Kloning Gen Penisilin V Asilase dari Bacillus sp BAC4 di Industri Farmasi

Nama kelompok:Ruth Pistia Eusebeia (31130025)Gan Edytia Noer Cahyani (31130026)Elsa Narwastu Pesoa (31130027)Jesika Laurenza (31130028)

Antibiotik

Golongan beta-laktam

Penisilin (Alexander Fleming ,1929)

PVA ( Penisilin V Asilase )

Enzim ini merupakan kunci dalam pembuatan antibiotik beta-laktam semisintetik karena dapat menghidrolisis penisilin V untuk menghasilkan senyawa antara yaitu asam 6 amino penisilanat (6-APA)

Penisilin semisintetik, diantaranya metilsilin, kloksasilin, ampisilin dan karbenisilin

Peningkatan produksi enzim PVA dengan pendekatan genetika

Spesies Bacillus sp. BAC4:Tidak menghasilkan toksinMudah ditumbuhkanTidak memerlukan substrat yang mahalBertahan pada temperatur tinggiTidak ada hasil samping metabolismeKemampuan untuk menghasilkan

sejumlah besar protein ekstra seluler

Gen PVA dari Bacillus sp.BAC4 akan diklon ke dalam vektor plasmid menggunakan pustaka genom.

Pustaka genom dibuat dengan memurnikan DNA kromosom Bacillus sp.BAC4

Fragmen DNA diinsersikan ke vektor yang sesuai sehingga menghasilkan vektor rekombinan.

Vektor rekombinan ditransfeksi ke dalam sel inang yaitu E. coli

Ekspresi skrining dilakukan untuk melihat aktivitas PVA klon rekombinan.

DNA plasmid pHB201 diisolasi dari E. coli dengan menanamnya ke medium LB cair yang mengandung antibiotik kloramfenikol karena plasmid pHB201 memiliki gen resisten kloramfenikol, sehingga diharapkan koloni yang tumbuh dalam medium adalah koloni bakteri yang mengandung plasmid pHB201.

pemotongan DNA kromosom hasil isolasi dengan enzim restriksi HindIII menghasilkan fragmen yang berukuran lebih besar dari 23 kb

Koloni warna putih: Adanya vektor dengan DNA sisipanKoloni warna biru : tidak terdapat DNA sisipan pada vektor pHB201.Adanya koloni biru dan putih disebabkan DNA sisipan dimasukkan pada daerah pengkode gen lacZ. Gen lacZ tersebut merupakan daerah pengkode enzim beta-galaktosidase. Enzim ini dapat menguraikan senyawa mirip laktosa yaitu X-gal dan adanya IPTG sebagai penginduksi dihasilkan senyawa galaktosa dan 5-bromo-4 kloroindigo yang berwarna biru.

Daftar pustaka

Elvi Susanti VH,Ariani SR Dwi.2004. Kloning Gen Penisilin V Asilase dari Bacillus sp. BAC4 Melalui Pembuatan Pustaka Genom. Biodiversitas.Vol5(1):1-6p.

http://biodiversitas.mipa.uns.ac.id/D/D0501/D050101.pdf. diakses tanggal 23 November 2014 pukul 16.43WIB

Thanks you…….