brawijaya tri wicaksono pengaruh kadar pvp k30 … · laboran laboratorium teknologi sediaan...
TRANSCRIPT
SKRIPSI
BRAWIJAYA TRI WICAKSONO
PENGARUH KADAR PVP K30 TERHADAP
MUTU FISIK TABLET EKSTRAK BUAH PARE
DENGAN METODE GRANULASI BASAH
PROGRAM STUDI FARMASI
FAKULTAS ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG
2016
ii
iii
iv
KATA PENGANTAR
Syukur Alhamdulillah dan terima kasih penulis panjatkan kepada Allah SWT atas
rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul
“PENGARUH KADAR PVP K30 TERHADAP MUTU FISIK TABLET
EKSTRAK BUAH PARE DENGAN METODE GRANULASI BASAH” untuk
memenuhi salah satu persyaratan akademik dalam menyelesaikan Program Sarjana
Farmasi Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Malang.
Dalam proses penyusunan skripsi ini penulis tidak terlepas dari berbagai pihak
yang memberikan bimbingan, bantuan serta do’a sehingga penulis dapat
menyelesaikannya dengan baik. Untuk itu penulis menyampaikan rasa terimakasih
yang sebesar besarnya kepada:
1. Dr. H. Achmad Rajaram, Apt. Sebagai pembimbing I dan Dra. Uswatun
Chasanah. M.Kes., Apt. Sebagai pembimbing II yang telah tulus ikhlas dan
penuh kesabaran, membimbing dan selalu meluangkan waktu maupun
dorongan moral meberi arahan-arahan terbaik kepada saya sehingga skripsi
ini dapat diselesaikan dengan baik.
2. Drs. H. Achmad Inoni, Apt. dan Dian Ermawati, M.Farm., Apt. sebagai tim
penguji yang memberikan saran, masukan, dan kritik yang membangun
terhadap skripsi yang telah saya kerjakan.
3. Yoyok Bekti P., M.Kep., Sp.Kom. selaku dekan Fakultas Ilmu Kesehatan
Universitas Muhammadiyah Malang.
4. Nailis Syifa’, S.Farm., M.Sc., Apt. selaku ketua Program Studi Farmasi
Universitas Muhammadiyah Malang.
5. Seluruh staf pengajar Program Studi Farmasi Universitas Muhammadiyah
Malang yang telah mendidik dan mengajarkan ilmu pengetahuan selama saya
mengikuti program sarjana.
6. Laboran Laboratorium Teknologi sediaan farmasi Mba Susi, Mas Ferdi, dan
Mas Dani yang banyak membantu saya.
7. Orang tua saya terimakasih yang selalu membimbing, memberi dukungan,
masukan, dan do’a kepada saya.
8. Fitri Laitul Hidayah yang selalu memberi semangat, dukungan, dan do’a
kepada saya.
v
vi
RINGKASAN
PENGARUH KADAR PVP K30 TERHADAP
MUTU FISIK TABLET EKSTRAK BUAH PARE
Dengan Metode Granulasi Basah
Buah pare (Momordica charantia) merupakan salah satu tanaman yang sering
digunakan sebagai obat tradisional. Buah pare mengandung senyawa Charantin yang
berkhasiat sebagai antidiabetes. Berdasarkan khasiat tersebut, dilakukan penitian
untuk mengembangkan ekstrak buah pare menjadi sedian tablet antidiabetes yang
memenuhi persyaratan farmasetik. Pembuatan tablet merupakan upaya
mengembangkan tanaman obat agar lebih praktis dan efektif dalam penggunaannya.
Tablet yang dibuat menggunakan metode granulasi basah dengan penambahan PVP
K30 sebagai bahan pengikat untuk meningkatkan kompaktibilitas serta kekerasan
tablet. Sehingga itu, pada penelitian ini dilakukan pengamatan pengaruh kadar PVP
K30 terhadap mutu fisik tablet ekstrak buah pare (Momordica charantia). Pemberian
kadar bahan pengikat yang berbeda diharapkan dapat memberikan mutu fisik tablet
yang berbeda. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan kadar PVP K30
sebagai bahan pengikat yang dapat menghasilkan tablet dengan mutu fisik yang
memenuhi persyaratan meliputi kekerasan, kerapuhan, dan waktu hancur tablet.
Penelitian ini diawali dengan pembuatan ektrak buah pare menggunakan metode
maserasi dan dilanjutkan dengan uji identifikasi senyawa Charantin yang terkandung
dalam ekstrak. Hasil pemeriksaan menunjukan bahwa ekstrak buah pare benar
mengandung senyawa Charantin. Selanjutnya dilakukan uji identifikasi bahan
tambahan tablet dengan menggunakan spektrofotometri inframerah. Hasil
pemeriksaan menunjukan bahwa bahan yang diperiksa adalah benar merupakan
Laktosa, PVP K30 dan Primojel. Untuk Pati Jagung pemeriksaan dilakukan secara
mikroskopik. Hasil pemeriksaan menunjukan bahwa bahan yang diamati adalah benar
Pati Jagung.
Pada penelitian ini yang menjadi variabel adalah kadar PVP K30 1% (F2),
2%(F3), 3% (F4), dan F1 tanpa bahan pengikat sebagai kontrol. Pembuatan tablet
ekstrak buah pare menggunakan metode granulasi basah dengan pelarut alkohol.
Granul yang dihasilkan dilakukan pengujian kandungan lengas serta penentuan kadar
fines. Untuk uji kecepatan alir, sudut diam, dan uji kompaktibilitas dilakukan setelah
terbentuk massa granul cetak. Pencetakan tablet dilakukan dengan kekuatan
pengempaan 1 ton, dilanjutkan dengan pemeriksaan mutu fisik tablet meliputi
kekerasan, kerapuhan, dan waktu hancur tablet.
Dari uji yang dilakukan diketahui bahwa kandungan lembab F1, F2, F3, dan F4
memenuhi persyaratan 1-2%. Jumlah fines keempat formula telah memenuhi
persyaratan <20%. Untuk kecepatan alir massa granul cetak untuk F1, F2, dan F4
memiliki karakteristik mudah mengalir (4-10 gram/detik). Sementara itu, massa
granul cetak F3 memiliki karakteristik bebas mengalir (>10 gram/detik). Hasil uji
kompaktibilitas menunjukan bahwa antara tekanan 1 ton dan 2 ton menghasilkan
kekerasan yang semakin meningkat. Untuk mutu fisik tablet, kekerasan yang
dihasilkan F2 dan F3 memenuhi persyaratan yaitu 4-8 kg, sedangan F1 < 4 kg dan F4
> 8 kg. Pada uji kerapuhan dan waktu hancur tablet keempat formula memenuhi
persyaratan yaitu <1% untuk kerapuhan tablet dan < 15 menit untuk waktu hancur
tablet.
vii
Hasil analisis statistik menunjukan adanya perbedaan bermakna dari masing-
masing formula terhadap peningkatan kadar PVP K30. Dengan demikian dapat ditarik
kesimpulan bahwa semakin tinggi kadar pengikat yang ditambahkan akan
meningkatkan kekerasan, menurunkan kerapuhan dan meningkatkan waktu hancur
tablet ekstrak buah pare.
x
DAFTAR ISI
Lembar Pengesahan......................................................................................................... ii
Lembar Pengujian........................................................................................................... iii
KATA PENGANTAR.................................................................................................... iv
RINGKASAN.................................................................................................................. vi
ABSTRACT................................................................................................................... viii
ABSTRAK....................................................................................................................... ix
DAFTAR ISI.................................................................................................................... x
DAFTAR TABEL.......................................................................................................... xii
DAFTAR GAMBAR.................................................................................................... xiii
DAFTAR LAMPIRAN................................................................................................ xiv
DAFTAR SINGKATAN.............................................................................................. xv
BAB I PENDAHULUAN.............................................................................................. 1
1.1. Latar Belakang....................................................................................... 1
1.2. Rumusan Masalah.................................................................................. 2
1.3. Tujuan Penelitian................................................................................... 2
1.4. Hipotesis................................................................................................ 2
1.5. Manfaat Penelitian................................................................................. 2
BAB II TINJAUAN PUSTAKA.................................................................................. 3
2.1. Pare (Momordica charantia)................................................................. 3
2.2. Tinjauan Tentang Ekstrak..................................................................... 5
2.3. Tinjauan Tentang Tablet....................................................................... 6
2.3.1. Bahan Pembawa (Eksipien)......................................................... 6
2.3.2. Metode Pembuatan Tablet........................................................... 7
2.4. Tinjauan Tentang Bahan Penelitian...................................................... 8
2.4.1. Laktosa........................................................................................ 8
2.4.2. Pati Jagung.................................................................................. 9
2.4.3. PVP K30..................................................................................... 9
2.4.4. Primojel..................................................................................... 10
BAB III KERANGKA KONSEPTUAL.................................................................. 11
BAB IV METODE PENELITIAN........................................................................... 13
4.1. Bahan Penelitian................................................................................. 13
4.2. Alat Penelitian.................................................................................... 13
4.3. Rancangan Penelitian......................................................................... 13
xi
4.4. Metode Penelitian.................................................................................. 15
4.4.1. Pembuatan Dan Pemeriksaan Ekstrak Buah Pare........................ 17
4.4.2. Pemeriksaan Kualitatif Bahan Tambahan.................................... 18
4.4.3. Pemeriksaan Mutu Fisik Granul.................................................. 19
4.4.4. Pemeriksaan Mutu Fisik Tablet................................................... 20
4.5. Analisis Statistika.................................................................................. 22
BAB V HASIL PENELITIAN..................................................................................... 23
5.1 Pembuatan Dan Pemeriksaan Ekstrak Buah Pare................................. 23
5.1.1. Pemeriksaan Kalitatif Ekstrak Buah Pare.................................... 23
5.2 Pemeriksaan Kualitatif Bahan Tambahan............................................. 24
5.2.1. Pemeriksaan Kualitatif Laktosa................................................... 24
5.2.2. Pemeriksaan Kualitatif PVP K30................................................ 25
5.2.3. Pemeriksaan Kualitatif Primogel................................................ 26
5.2.4. Pemeriksaan Kualitatif Pati Jagung............................................ 27
5.3 Pemeriksaan Mutu Fisik Granul dan Massa Granul Cetak.................. 27
5.4 Pemeriksaan Mutu Fisik Tablet Ekstrak Buah Pare............................. 29
5.5 Analisis Statistik Mutu Fisik Tablet..................................................... 31
5.5.1 Uji Analisis Statistik Kekerasan Tablet...................................... 31
5.5.2 Uji Analisis Statistik Kerapuhan Tablet..................................... 32
5.5.3 Uji Analisis Statistik Waktu Hancur Tablet............................... 33
BAB VI PEMBAHASAN........................................................................................... 35
BAB VII KESIMPULAN DAN SARAN................................................................. 39
7.1. Kesimpulan.......................................................................................... 39
7.1. Saran.................................................................................................... 39
DAFTAR PUSTKA..................................................................................................... 40
Lampiran....................................................................................................................... 43
xii
DAFTAR TABEL
Tabel
II.1 Perbandingan Berat Badan Beberapa Hewan Coba Dan Manusia.................. 5
IV.1 Rancangan Formula Tablet Ekstrak Buah Pare............................................... 14
V.1 Uji Kualitatif Ekstrak Buah Pare....................................................................... 23
V.2 Hasil Pemeriksaan Organoleptis dan Spektrum Inframerah Laktosa........... 24
V.3 Hasil Pemeriksaan Organoleptis dan Spektrum Inframerah PVP K30........ 25
V.4 Hasil Pemeriksaan Organoleptis dan Spektrum Inframerah Primogel......... 26
V.5 Hasil Pemeriksaan Kualitatif Amilum Maydis................................................ 27
V.6 Hasil Uji Mutu Fisik Granul dan Massa Granul Cetak................................ 28
V.7 Hasil Uji Mutu Fisik Tabet................................................................................ 29
V.8 Hasil Analisis Kekerasan Tablet....................................................................... 31
V.9 Hasil Uji Tukey HSD Kekerasan Tablet.......................................................... 32
V.10 Hasil Analisis Kerapuhan Tablet...................................................................... 32
V.11 Hasil Uji Tukey HSD kerapuhan Tablet.......................................................... 33
V.12 Hasil Uji Analisis Waktu Hancur Tablet......................................................... 33
V.13 Hasil Uji Tukey HSD Waktu Hancur Tablet.................................................. 34
xiii
DAFTAR GAMBAR
Gambar
2.1 tanaman pare...................................................................................................... 4
2.2 struktur charantin.............................................................................................. 4
2.3 laktosa α monohidrat......................................................................................... 9
2.4 struktur pvp..................................................................................................... 10
2.5 struktur primojel.............................................................................................. 10
3.1 skema kerangka konseptual............................................................................. 12
4.1 skema metode penetilian................................................................................. 16
5.3 histogram pengaruh tekanan terhadap uji kompaktibilitas.............................. 28
5.6 histogram kekerasan tablet.............................................................................. 30
5.7 histogram kerapuhan tablet............................................................................. 30
5.8 histogram waktu hancur tablet........................................................................ 31
xiv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran
1 Daftar Riwayat Hidup....................................................................................... 43
2 Surat Pernyataan............................................................................................... 44
3 Perhitungan Rendemen Pembuatan Ekstrak Buah Pare................................... 45
4 Perhitungan Penimbangan Bahan..................................................................... 46
5 Sertifikat Analisis Buah Pare............................................................................ 50
6 Sertifikat Analisis Laktosa................................................................................ 51
7 Sertifikat Analisis PVP K30............................................................................. 52
8 Preparasi Ekstrak Buah Pare............................................................................. 53
9 Hasil Uji Kualitatif Ekstrak Buah Pare............................................................. 54
10 Hasil FT-IR Laktosa.......................................................................................... 56
11 Hasil FT-IR PVP K30....................................................................................... 58
12 Hasil FT-IR Primojel........................................................................................ 60
13 Hasil Uji Kualitatiff Amilum Maydis............................................................... 63
14 Hasil Uji Mutu Fisik Granul............................................................................. 64
15 Hasil Uji Mutu Fisik Tablet.............................................................................. 70
16 Hasil Analisis Kekerasan Tablet....................................................................... 75
17 Hasil Analisis Kerapuhan Tablet...................................................................... 77
18 Hasil Analisis Waktu Hancur Tablet................................................................ 79
19 Foto Granul Ekstrak Buah Pare........................................................................ 81
20 Foto Tablet Ekstrak Buah Pare......................................................................... 82
21 Tabel Gugus Funsi FT-IR................................................................................. 83
22 Tabel F Probabiliti 0,05.................................................................................... 85
23 Parameter Umum Standar Mutu Simplisia....................................................... 86
24 Parameter Umum Standar Mutu Ekstrak.......................................................... 87
25 Parameter Standar Simplisia Buah Pare........................................................... 88
26 Parameter Standar Ekstrak Buah Pare.............................................................. 89
xv
DAFTAR SINGKATAN
mg : mili gram
Kg : kilo gram
BB : berat badan
DM : diabetes melitus
g : gram
dt : detik
ml : mili liter
v/v : volum/volum
µl : mikro liter
µm : mikro meter
KLT : kromatografi lapis tipis
cm : centi meter
M. charantia : Momordica charantia
40
DAFTAR PUSTKA
Agoes G., 2008. Pengembangan Sediaan Farmasi. Ed Revisi dan Perluasan.
Penerbit ITB. Bandung. Hal 192-237.
Ahamad J., Amin S., Mir R. S., 2014. Development and validation of HPTLC
densitometric method for estimation of charantin in Momordica charantia fruits
and herbal formulation. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry. 2(5).
172-176.
Anasuya K. V., Veeraiah M. K., Hemalatha P., 2015. Synthesis and Characterisation
of Poly (Vinylpyrrolidone)-Copper (II) Complexes. Research Journal of
Chemical Sciences. Vol. 5(2). Pp 64-69.
Anwar E., 2012. Eksepian Dalam Sediaan Farmasi Karakteristik Dan Aplikasi.
PT Dian Rakyat. Jakrta.
Aulton M. E, Summer M., 2002. Tablet and Compaction in : Pharmacutic The
Science of Dosage Forms Design. 2nd Edition. Churchill Livingstone.
Philadelphia.
Ansel C. H., 2008. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. Edisi 4. UI Press. Jakarta.
Hal 252
Agoes G., 2007. Teknologi Bahan Alam. Cetakan I. Penerbit ITB. Bandung.
BPOM RI, 2010. Acuan Sediaan herbal. Vol 5. Ed 1. Direktorat OAI, Deputi II,
Badan POM RI. Jakarta.
Chaud M. V., Lima A. C., Vila M. M. D. C., Paganelli M. O., Paula F. C., Pedreiro L.
N., Gremiao M. P. D., 2013. Development and Evaluation of Praziquantel Solid
Dispersions in Sodium Starch Glycolate. Tropical Journal of Pharmaceutical
Research. Vol 12 (2). Pp 163-168.
Dewoto H. R., 2007. Pengembangan Obat Tradisional Indonesia Menjadi
Fitofarmaka. Maj Kedokt Indon, Volum: 57, Nomor: 7, hal 205-211.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 1995. Farmakope Indonesia. Ed IV.
Departemen Kesehatan RI. Jakarta.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2014. Farmakope Indonesia. Ed V.
Departemen Kesehatan RI. Jakarta.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2008. Farmakope Herbal Indonesia.
Ed I. Departemen Kesehatan RI. Jakarta.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2010. Suplemen 1 Farmakope Herbal
Indonesia. Departemen Kesehatan RI. Jakarta.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia. 2000. Parameter Standar Umum
Ekstrak Tumbuhan Obat. Departemen Kesehatan RI. Jakarta.
Desai S., Tatke P., 2015. Charantin: An important lead compound from Momordica
charantia for the treatment of diabetes. Journal of Pharmacognosy and
Phytochemistry, vol 3 No. 6, p. 163-166.
41
Dua K., Pabreja K., Ramana M. V., 2010. Preparation, Characterization and In Vitro
Evaluation of Aceclofenac Solid Dispersions. ARS Pharmaceutica. Vol 51. Pp
57-76.
Gibson M., 2004. Pharmaceutical Preformulation And Formulation A Practical Guide
from Candidate Drug Selection to Commercial Dosage Form. Interpharm.
United State of America. Pp 402-406
Giri N., Natarajan R. K., Gunasekaran S., Shreemathi S., 2011. C NMR and FTIR
Spectroscopic Study of Blend Behavior of PVP and Nano Silver Particles.
Archieves of Applied Science Research. Vol 3 (5). Pp 624-630.
Gusmayadi I., Azwar N., 2014. Pengaruh Kombinasi Aspartam-Sorbitol Sabagai
Bahan Pemanis Terhadap Sifat Fisik Tablet Hisap Ekstrak Daun Sirih (Piper betle
L.) Secara Granulasi Basah.
Joseph B, Jini D, 2013. Antidiabetic effects of Momordica charantia (bitter melon)
and its medicinal potency. Asian Pac J Trop Dis, 3(2): 93-102.
Jones D., 2008. Pharmaceutics Dosage Form and Design. Pharmaceutical Press.
London. Pp 203-253
Japanese Pharmacopoeia, 2011. Japanese Pharmacopoeia Sixth Edition. Japanese.
Kumar K.P.S, Bhowmik D., 2010. Traditional Medicinal Uses And Therapeutic
Benefits Of Momordica charantia Linn. International Journal of
Pharmaceutical Sciences Review and Research. Volume 4. Pp. 23-28.
Martin A., 1993. Farmasi Fisik : Dasar-Dasar Kimia Fisik Dalam Ilmu Farmasetik.
Edisi ketiga. Penerbit Universitas Indonesia. Jakarta.
Mardiana L, 2015. Pengaruh Kadar Pengikat Gelatin Terhadap Mutu Fisik Tablet Ekstrak
Buah Pare (Momordica charantia L.) Secara Granulasi Basah. Skripsi Sarjana
Farmasi. Fakultas Ilmu Kesehatan. Universitas Muhammadiyah Malang.
Monton C., Saingam W., Suksaeree J., Sakunpak A., 2014. Formulation Development
and Properties Study of Thai Tradinosional Herbal Tablet: Original Jit-Tra-Rom
Recipe. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences.
Vol 6(4).
Mohammady I., et al, 2012. An Evaluation of Anti-Diabetic and Anti-Lipidemic
Properties of Momordica charantia (Bitter Melon) Fruit Extract in
Experimentally Induced Diabetes. Life Science Journal, 9 (2), pp. 363-374.
Masitoh S, 2011. Penapisan Fitokimia Ekstrak Etanol Beberapa Tanaman Obat
Indonesia Serta Uji Aktivitas Anti Diabetes Melitus Melalui Penghambatan
Enzim Α-Glukosidase. Skripsi Sarjana Farmasi. Fakultas Matematika Dan Ilmu
Pengetahuan Alam Universitas Indonesia.
Nkambo W., Anyama NG., Onegi B., 2013. In vivo hypoglycemic effect of methanolic
fruit extract of Momordica charantia L. African Health Sciences Vol 13, PP 933-
93.
42
Namdeo K.P., Bodakhe S.H., Dwedi J., Saifi A., 2013. A Review On Antidiabetic
Potential Of M. Charantia Linn. International Journal Of Pharmaceutical
Research And Bio-Science. Volume 2(6). Pp.475-485.
Paul A., Raychaudhuri S.S., 2010. Medicinal Uses and Molecular Identification of
Two Momordica charantia Varieties – a review. Electronic Journal of Biology.
Vol 6(2). Pp 43-51
Petil P. B., Thakare V. M., Takade B. W., Chaudhari K. P., 2014. Development and
Evaluation of Fast Dissolving Metoprolol Succinate Tablet. Asian J. Pharm.
Res. Vol 4. Pp 39-46
Raut M. D., Allada R., Pavan K. V., Deshpande G., Patil D., Patil A., Deshmukh A.,
Sakharkar D. M., Bodke P. S., Mahajan D. T., 2011. Dehydration of Lactose
Monohydrate: Analytical and Physical Characterization. Scholars Research
Library. Vol 3 (5), pp. 202-212.
Rowe R.C., Sheskey P.J., Quinn M.E., 2009. Handbook Of Pharmaceutical
Excipients. 6th Edition. Pharmaceutical Press. Chicago.
Singh J, Cumming E, Manoharan G, Kalasz H, Adeghate E, 2011. Medicinal
Chemistry of the Anti-Diabetic Effects of Momordica Charantia: Active
Constituents and Modes of Actions. The Open Medicinal Chemistry Journal,
Vol. 5, pp. 70-77.
Siregar C. J. P., Wikarsa S., 2010. Teknologi Farmasi Sediaan Tablet Dasar-Dasar
Praktis. EGC. Jakarta. 38
Sirisha K., Shivani J., 2014. Antihyperglycemic and Antihyperlipidemic Activities of
New Polyherbal Formulation. International Journal of Advances in Pharmacy,
Biology And Chemistry. Vol.3(1). 189-198
Sugiharti R.J., Kartini N., 2007. UJI TOKSISITAS RADIOFARMAKA 99mtc-
ETAMBUTOL PADA MENCIT (Mus musculus). Prosiding Seminar Nasional
Sains dan Teknologi Nuklir. Hal 334-339.
Swarbrick J., 2007. Encyclopedia of pharmaceutical technology 3rd edition.
Informa healthcare. New york. 3281
U.S Pharmacopei, 2006. United States Pharmacopea (USP). 30th edition. United
States
Wells B.G., Dipiro J.T., Schwinghammer T.L., Dipiro C.V., 2009. Pharmacoherapy
Handbook. 7th Ed. McGraw-Hil. New York. 210
Wicaksono Y., Syifa’ N., 2008. Pengembangan pati singkong-avicel PH 101 menjadi
bahan pengisi co-process tablet cetak langsung. Majalah Farmasi Indonesia.
19(4). 165– 171.
Yuda I K A, Anthara M S, Dharmayudha A A G O, 2013. Identifikasi Golongan
Senyawa Kimia Estrak Etanol Buah Pare (Momordica charantia) dan
Pengaruhnya Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah Tikus Putih Jantan
(Rattus novergicus) yang Diinduksi Aloksan. Buletin Veteriner Udayana. Vol.
5 No. 2, pp. 87-95.