lia lisina – hierro - agar

Lisina – Hierro - Agar

PRINCIPIO:Capacidad enzimática

DescarboxilaciónAlcalinidad

objetivo

• Descarboxilasas numerosas

• Adaptativas inducidas• Se produce

anaeróbicamente• Coenzima común:

fosfato de piridoxal BASES BIOQUÍMICAS

Medios empleados

Caldo de Lisina-descarboxilasa de Falkow, pH: 6.8

Ingredientes Indicador del pH: púrpura de bromocresola) Ácido: color amarillo, pH 5.2b) Alcalino: color púrpura, pH (6.8)c) Medio no inoculado: color púrpura intenso brillante

comercio a)Difco: Caldo de lisina-descarboxilasab)BBL: Caldo de lisina de Falkow

Método de preparación

a) Pesar exacmente la cantidad siguiendo las instruccionesb) Rehidratar con agua destilada o desmineralizadac) Calentar suavemente hasta su disolución d) Distribuir en tubos aproximadamente 4 a 5 mL por cada tubo con tapa a

rosca

Método de esterilización

Autoclaveb)121°C, 15 lb, 15 min

Inoculación Crecimiento de un cultivo puro de 18 a 24 h (AHK)b) Inóculo liviano c) Preparar un tubo de control que no contenga aminoácido para cada organismo en que se investiga su capacidad de degradación de la lisina

Incubación a) A 35°Cb) No menos de 24 h. Puede ser necesaria una incubación prolongada, hasta

de 4 días

Desviacion del pH10 – 12 h de incubación= amarilloAcidez => lisina descarboxilasa = púrpura

RESULTADOS E INTERPRETACIÓN

Tira impregnada con reactivo para la prueba de lisina-descarboxilasa (PathoTec)Fabricante Warner-Lambert companyPrincipio: prueba de la lisina de FalkowResultados: a las 3 a 6 h de la incubaciónMétodo: seguir las indicaciones de las indicaciones del fabricanteFalsos positivos: especies de pseudomonas; Proteus mirabilis; especies de ShigellaFalsos negativos: Salmonella, Arizona, Edwardsiella, Aeromonas; Klebsiella-Enterobacter; Serratia, Escherichia

Lectura e interpretación

Prueba presuntiva

• Resultados: a las 6 a 24 h de incubación• Método:1.- cápsula de control únicamente -Buffer-Indicador2.- Cápsula de prueba-4 gotas de solución de aminoácido -Una sola gota (pipeta capilar) de suspensión celular-Crecimiento de un agar en pico de flauta de 6 h-Hisopo estéril del crecimiento en 0.5 mL de buffer ftalato ácido de potasio 0.004 M (pH ajustado a 5.7)-Cubrir la placa con una gasa-Incubación a 35°Cdurante 24 h; leer a las 6 h y a las 24 h3.-Interpretación• Positiva: Color rojo rosado• Negativa: no hay cambio de color, se mantiene

amarillo

PRUEBA DE LA PLACA EN MANCHA

• Agitar suavemente antes de la interpretación• Comparación con el control• Tener cuidado de no destruir el indicador

• Invalidación de pruebas

• No se recomienda el uso del método de Falkow para la identificación de los grupos Klebsiella

PRECAUCIONES