5/20/2018 Cara Kerja Isolasi Piperin

1/3

Pada percobaan isolasi piperin dari Piperis nigri, simplisia atau serbuk piperin

ditimbang sebanyak 30 gram dan kemudian dibungkus atau ditempatkan dalam kertas saring

yang akan dimasukkan ke dalam alat penyari soxhlet. Kertas saring dibentuk sesuai dengan

diameter alat penyari soxhlet dan dibuat tidak terlalu tinggi agar saat etanol mengalir melalui

kertas saring, etanol dapat dengan cepat menyari serbuk dan didapatkan sari yang baik. Pada

percobaan kelompok kami, kertas saring dibuat terlalu tinggi sehingga diperlukan waktu lebih

lama saat proses penyarian. Pelarut yang digunakan adalah etanol 96% yang ditambahkan

paling sedikit sebanyak 2 kali sirkulasi ( 120 ml). Selanjutnya ditambahkan batu didih pada

labu. Fungsi batu didih adalah untuk meratakan panas dan mencegah bumping. Penyarian

dilakukan selama 2 jam dengan kecepatan 6-8 sirkulasi per jam.

Kertas saring yang telah terisi sampel dimasukan ke dalam soxhlet. Soxhlet

disambungkan dengan labu dan ditempatkan pada alat pemanas listrik serta kondensor . Alat

pendingin disambungkan dengan soxhlet. Air untuk pendingin dijalankan dan alat ekstraksi

mulai dipanaskan .

Ketika pelarut dididihkan, uapnya naik melewati soklet menuju ke pipa pendingin.

Air dingin yang dialirkan melewati bagian luar kondenser mengembunkan uap pelarut

sehingga kembali ke fase cair, kemudian menetes ke kertas saring berisi serbuk piperin.

Pelarut melarutkan simplisia, larutan sari akan terkumpul dan bila volumenya telah

mencukupi, sari akan dialirkan menuju labu. Proses dari pengembunan hingga pengaliran

disebut sebagai refluks. Penyarian dilakukan selama 2 jam dengan kecepatan 6-8 sirkulasi per

jam.

Selanjutnya sari didinginkan, kemudian dipisahkan dari bagian yang tidak terlarut

dengan penyaringan melalui kertas saring. Selanjutnya filtrat yang diperoleh diuapkan di atas

penangas air sampai kering atau konsistensi kental. Setelah itu ditambahkan dengan 10 ml

KOH-etanolik 10% sambil diaduk-aduk hingga timbul endapan. Setelah mengendap, sari

dipisahkan dari bagian yang tidak larut melalui glass wool. Sari jernih yang didapat

didiamkan dalam lemari es sampai pembentukan kristal optimal. Pada praktikum sari

didinginkan dalam lemari es selama 4 hari. Namun pada hari ke-4, sari piperin tidak

didapatkan kristal optimal, kemungkinan karena kurangnya pendinginan saat penyaringan

atau saat dilakukan penyaringan, sari masih daam kondisi panas sehingga kristal yang

terbentuk hanya berupa serbuk-serbuk kecil.

Kristal yang timbul tersebut kemudian dipisahkan, dicuci dengan etanol 96% dingin

dan dikeringkan dalam lemari pengering pada suhu 40C selama 30-45 menit kemudian

disimpan dalam eksikator yang dilengkapi kapur tohor. Fungsi dari kapur tohor adalah

5/20/2018 Cara Kerja Isolasi Piperin

2/3

sebagai penetral pH dan mengendapkan senyawa. Kristal yang diperoleh kemudian ditimbang

dan diidentifikasi dengan KLT.

Kromatografi lapis tipis (KLT) merupakan teknik pemisahan yang digunakan hanya

sebatas untuk memisahkan senyawa-senyawa dalam suatu sampel. Pada KLT selalu

digunakan pembanding atau standar dan bergantung pada detector. Pada identifikasi senyawa

piperin dengan KLT, fase diam yang digunakan yaitu Silika gel GF 254. Silika gel tersebut

mengandung gipsum dan dapat berflourosensi. Fase diam yang digunakan yaitu

Diklorometana dan etil asetat dengan 75:25. Cuplikannya adalah larutan sampel dan larutan

standar piperin. Sedangkan deteksi yang digunakan yaitu UV 254 dengan penampak noda

anisaldehid asam sulfat yang dipanaskan dengan suhu 110C selama 10 menit.

Kertas silika gel diberi batas tepi sebelum diberikan penotolan. Ektsrak piperin yang

telah dilarutkan kemudian ditotolkan pada kertas dengan pipa kapiler. Setelah semua ekstrak

ditotolkan, kertas kromatografi dimasukkan dalam chamber yang telah diisi dengan eluen

yaitu diklorometana dan etil asetat. Setelah eluen sampai pada batas eluasi, kertas

kromatografi diambil dari chamber dan dikeringkan dengan diangin-anginkan. Kemudian

noda yang timbul pada kertas dideteksi menggunakan UV 254 dan diberi penampak noda

anisaldehid asam sulfat yang telah dipanaskan sehingga dapat diketahui pemisahan senyawa

pada sampel serbuk piperin.

5/20/2018 Cara Kerja Isolasi Piperin

3/3