uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak...

51
UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI JINTAN HITAM (Nigella sativa) TERHADAP JUMLAH NEUTROFIL DAN EKSPRESI COX-2 PADA KULIT PUNGGUNG MENCIT YANG DIINDUKSI KARAGENIN SKRIPSI Dijalankan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi Oleh : Amanda Anggraini NIM : 138114005 FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2017 PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Upload: lynhan

Post on 14-Mar-2019

257 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI JINTAN

HITAM (Nigella sativa) TERHADAP JUMLAH NEUTROFIL DAN EKSPRESI

COX-2 PADA KULIT PUNGGUNG MENCIT YANG DIINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI

Dijalankan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Amanda Anggraini

NIM : 138114005

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2017

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 2: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

i

UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI JINTAN

HITAM (Nigella sativa) TERHADAP JUMLAH NEUTROFIL DAN EKSPRESI

COX-2 PADA KULIT PUNGGUNG MENCIT YANG DIINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI

Dijalankan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh :

Amanda Anggraini

NIM : 138114005

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2017

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 3: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

ii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 4: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

iii

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 5: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

iv

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 6: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

v

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 7: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

vi

HALAMAN PERSEMBAHAN

Kupersembahkan karya ini untuk :

Allah SWT

Nabi Muhammad SAW

Ibu Fitryani, Ayah Jhoni Latius, dan Adek

Akbar tercinta

Sahabat-sahabat serta almamaterku

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 8: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

vii

PRAKATA

Penulis memanjatkan puji dan syukur kehadirat Allah SWT atas berkah dan rahmat-

Nya penulis dapat menyelesaikan naskah skripsi yang berjudul “Uji Efek Antiiflamasi

Topikal Ekstrak Etanol Biji Jintan Hitam (Nigella sativa) terhadap Jumlah Neutrofil dan

Ekspresi COX-2 pada Kulit Punggung Mencit yang Diinduksi Karagenin” sebagai syarat

memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) di Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

Penulisan skripsi juga mendapat dukungan dan bantuan dari berbagai pihak, sehingga

penulis mengucapkan terima kasih kepada :

1. Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph.D., Apt, selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata

Dharma, selaku Dosen Pembimbing akademik, atas semua saran dan dukungan yang

membangun.

2. Ibu drh. Sitarina Widyarini, M.P., Ph.D., selaku dosen pembimbing skripsi yang telah

banyak membimbing, memotivasi, mendukung dan membantu dalam berbagai ilmu,

serta bersedia meluangkan waktu membimbing penulis dalam penyusunan skripsi ini.

3. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt., selaku dosen penguji atas dukungan, saran dan

kritik yang membangun, serta masukan kepada penulis dalam menyusun skripsi ini.

4. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt., selaku dosen penguji atas dukungan, saran dan

kritik yang membangun, serta masukan kepada penulis dalam menyusun skripsi ini.

5. Ibu Dr. Dewi Setyaningsih, S.Si., Apt., M.Sc., selaku Kepala Penanggung Jawab

Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta yang telah

memberikan izin peneliti untuk menggunakan sarana dan prasarana seperti laboratorium

dan alat-alat lainnya dalam penelitian ini.

6. Seluruh Dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah memberikan

ilmu pengetahuan dan bimbingan kepada penulis selama proses perkuliahan.

7. Staf laboratorium farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta,

atas bantuan dan kerja sama selama penelitian yang dilakukan di laboratorium farmasi.

8. Keluarga tercinta, terutama Ibu Fitryani dan Ayah Jhoni Latius serta Adek Akbar

Pribadi dan seluruh keluarga, yang selalu memberika semangat, doa, kasih sayang dan

dukungan secara materi maupun non-materi sehingga penulis dapat menyelesaikan

skripsi ini.

9. Teman-teman seperjuangan skripsi “Liana Yudomulyono, Emerentio Renola, Albertin

Gilang K, Veronika Lauren, Dian Pratiwi dan Clara Wina Caesaria” yang selalu

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 9: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

viii

berjuang bersama dan saling memberikan semangat dalam proses penyusunan skripsi

ini.

10. Sahabat-sahabatku, Fira Elsa Septiana, Maria Nareswari, Maria Atika Sukmana Dewi,

Andyni, dan Resty Zama Andiena, atas motivasi dan dukungan, serta doa, sehingga

penulis dapat menyelesaikan skripsi ini.

11. Tanzil Al Rasjid, yang telah memberikan semangat, motivasi dan dukungan, doa, kritik,

saran dan perhatian dalam proses penyusunan skripsi ini hingga selesai.

12. Teman-teman FKK A 2013, dan semua angkatan 2013 yang telah bersama-sama

berproses dan berbagi suka duka di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma

Yogyakarta serta semua pihak yang telah membantu penulis, yang tidak dapat

disebutkan satu persatu.

Penulis menyadari bahwa skripsi ini masih terdapat banyak kekurangan serta masih

jauh dari kesempurnaan. Maka, penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun

dari semua pihak sehingga membuat karya tulis ini menjadi lebih baik. Akhir kata penulis

berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca-nya serta bermanfaat dalam

bidang ilmu kefarmasian serta perkembangan ilmu pengetahuan.

Yogyakarta, 22 November 2016

Penulis

Amanda Anggraini

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 10: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

ix

INTISARI

Jintan hitam (Nigella sativa) tumbuh subur di wilayah tropis dan termasuk golongan

tanaman gulma yang tumbuh semusim dengan tinggi 20-50 cm, famili Ranunculaceae atau

tanaman berbiji. Biji Nigella sativa memiliki kandungan flavonoid. Flavonoid memiliki efek

antiinflamasi. Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan aktivitas antiinflamasi topikal

pada biji Nigella sativa yang dibuktikan dengan penurunan sel neutrofil dan penurunan

ekspresi COX-2 pada mencit terinduksi karagenin. Penelitian dilakukan dengan metode

eksperimental murni dengan rancangan sederhana acak lengkap pola searah. Hewan uji

adalah mencit betina galur Swiss, umur 6-8 minggu (2-3 bulan), berat 20-30 gram dan sehat.

Pengamatan menggunakan metode pengecatan hematoksilin eosin (HE) untuk migrasi sel

neutrofil dan imunohistokimia dengan antibody anti-COX-2 untuk uji persen ekspresi COX-

2. Data yang dianalisis menggunakan uji Shapiro Wilk, dilanjutkan uji One Way ANOVA

(taraf kepercayaan 95%) dilanjutkan dengan Post Hoc Test dengan Scheffe test dan Tamhene

test. Hasil penelitian menunjukkan bahwa persentase rerata sel neutrofil konsentrasi 5; 10;

dan 20% berturut-turut yaitu 69,92; 55,76; dan 43,26% dan rerata ekspresi COX-2 yaitu

83,23; 80,32; dan 82,23 %. Konsentrasi optimum dari ekstrak etanol biji Nigella sativa

adalah 5%. Kesimpulan penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji Nigella sativa

memiliki aktivitas antiinflamasi dengan menurunkan jumlah sel neutrofil dan menurunkan

ekspresi enzim COX-2. Kandungan flavonoid pada biji Nigella sativa berperan sebagai agen

antiiflamasi yang dapat menghambat migrasi sel neutrofil dari pembuluh darah menuju

daerah peradangan dan menghambat pembentukan enzim COX-2 sehingga metabolism

asam arakidonat menjadi mediator prostaglandin terhambat.

Kata Kunci: Biji Nigella sativa, topikal, antiinflamasi, neutrofil, ekspresi COX-2

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 11: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

x

ABSTRACT

Black cumin (Nigella sativa) thrives in tropical regions and included weeds

plants which grew in one season with 20-50 centimeters (cm), Family Ranunculaceae or seed

plants. Nigella sativa seeds contains flavonoids. Flavonoids have anti-inflammatory effects.

This research is to know topical anti-inflammatory effects of Nigella sativa seeds by a

decrease in neutrophil cell and decrease expression of COX-2 in mice induced karagenin.

This research was experimenral study with one way-complete-random design. The animal

used were female mice of Swiss strain, 6-8 weeks (2-3 months) of age, 20-30 grams weight

and healthy. This observations using hematoxylin eosin staining (HE) for migration of

neutrophils cell and immunohistochemistry with antibody anti-COX-2 for percentage of

COX-2 expression. Data were analyzed using Shapiro-Wilk test using One Way ANOVA

test and Post Hoc Test with Scheffe test and Tamhene test with 95% confidence level. The

results showed that the percentage of neutrophil cell by Nigella sativa seeds 5; 10 and 20%

concentration were 69.92; 55.76; and 43.26% and the percentage of COX-2 expression were

83.23; 80.32; and 82.23%. The optimum concentration of ethanol extract of Nigella sativa

seeds is 5%. The conclusion was The ethanol extract of Nigella sativa seeds have anti-

inflammatory effect by decreased in neutrophil cells and decreased expression of COX-2.

The content of flavonoids in Nigella sativa seeds acted as agents inflammatory that can

inhibit migration of neutrophil cells from the blood vessels into areas of inflammation and

inhibit the formation of COX-2 so the metabolism of arachidonic acid to prostaglandins

mediators inhibited.

Keywords: Nigella sativa seeds, topical, anti-inflammatory, neutrophil, expression of COX-

2.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 12: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

xi

DAFTAR ISI

HALAMAN SAMPUL ........................................................................................... i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ........................................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................... iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................................ iv

PRAKATA ............................................................................................................ v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ......................................................................... vii

DAFTAR ISI .......................................................................................................... viii

DAFTAR TABEL ................................................................................................... ix

DAFTAR GAMBAR .............................................................................................. x

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................ xi

ABSTRACT .......................................................................................................... xiii

PENDAHULUAN .................................................................................................. 1

METODE PENELITIAN ......................................................................................... 2

Desain dan Subjek Penelitian ............................................................................. 2

Alat dan Bahan.................................................................................................... 3

Determinasi Tanaman ........................................................................................ 3

Ekstraksi .............................................................................................................. 3

Uji Flavonoid ....................................................................................................... 4

Uji Kadar Air ........................................................................................................ 4

Pembuatan Larutan Karagenin dan Krim Ekstrak Etanol Nigella sativa ............ 4

Uji Orientasi Karagenin ....................................................................................... 4

Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Biji Nigella sativa ..................................... 4

Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Biji Nigella sativa terhadap Jumlah Sel

Neutrofil dan Ekspresi COX-2 ............................................................................. 5

Analisis statistik ................................................................................................. 5

HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................................. 6

KESIMPULAN ...................................................................................................... 14

DAFTAR PUSTAKA .............................................................................................. 13

LAMPIRAN .......................................................................................................... 16

BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................... 36

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 13: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

xii

DAFTAR TABEL

Tabel 1. Hasil uji Scheffe test aktivitas sel neutrofil pada mencit setelah pemberian ekstak

etanol Nigella sativa secara topikal

.............................................................................................................................. 9

Tabel 2. Rerata persen ekspresi COX-2 dan hasil uji Tamhene test pada kelompok

perlakunan beserta kontrol pada mencit setelah pemberian ekstrak etanol Nigella

sativa secara topikal

.............................................................................................................................. 12

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 14: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

xiii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Kurva grafik peningkatan tebal lipat kulit selama enam jam ........... 7

Gambar 2. Mikrofotografi pengecatan HE kulit normal, perlakuan ekstrak etanol biji Nigella

sativa konsentrasi 20% beserta kontrol negatif (karagenin) dengan perbesaran

100 kali dan 400 kali. Migrasi sel neutrofil terlihat pada daerah subkutan jaringan

kulit (tanda lingkaran merah)........................................................... 8

Gambar 3. Diagram batang aktivitas sel neutrofil pada mencit setelah pemberian ekstak

etanol Nigella sativa secara topikal ................................................. 10

Gambar 4. Mikrofotografi pengecatan Immunohistokimia dengan antibodi anti-COX-2 kulit

normal, perlakuan Nigella sativa konsentrasi 20% beserta kontrol negatif

(karagenin) dengan perbesaran 100 kali dan 400 kali. Migrasi sel neutrofil

terlihat pada daerah subkutan jaringan kulit (tanda lingkaran kuning) 11

Gambar 5. Diagram batang persen (%) ekspresi COX-2 pada mencit setelah pemberian

ekstak etanol Nigella sativa secara topikal ...................................... 13

Gambar 6. Kontrol Biocream® sebagai basis ekstrak ........................................ 17

Gambar 7. Serbuk karagenin yang digunakan sebagai kontrol negatif .............. 17

Gambar 8. Alat spuit injeksi ............................................................................... 17

Gambar 9. Tumbuhan dan Biji Nigella sativa .................................................... 18

Gambar 10. Biji Nigella sativa yang telah dioven ............................................. 18

Gambar 11. Proses penyerbukan biji Nigella sativa........................................... 18

Gambar 12. Ekstrak Nigella sativa yang sudah dibuat dalam basis Biocream® 19

Gambar 13. Hasil uji flavonoid serbuk biji Nigella sativa ................................ 19

Gambar 14. Mencit betina galur Swiss dan kulit punggung mencit sesudah dicukur 19

Gambar 15. Serbuk simplisia biji Nigella sativa dan ekstrak etanol kental biji Nigella

sativa ................................................................................................ 20

Gambar 16. Kulit punggung mencit yang diinjeksikan karagenin ..................... 20

Gambar 17. Kulit punggung mencit yang dioleskan ekstrak Nigella sativa ..... 20

Gambar 18. Pemotongan kulit punggung mencit .............................................. 20

Gambar 19. Kulit mencit yang diawetkan dengan formalin 10% ..................... 21

Gambar 20. Proses pemotongan kulit mencit yang sudah diawetkan ................ 21

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 15: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian ........................... 17

Lampiran 2. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ................................... 19

Lampiran 3. Pemotongan kulit untuk histopatologi ............................................. 20

Lampiran 4. Surat keterangan hasil determinasi tanaman Nigella sativa............. 22

Lampiran 5. Surat Ethical Clearence ................................................................... 23

Lampiran 6. Surat kalibrasi jangka sorong ........................................................... 24

Lampiran 7. Hasil analisis statistik perhitungan rata-rata jumlah sel-sel neutrofil pada

masing-masing kelompok

.............................................................................................................................. 26

Lampiran 8. Hasil analisis statistik uji normalitas dengan uji Shapiro-Wilk

.............................................................................................................................. 28

Lampiran 9. Hasil pengujian ANOVA rata-rata jumlah sel-sel neutrofil pada masing-masing

kelompok

.............................................................................................................................. 28

Lampiran 10. Hasil pengujian uji Post-Hoc Tests dengan uji Scheffe test .......... 29

Lampiran 11. Hasil analisis statistik perhitungan rata-rata persen (%) ekspresi COX-2 pada

masing-masing kelompok

.............................................................................................................................. 30

Lampiran 12. Hasil uji normalitas dengan Shapiro-Wilk .................................... 33

Lampiran 13. Hasil pengujian ANOVA rata-rata persen (%) ekspresi COX-2 pada masing-

masing kelompok

.............................................................................................................................. 33

Lampiran 14. Hasil pengujian uji Post-Hoc Tests dengan uji Tamhane test ....... 34

Lampiran 15. Surat keterangan analisis data statistik di Pusat Kajian CE&BU

.............................................................................................................................. 35

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 16: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

1

PENDAHULUAN

Inflamasi merupakan respon protektif yang timbul akibat cedera atau infeksi untuk

menghancurkan agen penyebab kerusakan jaringan, menyembuhkan atau memperbaiki

jaringan yang rusak. Gejala umum yang timbul saat inflamasi antara lain kemerahan (rubor);

rasa panas (kalor); rasa sakit (dolor); pembengkakan (tumor); dan gangguan fungsi dari

jaringan (function laesa) (Kumar, Abbas, Fauston, dan Aster, 2005). Saat terjadi reaksi

inflamasi, enzim siklooksigenase (COX) berperan sebagai katalisator dalam sintesis

pembentukan mediator prostaglandin serta jumlah sel neutrofil dalam darah dan jaringan

akan meningkat akibat peningkatan permeabilitas vaskular dan vasodilatasi (Kumar dkk.,

2005). Salah satu manifestasi inflamasi adalah meningkatnya persentase kadar neutrofil

dalam jaringan yang mengalami peradangan. Neutrofil merupakan leukosit yang berperan

dalam pertahanan seluler dan humoral organisme terhadap zat-zat asing (Effendi, 2003).

Penghambatan migrasi sel neutrofil akan menekan pelepasan mediator prostaglandin,

sehingga substrat bagi jalur sikooksigenase juga akan berkurang (Kumar dkk., 2005).

Inflamasi menyebabkan ketidaknyamanan sehingga dapat merugikan dan menggangu

aktivitas sehari-hari, oleh karena itulah diperlukan obat untuk mengatasi dan mengobati

inflamasi yang terjadi.

Obat antiinflamasi berguna untuk mengurangi inflamasi dan meredakan nyeri

berdasarkan mekanisme kerjanya dibedakan menjadi dua, yaitu golongan steroid dan

golongan non steroid. Terdapat beberapa cara untuk mengobati dan mengatasi gejala yang

timbul saat terjadi inflamasi, salah satunya dengan mengkonsumsi obat secara per oral

maupun topikal. Pemberian obat secara topikal merupakan pertolongan pertama yang

dilakukan dengan mengoleskan obat pada bagian yang mengalami inflamasi (Soeroso,

2008). Efek obat dengan pemberian topikal akan lebih cepat dibandingkan dengan

pemberian per oral. Hal ini disebabkan karena obat topikal bekerja langsung pada daerah

inflamasi dan tidak melalui sistem pencernaan, sehingga dapat melindungi kemungkinan

kerusakan zat aktif obat akibat enzim pencernaan (Ansel, 1989).

Indonesia merupakan negara tropis yang memiliki keanekaragaman tanaman yang

dapat digunakan sebagai obat herbal. Merfort, Wray, Barakat, Hussein, Nawwar, dan

Willuhn, (1997) melaporkan bahwa jintan hitam mengandung senyawa flavonoid dan

fenolik yaitu triglikosida flavonoid yang merupakan golongan kuersetin dan asam vanilat

(Bourgaou, Ksouri, Bellila, Skandrani, Falleh, dan Marzouk, 2007). Biji Nigella sativa

memiliki berbagai kandungan kimia seperti dithymoquinone, steryl-glucoside (Al-Ali,

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 17: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

2

Alkhawajah, Randhawa, dan Shaikh, 2008), flavonoids, glycosides, tannins (Tanko dkk.,

2007), serta komponen non-kalori yaitu 2 flavonoid golongan camferol seperti diglucoside

dan digalactoside (Keyhanmanesh, Baqban, Nazemieh, Mirzaei, dan Alipour, 2013).

Stilbenes, antrhaquinones, flavonoids, alkaloids, fatty acids dan terpenoids dilaporkan

berperan dalam regulasi enzim siklooksigenase (COX) (Perera, Ringbom, Huss, Vasage, dan

Bohlin 2001). Hasil penelitian yang dilakukan Kooti, Noohi, Ahvazi, Samani dan Larky

(2016) menunjukkan bahwa ekstrak biji dari Nigella sativa dan thymoquinone memiliki efek

antiinflamasi pada peradangan yang diinduksi oleh LPS. Hasil penelitian Aljabre, Alakloby,

Randhawa (2015) menyimpulkan bahwa Nigella Sativa menunjukkan efek farmakologis

yang potensial dalam dermatologi. Diperlukan metode standar pengembangan obat untuk

memformulasikan sediaan yang memiliki efek terapi topikal untuk digunakan dalam

dermatologi.

Peran penting sel neutrofil dan enzim COX dalam proses reaksi inflamasi dapat

dijadikan target aksi dari zat aktif tanaman yang memiliki aktivitas antiinflamasi.

Berdasarkan uraian di atas maka perlu dilakukan penelitian apakah ekstrak etanol biji

Nigella sativa dapat menurunkan inflamasi pada mencit betina yang diinduksi karagenin

3% secara subkutan didukung dengan pengamatan secara kualitatif gambaran hispatologis

kulit mencit terhadap penurunan jumlah sel neutrofil dan penurunan ekspresi protein COX-

2.Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efek antiinflamasi topikal ekstrak

etanol biji Nigella sativa dilihat dari penurunan jumlah sel neutrofil dan penurunan ekspresi

COX-2 dan mengetahui konsentrasi optimum ekstrak etanol biji Nigella sativa sebagai

antiinflmasi.

METODE PENELITIAN

Desain dan Subjek Penelitian

Penelitian yang dilakukan merupakan eksperimental murni dengan rancangan

penelitian acak lengkap pola searah. Subyek pada penelitian ini adalah mencit betina yang

diperoleh dari Laboratorium Imono Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, berumur 2-3

bulan dengan berat badan 20-30 gram dan subyek dalam keadaan sehat. Subyek dibagi

secara acak menjadi lima kelompok. Kelompok perlakuan terdiri dari lima kelompok yang

masing-masing kelompok terdiri dari lima ekor mencit. Penelitian dilakukan dengan

menghitung penurunan jumlah sel neutrofil dan penurunan ekspresi COX-2 pada kulit

punggung mencit betina yang terinduksi karagenin.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 18: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

3

Prosedur yang digunakan dalam penelitian telah disetujui oleh Komisi Etik Penelitian

Kedokteran dan Kesehatan Fakultas Kedokteran Universitas Gajah Mada Yogyakarta

dengan nomor KE/FK/1111/EC/2016. Keaslian penelitian juga telah disetujui oleh Fakultas

Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

Alat dan Bahan

Alat yang digunakan yakni mikroskop binokuler (Olympus CX21®), jangka sorong

digital (Hardened®), ayakan no. mesh 40, alat maserasi (Innova 2100), vacuum rotary

evaporator (Buchi R 201/215), oven (Memmert®), corong Buchner, pompa vakum, alat

moisture balance (Halogen Moisture Analyzer HG53), mesin penyerbuk, waterbath, kertas

saring, aluminium foil, spuit injeksi, stopwatch, mortir dan stamper, container, papan lilin

dan pines, gunting bedah, pinset, karton serta alat – alat gelas (labu ukur, beaker glass,

erlenmeyer, gelas ukur, cawan porselen, pipet tetes, batang pengaduk dan kaca arloji).

Bahan yang digunakan yakni biji Nigella sativa, etanol 80%, karagenin tipe I (Sigma

Chemical Co.), aquades, NaCl 0,9%, Biocream (Merck®), Veet (Reckitt Benckiser®) dan

formalin 10%.

Determinasi Tanaman

Biji Nigella sativa diperoleh dari Toko Obat Bintang Selatan, Jakarta Barat. Bahan

yang digunakan terlebih dahulu dilakukan determinasi di Laboratorium Sistematika

Tumbuhan Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Berdasarkan hasil

determinasi yang telah dilakukan pada lampiran 4. maka terbukti bahwa biji yang digunakan

dalam penelitian ini adalah benar berasal dari tanaman Nigella sativa.

Ekstraksi

Tahapan awal yakni memilih biji Nigella sativa yang berwarna hitam berbentuk

trigonal (bersudut tiga tak beraturan), pendek (panjang biji sekitar 1-3 mm), serta tidak

terdapat kotoran dari binatang kecil kemudiaan dioven hingga benar-benar kering dan

diserbukkan. Selanjutnya serbuk diayak menggunakan ayakan no. mesh 40. Metode

ekstraksi yang digunakan yaitu maserasi dengan cara merendam serbuk biji Nigella sativa

sebanyak 60 gram dengan 250 mL etanol 80%. Penyarian dilakukan 3 x 24 jam dengan

penggantian cairan penyari setiap 1 x 24 jam. Setelah proses maserasi berakhir, selanjutnya

hasil filtrat maserasi disatukan dan diuapkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator

vaccum hingga didapat ekstrak kental. Kemudian ekstrak kental dipindahkan kedalam cawan

porselen dan ditimbang massanya lalu diuapkan di atas waterbath dan dioven pada suhu 40

-50°C hingga didapat ekstrak kental dengan bobot tetap. Hasil esktraksi pada ekstrak kental

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 19: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

4

biji nigella sativa mengandung minyak, sehingga ekstrak kental dipisahkan dari lapisan

minyak menggunakan pipet tetes sebelum dilanjutkan tahap pembuatan krim ekstrak biji

Nigella sativa.

Uji Flavonoid

Tujuan uji flavonoid untuk membuktikan kandungan flavonoid didalam ekstrak etanol

biji Nigella sativa. Ekstrak kental 0,5 gram diteteskan beberapa tetes senyawa FeCl3. Bila

terkandung flavonoid maka akan terbentuk warna coklat (Harbone, 1998).

Uji Kadar Air

Tujuan uji kadar air untuk mengetahui kadar air dalam serbuk biji Nigella sativa

sehingga kualitas serbuk tetap dalam keadaan baik. Sebanyak 0,2 gram serbuk biji Nigella

sativa dimasukkan kedalam alat moisture balance. Sampel akan dipanaskan hingga suhu

120°C dan berhenti secara otomatis ketika sudah mencapai bobot tetap.

Pembuatan Larutan Karagenin dan Krim Ekstrak Etanol Nigella sativa

Karagenin 0,3 gram dilarutkan kedalam 10 mL NaCl 0,9% sehingga didapat

karagenin konsentrasi 3%. Ekstrak etanol Nigella sativa dibuat menjadi tiga seri konsentrasi

yakni 5; 10; dan 20%. Pembuatan krim dilakukan dengan menimbang ekstrak kental Nigella

sativa sebanyak 0,5; 1; dan 2 gram kemudian masing-masing ekstrak kental ditambahkan 10

gram basis Biocream® diaduk hingga terbentuk sediaan krim.

Uji Orientasi Karagenin

Tujuan uji orientasi karagenin untuk menetapkan konsentrasi karagenin paling

optimal yang akan digunakan sebagai penginduksi inflamasi pada penelitian ini. Konsentrasi

dikatakan optimal saat terjadi peningkatan tebal lipat kulit punggung mencit sekitar 2-3 kali

dari tebal kulit normal. Konsentrasi yang digunakan dalam uji ini yaitu 1,5% dan 3%. Uji

dilakukan dengan menginjeksikan karagenin pada kulit punggung mencit.

Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Biji Nigella sativa

Hewan uji sebanyak 25 ekor mencit betina, berumur 2-3 bulan, dengan bobot 20-30

gram dan dalam kondisi sehat. Hewan uji dibagi secara acak menjadi lima kelompok.

Kelompok I (kontrol negatif) diinjeksikan karagenin 3%. Kelompok II diinjeksikan

karagenin lalu dioles Biocream®. Kelompok III, IV, dan V diinjeksikan karagenin lalu

dioles krim ekstrak etanol biji Nigella sativa dengan konsentrasi 5; 10; dan 20% secara

topikal. Setiap kelompok perlakuan terdiri dari lima ekor mencit. Hewan uji terlebih dahulu

dicukur bulu punggungnya dengan gunting, kemudian dioleskan Veet® untuk merontokkan

bulu yang belum tercukur sempurna. Kulit punggung yang telah dicukur bulunya dibiarkan

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 20: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

5

selama dua hari untuk menghindari adanya inflamasi yang disebabkan oleh pencukuran dan

pemberian Veet®.

Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Biji Nigella sativa terhadap

Jumlah Sel Neutrofil dan Ekspresi COX-2

Pengujian diawali dengan pembedahan kulit punggung mencit setelah 24 jam

diinjeksi karagenin 3% dan dioleskan krim biji Nigella sativa. Pembedahan dilakukan

dengan dislokasi tulang leher dan diambil kulit punggung mencit pada daerah edema.

Selanjutnya kulit mencit diletakkan diatas karton tebal dan diawetkan dengan merendam

kulit dalam larutan formalin 10%. Kemudian dilakukan pengecatan hematoksilin eosin (HE)

sesuai prosedur dari Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada Yogyakarta dan

metode imunohistokimia dengan antibodi anti-COX-2 mouse sesuai prosedur dari RSUP Dr.

Sardjito Yogyakarta, dan selanjutnya diamati dengan mikroskop binokuler (Olympus®)

untuk setiap lima bidang pandang berbeda dengan perbesaran 400 kali. Selanjutnya dihitung

penurunan sel neutrofil menggunakan perhitungan langsung (direct counting) dan persen

(%) ekspresi COX-2 yang selanjutnya dianalisis secara kuantitatif dihitung dengan

persamaan:

% 𝑒𝑘𝑠𝑝𝑟𝑒𝑠𝑖 𝐶𝑂𝑋 − 2 = 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑒𝑙 𝑒𝑘𝑠𝑝𝑟𝑒𝑠𝑖 𝑐𝑜𝑥−2

𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑠𝑒𝑙 ℎ𝑖𝑡𝑢𝑛𝑔 × 100%

(Ikawati, Nugroho, dan Werdhinindah, 2006).

Analisis Statistik

Seluruh analisis data statistik dilakukan di Pusat Kajian CE&BU dengan

menggunakan program IBM SPSS 22 Lisensi Universitas Gajah Mada Yogyakarta dengan

taraf kepercayaan 95%. Data yang diperoleh terlebih dahulu dianalisis secara statistik

dengan Shapiro-Wilk untuk melihat kenormalan dan homogenitas distribusi data. Data yang

terdistribusi dengan normal dan homogenitas sama dilanjutkan dengan uji One Way ANOVA

(taraf kepercayaan 95%) karena skala variabel penelitian adalah skala numerik, data tidak

berpasangan dan lebih dari dua kelompok. Analisis dilanjutkan dengan Post Hoc Test dengan

Scheffe test dan Tamhane test.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 21: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

6

HASIL DAN PEMBAHASAN

Ekstraksi

Biji Nigella sativa yang telah kering selanjutnya dibuat serbuk. Tujuan penyerbukan

untuk memperluas kontak antara permukaan serbuk dengan pelarut sehingga mempermudah

penyarian kandungan fitokimia. Ekstrak etanol biji Nigella sativa diperoleh dari proses

penyarian serbuk simplisia biji Nigella sativa secara maserasi. Hasil ekstrak etanol kental

yang didapat yaitu seberat 6,58g ekstrak kental dengan rendemen ekstrak 21,9%.

Uji Flavonoid

Uji flavonoid untuk membuktikan adanya kandungan flavonoid golongan fenolik

dalam ekstrak etanol biji Nigella sativa yang dilakukan dengan meneteskan reagen FeCl3.

Hasil uji menunjukkan hasil positif mengandung flavonoid ditandai dengan ekstrak berubah

warna menjadi coklat setelah ditetesi reagen FeCl3.

Uji Kadar Air

Standar kadar air serbuk yang baik adalah ≤10% (Departemen Kesehatan Republik

Indonesia, 2008). Hasil rata-rata uji kadar air serbuk biji Nigella sativa sebesar 6,69%.

Sehingga termasuk kedalam standar serbuk yang baik.

Uji Orientasi Karagenin

Hasil pengukuran uji orientasi karagenin menunjukkan pada kelompok perlakuan

konsentrasi karagenin 1,5% mengalami peningkatan tebal lipat kulit sebesar 2,25 kali dari

tebal kulit normal yaitu 0,63 mm menjadi 2,8 mm, tetapi edema yang terbentuk tidak dapat

bertahan hingga 6 jam. Pada konsentrasi karagenin 3% terjadi peningkatan tebal lipat kulit

sebesar 3,13 kali dari tebal kulit normal 0,40 mm menjadi 3,53 mm dan mampu bertahan

hingga 6 jam. Sehingga konsentrasi karagenin 3% digunakan sebagai penginduksi inflamasi.

Kurva grafik hasil pengukuran peningkatan tebal lipat kulit yang menunjukkan edema yang

terjadi pada setiap jam selama 6 jam dapat dilihat pada gambar 1.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 22: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

7

Gambar 1. Kurva grafik peningkatan tebal lipat kulit selama enam jam.

Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Biji Nigella sativa terhadap

Jumlah Sel Neutrofil

Pengujian efek antiinflamasi ekstrak etanol biji Nigella sativa bertujuan untuk

mengetahui efek antiinflamasi topikal dan berapa konsentrasi optimum ekstrak etanol biji

Nigella sativa sebagai antiinflamasi berdasarkan penurunan jumlah sel neutrofil dan

penurunan ekspresi COX-2. Neutrofil bertugas membersihkan jaringan dari agen infeksi atau

toksik. Neutrofil memiliki beberapa sifat seperti diapedesis, gerak amuboid, kemotaksis, dan

fagositosis (Guyton dan Hall, 2008). Saat terjadi inflamasi, pada 24 jam pertama akan terjadi

migrasi neutrofil dari sirkulasi darah yang akan mendominasi jaringan yang mengalami

peradangan dan setelah 24 jam hingga 48 jam akan didominasi oleh monosit (Kumar dkk.,

2005).

Metode pengujian menggunakan pewarnaan hematoksilin dan eosin yang banyak

digunakan dalam pewarnaan jaringan. Hematoksilin bekerja sebagai pewarna basa yang

akan mewarnai unsur basofilik jaringan dan akan memulas inti serta strukutur asam lainnya

dari sel (meliputi, matriks tulang rawan dan bagian sitoplasma yang kaya-RNA) menjadi

biru. Sedangkan eosin bersifat asam, yang akan memulas komponen asidofilik jaringan

(meliputi mitokondria, granula sekretoris dan kolagen). Eosin akan mewarnai sitoplasma dan

kolagen menjadi warna merah muda (Junquera, 2007). Pengujian menggunakan tiga seri

konsentrasi yaitu konsentrasi 5; 10; dan 20%. Tujuan pembuatan tiga seri konsentrasi untuk

mengetahui apakah ketiga seri konsentrasi memiliki efek antiinflamasi yang berbeda dengan

membandingkan khasiatnya terhadap kontrol. Penetapan konsentrasi ditentukan bedasarkan

penelitian Abdul-Ameer dan Al-Harcham (2010) dalam Aljabre, Alakloby, dan Randhawa

(2015) yang menggunakan biji Nigella sativa dalam sediaan oil lotion 10% yang secara

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 23: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

8

signifikan dapat menurunkan lesi papula dan pustula. Konsentrasi tersebut dijadikan

konsentrasi tengah untuk sedian krim ekstrak etanol Nigella sativa. Profil pengecatan

hematoksilin dan eosin dan rerata masing-masing kelompok perlakuan dan kontrol dapat

dilihat pada gambar 2.

Gambar 2. Mikrofotografi pengecatan HE kulit normal, perlakuan ekstrak

etanol biji Nigella sativa konsentrasi 20% beserta kontrol negatif

(karagenin) dengan perbesaran 100 kali dan 400 kali. Migrasi sel

neutrofil terlihat pada daerah subkutan jaringan kulit (tanda

lingkaran merah)

Keterangan :

1. Kulit normal dengan perbesaran 100 kali

2. Kulit normal dengan perbesaran 400 kali

3. Kulit kontrol negatif (karagenin) dengan perbesaran 100 kali

4. Kulit kontrol negatif (karagenin) dengan perbesaran 400 kali

5. Kulit ekstrak etanol biji jintan hitam 20% dengan perbesaran 100 kali

6. Kulit ekstrak etanol biji jintan hitam 20% dengan perbesaran 400 kali

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 24: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

9

Tabel 1. Hasil uji Scheffe test aktivitas sel neutrofil pada mencit setelah pemberian

ekstak etanol Nigella sativa secara topikal.

Rerata Sel

Neutrofil ± SE I II III IV V

I 183,36±4,19 BTB BB BB BB

II 181,40±4,44 BTB BB BB BB

III 69,92±4,78 BB BB BTB BB

IV 55,76±5,35 BB BB BTB BTB

V 43,26±3,84 BB BB BB BTB

Keterangan :

I = Kontrol Negatif (Karagenin 3%)

II = Kontrol Biocream®

III = Ekstrak etanol biji Nigella sativa 5%

IV = Ekstrak etanol biji Nigella sativa 10%

V = Ekstraketanol biji Nigella sativa 20%

BB = Berbeda bermakna (p<0,05)

BTB = Berbeda tidak bermakna (p>0,05)

SE = Standart error

Secara statistik rerata sel neutrofil pada kelompok kontrol negatif memiliki rerata sel

neutrofil berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan kelompok kontrol Biocream®. Hal ini

menunjukkan bahwa kelompok kontrol Biocream® tidak memiliki aktivitas antiinflamasi

menurunkan jumlah sel neutrofil. Rerata sel neutrofil kelompok kontrol negatif karagenin

3% berbeda bermakna (p<0,05) dengan rerata kelompok perlakuan ekstrak Nigella sativa

konsentrasi 5; 10; dan 20%. Hal ini menunjukkan bahwa karagenin dapat menginduksi

terjadinya proses inflamasi. Pada kelompok perlakuan ekstrak Nigella sativa konsentrasi 5;

10; dan 20% menunjukkan penurunan jumlah sel neutrofil pada daerah subkutan dan berbeda

bermakna (p<0,05) dengan kontrol negatif karagenin 3% maupun kontrol Biocream®. Hal

ini membuktikan bahwa ekstrak memiliki efek antiinflamasi ditandai dengan penurunan

jumlah sel neutrofil pada daerah subkutan. Namun ketiga seri konsentrasi berbeda tidak

bermakna (p>0,05) yang berarti bahwa ketiga konsentrasi memiliki efek antiinflamasi yang

sebanding. Konsentrasi optimum dipilih saat dengan penambahan konsentrasi yang lebih

besar tidak memberikan aktivitas antiinflamasi yang lebih besar dari sebelumnya. Sehingga

konsentrasi 5% dipilih sebagai konsentrasi optimum karena memiliki aktivititas

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 25: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

10

antiinflamasi yang sebanding dengan konsentrasi 10 dan 20%. Profil rerata jumlah sel

neutrofil pada daerah subkutan pada pengukuran 24 jam setelah injeksi karagenin 3% dapat

dilihat pada gambar 3.

Gambar 3. Diagram batang aktivitas sel neutrofil pada mencit setelah

pemberian ekstak etanol Nigella sativa secara topikal.

Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Biji Nigella sativa terhadap

ekspresi COX-2

Uji imunohistokimia dengan antibodi anti-COX-2 bertujuan untuk mengetahui

aktivitas antiinflamasi ekstrak etanol biji Nigella sativa melalui pemeriksaan ekspresi

protein COX-2. Imunohistokimia merupakan suatu teknik yang digunakan untuk mendeteksi

adanya protein atau antigen didalam sel maupun jaringan dengan menggunakan antibodi

spesifik dengan prinsip reaksi ikatan antigen (Ag) dan antibodi (Ab) (Furuya, Fujiyama,

Nagai, Fujiwara, matsumoto, Takagi, dan Kawabata, 2004). Sel yang mengekspresikan

protein COX-2 akan memberikan warna coklat/gelap, sedangkan sel yang tidak

mengekspresikan protein akan berwarna ungu/biru. Sel yang mengekspresikan protein

tertentu dari keseluruhan sel dinyatakan dalam satuan persen (%) (Ikawati, Nugroho, dan

Werdhinindah, 2006).

Enzim COX-2 biasanya muncul oleh adanya peradangan dan diinduksi oleh sel

neutrofil yang distimulasi adanya LPS, TNF-α, dan agonis inflamasi lainnya. Sintesis COX-

2 juga disertai dengan adanya sintesis mediator PGE2 (Maloney, Kutchera, Albertine,

Mcintyre, Prescott, dan Zimmerman, 2006). Salah satu mekanisme flavonoid sebagai

antiinflamasi yakni dengan menghambat aktivitas enzim siklooksigenase dan lipooksigenase

(Gomes, Fernandes, Lima dan Corvo, 2008). Sehingga penelitian ini akan mengamati

aktivitas antiinflamasi kandungan flavonoid pada ekstrak biji Nigella sativa dengan

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 26: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

11

mengamati penurunan ekspresi COX-2. Ekspresi protein COX-2 pada neutrofil dalam sel

radang ditunjukkan melalui hasil pengecatan immunohistokimia dengan antibodi anti COX-

2 masing-masing perlakuan beserta kontrol dapat dilihat pada gambar 4 dan tabel 2.

Gambar 4. Mikrofotografi pengecatan Immunohistokimia dengan antibodi anti-COX-

2 kulit normal, perlakuan Nigella sativa konsentrasi 20% beserta kontrol

negatif (karagenin) dengan perbesaran 100 kali dan 400 kali. Migrasi sel

neutrofil terlihat pada daerah subkutan jaringan kulit (tanda lingkaran

kuning)

Keterangan :

1. Kulit normal dengan perbesaran 100 kali

2. Kulit normal dengan perbesaran 400 kali

3. Kulit kontrol negatif (karagenin) dengan perbesaran 100 kali

4. Kulit kontrol negatif (karagenin) dengan perbesaran 400 kali

5. Kulit ekstrak Nigella sativa 20% dengan perbesaran 100 kali

6. Kulit ekstrak Nigella sativa 20% dengan perbesaran 400 kali

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 27: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

12

Tabel 2. Rerata persen ekspresi COX-2 dan hasil uji Tamhene pada kelompok

perlakunan beserta kontrol pada mencit setelah pemberian ekstrak etanol

Nigella sativa secara topikal.

Rerata

persen (%)

ekspresi ±

SE

I II III IV V

I 98,03±0,25 BTB BB BB BB

II 95,6±1,27 BTB BB BB BB

III 83,23±40,45 BB BB BTB BB

IV 80,32±0,75 BB BB BTB BTB

V 82,23±0,40 BB BB BTB BTB

Keterangan :

I = Kontrol Negatif (Karagenin 3%)

II = Kontrol Biocream®

III = Ekstrak etanol biji Nigella sativa 5%

IV = Ekstrak etanol biji Nigella sativa 10%

V = Ekstraketanol biji Nigella sativa 20%

BB = Berbeda bermakna (p<0,05)

BTB = Berbeda tidak bermakna (p>0,05)

SE = Standart error

Berdasarkan tabel 2, secara statistik kontrol negatif (karagenin 3%) dan kontrol

Biocream® berbeda tidak bermakna (p>0,05) sehingga kedua kelompok perlakuan ini sama-

sama tidak memiliki aktifitas menurunkan ekspresi COX-2 yang diekspresikan oleh sel

radang. Hasil rerata kontrol negatif (karagenin 3%) dan kontrol Biocream® memiliki rerata

paling besar dibandingkan kelompok perlakuan yang lain yaitu sebesar 98,03 dan 95,6%.

Pada kelompok perlakuan ekstrak etanol biji Nigella sativa dengan konsentrasi 5; 10;

dan 20% rerata persen (%) ekspresi COX-2 menujukkan hasil rerata yang lebih kecil

dibandingkan dengan kontrol negatif dan kontrol Biocream® yaitu berturut-turut sebesar

83,23; 80,32; dan 82,23%. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji Nigella sativa

memiliki aktifitas menurunkan ekspresi COX-2 yang diekspresikan oleh sel radang. Secara

statistik, konsentrasi 5 dan 10% berbeda tidak bermakna (p>0,05), sedangkan konsentrasi 10

dan 20% juga berbeda tidak bermakna (p>0,05) yang berarti bahwa ketiga konsentrasi

tersebut memiliki aktifitas menurunkan ekspresi COX-2 yang diekspresikan oleh sel radang

yang sebanding. Konsentrasi optimum dipilih saat dimana dengan penambahan konsentrasi

yang lebih besar tidak memberikan aktivitas antiinflamasi yang lebih besar dari sebelumnya.

Sehingga konsentrasi 5% dipilih sebagai konsentrasi optimum karena memiliki aktivititas

antiinflamasi yang sebanding dengan konsentrasi 10 dan 20%. Profil rerata ekspresi protein

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 28: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

13

COX-2 pada daerah subkutan pada pengukuran 24 jam setelah diinjeksikan karagenin 3%

dapat dilihat pada gambar 5.

Gambar 5. Diagram batang persen (%) ekspresi COX-2 pada mencit setelah

pemberian ekstak etanol Nigella sativa secara topikal.

Kandungan flavonoid pada biji jintan hitam diduga bertanggung jawab dalam

memberi efek antiinflamasi. Salah satu mekanisme flavonoid sebagai antiinflamasi yakni

dengan menghambat aktivitas enzim siklooksigenase dan lipooksigenase (Gomes dkk.,

2008). Ketika pelepasan asam arakidonat terhambat, maka substrat arakidonat bagi jalur

siklooksigenase dan lipooksigenase akan berkurang. Sehingga akan menekan produksi

prostaglandin, prostasiklin, tromboksan, leukotiern, endoperoksida dan mediator lain

(Rahayu, 2009). Flavonoid juga akan mengikat radikal bebas sehingga mencegah kerusakan

jaringan yang semakin parah. Proses metabolisme oksigen sel radang akan membuat

kerusakan pada jaringan dan sel didalam tubuh. Jumlah ROS yang meningkat akan

menyebabkan kerusakan pada jaringan dan dapat memperparah proses peradangan (Gomes

dkk., 2008). Merfort dkk., (1997) melaporkan bahwa jintan hitam mengandung senyawa

flavonoid yaitu triglikosida flavonoid yang merupakan golongan kuersetin dan asam vanilat

(Bourgaou, Ksouri, Bellila, Skandrani, Falleh, dan Marzouk, 2007). Flavonoid glikosida

memiliki aktivitas antiinflamasi yang bersifat dose-dependent (Gomes dkk., 2008). Namun

hasil penelitian menggunakan ekstrak biji Nigella sativa dengan konsentrasi 5; 10; dan 20%

tidak menunjukkan hubungan dose-dependent karena diduga ketiga konsentrasi yang

digunakan dalam penelitian sudah termasuk dalam range konsentrasi tertinggi yang memiliki

aktivitas antiinflamasi. Sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk melihat

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 29: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

14

hubungan dose-dependent ekstrak biji Nigella sativa sebagai antiinflamasi dengan

menggunakan konsentrasi ekstrak dibawah 5%.

Efek farmakologis suatu obat dapat muncul saat adanya ikatan antara reseptor dengan

sisi aktif obat. Saat semua reseptor obat telah diduduki oleh obat maka penambahan jumlah

obat yang lebih banyak tidak dapat menimbulkan efek farmakologis yang lebih besar (Clark,

Finkel, Rey, dan Whalen, 2012). Hasil statistik dalam penelitian membuktikan ekstrak biji

Nigella sativa dengan konsentrasi 5; 10; dan 20% memiliki efek antiinflamasi yang

sebanding, hal ini diduga akibat semua reseptor telah terduduki oleh bahan aktif flavonoid

yang terkandung dalam ekstrak biji Nigella sativa, sehingga penambahan ekstrak dengan

konsentrasi yang lebih besar tidak menimbulkan efek antiinflamasi yang lebih besar pula.

KESIMPULAN

Ekstrak etanol biji Nigella sativa (jintan hitam) memiliki efek antiinflamasi topikal

melalui penurunan jumlah sel neutrofil dan penurunan ekspresi enzim COX-2 pada daerah

inflamasi pada mencit betina galur Swiss yang terinduksi karageni 3% dengan konsentrasi

optimum adalah 5%.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 30: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

15

DAFTAR PUSTAKA

Al-Ali, A., Alkhawajah, A., Randhawa, M.A., dan Shaikh, N.A., 2008, Oral and

Intraperitoneal LD50 of Thymoquinone, An Active Principle of Nigella sativa, in

Mice and Rats, J Ayub Med Coll Abbotabad, 20 (2), 25–27.

Aljabre S.H.M., Alakloby, O.M., dan Randhawa, M.A., 2015, Dermatological effects of

Nigella sativa, Journal of Dermatology & Dermatologic Surgery 19 (2), 92–98.

Ansel, H.C., 1989, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, Edisi 4, UI Press, Jakarta, pp.

96,147.

Bourgou, S., Ksouri, R., Bellila, A., Skandrani, I., Falleh, H., dan Marzouk, B.,2007, Abstrac

Phenolic Composition and Biological Activities of Tunisian Nigella sativa L. shoots

and roots, Elsevier Masson, 331 (1), 48-55.

Clark, M.A., Finkel, R., Rey, J.A., dan Whalen, K., 2012, Pharmacology: Lippincott’s

Illustrated Reviews, Edisi 5, Lippincott Williams & Wilkins, Republic of China, pp.

31-32.

Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2008, Farmakope Herbal Indonesia, Edisi I,

Departemen Kesehatan republik Indonesia, Jakarta, hal. Xxix.

Effendi, Z., 2003, Peranan Leukosit Sebagai Anti Inflamasi Alergik dalam Tubuh, Bagian

Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara, Sumatera Utara.

Furuya, K., Fujiyama, K., Nagai, S., Akikuni, Y., Fujiwara, T., Matsumoto, S., Takagi, K.,

dan Kawabata,T., 2004, Risk based inspection and maintenance system for steam

turbines, Journal of Pressure Vessel and Piping, 81, 825-835

Gomes, A., Fernandes, E., Lima, J.L.F.C., Mira, L., Corvo, M.L., 2008, Molecular

Mechanism of Antiinflammatory Activity Mediated by Flavonoids, Current Medical

Chemistry, Vol. 15, 1586-1605.

Guyton, A.C., dan Hall, J.E., 2008, Buku Ajar Fisiologi Kedokteran, Edisi 11, EGC, Jakarta.

Harbone, A.J., 1998, Phytochemical Methods A Guide to Modern Techniques of Plant

Analysis, Springer, p. 61.

Ikawati, Z., Nugroho, A.E., dan Werdhinindah, W., 2006, Efek Ekstrak Etanol Daun

Erythrina fusca Lour (cangkring) terhadap penekanan ekspresi enzim

siklooksigenase–2 pada kultur sel raji, Majalah Farmasi Indonesia, 17(2), 85-90.

Junqueira, L.C., 2007, Persiapan Jaringan untuk Pemeriksaan Mikroskopik. Histology

Dasar: Teks dan Atlas, EGC, Jakarta, Hal. 3-5.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 31: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

16

Keyhanmanesh. R., Baqban, H., Nazemieh, H., Mirzaei, B.F., dan Alipour M.R., 2013, The

Main Relaxant Constituents of Nigella sativa Methanolic Fraction on Guinea Pig

Tracheal Chains, Iran J Allergy Asthma Immunol, 12(2), 136-43.

Kooti, W., Noohi, Z.H., Ahvazi, N.S., Samani, M.A., dan Larky, D.A., 2016,

Phytochemistry, Pharmacology, and Therapeutic Uses of Black Seed (Nigella

sativa), Chinese Journal of Natural Medicines, 14(10), 732-745.

Kumar, V., Abbas, A.K., dan Fausto, N., 2005, Pathologic basic of disease, Edisi ke-7,

Elsavier Saunders, Philadelphia, p. 5.

Maloney, C.G., Kutchera, W.S., Albertine, K.H., McIntyre, T.M., Prescott, S.M., dan

Zimmerman, G.A., 2016, Infammatory Aginist Induce Cyclooxygenase Type 2

Expression by Human Netrophils, The Journal of Immunology, America, 160, 1402-

1410.

Merfort, I., Wray, V., Barakat, H.H., Hussein, S.A.M., Nawwar, M.A.M., dan Willuhn, G.,

1997, Flavonol Triglycosides from Seeds of Nigella sativa, Phytochemistry, 46

(2),359-363,

http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0031942297002963, diakses

tanggal 29 Desember 2015.

Perera, P., Ringbom, T., Huss, U., Vasage, M., and Bohlin, L., 2001, Search for Natural

Product which Affect Cyclooxygenase-2, in Tringali, C., (Ed.), Bioactive Compounds

from Natural Sources: Isolation, Characterisation, and Biological Properties,

Taylor and Francis, London, pp. 434-465.

Rahayu, Yani C., 2009, Respons Antiinflamasi Serbuk Buji Alpukat (Persea Americana

mill) terhadap Jumlah PMN Neutrofil Mencit yang Diinduksi Bakteri E. Coli, Jurnal

Kedokteran Meditek, 16(42).

Soeroso, J., 2008, Pedoman Penggunaan Obat Anti Inflamasi Non Steroid (Abstrak),

http://penelitian.unair.ac.id/artikel_dosen, diakses tanggal 30 desember 2015.

Tanko, Y., Mohammad, A., Okasha, M.A., Shuaibu, A., Magaji, M.G., dan Yaro, A.H.,

2007, Analgesic and anti-inflammatory activities of ethanol seed extract of Nigella

sativa (black cumin) in mice and rats, Eur J Sci Res, 18 (2), 277-81.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 32: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

17

LAMPIRAN

Lampiran 1. Alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian

Gambar 6. Kontrol Biocream® sebagai basis ekstrak

Gambar 7. Serbuk karagenin yang digunakan sebagai kontrol negatif

Gambar 8. Alat spuit injeksi

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 33: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

18

Gambar 9. Tumbuhan dan biji Nigella sativa (Kooti dkk., 2016)

Gambar 10. Biji Nigella sativa yang telah dioven

Gambar 11. Proses penyerbukan biji Nigella sativa

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 34: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

19

Gambar 12. Ekstrak Nigella sativa yang sudah dibuat dalam basis Biocream®

Gambar 13. Hasil uji flavonoid serbuk biji Nigella sativa

Lampiran 2. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian

Gambar 14. Mencit betina galur Swiss dan kulit punggung mencit sesudah dicukur

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 35: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

20

Gambar 15. Serbuk simplisia biji Nigella sativa dan ekstrak etanol kental biji Nigella

sativa

Gambar 16. Kulit punggung mencit yang di injeksikan karagenin

Gambar 17. Kulit punggung mencit yang dioleskan ekstrak Nigella sativa

Lampiran 3. Pemotongan kulit untuk histopatologi

Gambar 18. Pemotongan kulit punggung mencit

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 36: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

21

Gambar 19. Kulit mencit yang diawetkan dengan formalin 10%

Gambar 20. Proses pemotongan kulit mencit yang sudah diawetkan

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 37: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

22

Lampiran 4. Surat keterangan hasil determinasi tanaman Nigella sativa

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 38: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

23

Lampiran 5. Surat Ethical Clearence

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 39: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

24

Lampiran 6. Surat kalibrasi jangka sorong

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 40: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

25

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 41: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

26

Lampiran 7. Hasil analisis statistik perhitungan rata-rata jumlah sel-sel neutrofil pada

masing-masing kelompok.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 42: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

27

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 43: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

28

Lampiran 8. Hasil analisis statistik uji normalitas dengan uji Shapiro-Wilk

Tests of Normality

kelompok perlakuan Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk

Statistic df Sig. Statistic df

jumlah neutrofil

Kontrol Karagenin .247 5 .200* .884 5

Kontrol Biocream .219 5 .200* .932 5

Ekstrak Nigella sativa 5% .203 5 .200* .939 5

Ekstrak Nigella sativa 10% .200 5 .200* .942 5

Ekstrak Nigella sativa 20% .339 5 .062 .802 5

Tests of Normality

kelompok perlakuan Shapiro-Wilka

Sig.

jumlah neutrofil

Kontrol Karagenin .326

Kontrol Biocream .609

Ekstrak Nigella sativa 5% .659

Ekstrak Nigella sativa 10% .678

Ekstrak Nigella sativa 20% .084

Test of Homogeneity of Variances

jumlah neutrofil

Levene Statistic df1 df2 Sig.

.381 4 20 .820

Lampiran 9. Hasil pengujian ANOVA rata-rata jumlah sel-sel neutrofil pada masing-

masing kelompok.

ANOVA

jumlah neutrofil

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 97158.314 4 24289.578 234.629 .000

Within Groups 2070.464 20 103.523

Total 99228.778 24

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 44: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

29

Lampiran 10. Hasil pengujian uji Post-Hoc Tests dengan uji Scheffe test

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 45: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

30

Lampiran 11. Hasil analisis statistik perhitungan rata-rata persen (%) ekspresi COX-2 pada

masing-masing kelompok.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 46: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

31

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 47: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

32

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 48: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

33

Lampiran 12. Hasil uji normalitas dengan Shapiro-Wilk

Lampiran 13. Hasil pengujian ANOVA rata-rata persen (%) ekspresi COX-2 pada

masing-masing kelompok

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 49: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

34

Lampiran 14. Hasil pengujian uji Post-Hoc Tests dengan uji Tamhane test

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 50: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

35

Lampiran 15. Surat keterangan analisis data statistik di Pusat Kajian CE&BU

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Page 51: UJI EFEK ANTIINFLAMASI TOPIKAL EKSTRAK ETANOL BIJI … · uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol biji jintan hitam (nigella sativa) terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi cox-2

36

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi dengan judul “Uji Efek Antiiflamasi Topikal

Ekstrak Etanol Biji Jintan Hitam (Nigella sativa) terhadap Jumlah

Neutrofil dan Ekspresi COX-2 pada Kulit Punggung Mencit yang

Terinduksi Karagenin” bernama lengkap Amanda Anggraini, lahir

di Pangkalpinang, 3 Desember 1995, merupakan anak pertama dari

dua bersaudara pasangan Jhoni Latius dan Fitryani. Pendidikan

formal yang ditempuh penulis yaitu TK Yamusru (1999-2001),

pendidikan Sekolah Dasar di SD Negeri 23 Pangkapinang (2001-

2007), pendidikan Sekolah Menengah Pertama di SMP Negeri 7 Pangkapinang (2007-2010),

pendidikan Sekolah Menengah Atas di SMA Negeri 1 Pangkapinang (2010-2013). Penulis

melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma pada tahun

2013. Penulis terlibat dalam berbagai organisasi, kepanitiaan dan asisten praktikum, antara

lain menjadi anggota Farmasi Islam Sanata Dharma (FISTARA) (2013-2014), anggota divisi

Medis pada acara Paingan Festival 2014 (2014), anggota PKM-M didanai DIKTI “PSP

Beres (Perkampungan Sosial Pingit Bersih dan Sehat) (2015), dan Volunter Kegiatan Bakti

Sosial Pengobatan Gratis yang dilaksanakan Yayasan Persaudaraan Masyarakat Jogja

(2015). Selain itu, Penulis juga pernah menjadi asisten praktikum Peracikan Obat (2015),

dan asisten praktikum Farmasetika Dasar (2015-2016).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI