HAMBATAN PERTUMBUHAN PROBIOTIK STRAIN

Lactobacillus acidophilus OLEH ANTIBIOTIK

METRONIDAZOL BERDASARKAN PERBEDAAN

WAKTU PEMBERIAN SECARA IN VITRO

Skripsi

I WAYAN SUDIASMARA

1108505040

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2015

Lembar Pengesahan

HAMBATAN PERTUMBUHAN PROBIOTIK STRAIN

Lactobacillus acidophilus OLEH ANTIBIOTIK

METRONIDAZOL BERDASARKAN PERBEDAAN

WAKTU PEMBERIAN SECARA IN VITRO

Skripsi

Skripsi ini diajukan sebagai syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi (S.Farm) di

Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana

Oleh

I WAYAN SUDIASMARA

NIM. 1108505040

Menyetujui:

Pembimbing I Pembimbing II

Dewa Ayu Swastini, S.F., M.Farm., Apt. Putu S.Yustiantara, S.Farm., M.Si.,Apt.

NIP. 197905162006042002 NIP.

Mengesahkan:

Ketua Jurusan Farmasi

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt.

NIP. 196804201994021001

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena atas

berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Hambatan

Pertumbuhan Probiotik Strain Lactobacillus acidophilus oleh Antibiotik

Metronidazol Berdasarkan Perbedaan Waktu Pemberian Secara In Vitro”

tepat pada waktunya.

Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran, dan bimbingan

dari berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin

mengucapkan terima kasih kepada:

1. Ir. A. A. Gde Raka Dalem, M.Sc (Hons), selaku Dekan Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

2. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua

Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Udayana.

3. Dewa Ayu Swastini, S.F., M.Farm., Apt., selaku dosen pembimbing I

yang telah membantu dalam membimbing serta tak hentinya memberikan

semangat dan dukungan hingga akhir penyusunan proposal ini.

4. Putu Sanna Yustiantara, S.Farm., M.Si., Apt., selaku dosen pembimbing II

yang juga telah banyak membimbing demi kelancaran penyusunan

proposal ini.

5. Ibu Cokorda Istri Sri Arisanti, S.Farm., M.si., Apt., selaku penguji tugas

akhir. Terima kasih atas saran dan arahannya.

6. Ni Luh Putu Vidya Paramita, S.Farm., M.sc., Apt., selaku penguji tugas

akhir. Terima kasih atas saran dan arahannya.

7. Ni Putu Linda Laksmiani, S.Farm., M.sc., Apt., selaku penguji tugas akhir.

Terima kasih atas saran dan arahannya.

8. Seluruh dosen pengajar beserta staf/pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana yang telah

banyak membantu penulis.

9. Ibu Ni Wayan Nursini, S.Tp., M.P., selaku staf UPT Laboratorium

Terpadu Biosains dan Bioteknologi Universitas Udayana yang telah

membimbing, memberikan saran serta motivasi kepada penulis.

10. Orang tua yang sangat saya cintai dan hormati, Alm. I Nengah Suelen Bsc.

dan Ni Ketut Deliani yang telah mengasuh dan membesarkan penulis, adik

Ni Made Widiadnyani, yang selalu memberi motivasi dan dukungan.

11. Tim seperjuangan penulis, Krisna, Agung, dan Tiara yang banyak

membantu dan memberikan semangat dalam penyusunan skripsi ini.

12. Seluruh mahasiswa jurusan Farmasi, kak Arya, kak Lia, kak Wida, kak

Ages, kak Wahyu, kak Yuda, dan kak Ade. Anggota Ton 7 yaitu Yunita

(Unik), Fatwa, Indra, Maitri, Dayu Dewi, Risma, dan GeJe yang selalu

memberi semangat dan mengingatkan saya dalam berbagai hal. Kepada

teman-teman yaitu Krisna, Prima, Dewa, Dwi, Sastra, Jeffry, Buntil, Indra,

Agung, Andre, Sami, Ari, Roni, Redika, West, Butet, dan Yogi yang

selalu menemani disaat suka maupun duka. Teman d lab biosain, kak

Gung de, Wulan, Adiel, Banu, Gus Ari, dan Gus Nadi.

13. Teman terdekat Ni Made Ria Andini yang dari awal telah memberikan

bantuan, motivasi, perhatian, semangat, pengertian, kesabaran, dan doa

dalam segala kondisi selama penyusunan skripsi ini, penulis mengucapkan

banyak terima kasih.

14. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam penyusunan

skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.

Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.

Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat

membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis

berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang

memerlukan.

Bukit Jimbaran, 3 Agustus 2015

Penulis

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ……………………………………………………….... i

LEMBAR PENGESAHAN..…………………………………………………. ii

KATA PENGANTAR….…………………………………………………….. iii

DAFTAR ISI…………………………………………………………………. v

DAFTAR TABEL……………………………………………………………. vii

DAFTAR GAMBAR………………………………………………. ………... viii

DAFTAR LAMPIRAN………………………………………………………. ix

DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH………………………………… .... x

BAB I PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang………………………………………………... 1

1.2. Rumusan Masalah…………………………………………….. 3

1.3. Tujuan Penelitian……………………………………………... 4

1.4. Manfaat Penelitian……………………………………………. 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Definisi dan Prevalensi Diare.………………………………... 5

2.2. Diare Akut……………………………………………………. 5

2.2.1.Patofisiologi diare akut karena infeksi…………………. 6

2.2.2.Terapi diare akut karena infeksi………………………... 7

2.3. Antibiotik.……………………………………………………. 8

2.4. Metronidazol…………………………………………………. 9

2.5. Probiotik ……………………………………………………... 11

2.6. Lactobacillus acidophilus.…………………………………… 12

2.7. Metode Difusi Cakram………………………………………. 14

BAB III METODE PENELITIAN

3.1. Rancangan Penelitian………………………………………… 16

3.2. Tempat dan Waktu Penelitian………………………………... 16

3.3. Alat dan Bahan……………………………………………….. 16

3.3.1. Alat…………………………………………………….. 16

3.3.2. Bahan…………………………………………………... 17

3.4. Objek Penelitian……………………………………………… 17

3.5. Variabel Penelitian…………………………………………… 17

3.5.1. Variabel bebas…………………………………………. 17

3.5.2. Variabel terikat………………………………………… 17

3.5.3. Variabel terkendali…………………………………….. 18

3.6. Prosedur Penelitian…………………………………………... 18

3.6.1. Penyegaran isolat bakteri Lactobacillus acidophilus

pada media MRS broth………………………………… 18

3.6.2. Uji konfirmasi isolat bakteri asam laktat………………. 18

3.6.3. Uji hambatan pertumbuhan probiotik oleh

antibiotik..……………………………………………… 19

3.6.4. Pengamatan dan pengukuran zona bening.......………… 22

3.7. Analisis Data…………………………………………………. 22

3.8. Skema Penelitian...…………………………………………… 23

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Penyegaran Isolat Bakteri Lactobacillus Acidophilus pada

Media MRS Broth……………………………………………. 24

4.2. Hasil Uji Konfirmasi Isolat Bakteri Asam Laktat……………. 26

4.3. Hasil Uji Hambatan Pertumbuhan Probiotik

oleh Antibiotik.………………………………………………. 28

4.4. Pengamatan dan Pengukuran Zona Bening …………………. 30

4.5. Analisis Data……………………………….………………… 31

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan…………………………………………………... 35

5.2. Saran……………………………………………...………….. 35

DAFTAR PUSTAKA...……………………………………………………... 36

LAMPIRAN..........................………………………………………………... 40

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 2.1. Antibiotik Empiris untuk Diare Infeksi Bakteri.………………… 8

Tabel 2.2. Presentase Kejadian Diare Akibat Pengobatan Antibiotik.……… 9

Tabel 3.1. Perlakuan Masing-masing Kelompok…………………………… 19

Tabel 3.2. Kategori Kekuatan Aktivitas Antibakteri Metronidazol………… 21

Tabel 4.1. Pengukuran Zona Bening Masing-masing Kelompok…………... 31

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1. Ragam Jenis Bentuk Batang Lactobacillus…………………….. 13

Gambar 3.1. Skema Penelitian……………………….………………………. 23

Gambar 4.1. Pertumbuhan Lactobacillus acidophilus pada media

MRS broth.……………………….……………………………. 25

Gambar 4.2. Streak for single colony pada media MRS Agar………………. 25

Gambar 4.3. Bentuk Lactobacillus acidophilus yang tampak berbentuk

batang dan berwarna ungu dibawah mikroskop dengan

perbesaran 1000 kali…………………………………………… 27

Gambar 4.4. Pembagian Kelompok Perlakuan dalam Pengujian …………… 29

Gambar 4.5. Hasil Pengamatan Zona Bening dalam Sekali Pengulangan...… 30

Gambar 4.6. Diagram Perbandingan Nilai Zona Hambat pada

Masing-masing Kelompok Perlakuan…………………………. 32

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Sterilisasi Alat……………………………….…………………. 40

Lampiran 2. Pembuatan Larutan Gliserol 30% Steril………………………... 41

Lampiran 3. Pembuatan Media……………………………………………..... 42

Lampiran 4. Pembuatan Larutan Antibiotik………………………………..... 43

Lampiran 5. Analisis Perbedaan………….………………………………..... 45

Lampiran 6. Uji Asumsi dan Persyaratan…………………………………..... 46

Lampiran 7. Gambar-gambar Zona Bening..……………………………….... 47

DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH

BAL : Bakteri Asam Laktat

Genus : Salah satu bentuk pengelompokan dalam klasifikasi

makhluk hidup yang lebih rendah dari familia.

Homeostasis : Suatu keadaan tubuh untuk mempertahankan

keseimbangan dalam menghadapi kondisi yang

dialaminya.

Homofermentatif : Fermentasi bakteri asam laktat yang hanya

menghasilkan asam laktat sebagai produknya.

Inokulasi : Kegiatan pemindahan mikroorganisme dari tempat

atau sumber asalnya ke media yang baru dengan

tingkat ketelitian yang sangat tinggi dan aseptis.

Immunocompromised : Kondisi abnormal di mana kemampuan sistem imun

seseorang untuk melawan infeksi menurun.

Isolat : Kelompok individu yang dipisahkan oleh batasan

geografis, genetik, ekologis, sosial atau buatan yang

mencegah perkawinan dengan individu lain di luar

batasan tadi.

Mikroflora : Istilah yang menggambarkan berbagai macam

mikroorganisme seperti bakteri dan fungi yang

merupakan penghuni tetap dari bagian-bagian tubuh

tertentu khususnya kulit dan usus besar.

Patogen : Agen atau mikroorganisme penyebab penyakit.

Reprodusibel : Percobaan yang mendapatkan hasil yang sama

walaupun dilakukan pada tempat (laboratorium),

operator, dan peralatan yang berbeda.

Resisten : Mikroorganisme yang mampu menahan efek obat

yang mematikan terhadap sebagian besar anggota

spesiesnya.

Resistensi : Kemampuan alami suatu organisme untuk menjadi

tidak terpengaruh oleh agen berbahaya yang ada

pada lingkungannya.

Strain/Galur : Kelompok organisme dalam suatu spesies yang

ditandai dengan beberapa sifat yang khas.

Streak for single colony : Metode untuk memisahkan mikroorganisme menjadi

koloni tunggal dengan cara menggoreskan isolat

pada media agar.

Toksin : Zat yang dihasilkan oleh organisme hidup (tanaman,

hewan dan bakteri tertentu) yang beracun bagi

manusia.

ABSTRAK

Angka kesakitan diare di Indonesia dari tahun ke tahun cenderung meningkat. Jumlah kematian tertinggi terjadi pada anak. Diare yang paling sering menyerang anak adalah diare akut karena infeksi, dan antibiotik diberikan untuk mengeliminasi penyebab infeksi. Antibiotik yang diberikan biasanya tidak bekerja spesifik pada bakteri penyebab diare, sehingga dapat menyebabkan kematian mikroflora usus normal dan dapat memperpanjang episode diare akut. Pemberian probiotik bertujuan untuk menjaga keseimbangan mikroflora usus normal. Probiotik dan antibiotik memiliki aksi yang berbeda, namun pada praktek klinis probiotik dan antibiotik sering dikombinasikan. Tujuan penelitian ini adalah untuk membuktikan ada atau tidaknya perbedaan hambatan pertumbuhan probiotik oleh antibiotik berdasarkan perbedaan waktu pemberian secara in vitro melalui metode difusi cakram. Dalam pengujian digunakan 4 kelompok, yaitu: kelompok 1 (Pemberian probiotik, 2 jam kemudian diberikan antibiotik), kelompok 2 (Pemberian probiotik dan antibiotik secara bersama), kelompok 3 (Pemberian antibiotik, 2 jam kemudian diberikan probiotik), dan kelompok 4 (kontrol negatif).

Hasil penelitian menunjukkan bahwa adanya perbedaan hambatan pertumbuhan probiotik strain Lactobacillus acidophilus oleh antibiotik metronidazol berdasarkan perbedaan waktu pemberian kombinasi antibiotik dan probiotik secara in vitro. Perbedaan waktu pemberian menghasilkan diameter zona hambat yang berbeda bermakna dengan nilai signifikan (P<0,05) dan ketiga kelompok uji memiliki zona hambat yang lebih besar dibandingkan kontrol negatif. Kelompok yang memiliki zona hambat yang paling tinggi adalah kelompok 2, dan kelompok yang memiliki zona hambat yang paling kecil adalah kelompok 3.

Kata Kunci: Diare, Antibiotik, Probiotik, Zona Hambat, In Vitro

ABSTRACT

Morbidity of diarrhea in Indonesia from year to year tends to increase. The highest number of deaths occurred in children. Diarrhea is most often affects children is acute diarrhea due to infection, and antibiotics are given to eliminate the cause of the infection. Antibiotics are usually not given specific work on bacteria that cause diarrhea, which can lead to death of the normal intestinal microflora and can prolong episodes of acute diarrhea. Giving probiotics aim to maintain the balance of normal intestinal microflora. Probiotics and antibiotics have different actions, but in clinical practice often combined probiotics and antibiotics. The purpose of this study was to prove whether or not the difference in growth inhibition of probiotics by antibiotics based on timing differences in vitro by disc diffusion method. In the test used 4 groups: group 1 (Giving probiotics, 2 hours and then given an antibiotic), group 2 (Giving probiotics and antibiotics together), group 3 (antibiotics, 2 hours and then given probiotics), and group 4 (control negative).

The results showed that the difference in growth inhibition of probiotic strains Lactobacillus acidophilus by antibiotic metronidazole is based on differences in the timing of a combination of antibiotics and probiotics in vitro. Timing differences produce different diameters significant inhibition zone with significant values (P <0.05) and the third test group had a greater inhibitory zone compared to the negative control. The group that had the highest inhibition zone is a group 2, and group having the smallest inhibitory zone is the 3 groups. Keywords: Diarrhea, Antibiotics, Probiotics, Inhibition Zone, In Vitro