang sedikit berbeda digunakan (Gambar 7). Satu set terminator basa digunakan di samping basis normal yang memanjang untai DNA berkembang.

Ini basis terminator tidak memiliki kelompok kimia yang biasanya akan memungkinkan enzim untuk menempatkan basis lain setelah mereka. The diubah basa juga membawa pewarna fluorescent yang mudah dideteksi oleh alat otomatis. Dasar-dasar yang normal bersaing dengan basis diubah untuk dimasukkan ke dalam untai DNA yang berkembang, menghasilkan koleksi produk DNA yang berbeda dalam ukuran oleh salah satu dasar dan memiliki dasar fluorescently berlabel pada posisi akhir.

Produk yang dihasilkan dari reaksi sekuensing dipisahkan berdasarkan panjang mereka menggunakan teknik yang disebut elektroforesis gel. Ukuran pori-pori dalam gel elektroforesis matriks mengatur tingkat di mana setiap fragmen DNA bergerak melalui gel bawah pengaruh listrik lapangan. Produk kecil perjalanan lebih cepat melalui pori-pori, sedangkan produk lagi terbelakang oleh ukuran pori konstriksi.

Fragmen DNA berlabel mulai dari titik yang sama pada gel, dan detektor fluoresensi mencatat panjang gelombang yang dipancarkan dari pewarna fluorescent pada setiap dasar sebagai fragmen perjalanan melewati wilayah deteksi instrumen. Instrumen menghasilkan kromatogram, atau grafik berwarna, yang menggambarkan warna fragmen berlabel satu basis pada suatu waktu . Urutan mtDNA ditentukan dari serangkaian reaksi sekuensing siklus.

Pedoman interpretasi

Urutan DNA mitokondria pada awalnya dihasilkan oleh perangkat lunak komputer dan kemudian diedit oleh pemeriksa DNA menggunakan beberapa berjalan dari template yang sama untuk mendapatkan urutan akhir dari DNA. Setelah mengedit, urutan dicatat oleh daftar perbedaan atau perbedaan dari urutan referensi Anderson. Urutan diperoleh dari sampel asal mempertanyakan dibandingkan dengan urutan yang dikenal, atau referensi, sampel untuk menentukan apakah ada titik perbedaan yang hadir antara sampel.

Laboratorium FBI telah menyusun panduan untuk menafsirkan perbedaan dan persamaan antara sampel. Pada dasarnya, sampel tidak dapat dikecualikan sebagai berasal dari sumber yang sama jika ada konkordansi berurutan. Sebuah konkordansi urutan kehadiran basis yang sama (atau dasar umum) di setiap posisi dianalisis.

Tubuh manusia mengandung triliunan sel, yang masing-masing dapat berisi ribuan salinan dari genom mtDNA. Homoplasmy Lengkap (urutan yang sama mtDNA) untuk masing-masing molekul mtDNA akan mengejutkan karena jumlah besar mtDNA hadir dalam tubuh. Dengan demikian, heteroplasmi diharapkan akan hadir pada beberapa tingkat dalam semua individu. Heteroplasmi adalah terjadinya lebih dari satu jenis pada posisi tertentu dalam urutan DNA, dan ada dua bentuk heteroplasmi ditemukan di mtDNA.

Urutan heteroplasmi, atau tempat heteroplasmi, adalah terjadinya lebih dari satu dasar pada posisi atau jabatan tertentu dalam urutan mtDNA. Panjang heteroplasmi adalah terjadinya lebih dari satu panjang hamparan dasar yang sama dalam urutan mtDNA. Metode deteksi saat ini tersedia untuk biologi molekuler tidak dapat mendeteksi rendahnya tingkat heteroplasmi. Untuk alasan ini, heteroplasmi merupakan istilah operasional yang digunakan ketika metode ilmiah saat ini mampu mendeteksi lebih dari satu urutan individu.

Heteroplasmi pertama kali diamati pada mtDNA urutan forensik pada tahun 1994 olehScience Forensic Service (FSS) di Inggris sementara mengidentifikasi sisa-sisa keluarga Romanov (Gill et al. 1994). Fenomena heteroplasmi dipelajari dalam pengaturan terkontrol oleh Laboratorium FBI (Wilson et al. 1997).

Penelitian ini menyebabkan pemahaman yang lebih baik dari cara di mana heteroplasmi menunjukkan dirinya dalam sampel forensik. Kombinasi perbaikan terbaru dalam sekuensing enzim dan kimia pewarna fluorescent telah meningkatkan kemampuan deteksi heteroplasmi masyarakat forensik. Ketika heteroplasmi diamati di posisi yang sama dalam mempertanyakan dan sampel dikenal dan semua satu dasar lainnya adalah sama, pentingnya pertandingan ditingkatkan.

Tingkat heteroplasmi mungkin tidak selalu sama dalam berbagai jaringan. Misalnya, rambut mungkin berisi sebagian besar C pada posisi tertentu dalam genom mtDNA, tapi sampel darah dari individu yang sama mungkin berisi jumlah yang sama dari C dan T di posisi yang sama. Fenomena ini disebabkan oleh mekanisme yang berbeda dengan sel-sel yang dihasilkan dalam jaringan yang berbeda. Jika jaringan yang berbeda menunjukkan heteroplasmi dengan kehadiran pangkalan umum pada setiap posisi, maka konkordansi urutan ini, dan satu tidak bisa mengecualikan dua sampel sebagai awalnya berasal dari sumber yang sama atau garis keturunan ibu.

Dalam kasus di mana heteroplasmi diperkirakan terjadi, sampel yang dikenal tambahan dapat diurutkan untuk menentukan apakah heteroplasmi ini terlihat pada jaringan lain. Jelas, pengujian lebih lanjut tidak selalu dapat dilakukan pada sampel kejahatan adegan kuantitas terbatas, tetapi dapat membuktikan membantu untuk interpretasi sampel diketahui.

populasi database

FBI Laboratorium, Angkatan Bersenjata DNA Laboratorium Identifikasi, dan laboratorium lainnya telah bekerjasama untuk menyusun database penduduk mtDNA mengandung urutan dari Daerah hipervariabel I dan II. Database ini disebut sebagai SWGDAM (Kelompok Kerja Ilmiah pada Metode Analisis DNA) database. Ini berisi urutan dari empat kelompok ras utama: bule, Afrika, Hispanik, dan Asia. Sebagian besar sampel ini telah diperoleh dari laboratorium paternitas-pengujian, bank darah, atau kelompok akademik mempelajari populasi etnis.

Database saat ini berisi 2.426 mtDNA urutan dari individu yang tidak berhubungan. Namun, database diperbarui sering dan terus berkembang. Bagian dari daerah kontrol di luar dua segmen hypervariable juga sedang dianalisis potensi diskriminasi ditingkatkan.

Ketika urutan dari sampel dipertanyakan dan sampel dikenal adalah sama, database SWGDAM adalah mencari urutan ini. Setiap basis tak tentu yang dicari sebagai Ns, dimana N bisa menjadi A, C, G, atau T, untuk memperhitungkan kemungkinan bahwa salah satu dari empat basa mungkin terjadi pada posisi itu.

Laboratorium FBI daftar jumlah pengamatan dari urutan di setiap sub-kelompok rasial dari database dalam sebuah laporan dari pemeriksaan mtDNA. Sebagai contoh, urutan mungkin terlihat lima kali dalam sampel database keturunan Kaukasia dan satu kali dalam sampel database keturunan Hispanik namun tidak muncul dalam subkelompok database yang tersisa.

Reporting Statistik DNA mitokondria adalah lokus genetik tunggal. Berbagai daerah mtDNA

tidak independen satu sama lain karena mereka mewarisi bersama-sama dengan seluruh genom mtDNA. Sebagian besar urutan di forensik basis data mtDNA terjadi satu waktu (sekitar 60 persen), dan jumlah sekuens mtDNA di seluruh populasi manusia tidak diketahui. Perkiraan frekuensi yang dapat diandalkan untuk sebagian besar urutan mtDNA karena itu tidak mungkin.

Database mtDNA terlalu kecil saat ini untuk memberikan perkiraan frekuensi terjadinya sebagian besar urutan mtDNA dalam populasi. Keterbatasan ini dapat digambarkan dengan menggunakan analogi sederhana. Jika juri dari 12 orang digunakan sebagai database untuk memperkirakan terjadinya rambut cokelat pada populasi umum di Amerika Serikat, jumlah individu dalam juri dengan rambut cokelat mungkin erat mencerminkan frekuensi rambut cokelat pada populasi umum karena rambut cokelat adalah umum. Jika database yang sama digunakan untuk memperkirakan jumlah orang yang 7 meter, frekuensi tidak akan akurat. Juri Database mungkin tidak akan berisi perorangan yang 7 meter.

Dengan demikian, perkiraan frekuensi untuk acara ini akan menjadi nol. Namun, diketahui bahwa individu sangat tinggi memang ada di beberapa frekuensi rendah dalam populasi. Jika yang digunakan juri sebagai database dan konservatif diperkirakan frekuensi orang yang 7 meter menjadi sekitar 1 di 12, perkiraan ini jelas tidak benar. Juri database merupakan contoh ekstrim, tetapi ini menggambarkan fakta bahwa database kecil bukanlah alat yang efektif untuk memperkirakan frekuensi peristiwa langka.

Saat ini, Laboratorium FBI tidak memberikan perkiraan frekuensi jenis mtDNA dalam laporan laboratorium karena pembatasan yang disebutkan sebelumnya melibatkan ukuran basis data. Negara-negara FBI hanya jumlah kejadian dari urutan mtDNA dalam database saat ini. Sampai saat ini, jumlah sekuens mtDNA hadir dalam populasi umum tidak diketahui karena tidak semua urutan tersebut belum diamati.

Namun, metode statistik yang ada untuk menghitung perkiraan batas atas

dari frekuensi mtDNA jenis dengan kejadian nol atau sangat sedikit kejadian dalam database ukuran terbatas. Ini perkiraan batas atas menggambarkan frekuensi tertinggi yang diharapkan untuk urutan mtDNA tertentu menggunakan database. Seluruh rentang kemungkinan frekuensi, antara batas atas dan bawah, dapat juga diberikan. Sebagai database tumbuh dalam ukuran, perkiraan frekuensi untuk profil mtDNA individu akan menjadi lebih dan lebih halus dan akhirnya menyebabkan perkiraan frekuensi populasi yang handal.

Kepastian Kualitas Banyak langkah yang diambil selama proses sekuensing mtDNA untuk

menjamin kualitas hasil (lihat FBI Laboratorium DNA mitokondria DNA Unit II Sequencing Protokol, Revisi Mei 1998). Laboratorium FBI diakreditasi oleh American Society of Crime Direksi Laboratorium / Laboratorium Badan Akreditasi (ASCLD / LAB), dan Unit Analisis DNA mengikuti pedoman jaminan kualitas yang ditetapkan oleh Kelompok Kerja Ilmiah pada Metode Analisis DNA (SWGDAM), DNA Advisory Board (DAB), dan ASCLD / LAB.

Dua terbuka dan eksternal tes kemahiran yang dilakukan setiap tahun untuk semua personil satuan kerja kasus, dan catatan dari tes ini dipertahankan. Tindakan pencegahan umum dan khusus dirancang untuk meminimalkan kontaminasi diikuti, termasuk penggunaan sarung tangan, laboratorium mantel, aliran laminar atau kerudung deadspace, dan tips aerosol tahan pipet. Selama prosedur analitis, hanya satu item bukti dari kasus yang dibuka pada suatu waktu. Produk asal mempertanyakan dianalisis sebelum item asal dikenal untuk meminimalkan potensi akumulasi dari knowns menjadi barang dipertanyakan.

Daerah yang preamplification secara fisik terpisah dari area postamplification untuk mencegah diperkuat mentransfer produk DNA ke dalam sampel unamplified. Kebanyakan reagen, ruang kerja, dan instrumen seperti pipets dikenakan pembasuhan isopropanol, 10-persen pembasuhan pemutih, ultraviolet (UV) radiasi, atau kombinasi dari perawatan ini.

Langkah-langkah ini diambil dalam upaya untuk menghapus dan menghancurkan molekul DNA asing sebelum ekstraksi dan amplifikasi. Juga, semua instrumen yang digunakan dalam proses pemeriksaan secara rutin dikalibrasi. Instrumen mengalami skrining kualitas, pemantauan, atau keduanya termasuk pengendara sepeda termal yang digunakan untuk PCR dan sequencing, instrumen elektroforesis kapiler, instrumen sequencing, pemandian air, semua termometer, freezer dan lemari es, dan pipets digunakan untuk menyampaikan reagen ke dalam reaksi campuran.

Kosong reagen dan kontrol negatif siap berisi semua bahan kimia yang digunakan dalam proses ekstraksi dan amplifikasi, masing-masing. Reagen sampel kontrol kosong dan negatif pergi melalui semua langkah-langkah prosedural yang sama sebagai sampel pembuktian.

Kontrol ini digunakan untuk menentukan keberadaan dan jumlah DNA eksogen dalam reagen dan peralatan. Kontrol positif digunakan dalam amplifikasi dan sekuensing langkah-langkah untuk memantau keberhasilan amplifikasi dan sekuensing. Analisis mtDNA sampel tidak melanjutkan jika kontrol positif gagal untuk memperkuat atau memberikan urutan kualitas atau keduanya.

Elektroforesis kapiler dengan laser-induced deteksi fluoresensi digunakan untuk menentukan konsentrasi DNA sampel setelah amplifikasi. Analisis mtDNA sampel tidak akan melanjutkan jika jumlah DNA diperkuat dalam reagen kontrol kosong atau negatif melebihi 10 persen dari jumlah DNA diperkuat dalam sampel dipertanyakan. Sampel reextracted dengan reagen baru (dan reagen kosong baru) harus jumlah DNA diperkuat dalam reagen kontrol kosong atau negatif melebihi ambang batas 10 persen. The 10-persen ambang batas ditentukan dalam studi FBI awal (Wilson et al. 1995), dan urutan yang benar untuk ratusan sampel telah diperoleh dalam studi terkontrol sejak awal ambang pintu.

Selain itu, harus urutan DNA dari reagen kontrol kosong atau negatif menjadi sama dengan sampel, tetapi kurang dari 10 persen dari jumlah sampel, analisis yang berulang atau dihilangkan. Jika typeable urutan mtDNA diperoleh dari reagen kosong, dilakukan usaha untuk menentukan sumber DNA ini. Urutan DNA mitokondria dari semua pegawai laboratorium analisis mtDNA atau penanganan bukti mtDNA disimpan dalam file untuk tujuan ini.

Karena sensitivitas dari proses amplifikasi mtDNA, bahkan jumlah menit dari DNA pada kosong reagen dan kontrol negatif dapat memperkuat ke tingkat terdeteksi. Sebagian besar DNA ini bukan dari kualitas yang cukup untuk dianalisis, tetapi dipelajari secara terpisah oleh dua pemeriksa DNA sebelum penetapan ini dibuat. Akhirnya, ketika reaksi sequencing dilakukan, mtDNA tersebut sequencing dalam dua arah, menggunakan kedua untai molekul mtDNA. Dalam kasus urutan konkordansi, setiap urutan diperoleh secara independen dianalisis dengan setidaknya dua pemeriksa, dan semua konfirmasi dicatat.

kesaksian

Di Amerika Serikat, ada tujuh laboratorium sedang melakukan forensik pemeriksaan mtDNA: Laboratorium FBI, Laboratorium Corporation of America (LabCorp) di Research Triangle Park, North Carolina, Mitotyping Teknologi di State College, Pennsylvania, Bode Technology Group (BTG) di Springfield, Virginia, Angkatan Bersenjata DNA Identifikasi Laboratorium (AFDIL) di Rockville, Maryland, biosintesis, Inc di Dallas, Texas, dan Reliagene di New Orleans, Louisiana.

Analisis DNA mitokondria telah diterima dalam proses pidana dari laboratorium ini di negara-negara berikut per April 1999: Alabama, Arkansas, Florida, Indiana, Illinois, Maryland, Michigan, New Mexico, North Carolina, Pennsylvania, South Carolina, Tennessee, Texas, dan Washington. DNA mitokondria juga telah diakui dan digunakan dalam pengadilan pidana di Australia, Inggris, dan beberapa negara Eropa lainnya.

Penutup Sejak tahun 1996, jumlah orang yang melakukan analisis DNA

mitokondria di Laboratorium FBI telah tumbuh 4-12, dengan personil yang lebih diharapkan dalam waktu dekat. Lebih dari 150 kasus DNA mitokondria telah diselesaikan oleh Laboratorium FBI pada Maret 1999, dan puluhan lainnya menunggu analisis. Program forensik yang diajarkan oleh personil FBI Laboratorium dan kelompok lain untuk mendidik para ilmuwan forensik dalam prosedur dan interpretasi mtDNA sequencing. Semakin banyak orang belajar tentang nilai mtDNA sequencing untuk memperoleh informasi yang berguna dari sampel pembuktian yang kecil, rusak, atau keduanya.

Mitokondria DNA sequencing menjadi dikenal tidak hanya sebagai alat eksklusif, tetapi juga sebagai teknik pelengkap untuk digunakan dengan prosedur identifikasi manusia lainnya. Analisis DNA mitokondria akan terus menjadi alat yang ampuh untuk aparat penegak hukum di tahun-tahun mendatang sebagai aplikasi lain yang dikembangkan, divalidasi, dan diterapkan untuk bukti forensik