efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol bunga...

i

EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BUNGA

TELANG (Clitoria ternatea L.) TERHADAP JUMLAH SEL NEUTROFIL

DAN EKSPRESI COX-2 PADA KULIT MENCIT TERINDUKSI

KARAGENIN

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Diajukan oleh:

Ni Made Kuswindayanti

NIM: 168114126

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2020

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

ii

Persetujuan Pembimbing


iii

Pengesahan Skripsi Berjudul


iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA


v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH

UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS


vi

HALAMAN PERSEMBAHAN


vii

PRAKATA

Puji dan syukur saya haturkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas

karunia-Nya yang begitu besar sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang

berjudul “Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria

Ternatea L.) Terhadap Jumlah Sel Neutrofil dan Ekspresi COX-2 Pada Kulit

Mencit Terinduksi Karagenin” dengan baik. Skripsi ini disusun untuk

memperoleh gelar Sarjana Strata Satu pada program studi Farmasi Universitas

Sanata Dharma Yogyakarta. Terselesainya skripsi ini tidak lepas dari dukungan

berbagai pihak sehingga penulis bermaksud menyampaikan rasa terimakasih,

kepada :

1. Bapak I Ketut Agus Pancana, S.E., Ibu Ni Wayan Wirawati, S.E., I Wayan

Kuswirocana, S.Kom., dan I Nyoman Birawascita yang selalu memberikan

dukungan, doa, dan motivasi kepada penulis.

2. Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP., Ph.D. selaku dosen pembimbing yang

telah membimbing dan memberikan banyak pengalaman kepada penulis

sehingga dapat menyelesaikan skripsi ini dengan baik.

3. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, Apt. dan Bapak Christianus Heru Setiawan,

M.Sc., Apt. selaku dosen penguji yang telah memberikan saran dan

masukan untuk menjadikan skripsi ini lebih baik.

4. Ibu Dr. Christine Patramurti, Apt. selaku dosen pembimbing akademik

yang telah memberikan arahan selama perkuliahan penulis.

5. Sahabat seperjuangan Kadek Evi indrayani, Thessalonika, dan Ni Putu

Intan Ratnadi yang selalu memberikan dukungan dan telah membantu

penulis dalam mengerjakan skripsi ini.

6. Sahabat Radikal Bebas Squad selaku teman perkuliahan yang selalu

memberikan masukan, dukungan, dan mendengarkan keluh kesah penulis

dalam mengerjakan skripsi ini. Penulis sangat bersyukur memiliki teman

seperti kalian.

7. Bapak Heru, Bapak Wagiran, dan Bapak Lilik selaku laboran yang telah

membantu penulis dalam menjalankan penelitian.


viii

8. Seluruh Dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah

memberikan ilmunya selama perkuliahan.

9. Seluruh teman-teman FSMC 2016 yang tidak bisa penulis sebutkan satu

persatu.

10. Seluruh teman-teman angkatan 2016 yang tidak bisa penulis sebutkan satu

persatu.

Penulis sadar bahwa masih banyak kekurangan dalam penyusunan skripsi

ini sehingga penulis berharap menerima kritik dan saran yang membangun. Akhir

kata, semoga skripsi ini bermanfaat untuk ilmu pengetahuan khususnya di bidang

farmasi.


ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI ................................................................ iii PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................. v PERNYATAAN PUBLIKASI ................................................................................ v HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ vi PRAKATA ............................................................................................................ vii

DAFTAR ISI .......................................................................................................... ix DAFTAR TABEL .................................................................................................. xi DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ xii

DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xiii ABSTRAK ........................................................................................................... xiv ABSTRACT .......................................................................................................... xv

PENDAHULUAN .................................................................................................. 1 METODE PENELITIAN ........................................................................................ 2

Desain dan Subjek Penelitian .............................................................................. 2

Alat dan Bahan .................................................................................................... 3 Determinasi Tanaman ......................................................................................... 3

Ekstraksi .............................................................................................................. 4

Uji Flavonoid ...................................................................................................... 4

Uji Antosianin ..................................................................................................... 5 Uji Kadar Air....................................................................................................... 5

Pembuatan Larutan Karagenin dan Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang

(Clitoria ternatea L.) ........................................................................................... 5 Uji Organoleptis dan Homogenitas Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria

ternatea L.) .......................................................................................................... 5

Uji Pendahuluan Karagenin ................................................................................ 6 Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) ..... 6 Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria

ternatea L.) terhadap Jumlah Sel Neutrofil dan Ekspresi COX-2 ...................... 7

Analisis Statistik ................................................................................................. 7 HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................................... 8

Uji Kadar Air....................................................................................................... 8

Ekstraksi .............................................................................................................. 9 Uji Flavonoid ...................................................................................................... 9 Uji Antosianin ................................................................................................... 11 Uji Organoleptis dan Homogenitas Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang

(Clitoria ternatea L.) ......................................................................................... 13

Uji Pendahuluan Karagenin .............................................................................. 13 Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria

ternatea L.) terhadap Jumlah Sel Neutrofil....................................................... 14 Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria

ternatea L.) terhadap Ekspresi COX-2 ............................................................. 20 KESIMPULAN ..................................................................................................... 30


x

SARAN ................................................................................................................. 30 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 31

BIOGRAFI PENULIS .......................................................................................... 60


xi

DAFTAR TABEL

Tabel 1. Hasil Pengujian Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang dengan Basis

Biocream®. ........................................................................................................... 13 Tabel 2. Hasil Uji Tamhane Jumlah Sel Neutrofil Pada Mencit Setelah Pemberian

Ekstrak Etanol Bunga Telang secara Topikal. ...................................................... 18

Tabel 3. Rerata Persentase (%) Ekspresi COX-2 dan Hasil Uji Tamhane Pada

Kelompok Kontrol Beserta Kelompok Perlakuan Pada Mencit Setelah Pemberian

Ekstrak Etanol Bunga Telang Secara Topikal. ..................................................... 23 Tabel 4. Persentase (%) Penekanan Ekspresi COX-2 Pada Kelompok Kontrol dan

Kelompok Perlakuan Pada Mencit Terinduksi Karagenin. ................................... 26


xii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Reaksi Flavonoid dengan HCl dan Logam Magnesium .................... 10 Gambar 2. Kesetimbangan Antosianin dalam Larutan ........................................ 12 Gambar 3. Mikrofotografi Pengecatan HE Kulit Normal Mencit. ...................... 16 Gambar 4. Mikrofotografi Pengecatan HE Kontrol Negatif Karagenin 4,5%,

Kontrol Positif Voltaren 1%, serta Perlakuan Ekstrak Etanol Bunga Telang 0,5% ;

1% ; dan 1,5% dengan Perbesaran 400 kali.. ........................................................ 17

Gambar 5. Rerata Jumlah Sel Neutrofil Pada Mencit Setelah Pemberian Ekstrak

Etanol Bunga Telang secara Topikal. ................................................................... 20 Gambar 6. Mikrofotografi Pengecatan Immunohistokimia Kulit Normal Mencit.

............................................................................................................................... 21 Gambar 7. Mikrofotografi Pengecatan Immunohistokimia dengan Antibodi Anti-

COX-2 Pada Kontrol Negatif Karagenin 4,5%, Kontrol Positif Voltaren 1%, serta

Perlakuan Ekstrak Etanol Bunga Telang 0,5% ; 1% ; dan 1,5% dengan Perbesaran

400 Kali.. ............................................................................................................... 22 Gambar 8. Rerata Persentase (%) Ekspresi COX-2 Pada Mencit Setelah

Pemberian Ekstrak Etanol Bunga Telang secara Topikal. .................................... 25 Gambar 9. Persentase (%) Penekanan Ekspresi COX-2 Pada Kelompok Kontrol

Positif dan Kelompok Perlakuan. .......................................................................... 27


xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Alat dan Bahan yang Digunakan dalam Penelitian ........................ 36 Lampiran 2. Hewan Uji yang Digunakan dalam Penelitian ................................ 40

Lampiran 3. Pemotongan Kulit Untuk Histopatologi ......................................... 41 Lampiran 4. Hasil Preparat Histopatologi Kulit Punggung Mencit Galur Swiss 42 Lampiran 5. Surat Keterangan Hasil Determinasi Tanaman Telang (Clitoria

ternatea L.) ............................................................................................................ 44 Lampiran 6. Surat Ethical Clearance .................................................................. 45

Lampiran 7. Surat Kalibrasi Jangka Sorong ........................................................ 46 Lampiran 8. Hasil Analisis Statistik Rerata Jumlah Sel Neutrofil pada Masing-

Masing Kelompok ................................................................................................. 48

Lampiran 9. Hasil Analisis Statistik Uji Normalitas dengan Uji Shapiro-Wilk .. 50 Lampiran 10. Hasil Pengujian ANOVA Rerata Jumlah Sel Neutrofil pada

Masing-Masing Kelompok ................................................................................... 51

Lampiran 11. Hasil Pengujian Uji Post Hoc Test dengan Uji Tamhane ............. 51 Lampiran 12. Hasil Analisis Statistik Perhitungan Rerata Persentase (%)

Ekspresi COX-2 Pada Masing-Masing Kelompok ............................................... 53

Lampiran 13. Hasil Uji Normalitas dengan Uji Shapiro-Wilk ............................ 56 Lampiran 14. Hasil Pengujian ANOVA Rerata Persentase (%) Ekspresi COX-2

pada Masing-Masing Kelompok ........................................................................... 57

Lampiran 15. Hasil Pengujian Uji Post Hoc Test dengan Uji Tamhane ............ 57

Lampiran 16. Surat Keterangan Analisis Data Statistik di Pusat Kajian CE & BU

............................................................................................................................... 59


xiv

ABSTRAK

Bunga telang (Clitoria ternatea L.) mengandung flavonoid dan antosianin

yang sebelumnya terbukti memiliki efek sebagai antiinflamasi yang diekstrak

dalam bentuk infusa. Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan sediaan topikal

krim ekstrak etanol bunga telang memiliki aktivitas antiinflamasi yang dilihat dari

penurunan jumlah sel neutrofil dan penekanan ekspresi COX-2 pada mencit yang

terinduksi karagenin. Metode penelitian yang digunakan adalah eksperimental

murni dengan Rancangan Acak Lengkap pola searah. Hewan uji yang digunakan

adalah mencit betina galur Swiss sebanyak 31 ekor, usia 2-3 bulan, berat 20-30 g

yang dibagi menjadi lima kelompok, yaitu kelompok kontrol negatif, kelompok

kontrol positif, dan kelompok perlakuan yang terdiri dari tiga kelompok dengan

masing-masing konsentrasi 0,5% ; 1% ; dan 1,5%. Penginduksi edema

menggunakan karagenin dengan konsentrasi 4,5%. Uji aktivitas antiinflamasi

akan dilakukan dengan metode pengamatan secara mikroskopik, yaitu metode

pengecatan Hematoksilin Eosin (HE) untuk uji penurunan migrasi jumlah sel

neutrofil dan Immunohistokimia (IHC) dengan antibodi anti-COX-2 untuk uji

penurunan persentase ekspresi COX-2 pada kulit punggung mencit yang

terinduksi karagenin. Data yang dianalisis menggunakan Uji Shapiro-Wilk,

dilanjutkan dengan Levene Test, lalu dilanjutkan dengan Uji One Way ANOVA

dan Uji Tamhane. Hasil penelitian menunjukkan bahwa rerata sel neutrofil pada

konsentrasi 0,5% ; 1% ; dan 1,5% berturut-turut, yaitu 24,67 ; 15,14 ; dan 9,60.

Persentase rerata hasil penekanan ekspresi COX-2 berturut-turut, yaitu 1,13% ;

48,11% ; dan 53,84%. Konsentrasi optimum dari ekstrak etanol bunga telang

adalah 1,5%. Kesimpulan penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol bunga

telang dengan konsentrasi 1% dan 1,5% memiliki efek sebagai antiinflamasi yang

dilihat dari hasil penurunan jumlah sel neutrofil dan ekspresi COX-2.

Kata Kunci : Bunga telang (Clitoria ternatea L.), sediaan topikal krim,

antiinflamasi, sel neutrofil, ekspresi COX-2


xv

ABSTRACT

Butterfly pea (Clitoria ternatea L.) contains flavonoids and anthocyanins

that are previously proven to have an antiinflammatory effect which was extracted

in the form of infusion. This study aims that to prove the topical cream of ethanol

extract of butterfly pea have antiinflammatory activity which is seen from the

decrease in the number of neutrophil cells and suppression of COX-2 expression

in carrageenan induced mice microscopically. The research method used is

experimental study with one way complete random design. Animals subject used

were 31 female Swiss strain mice, age 2-3 months, weight 20-30 g divided into

five groups, such as the negative control group, the positive control group, and the

treatment group consisting of three groups with each concentration 0,5% ; 1% ;

and 1,5%. Induction of edema using carrageenan with a concentration of 4,5%.

Antiinflammatory activity test will be carried out by microscopic observation

method, which is the method of Hematoxylin Eosin (HE) staining to reduce the

migration of neutrophil cells counts and immunohistochemistry staining with anti-

COX-2 antibodies to test the reduction in the percentage of COX-2 expression in

the skin of mice induced carrageenan. Data were analyzed using Shapiro-Wilk

Test, followed by Levene Test, then continued with One Way ANOVA Test and

Tamhane Test. The results of the study showed that the average of neutrophil cells

at concentration of 0,5% ; 1% ; and 1,5% in a row are 24,67 ; 15,14 ; and 9,60.

The average percentage of the suppression of COX-2 expression in a row are

1,13% ; 48,11% ; and 53,84%. The optimum concentration of the ethanol extract

of butterfly pea is 1,5%. The conclusion of the study shows that the ethanol

extract of butterfly pea with concentrations of 1% and 1,5% have

antiinflammatory activity which is seen from the result of decrease in the

migration of neutrophil cells counts and decrease of COX-2 expression.

Keywords : Butterfly Pea (Clitoria ternatea L.), topical cream,

antiinflammatory, neutrophil cells, COX-2 expression


1

PENDAHULUAN

Indonesia merupakan negara tropis yang memiliki tingkat

keanekaragaman hayati yang tinggi dan memiliki beragam jenis tanaman obat

(Novianti, 2017). Salah satu tanaman yang dapat digunakan sebagai obat

tradisional adalah bunga telang (Clitoria ternatea L.). Bunga telang memiliki sifat

yang menguntungkan untuk kesehatan, seperti antidiabetes, antiinflamasi,

analgesik, antimikroba, dan mengandung senyawa antosianin dengan aktivitas

antioksidan yang tinggi (Kusrini et al., 2017). Menurut (Al-snafi, 2016), skrining

fitokimia menunjukkan bahwa bunga telang mengandung tanin, flobatanin,

karbohidrat, saponin, triterpenoid, fenol, flavonoid, flavanol glikosida, protein,

alkaloid, antrakuinon, antosianin, stigmasit 4-ena-3,6 dion, minyak atsiri, dan

steroid. Sejumlah penelitian membuktikan bahwa flavonoid memiliki aktivitas

sebagai antivirus, antialergi, antiplatelet, antiinflamasi, antitumor, dan antioksidan

(Ponnusamy et al., 2014).

Inflamasi adalah peradangan sebagai akibat dari mekanisme

perlindungan diri terhadap zat asing yang masuk ke dalam tubuh. Saat zat asing

masuk ke dalam tubuh, tubuh bereaksi dengan melepaskan senyawa

prostaglandin, leukotriene, interleukin, nitrit oksida, dan proinflamatori sitokin

(Alfaridz dan Amalia, 2015). Respon inflamasi ditandai dengan tumor

(pembengkakan jaringan), calor (peningkatan suhu jaringan), rubor (kemerahan),

dolor (nyeri), dan function laesa (hilangnya fungsi jaringan) (Stankov, 2012). Di

Indonesia, penyakit yang melibatkan proses inflamasi di dalam tubuh angka

kejadiannya cukup tinggi. Prevalensi nasional penyakit sebanyak hepatitis 0,4%,

penyakit diabetes mellitus 1,5%, penyakit tumor/kanker 1,8%, asma 2,4%,

pneumonia 4,0%, dermatitis 6,8%, penyakit sendi 7,3%, ISPA 9,3%, dan stroke

10,9%. Penyakit tersebut termasuk penyakit yang terdapat reaksi inflamasi

(Riskesdas, 2018).

Pada penelitian ini, ekstrak yang digunakan adalah ekstrak etanol bunga

telang. Metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi dengan menggunakan

pelarut etanol 70% karena berdasarkan penelitian (Andriani dan Murtisiwi, 2018),

etanol 70% memiliki kemampuan penetrasi yang baik pada sisi hidrofil dan lipofil


2

sehingga dapat menembus membran sel, lalu dapat masuk ke dalam sel dan

berinteraksi dengan metabolit yang terdapat dalam sel. Selain itu, etanol 70% juga

dapat menyari senyawa-senyawa yang diperlukan untuk uji aktivitas bunga telang,

seperti fenolik, flavonoid, alkaloid, terpenoid, dan steroid.

Ekstrak etanol bunga telang dibuat dalam bentuk sediaan topikal karena

pengobatan secara topikal untuk inflamasi merupakan tindakan pertama yang

dapat dilakukan dengan cara mengoleskan sediaan pada daerah yang mengalami

inflamasi secara langsung sehingga mudah untuk diaplikasikan. Penggunaan Obat

Anti Inflamasi Nonsteroid (OAINS) peroral dapat menyebabkan iritasi saluran

cerna sehingga menurut (Soeratri et al., 2014), penggunaan obat secara topikal

merupakan salah satu upaya untuk menghindari terjadinya efek samping tersebut.

Pada penelitian ini, digunakan bagian kulit punggung pada mencit karena aplikasi

sediaan topikal pada bagian tersebut memiliki area permukaan kulit yang luas dan

mudah diamati secara mikroskopik. Penurunan respon inflamasi dapat ditandai

dengan berkurangnya sintesa protein COX-2, berkurangnya biosintesis

prostaglandin, dan penghambatan adhesi neutrofil pada dinding pembuluh darah.

Penghambatan adhesi neutrofil pada dinding pembuluh darah menyebabkan

infiltrasi neutrofil ke dalam jaringan menurun sehingga inflamasi akan berkurang.

Maka dari itu, untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi dapat diketahui melalui

pengurangan migrasi jumlah sel neutrofil dan penurunan ekspresi COX-2 pada

area yang mengalami inflamasi (Kusumastuti et al., 2014).

Berdasarkan uraian di atas, penulis tertarik untuk meneliti aktivitas

sediaan topikal ekstrak etanol bunga telang sebagai antiinflamasi terhadap kulit

punggung mencit yang terinduksi karagenin melalui pengamatan secara kualitatif

gambaran histopatologi kulit punggung mencit terhadap penurunan migrasi

jumlah sel neutrofil dan penurunan ekspresi protein COX-2.

METODE PENELITIAN

Desain dan Subjek Penelitian

Penelitian mengenai ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.)

yang diberikan secara topikal sebagai antiinflamasi merupakan jenis penelitian

eksperimental murni dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) pola


3

searah. Subjek uji pada penelitian ini adalah mencit betina galur Swiss dan berusia

2-3 bulan dengan berat badan 20-30 gram yang diperoleh dari Laboratorium

Imono Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Dua puluh lima ekor ubjek uji

dibagi secara acak menjadi lima kelompok, yang mana masing-masing kelompok

terdiri dari lima ekor mencit. Penelitian dilakukan dengan menghitung penurunan

jumlah sel neutrofil dan penekanan ekspresi COX-2 pada kulit punggung mencit

betina yang terinduksi karagenin. Prosedur yang digunakan dalam penelitian ini

telah disetujui oleh Komisi Etik Penelitian Kedokteran dan Kesehatan Fakultas

Kedokteran Universitas Gadjah Mada Yogyakarta dengan nomor

KE/FK/1362/EC/2019. Keaslian penelitian juga telah disetujui oleh Fakultas

Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Alat dan Bahan

Alat-alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat ekstraksi yang

terdiri dari rotary evaporator vacuum, alat maserasi, corong buchner, kertas

saring, aluminium foil, mortir, stamfer, dan alat – alat gelas (labu ukur, gelas

Beker, erlenmeyer, gelas ukur, cawan porselin, pipet tetes, batang pengaduk dan

gelas arloji). Alat induksi dan pengukuran edema kulit punggung mencit betina

galur Swiss, terdiri dari gunting, alat pencukur rambut mencit, spuit injeksi 1 mL,

neraca analitik, stopwatch, jangka sorong digital, dan mikroskop binokuler. Alat

yang digunakan untuk pemotongan organ kulit punggung mencit betina galur

Swiss terdiri dari kertas karton, container, gunting bedah, dan formalin 10%.

Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini adalah mencit betina

galur Swiss yang berumur sekitar 2-3 bulan dengan bobot sekitar 20-30 gram,

serbuk bunga telang (Clitoria ternatea L.), karagenin, etanol 70%, NaCl 0,9%,

aquadest, Biocream®, Veet®, dan Voltaren®.

Determinasi Tanaman

Serbuk bunga telang (Clitoria ternatea L.) diperoleh dari tempat

budidaya tanaman telang Kranesia, Maguwoharjo, Depok, Sleman, Yogyakarta.

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini dilakukan determinasi terlebih dahulu

di Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Determinasi tanaman

bertujuan untuk membuktikan bahwa jenis tanaman yang digunakan dalam


4

penelitian ini sudah sesuai, yaitu jenis tanaman telang (Clitoria ternatea L.).

Berdasarkan hasil determinasi yang telah dilakukan pada lampiran, maka terbukti

bahwa bunga telang yang digunakan dalam penelitian ini adalah berasal dari

tanaman telang (Clitoria ternatea L.).

Ekstraksi

Bahan yang digunakan untuk ekstraksi pada penelitian ini adalah serbuk

bunga telang (Clitoria ternatea L.) yang diperoleh dari tempat budidaya tanaman

telang Kranesia, Maguwoharjo, Depok, Sleman, Yogyakarta. Ekstraksi etanol

bunga telang (Clitoria ternatea L.) dilakukan dengan mengambil 50 g serbuk

kering bunga telang. Kemudian, ditambah dengan 250 mL etanol 70% pada

erlenmeyer, ditutup dengan aluminium foil, dan proses ekstraksi dilakukan

dengan metode maserasi selama 3 hari pada suhu ruang dengan sesekali diaduk,

lalu disaring menggunakan corong buchner untuk mendapatkan filtrat. Setelah itu,

dilakukan remaserasi ampas dari serbuk bunga telang dengan melarutkan kembali

dalam larutan penyari dengan jumlah 125 mL selama tiga hari, lalu disaring untuk

mendapatkan filtrat. Hasil filtrat maserasi dan remaserasi disatukan, lalu dibiarkan

selama satu hari. Selanjutnya, pelarut ekstrak diuapkan menggunakan rotary

evaporator vacuum hingga diperoleh ekstrak kental dengan cara pemekatan

ekstrak (Andriani and Murtisiwi, 2018). Hasil rendemen ekstrak kental diperoleh

menggunakan rumus sebagai berikut :

(Vifta et al., 2017).

Uji Flavonoid

Uji flavonoid dilakukan bertujuan untuk membuktikan bahwa ekstrak

etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) mengandung senyawa flavonoid.

Pengujian dilakukan dengan cara ekstrak sampel ditambahkan dengan beberapa

tetes asam klorida (HCl) pekat dan ditambahkan dengan serbuk Magnesium (Mg).

Apabila menunjukkan warna kemerahan hingga merah muda, maka ekstrak etanol

bunga telang yang diuji tersebut positif mengandung flavonoid (Samatha et al.,

2012).


5

Uji Antosianin

Uji antosianin bertujuan untuk membuktikan bahwa di dalam ekstrak

etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) mengandung senyawa antosianin.

Pengujian dilakukan dengan cara 2 mL sampel ditambahkan dengan 2 mL HCl 2N

dan ditambahkan amonia (NH3). Apabila warna merah muda atau merah berubah

menjadi biru keunguan, maka menunjukkan adanya antosianin pada ekstrak etanol

bunga telang (Obouayeba et al., 2015).

Uji Kadar Air

Uji kadar air bertujuan untuk mengetahui kadar air dalam serbuk bunga

telang (Clitoria ternatea L.) sehingga kualitas serbuk tetap dalam keadaan baik.

Uji kadar air dilakukan dengan menggunakan metode destilasi. Pereaksi yang

digunakan adalah 200 mL toluen jenuh air yang dikocok dengan 20 mL air,

kemudian dibiarkan memisah dan lapisan air dibuang. Timbang saksama 10 g

serbuk sampel, lalu dimasukkan ke dalam labu kering. Masukkan lebih kurang

200 mL toluen jenuh air ke dalam labu, lalu pasang rangkaian alat. Kemudian,

labu dipanaskan sampai semua air tersuling. Baca volume air setelah air dan

toluen memisah sempurna. Kadar air dihitung dalam % v/b (FHI, 2008).

Pembuatan Larutan Karagenin dan Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang

(Clitoria ternatea L.)

Karagenin 4,5% dibuat dengan melarutkan 1,125 g karagenin dalam 25

mL larutan NaCl 0,9% sehingga diperoleh larutan karagenin 4,5% b/v.

Konsentrasi sediaan krim ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) dibuat

dalam tiga konsentrasi, yaitu 0,5% ; 1% ; dan 1,5%. Pembuatan krim ekstrak

etanol bunga telang dilakukan dengan cara menimbang ekstrak etanol bunga

telang sebanyak 0,025 g ; 0,05 g ; dan 0,075 g yang ditambahkan dalam 5 g basis

Biocream®, lalu diaduk hingga terbentuk sediaan krim.

Uji Organoleptis dan Homogenitas Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang


Sediaan krim ekstrak etanol bunga telang dievaluasi dengan pengujian

organoleptis dan pengujian homogenitas. Pada uji organoleptis, pengataman

dilakukan secara visual dengan mengamati bau, warna, bentuk, dan tekstur dari


6

sediaan krim. Kemudian, pada uji homogenitas dilakukan dengan cara sediaan

krim ekstrak etanol bunga telang diambil sebanyak 1 g dan dioleskan pada kaca

objek. Lalu, diamati apakah terjadi pemisahan fase atau tidak pada sediaan krim

(Depkes RI, 1979).

Uji Pendahuluan Karagenin

Uji pendahuluan bertujuan untuk menetapkan konsentrasi karagenin

optimal yang akan digunakan sebagai penginduksi inflamasi pada daerah kulit

punggung mencit secara subkutan. Uji pendahuluan menggunakan enam ekor

mencit yang masing-masing dibagi secara acak menjadi tiga kelompok

konsentrasi. Konsentrasi yang digunakan dalam uji pendahuluan ini adalah 1,5% ;

3% ; dan 4,5% yang dilakukan dengan menginjeksikan karagenin sebanyak 0,1

mL pada kulit punggung mencit secara subkutan yang telah dicukur bulunya.

Kelompok karagenin yang dipilih berdasarkan edema yang muncul menunjukkan

penebalan kulit 2-3 kali lipat dari tebal kulit awal.

Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria ternatea L.)

Hewan uji yang dibutuhkan sebanyak 25 ekor mencit betina galur Swiss

dan dibagi secara acak menjadi lima kelompok perlakuan. Sebelum pengujian,

hewan uji dicukur rambutnya pada punggungnya terlebih dahulu menggunakan

gunting, kemudian dioleskan Veet® untuk merontokkan rambut yang belum

tercukur sempurna. Kulit punggung yang telah dicukur rambutnya dibiarkan

selama dua hari untuk menghindari adanya inflamasi yang disebabkan oleh

pencukuran dan pemberian Veet®. Kelompok 1 terdiri dari lima ekor mencit

sebagai kontrol negatif dengan diinduksi karagenin secara subkutan pada daerah

kulit punggung mencit. Kelompok 2 terdiri dari lima ekor mencit sebagai kontrol

positif dengan diinduksi karagenin secara subkutan dan diolesi Voltaren® pada

daerah kulit punggung mencit. Kelompok 3, 4, dan 5 yang masing-masing

kelompok terdiri dari lima ekor mencit sebagai kontrol perlakuan dengan

perbedaan konsentrasi pada ketiga kelompok, yaitu 0,5% ; 1% ; dan 1,5% b/b.

Ekstrak sebanyak 0,025 g ; 0,05 g ; dan 0,075 g, masing-masing dicampur dengan

basis krim Biocream® sebanyak 5 g sehingga diperoleh konsentrasi 0,5% ; 1% ;

dan 1,5% b/b. Biocream® dan masing-masing konsentrasi ekstrak dalam basis


7

krim diambil sebanyak 0,1 g, kemudian dioleskan pada daerah kulit punggung

mencit disekitar suntikan seluas 1 x 1 cm (PDR, 2020).

Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria

ternatea L.) terhadap Jumlah Sel Neutrofil dan Ekspresi COX-2

Pengujian dilakukan setelah enam jam diinduksi karagenin, mencit

dikorbankan dengan cara dislokasi tulang leher mencit dan dilakukan

pengambilan kulit punggung mencit dengan cara dibedah. Area pengambilan kulit

di sekitar daerah injeksi subkutan dengan ukuran 1 x 1 cm. Hasil pemotongan

organ diletakkan pada karton tebal dan dimasukkan ke dalam container yang telah

diberi formalin 10% hingga organ kulit terendam sempurna. Kemudian, dilakukan

pengecatan Hematoksilin Eosin (HE) sesuai prosedur dari Laboratorium Patologi

Anatomi Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada Yogyakarta dan

pengecatan immunohistokimia (IHC) dengan Rabbit Polyclonal antibodi anti-

COX-2 sesuai prosedur dari RSUP Dr. Sardjito Yogyakarta. Selanjutnya, analisis

data dilakukan dengan menghitung jumlah sel neutrofil menggunakan perhitungan

langsung (direct counting) dan sel yang mengekspresikan COX-2 pada daerah

subkutan jaringan kulit punggung mencit betina galur Swiss pada tiga sudut

pandang yang berbeda di bawah mikroskop binokuler (Olympus CX21) dengan

perbesaran 400 kali. Jumlah sel neutrofil tersebut dihitung pada tiga sudut

pandang, kemudian dilakukan perhitungan rata-rata untuk menentukan total

jumlah sel neutrofil pada tiga sudut pandang tersebut. Pada hasil positif ekspresi

COX-2 ditandai dengan warna coklat atau gelap dalam sitoplasma. Sedangkan,

yang tidak menunjukkan adanya ekspresi COX-2 akan memberikan warna ungu

atau biru. Analisis secara kuantitatif persentase ekspresi COX-2 menggunakan

persamaan sebagai berikut :

(Ikawati et al., 2014).

Analisis Statistik

Seluruh analisis data statistik dilakukan di Pusat Kajian CE & BU dengan

menggunakan program IBM SPSS 22 Lisensi Universitas Gadjah Mada


8

Yogyakarta dengan taraf kepercayaan 95%. Data yang diperoleh terlebih dahulu

dianalisis secara statistik dengan Uji Shapiro Wilk untuk melihat kenormalan

distribusi data dan dilanjutkan Levene Test untuk melihat homogenitas variasi

data. Data yang terdistribusi normal (p>0,05), dilanjutkan dengan uji One Way

ANOVA dengan taraf kepercayaan 95% karena data tidak berpasangan dan lebih

dari dua kelompok. Apabila variasi data homogen, maka analisis dilanjutkan

dengan Post Hoc Test dengan Scheffe Test untuk melihat perbedaan bermakna

atau tidak antar tiap kelompok perlakuan. Apabila variasi data tidak homogen,

maka analisis dilanjutkan dengan Uji Tamhane. Apabila syarat Uji One Way

ANOVA tidak dapat terpenuhi, maka digunakan uji alternatif non-parametrik

Kruskal Wallis dengan taraf kepercayaan 95%. Apabila Uji Kruskal Wallis

menunjukkan perbedaan signifikan (p<0,05), maka dilanjutkan dengan Post Hoc

Test menggunakan Uji Mann Whitney untuk mengetahui perbedaan tiap kelompok

perlakuan (Djunarko et al., 2016).

HASIL DAN PEMBAHASAN

Uji Kadar Air

Pengujian kadar air dilakukan dengan metode destilasi sesuai dengan

metode uji kadar air pada Farmakope Herbal Indonesia. Hasil uji kadar air pada

serbuk simplisia bunga telang adalah sebesar 6%. Berdasarkan hasil kadar air

tersebut, menunjukkan bahwa serbuk simplisia bunga telang termasuk dalam

standar serbuk yang baik karena standar kadar air pada serbuk yang baik adalah

≤10% (Kemenkes RI, 2014). Penentuan kadar air yang sesuai dengan standar yang

ditetapkan (≤10%), hal tersebut berkaitan dengan kemurnian dan adanya

kontaminan dalam serbuk simplisia tersebut. Jumlah kadar air berlebih dalam

serbuk simplisia mempengaruhi masa penyimpanan dari serbuk dan

mempengaruhi percepatan pertumbuhan mikroba sehingga mempengaruhi mutu

dari serbuk simplisia. Dalam penelitian ini, metode destilasi efektif untuk

melakukan penetapan kadar air karena terjadinya penyulingan berulang kali di

dalam labu dan menggunakan pendingin balik (condensor) yang berfungsi untuk

mencegah adanya penguapan berlebih (Handayani et al., 2017).


9

Ekstraksi

Ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) diperoleh dari proses

penyarian dengan metode maserasi menggunakan serbuk simplisia bunga telang

(Clitoria ternatea L.). Hasil ekstrak etanol kental yang diperoleh pada metode

maserasi kali ini adalah sebesar 21,0544 g dengan rendemen ekstrak sebesar

42,1088% dan berwarna ungu pekat. Besarnya nilai rendemen merupakan

parameter yang menentukan keefektifan dari suatu proses ekstraksi yang mana

dapat menggambarkan jumlah penarikan senyawa aktif pada proses ekstraksi.

Pada penelitian kali ini, rendemen ekstrak yang dihasilkan dapat

dipengaruhi oleh pelarut yang digunakan, yaitu etanol 70%. Etanol 70% memiliki

sifat kepolaran yang sama dengan senyawa yang terdapat dalam bunga telang dan

juga dapat melarutkan senyawa fitokimia lebih maksimal karena etanol 70%

mengandung air yang cukup banyak (30%) yang dapat membantu proses ekstraksi

sehingga senyawa yang terdapat dalam bunga telang dapat tertarik keluar dalam

etanol. Asam amino, gula, dan beberapa senyawa fitokimia lainnya seperti

flavonoid dan alkaloid dapat terlarut dalam pelarut polar sehingga senyawa yang

terekstrak dalam etanol 70% cukup banyak dan menghasilkan rendemen yang

cukup tinggi (Sani et al., 2014).

Uji Flavonoid

Uji flavonoid dilakukan untuk membuktikan adanya kandungan senyawa

flavonoid dalam ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) yang dilakukan

dengan cara menambahkan beberapa tetes HCl pekat dan ditambahkan dengan

serbuk Mg. Hasil uji menunjukkan bahwa ekstrak etanol bunga telang positif

mengandung flavonoid yang dapat ditunjukkan dari warna merah yang dihasilkan

setelah ditetesi dengan reagen HCl dan serbuk Mg.

Senyawa flavonoid yang terdapat pada tanaman telang berikatan dengan

suatu gugus gula yang membentuk senyawa glikosida flavonoid. Adapun

pengertian glikosida merupakan senyawa yang terdiri dari senyawa gula (glikon),

sedangkan senyawa bukan gula disebut aglikon. Agar flavonoid bisa diidentifikasi

pada ekstrak sampel, maka ikatan glikosida dengan flavonoid harus diputus

dengan cara mereduksi ikatan tersebut (Riyani and Adawiah, 2015). Berikut


10

merupakan reaksi yang terjadi ketika penambahan HCl dan Mg pada ekstrak

sampel.

Gambar 1. Reaksi Flavonoid dengan HCl dan Logam Magnesium

(Nugrahani et al., 2016).

Pada uji flavonoid ini, dilakukan penambahan logam Mg dan HCl pada

ekstrak etanol bunga telang yang bertujuan untuk mereduksi inti benzopiron yang

terdapat dalam struktur flavonoid sehingga terbentuk garam flavilium berwarna

merah atau jingga (Ergina et al., 2014). Senyawa flavonoid merupakan reaksi

oksidasi, yang mana senyawa flavonoid akan dioksidasi oleh Mg2+

dengan

membentuk kompleks dengan ion magnesium. Polihidroksi dari flavonon akan

direduksi oleh logam magnesium dalam asam klorida dalam larutan etanol

sehingga membentuk garam benzopirilium yang berwarna merah, kuning, atau

disebut dengan garam flavilium (Setiabudi and Tukiran, 2017). Penambahan

reagen HCl pada ekstrak etanol bunga telang yang bertujuan untuk menghidrolisis

flavonoid menjadi aglikonnya, yaitu menjadi O-glikosil. Gugus glikosil akan

tergantikan oleh H+ dari asam kloridanya karena bersifat elektrofilik. Reduksi HCl

ini menghasilkan senyawa kompleks yang berwarna merah pada flavonol,

flavanon, flavanolol, dan xanton (Riyani and Adawiah, 2015). Perubahan warna

menjadi merah tersebut dapat diberikan oleh senyawa flavon yang terkandung

pada ekstrak etanol bunga telang (Mariana et al., 2014).


11

Uji Antosianin

Uji antosianin dilakukan untuk membuktikan adanya kandungan senyawa

antosianin dalam ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.). Pengujian

dilakukan dengan menambahkan 2 mL HCL 2N dan menambahkan NH3 pada 2

mL ekstrak kental bunga telang. Hasil uji menunjukkan bahwa ekstrak etanol

bunga telang positif mengandung antosianin karena terjadi perubahan warna

ekstrak kental dari warna merah setelah ditambahkan HCl yang berubah menjadi

biru keunguan setelah ditambahkan dengan NH3. Hasil tersebut menunjukkan

bahwa ekstrak etanol bunga telang positif mengandung antosianin.

Hasil positif yang ditunjukan setelah dilakukan pengujian tabung pada

ekstrak etanol bunga telang dapat disebabkan oleh adanya pengaruh pH. Pada pH

asam, antosianin akan berada pada bentuk ion flavilium yang berwarna merah dan

berubah menjadi warna biru kehijauan pada keadaan basa. Warna biru kehijauan

dapat disebabkan karena antosianin banyak berada dalam bentuk ion anhidro basa

(Maulida and Guntarti, 2015). Perubahan warna yang terjadi disebabkan karena

antosianin berada dalam empat bentuk kesetimbangan tergantung pada kondisi

pH. Keempat bentuk tersebut adalah kation flavilium, basa karbinol, kalkon, dan

basa quinoidal. Saat pH dinaikkan (>5), akan mempercepat kehilangan proton

sehingga membentuk basa quinoidal yang cenderung menjadi biru atau ungu.

Selain itu, kenaikan pH menyebabkan hidrasi kation flavilium untuk membentuk

karbinol atau kalkon yang tidak berwarna (Neliyanti and Idiawati, 2014). Pada pH

sangat asam (pH 1-2), bentuk dominan dari antosianin adalah kation flavilium.

Flavilium dalam kondisi asam berwarna merah. Pada kondisi ini, antosianin

berada dalam kondisi paling stabil dan paling berwarna. Ketika pH meningkat

diatas 4, terbentuk senyawa antosianin berwarna kuning yaitu dalam bentuk

kalkon. Apabila senyawa berwarna biru, maka termasuk dalam bentuk quinoid.

Kemudian, senyawa yang tidak berwarna termasuk dalam basa karbinol

(Virliantari et al., 2018).


12

Gambar 2. Kesetimbangan Antosianin dalam Larutan (Neliyanti and Idiawati, 2014).

Secara kimia, semua antosianin merupakan turunan suatu struktur

aromatik tunggal, yaitu sianidin. Antosianidin adalah aglikon antosianin yang

terbentuk apabila antosianidin dihidrolisis dengan asam. Perbedaan warna alami

pigmen ini dipengaruhi oleh hidroksilasi dan metilasi. Hidroksilasi meningkatkan

warna biru, sedangkan metilasi meningkatkan warna merah (Solihin et al., 2013).

Selain faktor pH, adanya campuran dengan senyawa lain, jumlah gugus

hidroksi dan metoksi juga dapat mempengaruhi warna dari antosianin. Jumlah

gugus hidroksi yang dominan dapat menyebabkan warna cenderung biru,

sedangkan jumlah gugus metoksi yang dominan dibandingkan gugus hidroksi

pada struktur antosianin dapat menyebabkan warna cenderung merah (Supiyanti

et al., 2010).


13

Uji Organoleptis dan Homogenitas Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang


Berikut merupakan hasil pengujian organoleptis dan homogenitas pada

sediaan krim ekstrak etanol bunga telang.

Tabel 1. Hasil Pengujian Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang dengan Basis Biocream®.

No. Uji Evaluasi Hasil Pengujian Krim

EEBT 0,5% EEBT 1% EEBT 1,5%

1 Uji

Organoleptis

Warna ungu

terang, bau khas

bunga telang,

konsistensi/tekstur

krim lembut.

Warna ungu agak

pekat, bau khas

bunga telang,

konsistensi/tekstur

krim lembut.

Warna ungu

pekat, bau khas

bunga telang,

konsistensi/tekstur

krim lembut.

2 Uji

Homogenitas

Terdispersi

merata dan tidak

terdapat butiran-

butiran partikel.

Terdispersi

merata dan tidak

terdapat butiran-

butiran partikel.

Terdispersi

merata dan tidak

terdapat butiran-

butiran partikel.

Uji Pendahuluan Karagenin

Pada uji pendahuluan karagenin, hasil pengukuran tebal lipat kulit mencit

yang sudah diinduksi karagenin menunjukkan adanya edema pada setiap jamnya

selama enam jam. Setelah dilakukan pengamatan selama enam jam, konsentrasi

optimal karagenin yang digunakan sebagai penginduksi inflamasi adalah

karagenin dengan konsentrasi 4,5%. Pada penelitian ini, digunakan karagenin

sebagai penginduksi inflamasi karena memiliki beberapa keuntungan, yaitu tidak

meninggalkan bekas, tidak menimbulkan kerusakan jaringan, dan memberikan

respon yang lebih peka terhadap obat antiinflamasi dibandingkan dengan senyawa

iritan lainnya (Nur et al., 2018). Perkembangan edema setelah diinjeksi karagenin,

berbagai mediator inflamasi beroperasi secara berurutan untuk menghasilkan

respon inflamasi. Ada beberapa mediator yang terlibat dalam peradangan, yaitu

histamin, serotonin, dan bradikinin yang merupakan mediator pertama yang

terdeteksi pada fase awal karagenin diinduksi (90 menit pertama) (Necas dan


14

Bartosikova, 2013). Fase kedua terjadi pelepasan bradikinin pada 1,5 - 2,5 jam

setelah induksi. Pada fase ketiga, terjadi pelepasan prostaglandin pada 3 jam

setelah induksi (Sukmawati et al., 2015). Eksudasi cairan (keluarnya cairan

beserta sel radang neutrofil melalui membran luka) termasuk semua protein

plasma (albumin, globulin, dan fibrinogen) akan keluar ke pembuluh darah.

Banyaknya produk radang di sekitar jaringan ditandai dengan jumlah sel neutrofil

yang meningkat sehingga menimbulkan gejala pembengkakan atau edema

(Agustin et al., 2016).


ternatea L.) terhadap Jumlah Sel Neutrofil

Pada penelitian kali ini, pengujian efek antiinflamasi ekstrak etanol

bunga telang (Clitoria ternatea L.) bertujuan untuk mengetahui efek antiinflamasi

topikal ekstrak etanol bunga telang dan untuk menentukan konsentrasi optimum

ekstrak etanol bunga telang sebagai antiinflamasi yang dapat dilihat dari hasil

pengukuran penurunan jumlah sel neutrofil dan penekanan ekspresi COX-2.

Neutrofil merupakan leukosit yang paling banyak dalam sirkulasi dan dianggap

sebagai garis pertahanan pertama dalam sistem kekebalan tubuh, serta dapat

digunakan sebagai parameter terjadinya inflamasi karena neutrofil berperan

sebagai mediator peradangan (Rosales, 2018). Penghambatan adhesi neutrofil

pada dinding pembuluh darah menyebabkan infiltrasi neutrofil ke dalam jaringan

menurun sehingga inflamasi akan berkurang (Kusumastuti et al., 2014).

Peningkatan pelepasan neutrofil dari sumsum tulang menuju daerah atau lokasi

yang mengalami inflamasi selama 5 jam pertama sehingga akan dijumpai

peningkatan neutrofil dalam darah tepi (Prihandari and Muniroh, 2016).

Metode pengujian yang dilakukan untuk melihat jumlah sel neutrofil

adalah menggunakan pewarnaan HE. Pewarnaan HE tersebut bertujuan untuk

mewarnai jaringan kulit punggung mencit yang telah diambil untuk membedakan

komponen-komponen yang ada di dalam jaringan, memperlihatkan struktur, dan

morfologi jaringan pada uji histopatologi. Pewarnaan HE ini didasarkan pada

prinsip sederhana, yaitu sifat asam basa dari larutan yang akan berikatan dengan

komponen jaringan yang mempunyai kecenderungan terhadap sifat asam ataupun


15

basa pada sel sehingga terjadi ikatan antara molekul zat warna dengan komponen

jaringan. Senyawa hematoksilin yang digunakan disebut sebagai hematin (bentuk

oksidasinya) dan mengalami proses oksidasi yang disebut sebagai ripening.

Hematin akan mengikat molekul yang bermuatan negatif, yaitu material kromatis

dalam inti sel yang bermuatan negatif. Kromatin pada inti sel mempunyai sifat

asam dan akan menarik zat warna hematoksilin yang bersifat basa. Sedangkan,

pewarnaan eosin yang bersifat asam akan mengikat molekul protein yang

bermuatan positif di sitoplasma dan jaringan ikat. Eosin dapat mewarnai

sitoplasma dan jaringan ikat menjadi warna merah dan oranye, serta dapat

mewarnai inti sel yang telah terwarnai hematoksilin dari biru menjadi berwarna

ungu (Khristian and Inderiati, 2017). Perhitungan sel neutrofil menggunakan

perhitungan langsung (direct counting) dengan mikroskop binokuler untuk setiap

tiga bidang pandang berbeda dengan perbesaran 400 kali.

Pengujian sediaan topikal krim ekstrak etanol bunga telang menggunakan

tiga seri konsentrasi, yaitu konsentrasi 0,5% ; 1% ; dan 1,5% dengan tujuan untuk

mengetahui konsentrasi optimum dari sediaan topikal ekstrak etanol bunga telang

sebagai antiinflamasi dan juga untuk mengetahui apakah dari ketiga konsentrasi

tersebut memiliki efek antiinflamasi yang berbeda secara signifikan atau tidak.

Hasil dari kontrol perlakuan dengan perbedaan tiga konsentrasi tersebut akan

dibandingkan khasiat antiinflamasinya dengan hasil dari kelompok lainnya

sebagai antiinflamasi topikal.

Setelah pengamatan selama enam jam, dilakukan eutanasia pada mencit

dengan cara dislokasi tulang leher yang kemudian diambil kulit punggung mencit

dan diletakkan dalam container yang telah berisi formalin 10%. Pada pengujian

histopatologi, pembedahan kulit punggung mencit dilakukan setelah enam jam

pengamatan karena pembentukan radang oleh karagenin dapat bertahan selama

360 menit dan berangsur-angsur berkurang selama satu hari. Pembentukan radang

oleh karagenin menghasilkan peradangan akut dan tidak menyebabkan kerusakan

pada jaringan (Sukmawati et al., 2015). Profil pengecatan Hematoksilin dan Eosin

(HE) pada kulit normal mencit dapat dilihat pada gambar 3 berikut.


16

Gambar 3. Mikrofotografi Pengecatan HE Kulit Normal Mencit (Groves et al., 1995).

Kulit terdiri atas dua lapisan utama, yaitu epidermis dan dermis. Epidermis

merupakan jaringan epitel yang berasal dari ektoderm, sedangkan dermis berupa

jaringan ikat agak padat yang berasal dari mesoderm. Di bawah dermis terdapat

selapis jaringan ikat longgar yaitu hipodermis, yang pada beberapa tempat

terutama terdiri dari jaringan lemak. Epidermis merupakan lapisan paling luar

kulit yang terdiri dari jaringan epitel dan tidak mempunyai pembuluh darah

maupun limfa. Lapisan selanjutnya adalah dermis terdiri atas stratum papilaris dan

stratum retikularis, batas antara kedua lapisan tidak tegas, serat antaranya saling

menjalin. Sel-sel dermis merupakan sel-sel jaringan ikat seperti fibroblas, sel

lemak, sedikit makrofag, dan sel mast. Kemudian, hipodermis merupakan sebuah

lapisan subkutan dibawah retikularis dermis. Hipodermis berupa jaringan ikat

lebih longgar dengan serat kolagen halus terorientasi terutama sejajar terhadap

permukaan kulit, dengan beberapa di antaranya menyatu dengan yang dari dermis

(Kalangi, 2013). Profil pengecatan Hematoksilin dan Eosin (HE) pada kelompok

kontrol dan kelompok perlakuan dapat dilihat pada gambar 4 berikut.


17

Kontrol Negatif Karagenin 4,5% Kontrol Positif Voltaren 1%

Ekstrak Etanol

Bunga Telang 0,5%

Ekstrak Etanol

Bunga Telang 1%

Ekstrak Etanol Bunga Telang 1,5%

Gambar 4. Mikrofotografi Pengecatan HE Kontrol Negatif Karagenin 4,5%, Kontrol Positif

Voltaren 1%, serta Perlakuan Ekstrak Etanol Bunga Telang 0,5% ; 1% ; dan 1,5% dengan

Perbesaran 400 kali. Migrasi Sel Neutrofil Terlihat Pada Daerah Subkutan Jaringan Kulit

Punggung Mencit dan Ditandai dengan Lingkaran Kuning.

*Keterangan :

1. Kulit Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5% dengan perbesaran 400 kali.

2. Kulit Kontrol Positif Voltaren (KPV) 1% dengan perbesaran 400 kali.

3. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5% dengan perbesaran 400 kali.

4. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1% dengan perbesaran 400 kali.

5. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1,5% dengan perbesaram 400 kali.

1 2

3

5

4


18

Tabel 2. Hasil Uji Tamhane Jumlah Sel Neutrofil Pada Mencit Setelah Pemberian Ekstrak

Etanol Bunga Telang secara Topikal.

Rerata Sel Neutrofil

± SE I II III IV V

I 28.0000 ± 2.36112 BB BTB BB BB

II 9.4680 ± 0.74164 BB BB BTB BTB

III 24.6680 ± 1.74563 BTB BB BB BB

IV 15.1360 ± 1.28497 BB BTB BB BTB

V 9.6000 ± 1.00294 BB BTB BB BTB

*Keterangan :

I = Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5%.

II = Kontrol Positif Voltaren® (KPV) 1%.

III = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5%.

IV = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1%.

V = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1,5%.

BB = Berbeda Bermakna (p<0,05).

BTB = Berbeda Tidak Bermakna (p>0,05).

SE = Standart Error.

Berdasarkan hasil analisis statistik dari Uji Shapiro-Wilk, menunjukkan

bahwa data yang digunakan terdistribusi normal (p>0,05) sehingga dilanjutkan

dengan Levene Test. Variasi data yang dihasilkan tidak homogen dengan nilai p =

0,041 (p<0,05) sehingga analisis statistik dilanjutkan dengan Uji One Way

ANOVA dengan Post Hoc Test, yaitu Uji Tamhane.

Pada kontrol negatif karagenin (KNK) 4,5% menunjukkan hasil rerata

yang paling besar diantara kelompok lainnya, yaitu 28.0000 ± 2.36112.

Kemudian, kelompok perlakuan EEBT 0,5% menunjukkan rerata jumlah sel

neutrofil yang cukup besar juga diantara kelompok lainnya, yaitu 24.6680 ±

1.74563. Analisis statistik menunjukkan bahwa KNK 4,5% berbeda bermakna

(p<0,05) dengan kontrol positif voltaren (KPV) 1%, EEBT 1%, dan EEBT 1,5%.

Serta, berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan EEBT 0,5%. Hasil tersebut

menunjukkan bahwa KNK 4,5% dapat menginduksi inflamasi yang ditandai


19

dengan adanya peningkatan jumlah neutrofil pada kulit punggung mencit yang

diberikan secara subkutan. Serta, menunjukkan hasil bahwa EEBT 0,5% tidak

dapat memberikan efek sebagai antiinflamasi karena hasilnya berbeda bermakna

(p<0,05) dibandingkan dengan KPV 1%, EEBT 1%, dan EEBT 1,5%

Pada kelompok KPV 1% berbeda bermakna (p<0,05) dengan KNK 4,5%

dan EEBT 0,5%, sedangkan berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan EEBT 1%

dan EEBT 1,5%. Rerata yang dihasilkan pada KPV 1% sebesar 9.4680 ± 0.74164,

yang berarti bahwa adanya pengurangan jumlah sel neutrofil yang cukup besar

dan hasil tersebut menunjukkan bahwa KPV 1% dapat memberikan efek sebagai

antiinflamasi.

Berdasarkan rerata dari EEBT 1%, yaitu 15.1360 ± 1.28497 berbeda tidak

bermakna (p>0,05) dengan KPV 1% dan EEBT 1,5%, serta berbeda bermakna

(p<0,05) dengan KNK 4,5% dan EEBT 0,5%. Kemudian, EEBT 1,5% memiliki

rerata 9.6000 ± 1.00294 yang berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan KPV 1%

dan EEBT 1%, sedangkan berbeda bermakna (p<0,05) dengan KNK 4,5% dan

EEBT 0,5%. Hasil tersebut menunjukkan bahwa EEBT 1% dan EEBT 1,5%

memiliki efek sebagai antiinflamasi yang hampir sama dengan KPV 1%, yaitu

dapat menunjukkan adanya penurunan jumlah sel neutrofil yang bermigrasi pada

daerah subkutan, walaupun aktivitas antiinflamasinya tidak tinggi jika

dibandingkan dengan kontrol positif voltaren.

Berdasarkan hasil analisis statistik tersebut, dipilih EEBT konsentrasi

1,5% sebagai konsentrasi optimum karena memiliki hasil yang paling baik

dibandingkan dengan konsentrasi EEBT yang lainnya. Efek antiinflamasinya

dilihat dari efektivitasnya sebagai antiinflamasi yang dilihat dari penurunan rerata

jumlah sel neutrofil pada kulit punggung mencit yang memiliki hasil berbeda

bermakna setelah dibandingkan dengan kelompok KNK 4,5%. Profil rerata

jumlah sel neutrofil pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan dapat dilihat

pada gambar 5.


20

Gambar 5. Rerata Jumlah Sel Neutrofil Pada Mencit Setelah Pemberian Ekstrak Etanol

Bunga Telang secara Topikal.

*Keterangan :

= Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5%.

= Kontrol Positif Voltaren (KPV) 1%.

= Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5%.

= Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1%.


Berdasarkan diagram tersebut, dapat dinyatakan bahwa KNK 4,5%

memiliki rerata jumlah sel neutrofil yang paling besar pada daerah kulit punggung

mencit dibandingkan dengan kelompok lainnya. Hal tersebut menunjukkan bahwa

karagenin dapat digunakan sebagai penginduksi inflamasi yang dapat dilihat dari

peningkatan jumlah sel neutrofil pada daerah punggung mencit. Kemudian, EEBT

0,5% juga memiliki rerata jumlah sel neutrofil yang cukup besar setalah KNK

4,5%, yang menunjukkan bahwa EEBT 0,5% tidak dapat memberikan efek

sebagai antiinflamasi seperti kelompok KPV 1%, EEBT 1%, dan EEBT 1,5%.


ternatea L.) terhadap Ekspresi COX-2

Enzim COX-2 merupakan enzim yang terinduksi pada sel yang

mengalami inflamasi. Pengujian imunohistokimia dengan antibodi anti-COX-2

bertujuan untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi ekstrak etanol bunga telang

(Clitoria ternatea L.) dengan melihat ekspreksi COX-2 menggunakan mikroskop

binokuler pada setiap tiga sudut pandang dengan perbesaran 400 kali. Pengecatan

0

5

10

15

20

25

30

35

Kelompok

Rer

ata

Jum

lah

Sel

Neu

tro

fil

KNK 4,5%

KPV 1%

EEBT 0,5%

EEBT 1%

EEBT 1,5%


21

imunohistokimia dilakukan menggunakan antibodi anti-COX-2 terhadap sel kulit

punggung mencit yang dianalisis secara kuantitatif. Imunohistokimia adalah suatu

metode untuk mendeteksi keberadaan molekul atau berbagai macam komponen

yang terdapat di dalam sel atau jaringan dengan menggunakan prinsip reaksi

antara antigen dengan antibodi (Unitly and Sahertian, 2010). Ekspresi COX-2

diamati menggunakan mikroskop binokuler yang mana akan dihasilkan warna

coklat/gelap pada sel yang mengekspresikan protein COX-2, sedangkan yang

tidak akan memberikan warna ungu/biru (Ikawati et al., 2014).

Pengujian penekanan ekspresi COX-2 dengan metode inumohistokimia

dilakukan dengan analisis kuantitatif untuk mengetahui persentase penekanan

ekspresi COX-2 oleh ekstrak etanol bunga telang. Persentase penekanan ekspresi

COX-2 dilakukan dengan menghitung persentase ekspresi COX-2 terlebih dahulu.

Profil pengecatan immunohistokimia pada kulit normal mencit, kelompok kontrol,

kelompok perlakuan, beserta rerata persentase ekspresi COX-2 pada kulit

punggung mencit yang terinduksi karagenin dapat dilihat pada gambar dan tabel

berikut.

Gambar 6. Mikrofotografi Pengecatan Immunohistokimia Kulit Normal Mencit (Futagami

et al., 2002).


22

Kontrol Negatif Karagenin 4,5% Kontrol Positif Voltaren 1%

Ekstrak Etanol

Bunga Telang 0,5%

Ekstrak Etanol

Bunga Telang 1%

Ekstrak Etanol Bunga Telang 1,5%

Gambar 7. Mikrofotografi Pengecatan Immunohistokimia dengan Antibodi Anti-COX-2

Pada Kontrol Negatif Karagenin 4,5%, Kontrol Positif Voltaren 1%, serta Perlakuan

Ekstrak Etanol Bunga Telang 0,5% ; 1% ; dan 1,5% dengan Perbesaran 400 Kali. Tanda

Lingkaran Hijau Menunjukkan Hasil Positif Ekspresi COX-2 dan Tanda Lingkaran Merah

Menunjukkan Hasil Negatif Ekspresi COX-2.

*Keterangan :

1. Kulit Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5% dengan perbesaran 400 kali.

2. Kulit Kontrol Positif Voltaren (KPV) 1% dengan perbesaran 400 kali.

3. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5% dengan perbesaran 400 kali.

4. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1% dengan perbesaran 400 kali.

5. Kulit Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1,5% dengan perbesaram 400 kali.

3

5

4

1 2


23

Tabel 3. Rerata Persentase (%) Ekspresi COX-2 dan Hasil Uji Tamhane Pada Kelompok

Kontrol Beserta Kelompok Perlakuan Pada Mencit Setelah Pemberian Ekstrak Etanol

Bunga Telang Secara Topikal.

Rerata % Ekspresi

COX-2 ± SE I II III IV V

I 91.9400 ± 1.95870 BB BTB BB BB

II 41.3540 ± 1.82401 BB BB BTB BTB

III 90.9040 ± 0.45578 BTB BB BB BB

IV 47.7100 ± 2.65788 BB BTB BB BTB

V 42.4400 ± 3.73750 BB BTB BB BTB

*Keterangan :

I = Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5%.

II = Kontrol Positif Voltaren® (KPV) 1%.

III = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 0,5%.

IV = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1%.

V = Ekstrak Etanol Bunga Telang (EEBT) 1,5%.

BB = Berbeda Bermakna (p<0,05).

BTB = Berbeda Tidak Bermakna (p>0,05).

SE = Standart Error.

Berdasarkan hasil analisis statistik, setelah dilakukan Uji Shapiro Wilk

diperoleh hasil bahwa data terdistribusi normal (p>0,05) sehingga dilanjutkan

dengan Levene Test. Hasil analisis yang diperoleh adalah variasi data tidak

homogen dengan nilai p = 0,001 (p<0,05). Oleh karena itu, analisis statistik

dilanjutkan dengan Uji One Way ANOVA dengan Uji Post Hoc Test, yaitu Uji

Tamhane.

Pada kelompok KNK 4,5% memiliki nilai rerata persentase (%) ekspresi

COX-2 sebesar 91.9400 ± 1.95870. Hasil rerata tersebut menunjukkan bahwa

persentase ekspresi COX-2 yang cukup besar setelah dilakukan perhitungan

menggunakan rumus. Rerata ekspresi COX-2 pada KNK 4,5% memiliki hasil

yang hampir sama dengan kelompok EEBT 0,5%, yaitu 90.9040 ± 0.45578.

Berdasarkan hasil Uji Tamhane, KNK 4,5% berbeda tidak bermakna (p>0,05)

dengan EEBT 0,5%, serta berbeda bermakna (p<0,05) dengan KPV 1%, EEBT


24

1%, dan EEBT 1,5%. Hasil tersebut menunjukkan bahwa KNK 4,5% dapat

menginduksi inflamasi yang ditandai dengan adanya peningkatan ekspresi COX-2

pada kulit punggung mencit yang terinduksi karagenin. Kemudian, hal tersebut

juga menunjukkan bahwa EEBT 0,5% tidak dapat memberikan efek sebagai

antiinflamasi dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya karena hasilnya

berbeda bermakna (p<0,05) dibandingkan dengan kelompok KPV 1%, EEBT 1%,

dan EEBT 1,5%.

Rerata persentase ekspresi COX-2 pada kelompok KPV 1% sebesar

41.3540 ± 1.82401 yang menunjukkan bahwa terjadi penurunan ekspresi COX-2

pada kulit punggung mencit. KPV 1% berbeda bermakna (p<0,05) dengan KNK

4,5% dan EEBT 0,5%, serta berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan EEBT 1%

dan EEBT 1,5%. Hasil tersebut menunjukkan bahwa KPV 1% dapat memberikan

efek sebagai antiinflamasi yang hampir sama dengan EEBT 1% dan EEBT 1,5%.

Pada kelompok EEBT 1% memiliki nilai rerata persentase ekspresi COX-

2 sebesar 47.7100 ± 2.65788, berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan KPV 1%

dan EEBT 1,5%. Hasil tersebut menunjukkan bahwa EEBT 1% dapat

memberikan efek sebagai antiinflamasi pada kulit punggung mencit yang ditandai

dengan adanya penurunan persentase ekspresi COX-2. EEBT 1% memiliki hasil

yang berbeda tidak bermakna atau hampir sama dengan EEBT 1,5% yang mana

EEBT 1,5% memiliki rerata sebesar 42.4400 ± 3.73750.

Berdasarkan hasil analisis statistik tersebut, konsentrasi kelompok EEBT

yang dipilih sebagai konsentrasi optimum adalah EEBT 1,5% karena EEBT 1,5%

dapat memberikan efek antiinflamasi yang paling baik pada mencit dibandingkan

dengan konsentrasi EEBT lainnya. Efek antiinflamasinya dilihat dari penurunan

persentase ekspresi COX-2 yang hasilnya berbeda bermakna dengan kelompok

KNK 4,5%, walaupun penurunan ekspresi COX-2 nya tidak tinggi seperti pada

kelompok KPV 1%.

Profil rerata persentase (%) ekspresi COX-2 pada kelompok kontrol dan

kelompok perlakuan dapat dilihat pada gambar 8 berikut.


25

Gambar 8. Rerata Persentase (%) Ekspresi COX-2 Pada Mencit Setelah Pemberian Ekstrak

Etanol Bunga Telang secara Topikal.

*Keterangan :

= Kontrol Negatif Karagenin (KNK) 4,5%.





Berdasarkan diagram batang tersebut, menunjukkan bahwa rerata ekspresi

COX-2 paling tinggi terdapat pada KNK 4,5%. Kemudian, kelompok EEBT 0,5%

juga menunjukkan rerata ekspresi COX-2 yang cukup besar setelah KNK 4,5%,

yang menunjukkan bahwa KNK 4,5% dapat menginduksi terjadinya inflamasi

pada kulit punggung mencit yang terinduksi karagenin dilihat dari peningkatan

ekspresi COX-2 yang dihasilkan. Hal tersebut juga menunjukkan bahwa EEBT

0,5% tidak dapat memberikan efek sebagai antiinflamasi dibandingkan dengan

kelompok lainnya, yaitu KPV 1%, EEBT 1%, dan EEBT 1,5%.

Persentase penekanan ekspresi COX-2 diperoleh dengan cara menghitung

secara langsung (direct counting) sel neutrofil yang mengekspresikan COX-2

menggunakan mikroskop binokuler dengan perbesaran 400 kali. Pembacaan

dilakukan setelah pengecatan HE dan immunohistokimia pada histopatologi kulit

punggung mencit yang terinduksi karagenin dan diberikan sediaan topikal ekstrak

etanol bunga telang. Sel neutrofil yang mengekspresikan COX-2 akan

0.00%

20.00%

40.00%

60.00%

80.00%

100.00%

120.00%

Kelompok

Rer

ata

Per

sen

tase

(%

) Ek

spre

si C

OX

-2

KNK 4,5%

KPV 1%

EEBT 0,5%

EEBT 1%

EEBT 1,5%


26

mengasilkan warna coklat/gelap, sedangkan sel neutrofil yang tidak

mengekspresikan COX-2 akan berwarna ungu. Hasil direct counting akan

dihitung untuk memperoleh hasil persentase ekspresi COX-2 pada masing-masing

kelompok kontrol dan perlakuan. Kemudian, hasil persentase ekspresi COX-2

pada masing-masing kelompok akan dihitung menggunakan rumus sebagai

berikut :

*Keterangan :

A = Persentase (%) Rerata Ekspresi COX-2 Kontrol Negatif Karagenin 4,5%

B = Persentase (%) Rerata Ekspresi COX-2 Kontrol Positif atau Kelompok Perlakuan

Berikut merupakan tabel profil persentase (%) penekanan ekspresi COX-2

pada kulit punggung mencit yang terinduksi karagenin.

Tabel 4. Persentase (%) Penekanan Ekspresi COX-2 Pada Kelompok Kontrol dan

Kelompok Perlakuan Pada Mencit Terinduksi Karagenin.

Kode Kelompok

Rerata

%Ekspresi

COX-2

%Penekanan

Ekspresi

COX-2

KNK 4,5% Kontrol Negatif Karagenin 4,5% 91,94% -

KPV 1% Kontrol Positif Voltaren 1% 41,36% 55,01%

EEBT 0,5% Ekstrak Etanol Bunga Telang 0,5% 90,90% 1,13%

EEBT 1% Ekstrak Etanol Bunga Telang 1% 47,71% 48,11%

EEBT 1,5% Ekstrak Etanol Bunga Telang 1,5% 42,44% 53,84%

Berdasarkan tabel di atas, dinyatakan bahwa persentase (%) penekanan

ekspresi COX-2 paling besar pada kelompok KPV 1%, yaitu 55,01%. Kemudian,

dilanjutkan dengan kelompok EEBT 1,5% dengan persentase sebesar 53,84%.

Selanjutnya adalah EEBT 1% dengan persentase sebesar 48,11%, lalu yang

terakhir adalah EEBT 0,5% dengan persentase sebesar 1,13%. Hasil tersebut

menunjukkan bahwa EEBT 1% dan 1,5% dapat memberikan efek sebagai

antiinflamasi yang dapat dilihat dari persentase penekanan terhadap ekspresi

COX-2 yang cukup besar, walaupun tidak sebesar pada kontrol positif.


27

Sedangkan, pada kelompok EEBT 0,5% menunjukkan penekanan terhadap

ekspresi COX-2 yang paling rendah sehingga EEBT 0,5% dinyatakan tidak

memberikan efek sebagai antiinflamasi dibandingkan dengan kelompok perlakuan

lainnya. Kemudian, KNK 4,5% digunakan sebagai pembanding terhadap

kelompok lainnya karena KNK 4,5% merupakan kontrol negatif yang hanya

diinduksi karagenin 4,5% tanpa adanya intervensi lain. Oleh karena itu, persentase

ekspresi COX-2 pada KNK 4,5% dibandingkan dengan kelompok lainnya agar

diketahui berapa persentase penekanan COX-2 yang dapat dihasilkan oleh

kelompok kontrol positif dan kelompok perlakuan untuk menentukan efektivitas

antiinflamasi pada masing-masing kelompok. Profil persentase (%) penekanan

ekspresi COX-2 pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan dapat dilihat

pada gambar 9 berikut.

Gambar 9. Persentase (%) Penekanan Ekspresi COX-2 Pada Kelompok Kontrol Positif dan

Kelompok Perlakuan.

*Keterangan :





Berdasarkan diagram batang di atas, menunjukkan hasil bahwa

penekanan ekspresi COX-2 paling tinggi pada kelompok KPV 1%. Kemudian,

persentase penekanan ekspresi COX-2 tertinggi kedua adalah kelompok EEBT

0.00%

10.00%

20.00%

30.00%

40.00%

50.00%

60.00%

Kelompok

Per

sen

tase

(%

) P

enek

anan

Ek

spre

si C

OX

-2

KPV 1%

EEBT 0,5%

EEBT 1%

EEBT 1,5%


28

1,5% dan diikuti oleh kelompok EEBT 1%. Persentase penekanan terendah

ditunjukkan oleh kelompok EEBT 0,5% yang menunjukkan bahwa EEBT dengan

konsentrasi 0,5% tidak dapat memberikan efek sebagai antiinflamasi pada kulit

punggung mencit yang terinduksi karagenin.

Basis krim yang digunakan untuk membuat sediaan topikal ekstrak etanol

bunga telang adalah Biocream® yang diperoleh dari Apotek Sari Dewi Paingan,

Maguwoharjo, Depok, Sleman, Yogyakarta. Biocream® ini bersifat ambifilik

yang bersifat sebagai A/M atau M/A (Yanhendri and Yenny, 2012). Pada

penelitian ini, tidak dilakukan pengujian Biocream® sebagai kelompok kontrol

karena menurut penelitian Wulansari et al., (2018), kelompok basis krim

Biocream® tidak menunjukkan hasil penurunan selisih tebal lipat kulit selama

pengamatan enam jam yang berarti bahwa Biocream® tidak mempengaruhi dan

tidak memberikan efek sebagai antiinflamasi sama seperti dengan kelompok

kontrol negatif.

Pada penelitian ini, terjadi penurunan migrasi jumlah sel neutrofil dan

penurunan ekspresi COX-2 yang menunjukkan perbedaan hasil yang cukup

signifikan antar konsentrasi pada kelompok perlakuan setelah diujikan pada kulit

punggung mencit terinduksi karagenin. Pada ketiga variasi konsentrasi dosis

sediaan topikal ekstrak etanol bunga telang terdapat hubungan kenaikan dosis

dengan efektivitas sebagai antiinflamasi karena semakin tinggi konsentrasi ekstrak

yang diberikan menghasilkan penurunan rerata jumlah sel neutrofil dan rerata

persentase penekanan ekspresi COX-2 yang semakin baik. Hal tersebut

menunjukkan bahwa semakin besar dosis yang digunakan memberikan efek

antiinflamasi yang semakin baik. Kemudian, untuk pengobatan tradisional sebagai

antiinflamasi dapat dipilih dosis EEBT 1,5% sebagai konsentrasi optimum karena

efektivitasnya sebagai antiinflamasi paling baik dibandingkan dengan konsentrasi

EEBT yang lainnya dilihat dari penurunan migrasi jumlah sel neutrofil dan

penekanan ekspresi COX-2.

Metabolit sekunder yang terkandung pada bunga telang, seperti flavonoid

dan antosianin dapat memberikan efek sebagai antiinflamasi setelah dilakukan

pengujian pada kulit punggung mencit. Hal tersebut dapat disebabkan oleh karena


29

flavonoid termasuk dalam senyawa fenolik alam yang potensial sebagai

antioksidan. Antioksidan tersebut dapat berperan sebagai antiinflamasi dengan

berbagai cara, yaitu : (1) Menghambat produksi oksidan (O2) oleh neutrofil,

monosit dan makrofag. Penghambatan produksi oksidan (O2) akan mengurangi

pembentukan H2O2 yang mengakibatkan produksi HOC1 dan juga OH ikut

terhambat. (2) Menghambat langsung oksidan reaktif seperti radikal hidroksil

(OH) dan asam hipoklorid (HOC1)16

dengan dihambatnya oksidasi dari asam

arakidonat dan penangkapan radikal bebas yang berperan, maka proses

pembentukan prostaglandin akan terhambat. Akibat terhambatnya prostaglandin,

inflamasi pada jaringan menjadi berkurang. Semakin banyak senyawa flavonoid

sebagai antioksidan yang mampu menangkap radikal penginduksi inflamasi, maka

kemampuannya untuk menghambat inflamasi juga semakin besar (Djunarko et al.,

2016). Antioksidan dalam flavonoid dapat mengurangi inflamasi dengan

menghambat aktivasi NFkB sehingga menghambat sintesa IL-1 dan TnFα.

Penghambatan sintesa IL-1 dan TnFα menyebabkan tidak terjadinya vasodilatasi

pembuluh darah dan peningkatan permeabilitas kapiler, serta menghambat adhesi

neutrofil pada dinding pembuluh darah. Penghambatan adhesi neurofil pada

dinding pembuluh darah menyebabkan infiltrasi neutrofil ke dalam jaringan turun

sehingga inflamasi akan berkurang (Kusumastuti et al., 2014).

Kemudian, antosianin dapat berperan sebagai antiinflamasi karena

antosianin memiliki kemampuan untuk menghambat tingkat ekspresi protein

COX-2 dan juga dapat menghambat aktivitas sintesa prostaglandin. Antosianin

merupakan bagian dari flavonoid memiliki efek fisiologis terkuat dari senyawa

tanaman lain. Struktur fenol dari senyawa antosianin dapat menangkap radikal

bebas dan berperan sebagai antioksidan (Kumar and More, 2019). Sebagai

senyawa bioaktif, adanya susunan ikatan rangkap terkonjugasi pada struktur

antosianin membuat antosianin mampu memfungsikan antosianin sebagai

senyawa penghancur dan penangkal radikal bebas alami atau yang lebih dikenal

sebagai senyawa antioksidan alami pada manusia (Priska et al., 2018).


30

KESIMPULAN

Sediaan topikal ekstrak etanol bunga telang (Clitoria ternatea L.) dengan

konsentrasi 1% dan 1,5% memiliki efek sebagai antiinflamasi yang dapat dilihat

dari penurunan jumlah migrasi sel neutrofil dan penurunan ekspresi COX-2 pada

daerah inflamasi kulit punggung mencit betina galur Swiss yang terinduksi

karagenin.

SARAN

Perlu dilakukan lagi penelitian terkait dengan khasiat tanaman telang

sebagai antiinflamasi dengan menggunakan bagian tanaman telang lainnya,

seperti daun, akar, dan batangnya dalam bentuk sediaan topikal ataupun oral.


31

DAFTAR PUSTAKA

Agustin, R., Dewi, N., Rahardja, S.D., 2016. Efektivitas Ekstrak Ikan Haruan

(Channa striata) dan Ibuprofen terhadap Jumlah Sel Neutrofil pada Proses

Penyembuhan Luka Studi in Vivo pada Mukosa Bukal Tikus (Rattus

norvegicus) Wistar. Jurnal Kedokteran Gigi, 1(1), 69.

Al-snafi, A.E., 2016. Pharmacological Importance of Clitoria ternatea - A Review.

IOSR Journal of Pharmacy, 6(3), 68.

Alfaridz, F., Amalia, R., 2015. Review Jurnal : Klasifikasi dan Aktivitas

Farmakologi dari Senyawa Aktif Flavonoid. Farmaka, 16, 1–9.

Andriani, D., Murtisiwi, L., 2018. Penetapan Kadar Fenolik Total Ekstrak Etanol

Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) dengan Spektrofotometri UV Vis.

Cendekia Journal of Pharmacy, 2(1), 35.

Depkes RI, 1979. Farmakope Indonesia, 3rd ed, Departemen Kesehatan Republik

Indonesia, Jakarta.

Djunarko, I., Yanthre, D., Manurung, S., Sagala, N., 2016. Efek Antiinflamasi

Infusa Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) dan Kombinasi dengan Infusa

Daun Iler (Coleus atropurpureus L. Benth) Dosis 140 mg/kg BB Pada Udema

Telapak Kaki Mencit Betina Terinduksi Karagenin. Prosiding Rakernas dan

Pertemuan Ilmiah Tahunan Ikatan Apoteker Indonesia, 6–15.

Ergina., Nuryanti, S., Pursitasari, I.D., 2014. Uji Kualitatif Senyawa Metanolit

Sekunder pada Daun Palado (Agave angustifolia) yang Diekstraksi dengan

Pelarut Air dan Etanol. Jurnal Akademika Kimia, 3(3), 169.

FHI, 2008. Farmakope Herbal Indonesia Edisi I.

Futagami, A., Ishizaki, M., Fukuda, Y., Kawana, S., Yamanaka, N., 2002. Wound

Healing Involves Induction of Cyclooxygenase-2 Expression in Rat Skin.

Laboratory Investigation, 82(11), 1505.

Groves, R.W., Mizutani, H., Kieffer, J.D., Kupper, T.S., 1995. Inflammatory Skin

Disease in Transgenic Mice That Express High Levels of Interleukin 1α in

Basal Epidermis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the

United States of America, 92(25), 11876.


32

Handayani, S., Wirasutisna, K.R., Insanu, M., 2017. Penapisan Fitokimia Dan

Karakterisasi Simplisia Daun Jambu Mawar ( Syzygium jambos Alston)

Selpida. Jf Fik Uinam, 5(3), 179–180.

Ikawati, Z., Nugroho, A.E., Astutiningsih, W., 2014. Penekanan Ekspresi Enzim

COX-2 pada Kultur Sel Raji oleh Ekstrak Kloroform Daun Cangkring

(Erythrina fusca Lour.). Jurnal Universitas Gadjah Mada, 3.

Kemenkes RI, 2014. Persyaratan Mutu Obat Tradisional. BPOM RI, 8.

Khristian, E., Inderiati, D., 2017. Sitohistoteknologi. Kementrian Kesehatan

Republik Indonesia, 208–217.

Kumar, M., More, 2019. Phytochemical Analysis and Bioactivity of Selected

Medicinal Plant of Butterfly-Pea (Clitoria ternatea L.) Used by Kolam Tribe

Addjoing Region of Telangana and Maharashtra States. The Pharma

Innovation Journal, 8(1), 418–420.

Kusrini, E., Tristantini, D., Izza, N., 2017. Uji Aktivitas Ekstrak Bunga Telang

(Clitoria ternatea L.) sebagai Agen Anti-Katarak. Jurnal Jamu Indonesia,

2(1), 30.

Kusumastuti, E., Handajani, J., Susilowati, H., 2014. Ekspresi COX-2 dan Jumlah

Neutrofil Fase Inflamasi pada Proses Penyembuhan Luka Setelah Pemberian

Sistemik Ekstrak Etanolik Rosela (Hibiscus sabdariffa) (studi in vivo pada

Tikus Wistar). Jurnal Universitas Gadjah Mada, 21(1), 18.

Mariana, L., Andayani, Y., Gunawan, E.R., 2014. Analisis Senyawa Flavonoid

Hasil Fraksinasi Ekstrak Diklorometana Daun Keluwih (Artocarpus

camansi). Chemistry Progress, 6(2), 52.

Maulida, R., Guntarti, A., 2015. Pengaruh Ukuran Partikel Beras Hitam (Oryza

sativa L.) terhadap Rendemen Ekstrak dan Kandungan Total Antosianin.

Pharmaciana, 5(1), 13.

Necas, J., Bartosikova, L., 2013. Carrageenan : A Review. Veterinarni Medicina,

58(4), 187–188.

Neliyanti, Idiawati, N., 2014. Ekstraksi dan Uji Stabilitas Zat Warna Alami dari

Buah Lakum (Cayratia trifolia (L.) Domin). JKK, 3(2), 35.

Novianti, D., 2017. Potensi dan Pengembangan Jenis Tanaman Obat di Desa


33

Meranjat Kecamatan Indralaya Selatan. ISSN, 14(1), 45–46.

Nugrahani, R., Andayani, Y., Hakim, A., 2016. Skrining Fitokimia dari Ekstrak

Buah Buncis (Phaseolus vulgaris L.) dalam Sediaan Serbuk. Jurnal

Penelitian Pendidikan IPA, 2(1), 99.

Nur, A., Ma’ruf, D., Sari, I.W., Djide, N., Kabo, P., 2018. Uji Efek Analgetik dan

Antiinflamasi Ekstrak Etanol 70% Daun Beruwas Laut (Scaevola taccada

(Gaertn.( Roxb.) pada Tikus Putih (Rattus novergicus). Media Farmasi,

14(1), 62.

Obouayeba, A.P., Diarrassouba, M., Soumahin, E.F., Kouakou, H., 2015.

Phytochemical Analysis , Purification and Identification of Hibiscus

Anthocyanins. Journal of Pharmaceutical, Chemical, and Biological, 3(2),

159.

PDR, 2020. Diclofenac Sodium Topikal, https://www.pdr.net/drug-

summary/Diclofenac-Sodium-Topical-Solution-1-5--diclofenac-sodium-

24018., accessed 27 Januari 2020.

Ponnusamy, S., Gnanaraj, W.E., Antonisamy, J.M., 2014. Flavonoid Profile of

Clitoria ternatea Linn. Traditional Medicine Journal, 19(1), 1.

Prihandari, R., Muniroh, L., 2016. Jus Semangka Menurunkan Neutrofil Tikus

Jantan Galur Wistar yang Terpapar Asap Rokok. Media Gizi Indonesia,

11(2), 170.

Priska, M., Peni, N., Carvallo, L., Ngapa, Y.D., 2018. Review : Antosianin dan

Pemanfaatannya. Cakra Kimia E-Journal of Applied Chemistry, 6(2), 84.

Riskesdas, 2018. Hasil Utama Riskesdas 2018. Kementrian Kesehatan Republik

Indonesia, 50–57.

Riyani, A., Adawiah, R., 2015. Ekstraksi Flavonoid Metode Soxhletasi dari

Batang Pohon Pisang Ambon (Musa paradisiaca var. sapientum) dengan

Berbagai Jenis Pelarut. Prosiding Simposium Nasional Inovasi dan

Pembelajaran Sains (Snips), 626.

Rosales, C., 2018. Neutrophil : A Cell with Many Roles in Inflammation or

Several Cell Types. Frontiers in Physiology, 9, 1.

Samatha, T., Srinivas, P., Shyamsundarachary, R., Rajinikanth, M., Swamy, N.R.,


34

2012. Phytochemical Analysis of Seeds, Stem Bark and Root of An

Endangered Medicinal Forest Tree Oroxylum indicum (L) Kurz.

International journal of pharma and bio sciences, 3(3), 1066.

Sani, R.N., Nisa, F.C., Andriani, R.D., Maligan, J.M., 2014. Analisis Rendemen

dan Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Mikroalga Laut Tetraselmis chuii.

Jurnal Pangan dan Agroindustri, 2(2), 124.

Setiabudi, D.., Tukiran, 2017. Uji Skrining Fitokimia Ekstrak Metanol Kulit

Batang Tumbuhan Klampok Watu (Syzygium litorale). UNESA Journal of

Chemistry, 6(3), 159.

Soeratri, W., Erawati, T., Rahmatika, D., Rosita, N., 2014. Penentuan Dosis Asam

p-metoksisinamat (APMS) Sebagai Antiinflamasi Topikal dan Studi

Penetrasi APMS Melalui Kulit Tikus dengan dan Tanpa Stratum Korneum.

Jurnal Farmasi dan Ilmu Kefarmasian Indonesia, 1(1), 28.

Solihin, I., Silitonga, F.S., Khoirunnisa, F., 2013. Penentuan Trayek pH Ekstraksi

Daun Andong Merah (Cordyline fruticosa L.) dan Buah Senduduk

(Melastoma malabathricum L.) sebagai Indikator Asam dan Basa. Journal of

Chemical Information and Modeling, 53(9), 3–4.

Stankov, S. V, 2012. Definition of Inflammation, Causes of Inflammation and

Possible Anti-inflammatory Strategies. The Open Inflammation Journal, 5, 2.

Sukmawati, Yuliet, Hardani, R., 2015. Uji Aktivitas Antiinflamasi Ekstrak Etanol

Daun Pisang Ambon (Musa paradisiaca L.) terhadap Tikus Putih (Rattus

norvegicus L.) yang Diinduksi Karagenan. Galenika Journal of Pharmacy,

1(2), 130.

Supiyanti, W., Dwi, E., Dan, W., Kusmita, L., 2010. Uji Aktivitas Antioksidan

dan Penentuan Kandungan Antosianin Total Kulit Buah Manggis (Garcinia

Mangostana L). Majalah Obat Tradisional, 15(2), 67.

Sutedi, E., 2013. Potensi Kembang Telang (Clitoria ternatea) sebagai Tanaman

Pakan Ternak. Wartazoa, 23(2), 52–53.

Unitly, A.J.A., Sahertian, D.E., 2010. Deteksi Kandungan Antioksidan

Superoksida Dismutase (SOD) pada Organ Ginjal Tikus Ratus norvegicus

dengan Pewarnaan Imunohistokimia. Seminar Nasional Basic Science II, 16.


35

Vifta, R.L., Wansyah, M.A., Hati, A.K., 2017. Perbandingan Total Rendemen dan

Skrining Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) secara

Mikrodilusi. Journal of Science and Applicative Technology, 1(2), 90.

Virliantari, D.A., Maharani, A., Lestari, U., Ismiyati, 2018. Pembuatan Indikator

Alami Asam-Basa daei Ekstrak Kulit Bawang Merah (Allium ascalonicum

L.). Seminar Nasional Sains dan Teknologi, 1(1), 4.

Wahyuni, N.L.D.A., 2018. The Unity Color Of Kembang Telang. Institut Seni

Indonesia Denpasar, 4–5.

Wulansari, E.D., Wahyuono, S., Widyarini, S., 2018. Aktivitas Antiinflamasi

Topikal Ekstrak Etanolik Rimpang Bangle ( Zingiber cassumunar Roxb .)

pada Mencit yang Diinduksi Karagenin. Traditional Medicine Journal,

23(2), 124.

Yanhendri, Yenny, S.W., 2012. Berbagai Bentuk Sediaan Topikal dalam

Dermatologi. CDK-194, 39(6), 425.


36

LAMPIRAN

Lampiran 1. Alat dan Bahan yang Digunakan dalam Penelitian

Gambar 1. Biocream® sebagai Basis Ekstrak.

Gambar 2. Serbuk Karagenin yang Digunakan sebagai Kontrol Negatif.

Gambar 3. Alat Spuit Injeksi.


37

Gambar 4. Tanaman Telang (Clitoria ternatea L.) (Sutedi, 2013).

Gambar 5. Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) (Wahyuni, 2018).

Gambar 6. Serbuk Bunga Telang (Clitoria ternatea L.).


38

Gambar 7. Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatea L.).

Gambar 8. Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) yang Sudah Dibuat dalam Basis

Biocream®. (a) Konsentrasi 0,5%, (b) Konsentrasi 1%, (c) Konsentrasi 1,5%.

Gambar 9. Krim Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) Konsentrasi 0,5%.

(a) (b) (c)


39

Gambar 10. Krim Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) Konsentrasi 1%.

Gambar 11. Krim Ekstrak Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) Konsentrasi 1,5%.

Gambar 12. Hasil Uji Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria ternatea L.). (a) Uji Flavonoid,

(b) dan (c) Uji Antosianin, (d) Hasil Uji Flavonoid dan Uji Antosianin.

(a) (b) (c) (d)


40

Gambar 13. Hasil Uji Homogenitas Krim Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria ternatea

L.). (a) EEBT 0,5%, (b) EEBT 1% dan (c) EEBT 1,5%.

Lampiran 2. Hewan Uji yang Digunakan dalam Penelitian

Gambar 14. Mencit Betina Galur Swiss dan Kulit Punggung Mencit Sesudah Dicukur.

Gambar 15. Kulit Punggung Mencit yang Diinjeksikan Karagenin.

(a) (b) (c)


41

Gambar 16. Kulit Punggung Mencit yang Dioleskan Ekstrak Etanol Bunga Telang (Clitoria

ternatea L.).

Lampiran 3. Pemotongan Kulit Untuk Histopatologi

Gambar 17. Pemotongan Kulit Punggung Mencit.

Gambar 18. Kulit Punggung Mencit yang Diawetkan dengan Formalin 10%.


42

Lampiran 4. Hasil Preparat Histopatologi Kulit Punggung Mencit Galur

Swiss

Gambar 19. Preparat Kontrol Negatif Karagenin, (a) Pewarnaan HE dan (b) Pewarnaan

IHC.

Gambar 20. Preparat Kontrol Positif Voltaren, (a) Pewarnaan HE dan (b) Pewarnaan IHC.

Gambar 21. Preparat Kontrol Perlakuan Bunga Telang Hasil Pewarnaan HE, (a)

Konsentrasi 0,5%, (b) Konsentrasi 1%, dan (c) Konsentrasi 1,5%.

(a) (b) (c)

(a) (b)

(a) (b)


43

Gambar 22. Preparat Kontrol Perlakuan Bunga Telang Hasil Pewarnaan IHC, (a)

Konsentrasi 0,5%, (b) Konsentrasi 1%, dan (c) Konsentrasi 1,5%.

(a) (b) (c)


44

Lampiran 5. Surat Keterangan Hasil Determinasi Tanaman Telang (Clitoria

ternatea L.)


45

Lampiran 6. Surat Ethical Clearance


46

Lampiran 7. Surat Kalibrasi Jangka Sorong


47


48

Lampiran 8. Hasil Analisis Statistik Rerata Jumlah Sel Neutrofil pada

Masing-Masing Kelompok

Descriptives

Mencit Statistic Std. Error

Mean

Kontrol

Negatif

Karagenin

4,5%

Mean 28.0000 2.36112

95% Confidence

Interval for Mean

Lower Bound 21.4445

Upper Bound 34.5555

5% Trimmed Mean 27.8517

Median 25.0000

Variance 27.874

Std. Deviation 5.27963

Minimum 23.67

Maximum 35.00

Range 11.33

Interquartile Range 9.83

Skewness .713 .913

Kurtosis -2.464 2.000

Kontrol

Positif

Voltaren

1%

Mean 9.4680 .74164

95% Confidence Interval for Mean

Lower

Bound 7.4089

Upper

Bound 11.5271


Median 10.3300

Variance 2.750


Minimum 7.67

Maximum 11.00


49

Range 3.33


Skewness -.516 .913

Kurtosis -3.199 2.000

EEBT

0,5%

Mean 24.6680 1.74563


Lower

Bound 19.8214

Upper

Bound 29.5146


Median 25.6700

Variance 15.236


Minimum 19.00

Maximum 29.67

Range 10.67


Skewness -.402 .913

Kurtosis .956 2.000

EEBT 1%

Mean 15.1360 1.28497


Lower

Bound 11.5683

Upper

Bound 18.7037


Median 14.6700

Variance 8.256


Minimum 11.67


50

Maximum 19.67

Range 8.00


Skewness .902 .913

Kurtosis 2.399 2.000

EEBT

1,5%

Mean 9.6000 1.00294


Lower

Bound 6.8154

Upper

Bound 12.3846


Median 9.0000

Variance 5.029


Minimum 7.00

Maximum 12.67

Range 5.67


Skewness .437 .913

Kurtosis -1.027 2.000

Lampiran 9. Hasil Analisis Statistik Uji Normalitas dengan Uji Shapiro-Wilk

Tests of Normality

Mencit

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

Mean

Kontrol Negatif

Karagenin 4,5% .315 5 .117 .816 5 .110

Kontrol Positif

Voltaren 1% .298 5 .166 .784 5 .060

EEBT 0,5% .201 5 .200* .962 5 .821


51

EEBT 1% .319 5 .107 .882 5 .318

EEBT 1,5% .205 5 .200* .968 5 .862

a. Lilliefors Significance Correction

*. This is a lower bound of the true significance.

Test of Homogeneity of Variances

Mean

Levene Statistic df1 df2 Sig.

3.049 4 20 .041

Lampiran 10. Hasil Pengujian ANOVA Rerata Jumlah Sel Neutrofil pada

Masing-Masing Kelompok

ANOVA

Mean

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 1470.314 4 367.579 31.074 .000

Within Groups 236.584 20 11.829

Total 1706.898 24

Lampiran 11. Hasil Pengujian Uji Post Hoc Test dengan Uji Tamhane

Multiple Comparisons

Dependent

Variable:Mean

(I) Mencit (J) Mencit

Mean

Difference

(I-J)

Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

Tamhane

Kontrol

Negatif

Karagenin

4,5%

Kontrol

Positif

Voltaren

1%

18.53200* 2.47486 .008 6.4470 30.6170


52

EEBT

0,5% 3.33200 2.93634 .968 -8.2131 14.8771

EEBT 1% 12.86400* 2.68813 .028 1.4773 24.2507

EEBT

1,5% 18.40000

* 2.56530 .006 6.7548 30.0452

Kontrol

Positif

Voltaren

1%

Kontrol

Negatif

Karagenin

4,5%

-18.53200* 2.47486 .008 -30.6170 -6.4470

EEBT

0,5% -15.20000

* 1.89664 .003 -23.8094 -6.5906

EEBT 1% -5.66800 1.48364 .075 -11.8519 .5159

EEBT

1,5% -.13200 1.24736 1.000 -5.0362 4.7722

EEBT

0,5%

Kontrol

Negatif

Karagenin

4,5%

-3.33200 2.93634 .968 -14.8771 8.2131

Kontrol

Positif

Voltaren

1%

15.20000* 1.89664 .003 6.5906 23.8094

EEBT 1% 9.53200* 2.16757 .028 1.0026 18.0614

EEBT

1,5% 15.06800

* 2.01323 .002 6.6664 23.4696

EEBT 1%

Kontrol

Negatif

Karagenin

4,5%

-12.86400* 2.68813 .028 -24.2507 -1.4773

Kontrol

Positif

Voltaren

1%

5.66800 1.48364 .075 -.5159 11.8519

EEBT

0,5% -9.53200

* 2.16757 .028 -18.0614 -1.0026


53

Lampiran 12. Hasil Analisis Statistik Perhitungan Rerata Persentase (%)

Ekspresi COX-2 Pada Masing-Masing Kelompok

Descriptives

Mencit Statistic Std. Error

Mean Kontrol Negatif

Karagenin 4,5%

Mean 91.9400 1.95870

95% Confidence

Interval for Mean

Lower Bound 86.5018

Upper Bound 97.3782


Median 94.1600

Variance 19.183


Minimum 86.36

Maximum 95.54

Range 9.18


EEBT

1,5% 5.53600 1.63004 .098 -.8130 11.8850

EEBT

1,5%

Kontrol

Negatif

Karagenin

4,5%

-18.40000* 2.56530 .006 -30.0452 -6.7548

Kontrol

Positif

Voltaren

1%

.13200 1.24736 1.000 -4.7722 5.0362

EEBT

0,5% -15.06800

* 2.01323 .002 -23.4696 -6.6664

EEBT 1% -5.53600 1.63004 .098 -11.8850 .8130

*. The mean difference is

significant at the 0.05 level.


54

Skewness -.625 .913

Kurtosis -2.744 2.000

Kontrol Positif

Voltaren 1%

Mean 41.3540 1.82401


Lower

Bound 36.2897

Upper

Bound 46.4183


Median 41.5600

Variance 16.635


Minimum 34.69

Maximum 45.33

Range 10.64


Skewness -1.335 .913


EEBT 0,5%

Mean 90.9040 .45578


Lower

Bound 89.6386

Upper

Bound 92.1694


Median 90.9100

Variance 1.039


Minimum 89.29

Maximum 92.07

Range 2.78


55


Skewness -.998 .913


EEBT 1%

Mean 47.7100 2.65788


Lower

Bound 40.3305

Upper

Bound 55.0895


Median 49.2100

Variance 35.322


Minimum 40.48

Maximum 53.49

Range 13.01


Skewness -.368 .913

Kurtosis -2.713 2.000

EEBT 1,5%

Mean 42.4400 3.73750


Lower

Bound 32.0630

Upper

Bound 52.8170


Median 37.7400

Variance 69.844


Minimum 34.55

Maximum 53.57


56

Range 19.02


Skewness .670 .913

Kurtosis -2.263 2.000

Lampiran 13. Hasil Uji Normalitas dengan Uji Shapiro Wilk

Tests of Normality

Mencit

Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df Sig.

Mean

Kontrol Negatif

Karagenin 4,5% .294 5 .183 .813 5 .103

Kontrol Positif

Voltaren 1% .298 5 .169 .887 5 .342

EEBT 0,5% .302 5 .152 .917 5 .508

EEBT 1% .209 5 .200* .878 5 .302

EEBT 1,5% .313 5 .123 .860 5 .228

a. Lilliefors Significance Correction

*. This is a lower bound of the true significance.

Test of Homogeneity of Variances

Mean

Levene Statistic df1 df2 Sig.

7.098 4 20 .001


57

Lampiran 14. Hasil Pengujian ANOVA Rerata Persentase (%) Ekspresi

COX-2 pada Masing-Masing Kelompok

ANOVA

Mean

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 13705.594 4 3426.399 120.629 .000

Within Groups 568.090 20 28.405

Total 14273.684 24

Lampiran 15. Hasil Pengujian Uji Post Hoc Test dengan Uji Tamhane

Multiple Comparisons

Dependent

Variable:Mean

(I) Mencit (J) Mencit

Mean

Difference

(I-J)

Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

Tamhane

Kontrol

Negatif

Karagenin

4,5%

Kontrol

Positif

Voltaren 1%

50.58600* 2.67648 .000 40.3538 60.8182

EEBT 0,5% 1.03600 2.01103 1.000 -9.3061 11.3781

EEBT 1% 44.23000* 3.30165 .000 31.2407 57.2193

EEBT 1,5% 49.50000* 4.21964 .000 31.4361 67.5639

Kontrol

Positif

Voltaren

1%

Kontrol

Negatif

Karagenin

4,5%

-50.58600* 2.67648 .000 -60.8182 -40.3538

EEBT 0,5% -49.55000* 1.88010 .000 -59.1185 -39.9815

EEBT 1% -6.35600 3.22357 .605 -19.2250 6.5130

EEBT 1,5% -1.08600 4.15883 1.000 -19.2512 17.0792

EEBT

0,5%

Kontrol

Negatif

Karagenin

4,5%

-1.03600 2.01103 1.000 -11.3781 9.3061


58

Kontrol

Positif

Voltaren 1%

49.55000* 1.88010 .000 39.9815 59.1185

EEBT 1% 43.19400* 2.69668 .001 28.8538 57.5342

EEBT 1,5% 48.46400* 3.76518 .002 28.0074 68.9206

EEBT 1%

Kontrol

Negatif

Karagenin

4,5%

-44.23000* 3.30165 .000 -57.2193 -31.2407

Kontrol

Positif

Voltaren 1%

6.35600 3.22357 .605 -6.5130 19.2250

EEBT 0,5% -43.19400* 2.69668 .001 -57.5342 -28.8538

EEBT 1,5% 5.27000 4.58620 .966 -12.9003 23.4403

EEBT

1,5%

Kontrol

Negatif

Karagenin

4,5%

-49.50000* 4.21964 .000 -67.5639 -31.4361

Kontrol

Positif

Voltaren 1%

1.08600 4.15883 1.000 -17.0792 19.2512

EEBT 0,5% -48.46400* 3.76518 .002 -68.9206 -28.0074

EEBT 1% -5.27000 4.58620 .966 -23.4403 12.9003

*. The mean difference is

significant at the 0.05 level.


59

Lampiran 16. Surat Keterangan Analisis Data Statistik di Pusat Kajian CE

& BU


60

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi dengan judul “Efek

Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Bunga

Telang (Clitoria Ternatea L.) Terhadap Jumlah Sel

Neutrofil dan Ekspresi COX-2 Pada Kulit Mencit

Terinduksi Karagenin” bernama lengkap Ni Made

Kuswindayanti, lahir di Denpasar, 18 Februari 1999,

merupakan anak kedua dari tiga bersaudara pasangan

I Ketut Agus Pancana dan Ni Wayan Wirawati.

Pendidikan formal yang ditempuh penulis, yaitu TK Kumara Lilawati II (2003-

2004), pendidikan Sekolah Dasar di SD Negeri 1 Sukawati (2004-2010),

pendidikan Sekolah Menengah Pertama di SMP Negeri 1 Sukawati (2010-2013),

dan pendidikan Sekolah Menengah Atas di SMA Negeri 3 Denpasar (2013-2016).

Penulis melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata

Dharma pada tahun 2016. Penulis terlibat dalam berbagai organisasi, kepanitiaan,

dan asisten praktikum, antara lain menjadi Koordinator Divisi Hubungan

Masyarakat pada acara Desa Mitra (2016), Anggota Divisi Hubungan Masyarakat

pada acara Seminar Nasional (2017), Anggota UKM Komunitas Mahasiswa

Hindu Dharma (KMHD) Universitas Sanata Dharma (2017), Anggota Divisi

Hubungan Masyarakat pada acara KPU Fakultas Farmasi (2018), Volunteer pada

acara Bakti Sosial YPMJ (2018), Koordinator Divisi Pengabdian Masyarakat

BEMF Farmasi Universitas Sanata Dharma (2018), Koordinator Divisi Acara

pada acara FACTION#3 (2018), Asisten Praktikum Kimia Dasar (2018), penulis

pernah menjadi perempatfinalis dalam kompetisi Clinical Pharmacy Skill Event

(CPSE) KOFEIN di Universitas Airlangga Surabaya (2019), dan penulis pernah

menjadi Juara III dalam kompetisi Pharmanation (National OSCE Competition)

di Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta (2019).


efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol bunga...

Documents