preparat irisan-metode parafin

Kelompok 1Ardhania PratiwiErma YunitaNur AzizahYunita Putri

PEMBUATAN PREPARAT IRISAN MELALUI METODE

PARAFIN

JURUSAN BIOLOGIFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS NEGERI MALANG

TUJUAN

1. Membuat preparat irisan melintang batang dengan metode parafin

2. Membuat preparat irisan melintang akar dengan metode parafin

3. Membuat preparat irisan melintang daun dengan metode parafin

4. Membuat preparat irisan bujur meristem apikal batang dengan metode parafin

5. Membuat preparat irisan bujur meristem apikal akar dengan metode parafin

6. Mendeskripsikan ciri khas preparat irisan yang dihasilkan terkait dengan:a. Struktur anatomis spesimenb. Teknis fiksasi dan pewarnaan yang dilakukan

BAHAN

Dikotil : - Akar, batang/cabang, daun tumbuhan Klerek

(Sapindus rarak)Monokotil : - Akar dan batang tumbuhan Jagung (Zea

mays)- Daun tumbuhan Sereh (Cymbophogon

nardus)

ALAT & BAHAN- Pompa Vakum - Neraca - Alkohol abs : Xylol = 2:2- Desikator - Pipet tetes - Alkohol abs : Xylol =

1:3- Oven - Pipet transfer - Xylol- Kulkas - Gelas koplin - Xylol - parafin- Mikrotom - Jarum preparat - Aquades- Mikroskop - Lampu spiritus - Eritrosin- Loupe - Gliserin - Safranin- Nampan pengering - Formalin - Kristal violet- Pisau - Asam asetat - Fast green- Silet - Alkohol 50% - Orange-G- Kaca benda - Alkohol 70% - Minyak Cengkeh- Kaca penutup - Alkohol 85% - Balsam - Beaker glass - Alkohol 95% Kanada/Entelan- Kuas - Alkohol absolut- Gelas ukur - Alkohol abs : Xylol = 3:1

PROSEDUR1. Koleksi Spesimen2. Fiksasi3. Dehidrasi4. Penjernihan5. Infiltrasi6. Pengeblokan7. Pengirisan8. Penempelan9. Pengecatan/Pewarnaan10. Mounting

KOLEKSI SPESIMEN

AKAR, BATANG, DAUN ( bisa dari tanaman pot, pengecambahan, piaraan dalam tempat lembab, kultur jaringan)

Memotong Spesimen

Memasukkannya ke dalam bejana/wadah yang di dalamnya terdapat air untuk mencegah kekeringan/kerusakan sebelum fiksasi

FIKSASI

Mengeluarkan udara dalam jaringan tumbuhan dengan menggunakan pompa vakum

Hasil koleksi spesimen di rendam dalam akuades di dalam pompa vakum

Jika spesimen sudah tenggelam,mengganti akuades di dalam pompa vakum dengan larutan fiksatif misal: FAA selama 24 jam/ tergantung jenis preparat

DEHIDRASI

Mengganti larutan alkohol 50% dengan alkohol 70%(rendam 30 menit/tergantung kebutuhan)

Spesimen dapat disimpan

PENJERNIHAN

Alkohol/Xylol (1: 3) 1 jam

Xylol I, 1 jam

Xylol II, 1 jam

INFILTRASI

PENGEBLOKAN

Parafin pada dasar kotak

Tambah parafin dan atur spesimen

Luncur dan selam blok

PENGIRISAN

Mengatur tebal tipisnya irisan

Memindah hasil irisan dan meletakkan pada kaca benda menggunakan kuas yang basah

PENEMPELAN

Melarutkan 1 gr gelatin dm 100 ml aquades

Memanaskan sampai 30°C smbil diaduk.(Hingga Larut)

Menambahkan 2 gr kristal fenol dan 15 ml gliserin

Menyaring selagi masih panas

Mengoleskan perekat Haupt diatas kaca benda

Meneteskan sedikit formalin 3% diatas perekat Haupt pada kaca benda

Letakkan irisan diatas formalin

Panaskan diatas lampu spiritus

Sisa perekat dan formalin pada kaca benda dihisap menggunakan kertas hisap

Mengeringkan preparat bisa menempatkan di kotak pengering

PEWARNAAN

Irisan temp

el kerin

g

Xylol I (3

menit)

Xylol II (3

menit)Alkohol absolut

(2 menit)

Alkohol 95%

(2 menit)

Alkohol 70%

(2 menit)

Safranin 1% dalam alkohol 50%(2-24 jam)

Air

Kristal violet jenuh dalam aquades(1 menit)

Air

Alkohol absolut (3-4 celup)

Alkohol absolut (3-4 celup)

Fast green 1% dalam Alkohol absolut

(5-10 celup dalam 10 detik)

Orange-G jenuh dalam

Minyak cengkeh (10 detik)

Alkohol absolut : Minyak cengkeh : xylol1 : 1 : 1

Celup+goyang jernih

Xylol I (2-5 menit)

Xylol II (2-5 menit)

MOUNTING

MOUNTING

Tetes balsem kanada/entelan

Hasil pewarnaan

Tutup kaca benda

Simpan di pengeringan

Pemeriksaan Preparat

PREPARAT AWETAN IRISAN

.terima kasih.