PENGENALAN ALAT DAN TEKNIK KESELAMATAN KERJA

DAN

PEMBUATAN MEDIA, TEKNIK ASEPTIK, STERILISASI DAN DESINFEKSI

RABU, 24 APRIL 2013

JURNAL

MIKROBIOLOGI FARMASI

OLEH :

FAUZAN ARROZI

122210101035

BAGIAN BIOLOGI FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS JEMBER

2013

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 LATAR BELAKANG

Pada saat sekarang ini alat merupakan salah satu pendukung dari pada keberhasilan

suatu pekerjaan di laboratorium. Sehingga untuk memudahkan dan melancarkan

berlangsungnya praktikum, pengetahuan mengenai penggunaan alat sangat diperlukan.

Selain itu tata tertib juga sangat berpengaruh dalam lancarnya dan juga keberhasilan

praktikum yang dilakukan.

Pengenalan alat-alat laboratorium dan juga mengetahui tata tertib juga penting

dilakukan untuk keselamatan kerja saat melakukan penelitian. Alat-alat laboratorium

biasanya dapat rusak atau bahkan berbahaya jika penggunaannya tidak sesuai dengan

prosedur. Pentingnya dilakukan pengenalan alat-alat laboratorium adalah agar dapat

diketahui cara penggunaan alat tersebut dengan baik dan benar, sehingga kesalahan

prosedur pemakaian alat dapat diminimalisasi sedikit mungkin. Hal ini penting supaya

saat melakukan penelitian, data yang diperoleh akan benar pula. Data-data yang tepat akan

meningkatkan kualitas penelitian seseorang. Selain itu, bahan dan peralatan yang

digunakan dalam penelitian harus dalam kondisi steril. Untuk mencapainya, maka

diperlukan teknik sterilisasi. Dimana sterilisasi ialah proses-proses untuk menjadikan

peralatan dan bahan-bahan bebas dari semua bentuk kehidupan. Tujuan utamanya adalah

supaya sebelum digunakan untuk praktikum terlebih dahulu dimatikan dulu

mikroorganisme, karena kita ketahui bahwa alat-alat laboratorium mikrobiologi itu ada

bakterinya atau miroorganisme yang hidup atau yang menempel, maka dari itu perlu

dilakukan proses sterilisasi ataupun desinfeksi.

Berdasarkan hal tersebut diatas, maka dilakukanlah percobaan ini untuk mengetahui

teknik pengenalan, penyiapan dan penggunaan serta fungsi dan prinsip kerja setiap alat

laboratorium mikrobiologi. Dan juga untuk meminimalisir terjadinya kecelakaan dalam

praktikum yang dilakukan, untuk itu perlu halnya untuk mengetahui bagaimana cara

memberikan pertolongan pertama pada kecelakaan kemungkinan terjadi dan juga cuci

tangan aseptis yang benar agar tubuh kita steril dari mikroba (bakteri) yang menempel

pada tubuh kita saat praktikum. Selanjutnya praktikum ini juga dilakukan untuk

menambah pengetahuan tentang cara pembuatan medium dan juga cara menstrilisasikan

medium tersebut.

1.2 RUMUSAN MASALAH

1.2.1 Pengenalan Alat dan Teknik Keselamatan Kerja

1.2.1.1 Apa saja tata tertib yang harus diperhatikan dalam melakukan praktikum mikrobiologi?

1.2.1.2 Bagaimana cara melakukan pertolongan pertama pada kecelakaan? 1.2.1.3 Apa saja alat-alat yang dibutuhkan dalam melakukan praktikum

mikrobiologi serta apa kegunaannya?

1.2.1.4 Bagaimana cara mencuci tangan dengan baik dan benar?

1.2.2 Pembuatan Media, Teknik Aseptik, Sterilisasi Dandesinfeksi

1.2.2.1 Apa saja jenis-jenis medium yang digunakan untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroba serta bagaimana proses pembuatannya?

1.2.2.2 Bagaimanakah cara melakukan proses sterilisasi dan desinfeksi?

1.3 TUJUAN

1.3.1 Pengenalan Alat dan Teknik Keselamatan Kerja

1.3.1.1 Mahasiswa mengenal dan melaksanakan dengan baik tata tertib laboratorium mikrobiologi

1.3.1.2 Mahasiswa mengenal dan dapat melakukan pertolongan pertama pada kecelakaan

1.3.1.3 Mahasiswa dapat mengenal dan menggunakan alat-alat yang dibutuhkan dalam mikrobiologi beserta kegunaannya

1.3.1.4 Mahasiswa mampu mencuci tangan dengan baik dan benar

1.3.2 Pembuatan Media, Teknik Aseptik, Sterilisasi Dandesinfeksi

1.3.2.1 Mahasiswa mengenal jenis-jenis medium dan proses pembuatannya 1.3.2.2 Mahasiswa memahami proses sterilisasi dan desinfeksi

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Pengenalan Alat dan Teknik Keselamatan Kerja

Pada dasarnya setiap alat memiliki nama yang menunjukkan kegunaan alat, prinsip

kerja atau proses yang berlangsung ketika alat digunakan. Beberapa kegunaan alat dapat

dikenali berdasarkan namanya.Penamaan alat-alat yang berfungsi mengukur biasanya diakhiri

dengan kata meter seperti thermometer,hygrometer dan spektrofotometer,dll. Alat-alat

pengukur yang disertai dengan informasi tertulis, biasanya diberi tambahan graph seperti thermograph,barograph ( Moningka, 2008).

Pengetahuan alat merupakan salah satu faktor yang penting untuk mendukung

kegiatan praktikum. Siswa akan terampil dalam praktikum apabila mereka mempunyai

pengetahuan mengenai alat-alat praktikum yang meliputi nama alat, fungsi alat, dan cara

menggunakannya. Pengetahuan alat yang kurang akan mempengaruhi kelancaran saat

praktikum. Sebagai contoh, selama praktikum siswa dilibatkan aktif dengan pemakaian alat

dan bahan kimia. Siswa yang menguasai alat dengan baik akan lebih terampil dan teliti dalam

praktikum sehingga siswa memperoleh hasil praktikum seperti yang diharapkan (Laila, 2006).

Dalam suatu laboratorium, ada banyak jenis alat alat yang digunakan, salah satu jenis alat yang sering digunakan dalam laboratorium mikrobiologi adalah alat sterilisasi.

Dalam laboratorium, sterilisasi media dilakukan dengan menggunakan autoklaf yang

menggunakan tekanan yang disebabkan uap air, sehingga suhu dapat mencapai 1210C.

Sterilisasi dapat terlaksana bila mencapai tekanan 15 psi dan suhu 1210C selama 15 menit.

Media biakan yang telah disterilkan harus diberi penutup agar tidak dicemari oleh

mikroorganisme yang terdapat disekelilingnya. (Lay,W.B,1994). Pemanasan basah

bertekanan tinggi (autoklaf) dapat digunakan untuk mensterilkan larutan komponen media,

bahan dan alat-alat yang tahan terhadap pemanasan tinggi. Sterilisasi ini lebih baik

dibandingkan sterilisasi dengan pemanasan kering karena dengan autoklaf tidak hanya

mematikan mikroorganisme tapi juga mematikan sporanya. Waktu sterilisasi sangat

bervariasi, tergantung dari ukuran obyek yang disterilkan. Lamanya waktu sterilisasi bahan

cair (air, media) tergantung pada volume cairan yang disterilkan. Sterilisasi alat gelas dan

metal dapat dilakukan dengan pemanasan kering (oven) (Novilia, 2008).

Bahan-bahan yang digunakan meliputi bahan tanaman yang berupa daun M. citrifolia

muda dan bahan kimia yang meliputi akuades, detergen cair, alkohol absolut, desinfektan

(mengandung natrium hipoklorit 5,25%), komposisi media dasar Murashige-Skoog (MS),

sukrosa, ZPT (NAA dan kinetin), CaCl2.2H2O, CuSO4.5H2O, Agar, HCl 1 N, NaOH 1 N,

dan diklorometan. Adapun alat-alat yang digunakan meliputi botol kultur, laminar air flow,

cawan petri, hot plate, gelas ukur, magnetik stirer, vortex, erlenmeyer, keranjang autoklaf,

oven, skalpel, gelas beker, pinset, bunsen burner, gunting, neraca analitik, alumunium foil, pH

meter, tissue gulung, kertas label, pipet volumetrik, pipet, tetes, autoklaf, mortal, corong kaca,

gelas piala, tabung reaksi, rak tabung reaksi, rak media, kuvet, dan spektrofotometer UV-VIS

Shimadzu.

Penelitian dilakukan dengan Rancangan Acak Lengkap Faktorial yang terdiri atas dua

faktor. Faktor pertama yaitu penambahan Ca2+ dengan tiga taraf yang meliputi C0

(konsentrasi 0 mg/l), C1 (konsentrasi 440 mg/l), dan C2 (konsentrasi 880 mg/l). Sedangkan

faktor kedua yaitu penambahan Cu2+ dengan tiga taraf yang meliputi E0 (konsentrasi 0 mg/l),

E1 (konsentrasi 2,5 mg/l), dan E2 (konsentrasi 5 mg/l). Sehingga menghasilkan 9 kombinasi

perlakuan, masing-masing dengan tiga ulangan (Ika Ariningsi, 2003).

Vortex tube banyak digunakan dalam industri, karena memiliki beberapa kelebihan

dibandingkan dengan alat pendinginan komersial biasa, yaitu : sederhana, tidak ada bagian

yang bergerak, murah, tidak menggunakan listrik dan bahan kimiawi, tidak menggunakan

refrigerant, kecil, ringan, temperatur yang dihasilkan dapat diatur, minim perawatan, tahan

lama (terbuat dari stainless stell) dan pendiginannya instant. Tetapi alat ini memiliki

kelemahan yaitu efisiensi thermal rendah tidak lebih dari 20 persen serta menimbulkan suara

yang bising. Pada alat ini hanya mengunakan udara bertekanan dari kompresor sebagai

sumbernya (Anonim,).

Dalam praktikum pengenalan alat dan teknik praktikum akan dijelaskan secara detail

mengenai fungsi dan spesifikasi masing-masing alat tersebut. Contoh

peralatan yang digunakan pada laboratorium mikrobiologi dijelaskan sebagai berikut :

Mikroskop

Mikroskop berfungsi untuk melihat benda-benda atau organisme yang berukuran

sangat kecil. Pembesaran oleh suatu mikroskop merupakan hasil dari 2 sistem lensa, yaitu :

Lensa Obyektif, terletak di dekat obyek. Lensa obyektif terdiri dari kombinasi lensa

konveks dan lensa konkaf.

Lensa okuler, terletak di bagian atas di dekat mata orang yang melihat.

Cawan Petri Cawan petri berfungsi sebagai tempat untuk menumbuhkan dan memelihara

mikroorganisme secara kuantitatif dan sebagai tempat pengujian sampel. Cawan petri tersedia

dalam berbagai macam ukuran, diameter cawan yang biasa berdiameter 15 cm dan dapat

menampung media sebanyak 15-20 ml, sedangkan cawan berdiameter 9 cm kira-kira cukup

menampung media sebanyak 10 ml.

Untuk menghindari kontaminasi dengan lingkungan luar, perlu diperhatikan cara

membuka dan menutup cawan petri dengan baik. Ketika membuka dan menutup cawan petri

diusahakan selalu dekat dengan pembakar bunsen yang fungsinya adalah untuk menghindari

kontaminasi. Perlu diperhatikan pula ketika inkubasi, letakkanlah cawan petri dalam posisi

terbalik agar uap yang tersisa pada bagian tutup tidak jatuh membasahi media.

Sebelum disterilisasi, cawan petri harus dibungkus terlebih dahulu dengan kertas

coklat atau kertas putih satu per satu dengan tujuan meminimalisir terjadinya kontaminasi.

Cara membungkusnya yaitu dengan menggulung sisa kertas yang telah menyelimuti cawan

pada bagian atasnya, kemudian ujung-ujungnya dilipat seperti kado.

Cara memindahkan kultur ke cawan petri juga harus diperhatikan. Ada cara khusus,

yaitu dengan menggunakan jarum inokulasi atau Ose yang disebut dengan streak agar. Ose

yang telah dicelupkan pada media berisi mikroorganisme kemudian digoreskan pada cawan

secara zig-zag.

Tabung Reaksi Di dalam mikrobiologi, tabung reaksi digunakan untuk menyimpan mikroorganisme

dalam medium cair (broth) maupun padat. Agar tabung reaksi tetap steril, maka dalam

penggunannya dapat digunakan sumbat atau penutup. Macam-macam sumbat, antara lain

sumbat kapas, sumbat ulir, sumbat logam (stainless steel), dan sumbat plastik. Pada

praktikum kali ini, tabung reaksi disumbat menggunakan kapas yang dibulatkan dan

dibungkus dengan kasa. Dalam pembuatan sumbat kapas harus sangat diperhatikan.

Banyaknya kapas yang digunakan harus pas sehingga dapat menutup tabung reaksi dengan

sangat rapat. Jika tidak maka mikroorganisme dalam tabung rekasi akan mudah

terkontaminasi dengan mikroorganisme di lingkungan sekitar.

Media padat yang dimasukkan ke tabung reaksi dapat diatur menjadi 2 bentuk

menurut fungsinya, yaitu media agar tegak (Deep Tube Agar) dan agar miring (Slants Agar).

Untuk menyimpan tabung reaksi digunakan rak tabung reaksi. Ukurannya bermacam-

macam dan jumlah lubangnya pun beragam. Ada dua jenis tabung reaksi yaitu yang terbuat

dari kayu dan besi. Penggunaan rak tabung kayu lebih baik karena tidak menghantarkan panas

dan lebih nyaman dipakai. Pada bagian rak tabung terdapat bagian khusus yang dipakai untuk

tabung reaksi yang baru dicuci sehingga sisa air dalam tabung terbuang keluar dan

mempercepat pengeringan dari tabung tersebut. Dengan cara itu mikroorganisme akan sulit

tumbuh.

Pipet Ukur Pipet ukur adalah alat yang terbuat dari gelas atau plastik, yang berfungsi untuk

memindahkan kultur secara steril. pipet ini memiliki skala 1 ml, 5 ml, dan 10 ml. Selain itu

dapat digunakan untuk mengambil larutan dengan volume terttentu. Untuk mengambil larutan

digunakan ball pipet.

Ball Pipet Ball pipet adalah alat untuk menyedot dan mengeluarkan larutan yang dapat dipasang

pada pangkal pipet ukur. Karet sebagai bahan ball pipet merupakan karet yang resisten bahan

kimia. Ball pipet memiliki 3 saluran yang masing-masing saluran memiliki katup. Katup yang

bersimbol A (Aspirate) berguna untuk mengeluarkan udara dari gelembung. S (Suction)

merupakan katup yang jika ditekan maka cairan dari ujung pipet akan tersedot ke atas.

Kemudian katup E (Exhaust) berfungsi untuk mengeluarkan cairan dari pipet ukur.

Dengan menggunakan bulb pipet ini akan memudahkan mengambil atau menaruh cairan

karena kecepatan dan ketepatan banyaknya cairan dapat kita atur sesuai dengan kebutuhan.

Hati-hati jangan sampai zat cair masuk ke bagian atas ball pipet, karena hal ini akan

menyebabkan kerusakan dalam praktikum mikrobiologi pangan. Ball pipet digunakan untuk

mengambil sampel dari tabung reaksi dan menaruh sampel ke dalam cawan petri.

Jarum Inokulasi / Ose Ose berfungsi untuk memindahkan kultur mikroorganisme Ada 2 macam ose, yaitu

ose lurus (Inoculating Needle/Transfer Needle) untuk menanam mikroorganisme dan ose

bulat (Inoculating Loop/Transfer Loop) untuk menggores mikroorganisme yang biasanya

secara zig-zag. Ose terbuat dari nichrome atau platina sehingga dapat berpijar jika terkena

panas.

Beaker Glass Beaker glass merupakan alat yang memiliki banyak fungsi. Penggunaan beaker glass

dalam praktikum mikrobiologi pangan adalah sebagai alat untuk menampung berbagai macam

bahan kimia, alat pembantu penimbangan menggunakan neraca analitik, dan untuk

melarutkan media yang biasanya berupa serbuk agar.

Labu Erlenmeyer Erlenmeyer berfungsi untuk menampung larutan atau cairan. Labu Erlenmeyer dapat

digunakan untuk meracik dan menghomogenkan bahan-bahan komposisi media, menampung

akuades, kultivasi mikroba dalam kultur cair, dan lain-lain. Terdapat beberapa pilihan

berdasarkan volume cairan yang dapat ditampungnya yaitu 25 ml, 50 ml, 100 ml, 250 ml, 300

ml, 500 ml, 1000 ml, dan sebagainya.

Cara menyumbat labu Erlenmeyer sama dengan cara menyumbat tabung reaksi yaitu

menggunakan kapas. Penyumbatan dengan kapas dilakukan ketika labu Erlenmeyer tersebut

akan disterilisasi.

Gelas Ukur

Gelas ukur berfungsi untuk mengukur volume suatu cairan, seperti labu erlenmeyer,

gelas ukur memiliki beberapa pilihan berdasarkan skala volumenya. Pada saat mengukur

volume larutan, sebaiknya volume tersebut ditentukan berdasarkan meniskus cekung larutan.

Gelas ukur dapat disterilisasi menggunakan oven bersama peralatan praktikum lainnya,

karena bila terjadi pemuaian tidak akan memengaruhi hasil akhir yang diamati.

Spatula Digunakkan untuk mengambil padatan, misalnya media yang digunakan untuk

pertumbuhan mikroorganisme.

Kaca Preparat Merupakan lempengan kaca tipis yang digunakan untuk menyimpan sampel (objek

glass) yang akan diamati melalui mikroskop. Biasanya setelah sampel diletakkan, digunakan

kaca lain (cover glass) untuk menutupi sampel tersebut sehingga posisinya tidak berubah.

Tabung Durham Tabung durham berbentuk mirip dengan tabung reaksi namun ukurannya lebih kecil

dan berfungsi sebagai indikator terjadinya fermentasi yaitu dengan ditandai dengan adanya

gas yang tertampung dalam tabung tersebut. Tabung ini bekerja dengan metode MPN (Most

Probable Number). Penempatannya terbalik dalam tabung reaksi dan harus terendam

sempurna dalam media (jangan sampai ada sisa udara). Tabung durham dapat disterilisasi

menggunakan autoclave.

Bunsen Bunsen berfungsi untuk menciptakan kondisi yang steril. Biasanya untuk sterilisasi

jarum ose, mulut tabung reaksi, dan cawan petri. Bagian api yang paling cocok untuk

memijarkannya adalah bagian api yang berwarna biru. Perubahan bunsen dapat menggunakan

bahan bakar gas atau metanol.

Autoclave Autoclave adalah alat yang digunakan untuk mensterilkan alat ataupun bahan dalam

bidang mikrobiologi menggunakan uap air bertekanan tinggi pada 120C selama sekita 15-20

menit. Alat ini bekerja dengan sistem sterilisasi basah.

Inkubator Inkubator digunakan untuk alat penyimpan kultur. Alat ini dapat mempertahankan

temperature dimana mikroorganisme akan tumbuh pesat pada suhu optimumnya. Alat ini

bekerja seperti oven (panas kering) dengan suhu yang dapat diatur sesuai dengan kebutuhan.

Colony Counter Colony counter adalah alat yang digunakan untuk mempermudah kita dalam

menghitung banyaknya mikroorganisme yang ada dalam suatu biakan atau kultur. Dalam

penggunaannya kita dapat menghitung mikroorganisme yang ada dalam cawan petri.

Vortex Mixer Vortex mixer adalah alat yang digunakan untuk mencampur larutan yang ada dalam

tabung reaksi. Alat ini terdiri dari sebuah motor listrik dengan drive shaft berorientasi vertikal

dan melekat pada sepotong karet. Ketika tabung reaksi atau wadah lain yang sesuai ditekan

pada cangkir karet vortex mixer maka gerak akan ditransmisikan ke dalam cairan dan

terbentuk pusaran.

Waterbath Alat ini digunakan untuk meyimpan media yang baru diambil dari autoclave. Biasanya

media-media tersebut ada yang langsung dipakai, ada yang tidak. Sehingga untuk menjaga

suhu media tersebut tetap konstan (sekitar 50C) maka digunakan alat ini.

Neraca analitik Alat ini berfungsi deperti timbangan. Alat ini mempunya ketelitian 0,0001 gram dan

kapasitas sebesar 210 g. Sehingga hasil yang didapat menggunakan neraca ini sangat akurat.

Lemari es Lemari es dalam bidang mikrobiologi digunakan untuk menyimpan medium steril

untuk mencegahnya dari kekeringan, mempertahankan masa simpan mikroorganisme, dan

untuk mencegah terjadinya kontaminasi.

Oven Alat ini merupakan salah satu alat untuk sterilisasi kering. Alat ini menggunakan

sistem panas kering dalam suhu 160C-180C. Biasanya digunakan untuk mensterilkan alat-

alat gelas.

2.2 Pembuatan Media, Teknik Aseptik, Sterilisasi dan Desinfeksi

Dalam melakukan diagnosa mikrobiologi sterilisasi sangat diutamakan baik alat

maupun medianya. Suatu alat dikatakan steril apabila alat atau bahan bebas dari mikroba baik

bentuk vegetative maupun spora. Untuk itu sebagai pemula dalam mikrobiologi sangat perlu

mengenal teknik sterilisasi, pembuatan media serta teknik penanaman .

Secara umum sterilisasi merupakan proses pemusnahan kehidupan khususnya mikrobia

dalam suatu wadah ataupun peralatan laboratorium. Sterilisasi dalam mikrobiologi adalah

suatu proses untuk mematikan semua mikroorgansime yang terdapat pada atau didalam suatu

benda. Ada tiga cara utama yang umum dipakai dalam sterilisasi yaitu penggunaan panas,

penggunaan bahan kimia, dan penyaringan (filtrasi). Apabila panas digunakan bersama-sama

dengan uap air maka disebut sterilisasi basah, bila tanpa kelembapan maka disebut sterilisasi

kering.

Medium merupakan bahan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme

diatas atau didalamnya. Sebelum menumbuhkan mikroorganisme, pertama-tama kita harus

memahami kebutuhan dasarnya lalu mencoba memformulasikan suatu medium yang

memberikan hasil baik.

Berdasarkan hal tersebut maka dilakukan percobaan untuk menambah pengetahuan

tentang cara pembuatan medium dan juga cara menstrilisasikan medium.

Teknik aseptik adalah usaha mempertahankan klien sedapat mungkin bebas dari

mikroorganisme.

Asepsis ada 2 macam:

1. Asepsis medis Teknik bersih, termasuk prosedur yang digunakan untuk mencegah penyebaran

mikroorganisme Contoh : mencuci tangan,mengganti linen tempat tidur, dan menggunakan

cangkir untuk obat.

2. Asepsis bedah Teknik steril, termasuk prosedur yang digunakan untuk membunuh mikroorganisme dari

suatu daerah.

Prinsip-Prinsip Tindakan Asepsis Yang Umum

1. Semua benda yang menyentuh kulit yang merekah atau diamsukkan ke dalam kulit untuk

menyuntikkan sesuatu ke dalam tubuh, atau yang dimasukkan ke dalam rongga badan yang

dianggap steril, haruslah steril.

2. Jangan sekali-kali menjauhi atau membelakangi tempat yang steril.

3. Peganglah objek-objek yang steril, setinggi atas pinggang dengan demikian objek-objek itu

selalu akan terlihat jelas dan ini mencegah terjadinya kontaminasi diluar pengawasan.

4. Hindari berbicara, batuk, bersin atau menjangkau suatu objek yang steril

5. Jangan sampai menumpahkan larutan apapun pada kain atau kertas yang sudah steril.

6. Bukalah bungkusan yang steril sedemikian rupa, sehingga ujung pembungkusnya tidak

mengarah pada si petugas.

7. Objek yang steril menjadi tercemar, jika bersentuhan dengan objek yang tidak steril.

8. Cairan mengalir menurut arah daya tarik bumi, jika forcep dipegang sehingga cairan

desinfektan menyentuh bagian yang steril, maka forcep itu sudah tercemar.

Desinfeksi adalah menghancurkan atau membunuh kebanyakan kebanyakan

organisme patogen pada benda atau instrumen dengan menggunakan campuran zat kimia cair.

Hasil proses desinfeksi dipengaruhi oleh beberapa faktor:

1. Beban organik (beban biologis) yang dijumpai pada benda.

2. Tipe dan tingkat kontaminasi mikroba.

3. Pembersihan/dekontaminasi benda sbelumnya.

4. Konsentrasi desinfektan dan waktu pajanan

5. Struktur fisik benda

6. Suhu dan PH dari proses desinfeksi.

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Alat dan Bahan

3.1.1 Pengenalan Alat dan Teknik Keselamatan Kerja

1. Alat-alat gelas atau kaca

(a) Tabung reaksi

(b) Erlenmeyer

(c) Gelas ukur

(d) Pipet

(e) Cawan petri

(f) Buret

2. Alat-alat berbahan porselen

3. Alat-alat berbahan silika

4. Alat-alat dari logam

5. Alat-alat dari plastik atau karet

6. Alat-alat instrumen

(a) Neraca analitik

(b) pH meter

(c) Higrometer

(d) Mikroskop

(e) Alat-alat sterilisasi

Autoclave Oven

(f) Automatic Colony Counter

(g) Inkubator

(h) Laminar Air Flow Cabinet

3.1.2 Pembuatan Media, Teknik Aseptik, Sterilisasi dan Desinfeksi

1. Pembuatan Media

Alat Neraca

Erlenmeyer 500ml

Kompor

Korek api

Batang pengaduk

Cawan Petri

Tabung Reaksi

Kapas

Autoclaf

Bahan Nutrient agar

Aquades

2. Sterilisasi

Alat Autoclaf

Tabung reaksi

Wadah

Oven

Bahan -

3. Desinfeksi

Alat Lempeng agar

Lidi

Oven

Bahan Sabun biasa

Sabun antiseptik

Air

3.2 CARA KERJA

3.2.1 Pengenalan Alat dan Teknik Keselamatan Kerja

1. Pengenalan Alat

2. Teknik Keselamatan Kerja

Amati alat-alat yang ada di laboratorium

satu persatu beserta bagian bagiannya.

Pahami bentuk beserta fungsinya

Letakkan tas dan barang-barang lain yang tidak diperlukan pada

tempat yang tersedia. Benda-benda tersebut jangan diletakkan di

atas meja laboratorium.

Pakailah jas laboratorium selama bekerja di laboratorium

Sekalah meja laboratorium dengan desinfektan sebelum dan

sesudah kegiatan praktikum.

Jangan merokok, makan, dan minum di laboratorium.

Cucilah tangan menggunakan sabun dan cairan antiseptik sebelum

dan sesudah kegiatan laboratorium.

Jauhkan tangan anda dari mulut, hidung, dan telinga selama bekerja

di laboratorium.

3.2.2 Pembuatan Medium Padat

1. Penyiapan medium

Perlakukan semua organisme yang ditangani sebagai patogen

Setelah kegiatan selesai, alat-alat praktikum segera dibersihkan sesuai

ketentuan di laboratorium.

Lup inokulasi atau jarum inokulasi disterilkan dengan cara

memijarkan seluruh panjang kawat sebelum dan sesudah setiap

penggunaan.

Sampah yang terkontaminasi harus dibuang di tempat yang

disediakan.

Hubungi petugas laboratorium atau dosen jika terkontaminasi atau

terluka.

Semua biakan yang tidak terpakai lagi dan akan dibuang maka

harus diletakkan di tempat khusus

Apabila biakan mikroorganisme tumpah atau tercecer ke lantai atau

meja maka segera tuangkan desinfektan ke atasnya dan bersihkan.

Biakan mikroorganisme apapun tidak boleh dibawa keluar dari

laboratorium.

Ambillah bahan medium nutrient agar (NA). Perhatikan formula atau

petunjuk pembuatan.

Timbanglah medium NA sekian gram untuk dilarutkan dalam 250ml

aquades.

2. Pembuatan medium agar cawan dan medium agar miring

Masukkan aquades tersebut ke dalam erlenmeyer 500ml kemudian

didihkan selama 15 menit di atas hotplate atau kompor

Siapkan 2 cawan petri dan 4 tabung reaksi untuk setiap kelompok.

Selama pendidihan, tambahkan NA sedikit demi sedikit sambil diaduk

hingga homogen

Tuangkan 10ml medium NA ke dalam dua tabung reaksi dan 5ml ke

dalam dua tabung raksi yang lain.

Ambillah tabung reaksi yang berisi 5 ml medium dan langsung letakkan

tabung tersebut pada papan miring hingga memadat dan menjadi dingin.

Sumbatlah semua tabung reaksi dengan kapas.

Sterilkan dalam autoklaf pada 121C . selama 15 menit.

Setelah dikeluarkan dari autoklaf, letakkanlah tabung-tabung reaksi yang

memuat 10 ml medium ke dalam penangas air bersuhu 50. dan biarkan

selama 5 menit.

3. Sterilisasi Panas Basah

Ambillah tabung yang berisi 10 ml medium dan tuangkan satu per satu ke

dalam cawan petri steril secara aseptik. Pastikan seluruh permukaan

cawan tertutup rata oleh medium

Biarkan medium tersebut menjadi dingin dan memadat.

Tunggulah selama 24 jam. Apabila medium tetap bersih dan tidak

ditumbuhi bakteri atau jamur maka medium tersebut bisa dipakai.

Atur suhu sterilisasi pada 121.selama 15 menit.

Tatalah bahan atau wadah yang akandisterilisasi sedemikian sehingga

tersedia ruang bebas untuk gerak uap air.

Tutuplah autoklaf dengan benar.

Tuangkan aquades secukupnya ke dalam autoklaf

Siapkan tabung-tabung reaksi berisi medium yang telah dikemas

sedemikian rupa. Perhatikan cara pengemasannya.

4. Sterilisasi Panas Kering

Amati lama proses mulai dari awal menjalankan alat hingga pendinginan

Perhatikan oven yang tersedia dan pelajari bagian-bagiannya.

Siapkan peralatan gelas yang hendak disterilisasi hingga dikemas dengan

baik.

Masukkan peralatan tersebut ke dalam oven dan tempatkan secara

merata.

Tutuplah oven dengan baik.

Atur temperatur sterilisasi pada 170.selama 1 jam.

Pada akhir proses, matikan pemanasan dan tunggu hingga tekanan dalam

autoklaf menjadi nol

Jalankan autoklaf

5. Desinfeksi

Jalankan oven.

Cuci ibu jari tangan dengan sabun biasa dan air, kemudian ulangi

langkah ke-2 pada permukaan sektor II.

Pada akhir proses, matikan pemanasan dan tunggu hingga oven menjadi

dingin.

Amati lama proses mulai dari awal menjalankan alat hingga pendinginan

Siapkan lempeng agar dan bagi ke dalam 4 sektor atau kuadran.

Remas-remaslah jari jemari dan telapak tangan kiri atau tangan kanan

kemudian biarkan dalam posisi terbuka.

Ambil lidi kapas steril dan usapkan pada telapak tangan lalu oleskan

pada sektor I dari permukaan agar.

Inkubasikan lempeng agar pada suhu 37.selama 24 jam.

Cuci jari kelingking dengan larutan alkohol 70%, lalu ulangi langkah ke-

2 pada permukaan sektor IV.

Cuci jari telunjuk dengan sabun antiseptik dan air, selanjutnya ulangi

langkah ke-2 pada permukaan sektor III.

DAFTAR PUSTAKA

Hadiutomo. 1990. Mikrobiologi Dasar Jilid I. Jakarta: Erlangga.

Laila, Khusucidah, 2006, Krelasi Antara Pengetahuan Alat Praktikum dengan Psikomotorik

Siswa kelas XII IPA SMAN 11 Semarang Materi pokok, Univ. Negeri semarang.

Lay, W. B. (1994). Analisis Mikrobiologi di Laboratorium. Jakarta : Penerbit PT. Raja

Grafindo Persada. Hal. 32, 71-73.

Novilia, 2008. Artikel Ilmiah Penelitian Mikroba. Gramedia. Indonesia.

Winarno, 1999. Penuntun Praktikum Mikrobiologi Industri Pangan. Pustaka Harapan.

Jakarta