aktivitas sitotoksik fraksi non polar ekstrak …eprints.ums.ac.id/20645/1/cover-intisari.pdf ·...
TRANSCRIPT
i
AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI NON POLAR EKSTRAK ETANOLIK KULIT BATANG SIRSAK
(Annona muricata Linn.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Oleh:
AULIA HANDAYANI K 100 080 015
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA 2012
i
AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI NON POLAR EKSTRAK ETANOLIK KULIT BATANG SIRSAK
(Annona muricata Linn.) TERHADAP SEL T47D
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta di Surakarta
Oleh:
AULIA HANDAYANI K. 100 080 015
FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SURAKARTA
SURAKARTA 2012
ii
y
T
y
d
Den
yang pernah
Tinggi, dan
yang pernah
diacu dalam
ngan ini saya
h diajukan u
sepanjang p
h ditulis atau
m naskah ini d
DE
a menyataka
untuk memp
pengetahuan
u diterbitkan
dan disebutk
iii
EKLARAS
an bahwa da
peroleh gela
n saya juga t
n oleh orang
kan dalam da
SI
lam skripsi i
ar kesarjanaa
tidak terdapa
g lain, kecua
aftar pustaka
S
ini tidak terd
an di suatu
at karya atau
ali yang sec
a.
Surakarta, 19
Pene
(Aulia Ha
dapat karya
Perguruan
u pendapat
cara tertulis
9 Juni 2012
eliti
andayani)
iv
KATA PENGANTAR
Assalamu’alaikum wr wb.
Puji syukur kehadirat Allah SWT atas segala rahmat dan kasih sayang-
Nya sehingga penulis diberi kemampuan dan kesempatan untuk menyusun dan
menyelesaikan skripsi dengan judul “AKTIVITAS SITOTOKSIK FRAKSI
NON POLAR EKSTRAK ETANOLIK KULIT BATANG SIRSAK (Annona
muricata Linn.) TERHADAP SEL T47D”. Skripsi ini diajukan untuk memenuhi
salah satu syarat mencapai derajat Sarjana Farmasi (S. Farm) pada Fakultas
Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Dalam pelaksanaan penelitian sampai penyelesaian skripsi ini, tidak lepas
dari bantuan dan dukungan berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis ingin
menyampaikan ucapan terima kasih kepada:
1. Bapak Dr. Muhammad Da’i, M.Si., Apt. selaku dekan Fakultas Farmasi
Universitas Muhammadiyah Surakarta dan penguji.
2. Bapak Andi Suhendi, S. Farm., Apt. selaku pembimbing akademik yang
telah membimbing dan memberi nasehat selama studi.
3. Bapak Dr. Haryoto, M. Sc., selaku pembimbing utama dan Bapak Peni
Indrayudha, M. Biotech., Apt. selaku pembimbing pendamping yang telah
memberikan banyak bimbingan dan saran selama penelitian dan dalam
penyusunan skripsi ini.
4. Bapak Dr. Muhtadi, M.Si. selaku penguji skripsi yang telah memberikan
masukan dan bimbingan.
5. Bapak, Mama, dan kakak-kakakku yang selalu memberikan nasehat,
motivasi, dukungan, serta kasih sayangnya.
6. Tim peneliti Aktivitas Sitotoksik Kulit Batang Sirsak Terhadap Sel T47D,
terima kasih atas segala suka duka, canda, bantuan, dorongan, saran, serta
kebersamaannya selama ini.
7. Ibu Rumbiwati, S. T., selaku Teknisi Laboratorium Parasitologi Fakultas
Kedokteran Universitas Gadjah Mada yang telah membantu dan
memberikan fasilitas selama penelitian.
v
Semoga segala kebaikan yang telah diberikan menjadi sebuah amalan
tersendiri dan semoga kerjasama yang pernah terjalin dapat terus berjalan dengan
baik. Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih banyak kekurangan
karena keterbatasan kemampuan, pengetahuan, dan pengalaman. Oleh karena itu,
saran dan kritik yang membangun akan senantiasa diterima untuk menjadikan
skripsi ini lebih baik. Penulis berharap agar hasil penelitian ini dapat bermanfaat
dan memberikan sumbangan bagi perkembangan ilmu pengetahuan.
Wassalamu’alaikum wr wb.
Surakarta, 19 Juni 2012
Penulis
vi
DAFTAR ISI Halaman
JUDUL..............................................................................................................
PENGESAHAN................................................................................................
DEKLARASI....................................................................................................
KATA PENGANTAR.......................................................................................
DAFTAR ISI.....................................................................................................
DAFTAR GAMBAR........................................................................................
DAFTAR TABEL.............................................................................................
DAFTAR LAMPIRAN.....................................................................................
DAFTAR SINGKATAN...................................................................................
INTISARI..........................................................................................................
BAB I. PENDAHULUAN................................................................................
A. Latar Belakang Masalah...................................................................
B. Perumusan Masalah..........................................................................
C. Tujuan Penelitian..............................................................................
D. Tinjauan Pustaka...............................................................................
1. Tanaman Sirsak ...........................................................................
a. Klasifikasi tanaman.................................................................
b. Nama daerah............................................................................
c. Morfologi tanaman..................................................................
d. Kandungan kimia.....................................................................
e. Manfaat tanaman.....................................................................
2. Kanker..........................................................................................
3. Kanker Payudara..........................................................................
4. Sel Kanker Payudara (T47D) ......................................................
5. Uji Sitotoksik................................................................................
E. Landasan Teori.................................................................................
F. Hipotesis...........................................................................................
BAB II. METODE PENELITIAN....................................................................
i
ii
iii
iv
vi
viii
ix
x
xi
xii
1
1
2
2
3
3
3
3
3
4
4
5
5
6
6
7
7
8
vii
A. Kategori dan Rancangan Penelitian...............................................
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional................................
C. Bahan dan Alat...............................................................................
1. Bahan.........................................................................................
2. Alat............................................................................................
D. Tempat Penelitian...........................................................................
E. Jalannya Penelitian.........................................................................
1. Determinasi Tanaman................................................................
2. Pengumpulan Bahan dan Pembuatan Serbuk............................
3. Preparasi Ekstrak dan Fraksinasi...............................................
4. Sterilisasi...................................................................................
a. Sterilisasi laminar air flow cabinet.......................................
b. Sterilisasi alat........................................................................
5. Preparasi Sel Kanker Payudara (T47D).....................................
a. Preparasi sel...........................................................................
b. Panen sel................................................................................
6. Pembuatan Larutan Uji..............................................................
7. Uji Sitotoksik menggunakan Metode MTT...............................
8. Uji Kandungan Senyawa dengan Kromatografi Lapis Tipis.....
F. Analisis Data..................................................................................
BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN..........................................................
A. Determinasi Tanaman.....................................................................
B. Ekstraksi dan Fraksinasi Bahan......................................................
C. Hasil Uji Sitotoksik........................................................................
D. Analisis Kualitatif Kandungan Kimia............................................
BAB IV. KESIMPULAN DAN SARAN.........................................................
A. Kesimpulan.....................................................................................
B. Saran...............................................................................................
DAFTAR PUSTAKA.......................................................................................
LAMPIRAN......................................................................................................
8
8
8
8
9
9
9
9
9
10
11
11
11
11
11
11
12
12
12
13
14
14
14
17
20
24
24
24
25
29
viii
DAFTAR GAMBAR Halaman
Gambar 1. Skema Jalannya Penelitian.........................................................
Gambar 2. Profil KLT Hasil Fraksinasi I Ekstrak Etanol dengan Fase
Gerak n-Heksan : Etil Asetat (8:2) Berjumlah 17 Totolan........
Gambar 3. Profil KLT Hasil Penggabungan Fraksinasi I Ekstrak Etanol
dengan Fase Gerak n-Heksan : Etil Asetat (8:2) Berjumlah 4
Totolan.......................................................................................
Gambar 4. Profil KLT Hasil Fraksinasi II Ekstrak Etanol dengan Fase
Gerak n-Heksan : Etil Asetat (8:2) Berjumlah 16 Totolan........
Gambar 5. Profil KLT Hasil Fraksinasi I dan Fraksinasi II dengan Fase
Gerak n-Heksan : Etil Asetat (8:2) Berjumlah 8 Totolan..........
Gambar 6. Kristal Formazan........................................................................
Gambar 7. Morfologi Sel T47D...................................................................
Gambar 8. Grafik Hubungan Konsentrasi Fraksi Non Polar Ekstrak
Etanolik Kulit Batang Sirsak dengan Persentase Sel Hidup
T47D..........................................................................................
Gambar 9. Hasil KLT Fraksi Non Polar Ekstrak Etanolik Kulit Batang
Sirsak dengan Fase Gerak n-Heksan:Etil Asetat (9:1) dan
Fase Diam Silika Gel GF...........................................................
13
15
15
16
17
18
19
20
21
ix
DAFTAR TABEL Halaman
Tabel 1. Eluen yang digunakan dalam fraksinasi.....................................
Tabel 2. Enam Fraksi Hasil Fraksinasi I..................................................
Tabel 3. Lima Fraksi Hasil Fraksinasi II..................................................
Tabel 4. Tiga Fraksi Hasil Fraksinasi I dan Fraksinasi II........................
Tabel 5. Hasil uji sitotoksik fraksi non polar ekstrak etanolik kulit
batang sirsak terhadap selT47D.................................................
Tabel 6. Hasil Analisis Kromatografi Lapis Tipis Fraksi Non Polar
Ekstrak Etanolik Kulit Batang Sirsak........................................
10
15
16
17
19
22
x
DAFTAR LAMPIRAN Halaman
Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi.............................................
Lampiran 2. Surat Keterangan Penelitian Sitotoksik...............................
Lampiran 3. Foto Tanaman Sirsak...........................................................
Lampiran 4. Analisis Data........................................................................
Lampiran 5. Perhitungan % Sel Hidup.....................................................
Lampiran 6. Perhitungan Pembuatan Stok dan Seri Konsentrasi
Fraksi...................................................................................
29
31
32
33
34
35
xi
DAFTAR SINGKATAN
DMSO : Dimethyl Sulfokside
ELISA : Enzyme Linked Immunosorben Assay
FBS : Fetal Bovine Serum
IC50 : Inhibitory Concentration 50%
KCV : Kromatografi Cair Vakum
KLT : Kromatografi Lapis Tipis
LAF : Laminar Air Flow
MTT : 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide
PBS : Phospat Buffer Saline
RPMI : Roswell Park Memorial Institute
SDS : Sodium Dodecyl Sulfate
xii
INTISARI
Daun sirsak (Annona muricata L.) secara empiris digunakan untuk mengobati kanker. Penelitian sebelumnya menunjukkan ekstrak etil asetat daun sirsak mempunyai efek sitotoksik pada sel U-937 dengan nilai IC50 = 7,8 ± 0,3 µg/mL. Penelusuran atau skrining kandungan kimia dan aktivitasnya pada kulit batang sangat diperlukan untuk mengetahui efek sitotoksik fraksi non polar ekstrak etanolik kulit batang sirsak terhadap sel T47D dan kandungan senyawa yang tersari.
Ekstrak etanol diperoleh dari ekstraksi menggunakan pelarut etanol 96%, kemudian fraksi heksan diperoleh dengan metode KCV. Uji sitotoksik menggunakan metode MTT dengan berbagai seri konsentrasi fraksi sebesar 125,00; 62,50; 31,25; 15,62; dan 7,81 µg/mL. Pembacaan absorbansi menggunakan ELISA reader pada panjang gelombang 595 nm. Data yang diperoleh berupa absorbansi, digunakan untuk menghitung % sel hidup yang selanjutnya digunakan dalam menentukan nilai IC50. Analisis kualitatif kandungan senyawa dengan kromatografi lapis tipis (KLT) menggunakan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak n-heksan PA : etil asetat PA (9 : 1).
Hasil penelitian yang diperoleh menunjukkan bahwa fraksi non polar ekstrak etanolik kulit batang sirsak tidak memiliki efek sitotoksik terhadap sel T47D. Konsentrasi tertinggi pada 125 µg/mL menunjukkan % sel hidup = 114,94%. Hasil analisis KLT menunjukkan adanya senyawa saponin, polifenol, flavonoid, dan minyak atsiri.
Kata kunci: Annona muricata L., sel T47D, metode MTT, sitotoksik, ekstrak etanolik kulit batang sirsak