Gestational Hipoksia Protein Kinase C dan diregulasi Menghambat Kalsium-Activated Saluran Kalium di Bovine Arteri uterus

AbstrakTujuan: Penelitian ini menguji hipotesis bahwa hipoksia kehamilan up-mengatur protein kinase C (PKC) dan menghambat kalsium-diaktifkan saluran kaliumrelaksasi(KCA)dimediasiarteri uterus pada kehamilan. Desain penelitian: arteri uterus diisolasi dari hamil (NPUA) dan hamil (PUA) (~ 140 hari kehamilan) domba dipelihara baikdi permukaan laut atau tinggi ketinggian (3.820 m untuk 110 hari, PaO2: 60 mmHg). Kontraksi dari arteri uterina ditentukan. Temuan kunci: Dalam normoxic PUA, penghambatan selektif besar konduktansi KCA (BK) saluran secara signifikan meningkatkan PKC aktivator phorbol 12, 13-dibutyrate (PDBu)-diinduksi kontraksi. Efek ini dibatalkan oleh hipoksia kronis pada kehamilan. Tidak seperti saluran BK, penghambatan kecil-konduktansi KCA (SK) saluran tidak berpengaruh signifikan terhadap kontraksi PDBu-dimediasi. Dalam normoxic PUA, aktivasi baik BK dengan NS1619 atau SK dengan NS309 menghasilkan konsentrasi-relaksasi tergantung, yang tidak diubah oleh penambahan PDBu. Namun, dalam rahim arteri diobati dengan hipoksia kronis (10,5% O2 selama 48 jam), baik NS1619 dan NS309-induced relaksasi secara signifikan dilemahkan oleh PDBu. Dalam NPUAs, penghambatan saluran BK signifikan ditingkatkan kontraksi PDBu diinduksi pada hewan normoxic dan hipoksia.Kesimpulan: Hasil penelitian menunjukkan bahwa dalam kondisi normoxic BK menghambat aktivitas PKC dan pembuluh darah rahim kontraktilitas, yang selektif dilemahkan oleh hipoksia kronis selama kehamilan. Selain itu, hipoksia menginduksi inhibisi PKC-dimediasi BK dan SK kegiatan dan relaksasi arteri rahim pada kehamilan. Kata kunci: hipoksia kronis, kehamilan, PKC, K + channel, rahim kontraktilitas arteri.

PENGANTAR Hipoksia kronis selama kehamilan secara signifikan meningkatkan insiden preeklampsia dan janin pembatasan pertumbuhan intrauterin (IUGR) [1-8]. Namun, mekanisme yang mendasari hipoksia-induced merugikan hasil kehamilan sebagian besar tidak diketahui. sebelumnya Penelitian menunjukkan bahwa hipoksia diinduksi penyimpangan sirkulasi uteroplasenta pada kehamilan adalah penting dalam patogenesis komplikasi kehamilan [5,8-12]. Memang, hipoksia kronis selama kehamilan memiliki efek samping besar pada arteri rahim kontraktilitas uterus dan secara signifikan meningkatkan tonus pembuluh darah, menyebabkan redaman kehamilan-Peningkatan diinduksi dalam aliran darah uterus dan peningkatan risiko IUGR dan preeklamsia [1,12-14]. Mekanisme molekuler yang mendasari adaptasi kontraktilitas arteri rahim normal kehamilan dan hipoksia kronis yang kompleks dan tetap kurang dipahami. Kehamilan ditandai oleh peningkatan relaksasi pembuluh darah rahim dan penurunan rahim penyempitan arteri dan pembuluh darah Ivyspring Penerbit Internasional nada. Penelitian terbaru telah menunjukkan bahwa kehamilan-penurunan diinduksi dalam nada vaskular uterus adalah dimediasi oleh peningkatan Ca2 +-K + diaktifkan (KCA) ekspresi channel dan aktivitas [3,15]. penghambatan Saluran KCA dibalik penurunan kehamilan-dimediasi dalam rahim nada myogenic pembuluh darah dan meningkatkan aliran darah uterus [15-17], menunjukkan bahwa peningkatan KCA fungsi saluran memainkan peran penting di adaptasi dari sirkulasi rahim selama kehamilan. Hipoksia kronis selama kehamilan terhambat redaman kehamilan diinduksi vaskular uterus Nada via menekan KCA fungsi saluran [3,18]. Studi ini menunjukkan mekanisme KCA saluran dalam mengatur adaptasi myogenic dari rahim arteri pada kehamilan serta maladaptation dari sirkulasi rahim yang disebabkan oleh hipoksia kronis selama kehamilan. Berbeda dengan saluran KCA yang up-diatur oleh kehamilan dan turun-diatur oleh hipoksia kronis, aktivitas protein kinase C (PKC) dan yang mediasi kontraksi pembuluh darah rahim yang turun-diatur oleh kehamilan dan up-diatur oleh hipoksia kronis [19-22]. Dengan demikian, kehamilan dan kronis hipoksia diferensial mengatur KCA fungsi saluran dan kegiatan PKC di arteri rahim. keseimbangan antara aktivasi saluran KCA dan PKC kemungkinan untuk memainkan peran penting dalam adaptasi rahim tonus pembuluh darah dengan kehamilan dan hipoksia kronis. Namun, interaksi antara saluran KCA dan PKC serta bagaimana mereka mengatur dan mengintegrasikan ke mengatur uterus vaskular kontraktilitas selama kehamilan dalam menanggapi hipoksia kronis tetap tidak diketahui. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki efek potensial dari KCA saluran inhibitor pada PKC-dimediasi kontraksi arteri uterus dalam keadaan tidak hamil dan domba hamil yang berada di normoxic permukaan air laut atau terkena jangka panjang ketinggian hipoksia. Untuk lebih menentukan interaksi PKC dan KCA fungsi saluran dan efek kehamilan dan hipoksia kronis, kami juga meneliti efek dari Aktivasi PKC di KCA channel-dimediasi relaksasi dari arteri uterina di domba betina hamil dan hamil dalam kondisi normoxic dan hipoksia. BAHAN DAN METODE Persiapan jaringan dan pengobatan Semua prosedur dan protokol yang digunakan di masa kini penelitian telah disetujui oleh Komite Penelitian Hewan dari Loma Linda University dan mengikuti pedoman oleh National Institutes of Health Guide untuk Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium. seperti sebelumnya dijelaskan [2], tidak hamil dan waktu-tanggal domba hamil diperoleh dari Nebeker Peternakan di Lancaster, CA (ketinggian: ~ 300 m; arteri PaO2: 102 2 mmHg). Untuk pengobatan hipoksia kronis, tidak hamil dan hamil (30 hari kehamilan) hewan diangkut ke Laboratorium Barcroft, Putih Station Gunung Penelitian, Bishop, CA (ketinggian, 3.820 m; ibu PaO2, 60 2 mmHg) dan dipelihara di sana selama ~ 110 hari. Setelah pengobatan hipoksia, hewan-hewan itu diangkut ke laboratorium segera. Hewan dibius dengan ketamin (10 mg / kg, iv), diikuti oleh diinkubasi dan anestesi dipertahankan pada 1,5% sampai 3,0% isoflurane skor di O2 seluruh operasi. Sayatan di perut dibuat dan rahim terbuka. Arteri uterus diisolasi dan dihapus tanpa peregangan, dan ditempatkan dalam garam fisiologis dingin solusi (PSS) yang mengandung (dalam mM): 130 NaCl, 10,0 HEPES, 6.0 Glukosa, 4,0 KCl, 4,0 NaHCO3, 1,80 CaCl2, 1.2 MgSO4, KH2PO4 1,18, dan 0,025 EDTA, pH 7,4. Setelah pengangkatan jaringan, hewan dibunuh dengan T-61 (solusi euthanasia, Hoechst-Roussel, Somerville, NJ). studi relaksasi Cabang-cabang generasi keempat utama arteri uterina dari domba hamil dipisahkan dari jaringan sekitarnya, dan dipotong menjadi 2-mm cincin segmen. Untuk ex vivo pengobatan, arteri uterus segmen diinkubasi dalam phenol red bebas DMEM dengan 1% arang-dilucuti FBS selama 48 jam pada 37 C di baik ruang normoxic dengan 21% O2 dan hipoksia chamber dengan 10,5% O2. Ketegangan Isometric diukur dalam larutan Krebs dalam bath jaringan pada 37 C, sebagai dijelaskan sebelumnya [18]. Secara singkat, cincin masing-masing adalah dibiarkan selama 60 menit dan kemudian secara bertahap membentang ke ketegangan istirahat optimal, sebagaimana ditentukan oleh ketegangan yang dikembangkan sebagai tanggapan terhadap 120 mmol / L KCl ditambahkan pada setiap tingkat peregangan. kami penelitian sebelumnya telah menunjukkan bahwa aktivasi K + channel baik besar-konduktansi Ca2 +-diaktifkan (BK) dan kecil-konduktansi K + saluran Ca2 +-diaktifkan (SK) dapat menyebabkan relaxation.3 arteri rahim, 18 Untuk melihat apakah PKC mengatur BK dan SK-dimediasi relaksasi, cincin arteri yang pra-kontrak dengan konsentrasi submaksimal norepinefrin, diikuti dengan penambahan dari BK pembuka NS1619 atau SK pembuka NS309 dalam ketiadaan atau kehadiran phorbol 12,13-dibutyrate (PDBu, PKC aktivator), ditambahkan dalam secara kumulatif.STUDI KONTRAKSI Cabang-cabang generasi keempat utama arteri uterina dari kedua hamil dan tidak hamil domba diisolasi, dan dipotong menjadi segmen cincin 2-mm dan dipasang pada 10 mandi jaringan mL mengandung dimodifikasi Solusi Krebs diseimbangkan dengan campuran 95% O2 dan 5% CO2. Untuk melihat apakah PKC dan adrenergik kontraksi reseptor-dimediasi diatur oleh BK dan SK, PDBu dan norepinefrin diinduksi isometrik Ketegangan ditentukan dalam ketiadaan atau kehadiran BK inhibitor iberoitoxin (IBTX; 100 nmol / L), tetraetilamonium (TEA; 1 mmol / L) atau SK blocker apamin (500 nmol / L), seperti yang dijelaskan sebelumnya [23-25].

ANALISIS DATA Kurva konsentrasi-respons dianalisis dengan regresi nonlinear dengan bantuan komputer agar sesuai dengan data menggunakan GraphPad Prism (GraphPad Software, San Diego, CA). Hasil dinyatakan sebagai berarti SEM diperoleh dari jumlah hewan percobaan diberikan. Perbedaan dievaluasi untuk signifikansi statistik (P