ACARA IIPENETAPAN KADAR KOLESTEROL

A. PELAKSANAAN PRAKTIKUM1. Tujuan PraktikumMenentukan kadar kolesterol total.42. Hari, Tanggal PraktikumSenin, 6 April 20153. Tempat PraktikumLantai II dan III, Laboratorium Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,, Universitas Mataram.

B. LANDASAN TEORISteroid adalah lipid terpenoid yang dicirikan dengan empat ring karbon yang menyatu satu sama lain (four fusedbrng) yang setiap ringnya tersusun dengan pola 6-6-6-5. Pola ring tersebut sering disimpulkan dengan huruf A,B,C,D. seroid kaya akan gugus fungsi yang terikat pada ring-ring tersebut. Ratusan steroid yang mempunyai peranan penting yang diketemukan pada tumbuhan, hewan, manusia, dan jamur. Semua steroid dibuat di dalam sel dari sterol lanosterol (pada hewan, manusia dan jamur) atau sterol sikloarteol (tumbuhan) kedua steroid tersebut diturunkan dari triterpenoid dan skualen (Sudarma, 2014 : 69-70).Kolesterol adalah lemak yang terutama diproduksi dalam hati yang didapat dari makanan, penting untuk menjaga fungsi tubuh supaya tetap baik seperti fungsi hormon dan berperanan penting pada produksi asam empedu. Produksi akan meningkat jika terdapat kandungan lemak yang banyak. Jumlah kolesterol dalam tubuh haruslah seimbang dengan kebutuhan. Jika jumlah kolesterol melebihi kebutuhan, kolesterol LDL (Low-Density Lipoprotein) maka akan timbul penyakit,contoh penyakit jantung koroner, penyakit pembuluh darah. Kolesterol membentuk bekuan dan plak yang menyumbat arteri dan akhirnya memutusksn aliran darah ke jantung (menyebabkan serangan jantung) dan ke otak (menyebabkan stroke) (Poedjadi, 2007 : 74).Menurut hipotesis lipid : kadar kolesterol abnormal (hiperkolesterolemia) yaitu, konsentrasi yang lebih tinggi dari LDL dan konsentrasi yang lebih rendah HDL fungsional yang berkaitan erat dengan penyakit jantung karena mempromosikan pembangunan ateroma pada arteri (aterosklerosis). Proses penyakit menyebabkan infark miokard (serangan jantung), stroke, dan penyakit pembuluh darah perifer. Karena darah yang lebih tinggi LDL, terutama LDL konsentrasi yang lebih tinggi dan lebih kecil ukuran partikel LDL partikel, menyumbang proses ini lebih dari kadar kolesterol LDL partikel, partikel LDL sering disebut "kolesterol jahat" karena mereka telah dikaitkan dengan pembentukan ateroma . Di sisi lain, konsentrasi tinggi HDL fungsional, yang dapat menghilangkan kolesterol dari sel dan ateroma (Wilbraham, 1992 : 112).Pada tubuh manusia kolesterol terdapat dalam darah, empedu, kelenjar adrenal bagian luar dan jaringan syaraf. Mula-mula kolesterol diisolasi dari batu empedu karena kolesterol ini merupakan komponen utama batu empedu tersebut. Kolesterol dapat larut dalam pelarut lemak misalnya eter, kloroform, benzena dan alcohol panas. Apabila terdapat dalam konsentrasi tinggi kolesterol mengkristal dalam bentuk kristal yang tidak berwarna, tidak terasa, tidak berbau dan mempunyai titik lebur 150o-151oC. Endapan kolesterol apabila terdapat dalam pembuluh darah dapat menyebabkan penyempitan pembuluh darah karena dinding pembuluh darah menjadi lebih tebal. Hal ini mengakibatkan berkurangnya kelenturan pembuluh darah sehingga aliran darah terganggu dan untuk mengatasi gangguan ini jantung harus mempompa darah lebih keras (Muharrami, 2011).Uji Pitosterol dilakukan dengan metode Liebermann Burchard-itu, yaitu ekstrak (2 mg) dilarutkan dalam 2 ml anhidrida asetat, dipanaskan sampai mendidih, didinginkan dan kemudian ditambahkan 1 ml asam sulfat pekat di sepanjang dinding tabung reaksi. Sebuah formasi cincin cokelat di tengah dan lapisan atas berwarna hijau tua menyatakan tes psotif adanya pitosterol (Nair, 2013).Uji fitokimia dilakukan sebagai berikut. Identifikasi awal adanya senyawa forbol ester dalam ekstrak bungkil jarak pagar dilakukan dengan cara uji adanya senyawa terpenoid dengan menggunakan pereaksi Liebermann-Burchard. Larutan coklat kekuningan hasil ekstraksi bungkil biji jarak pagar direaksikan dengan beberapa tetes anhidrida asam asetat dan satu tetes asam sulfat pekat. Hasil uji fitokimia ini menunjukkan bahwa dalam ekstrak bungkil jarak pagar terdapat senyawa terpenoid yang diduga forbol ester, ditandai terbentuknya warna merah-ungu bila direaksikan dengan reagen Liebermann-Burchard. Ekstrak bungkil biji jarak pagar positif mengandung senyawa terpenoid yang ditandai dengan terbentuknya warna merah keunguan. Reaksi senyawa terpenoid dengan pereaksi Liebermann-Burchard menghasilkan warna merah-ungu. Prinsip reaksi dalam mekanisme reaksi uji terpenoid adalah kondensasi atau pelepasan H2O dan penggabungan dengan karbokation. Reaksi ini diawali dengan proses asetilasi gugus hidroksil menggunakan asam asetat anhidrida. Gugus asetil yang merupakan gugus pergi yang baik akan lepas, sehingga terbentuk ikatan rangkap. Selanjutnya terjadi pelepasan gugus hidrogen beserta elektronnya, mengakibatkan ikatan rangkap berpindah. Senyawa ini mengalami resonansi yang bertindak sebagai elektroil atau karbokation. Serangan karbokation menyebabkan adisi elektroilik, diikuti pelepasan hidrogen. Kemudian gugus hidrogen beserta elektronnya dilepas, akibatnya senyawa mengalami perpanjangan konjugasi yang memperlihatkan munculnya warna merah-ungu (Siadi, 2012).Kadar kolesterol ditetapkan dengan menggunakan reagen Liebermann Burchard. Larutan standar kolesterol yang digunakan adalah 2 mg/ml larutan. Reagen Liebermann Burcard yang disiapkan adalah 7 ml asam sulfat pekat dan 5 ml asam asetat glacial yang ditutupi dengan kertas hitam dan disimpan di ember es di tempat gelap. Preparasi larutan sampel dan larutan standar kolesterol yaitu enam labu volumetric ditandai sebagai s1, s2, s3, s4, s5 dan s6. Larutan standar kolesterol ditambahkan sebanyak 0,4; 0,6; 0,8; 1,0 dan 1,2 ml ke dalam 5 labu volumetric, labu ke-6 dibiarkan kosong. 2 ml reagen Liebermann Burchard ditambahkan ke semua labu dan diencerkan sampai volume 10 ml dengan kloroform. Labu ditutupi dengan kertas karbon hitam dan disimpan di tempat gelap selama 15 menit. Kemudian, diatur hingga nol pada spektrofotometer dengan larutan blangko (s6) pada panjang gelombang 640 nm. Absorbansi untuk semua standar (6 labu) ditentukan oleh spektrofotmeter SP66 UV/Vis. 3 ml larutan sampel diambil dan absorbansinya ditentukan dengan spektrofotometer SP65 UV/Vis setelah ditambahkan 1 ml sampel minyak, 2 ml reagent Liebermann Burchard dan 7 ml kloroform. Konsentrasi kolesterol pada larutan sampel ditentukan menggunakan kurva standar antara absorbansi dan konsentrasi kolesterol (Atinafu, 2011).

C. ALAT DAN BAHAN PRAKTIKUM1. Alat-alat Praktikuma. Centrifugeb. Kuvetc. Penangas aird. Pipet tetese. Spektrofotometer UV-Visf. Tabung reaksig. Rak tabung reaksih. Rubber bulbi. Pipet volume 2 mlj. Pipet volume 1 mlk. Penjepit kayul. Gelas kimia 100 ml

2. Bahan-bahan Praktikuma. Alkohol absolutb. Aquades (H2O(l))c. CH3COOH glasiald. Color reagente. H2SO4pekatf. Petroleum benzenag. Serum kolesterol sampelh. Kolesterol standar 0,05 mg/ml

D. SKEMA KERJA1. Uji sampel1 buah tabung reaksi bertutup Dimasukkan 2,5 mL alkohol + 0.1 mL serum kolesterol + 5 mL dietil eter (tabung ditutup rapat) Dicampur dalam sentrifuge selama 30 detik Hasil + 3 mL aquadest (dikocok 10-15 menit dengan sentrifius) Didiamkan Terbentuk 2 lapisan

Lapisan atas lapisan bawah Dimasukkan dalam tabung reaksi lain Diuapkan dalam penangas air (80C) sampai cairan tinggal sedikit (5 menit) Didinginkan (dibiarkan mengering)

Tabung reaksi blankoHasil + 4 ml asam asetat glasial+4 ml colour reagent dalam penangas air 5 menit BlangkoDidinginkan pada suhu kamarSampel

2 lapisan

Disentrifuge 1-2 menitDidiamkan dalam ruang gelap (30 menit)Diencerkan 10 kali (1 ml menjadi 10 ml untuk sampel saja)Diukur A pada = 560 nm

Hasil

2. Kurva kalibrasi Tabung 1 Tabung 2 Tabung 3 Masing-masing tabung di + 0.5 ; 1.0 ; 2.0 (mL) kolesterol standar 0.05 mg/mL petroleum benzen Diuapkan sampai kering (tersisa sedikit) dalam penangas air (80C) Sisanya yang tertinggal diuapkan pada suhu kamar Hasil +4 ml colour reagent dalam penangas air 10-15 menit Didinginkan pada suhu kamar + 3 ml asam sulfat pekat2 lapisan Disentrifuge 1-2 menit Didiamkan dalam ruang gelap (30 menit) Diencerkan 10 kali (1 ml menjadi 10 ml) Diukur A pada = 560 nm HasilE. HASIL PENGAMATAN1. Uji Sampel

PerlakuanHasil Pengamatan

0,1 ml serum + 2,5 ml alkohol absolut, kocok Larutan agak keruh dan terbentuk endapan putih Setelah dikocok filtrate jernih, terdapat endapan putih

+ 5 ml pertoleum benzen, ditutup tabung rapat-rapat. Dicampur sentrifuge (30 menit) Terbentuk 2 lapisan, lapisan atas petroleum benzene dan lapisan bawah campuran alcohol + serum kolesterol Tetap / tidak ada perubahan

+ 3 ml aquades

kocok lagi selama 10-15 detik kemudian didiamkan diambil lapisan atas. Terbentuk 3 lapisanLapisan atas : bening, tabung terasa agak panasLapisan tengah : endapan putihLapisan bawah : putih keruh, tabung terasa dingin. Tetap 3 lapisanLapisan atas : beningLapisan tengah : endapan putihLapisan bawah : bening, endapan putih

Lapisan bening (lapisan atas) diuapkan dalam penangas air (80oC). biarkan mengering Volume berkurang

+ 4,0 ml Colour reagent, Dipanaskan, lalu didinginkan pada suhu kamar Larutan berwarna kuning bening

+ 3 ml H2SO4 pekat

Terbentuk 3 lapisan Lapisan atas : kuning Lapisan tengah : putih Lapisan bawah : bening

Blanko: asam asetat glacial + 3 ml H2SO4 pekat, Larutan berwarna bening

Diamkan tabung sampel dan blanko dalam ruang gelap selama 30 menit. Tidak terjadi perubahan

Larutan sampel diencerkan 10 kali Larutan lebih encer (bening)

Diukur A pada larutan sampel dan larutan blanko dengan spektrofotometer UV-Vis pada = 560 nmSampel : 0,25 Blanko : 0,07

2. Kurva Kalibrasi

Langkah kerjaHasil Pengamatan

1. Tabung I: 0,5 ml kolesterol standar Diuapkan + 4 ml colour reagent Panaskan 10-15 menit + 3 ml asam sulfat, dikocokWarna awal bening

diuapkan : bening, larutan tinggal sedikit larutan berwarna kuning bening tetap kuning bening terbentuk 3 lapisan :lapisan atas : berwarna kuning beninglapisan tengah : larutan kuning keruhlapisan bawah : berwarna bening. Terasa panas

2. Tabung II: 1 ml Di panaskan + 4 ml colour reagen Panaskan + 3 ml asam sulfat, dikocok Warna awal bening dipanaskan : bening larutan berwarna kuning bening kuning bening terbentuk 3 lapisan : lapisan atas : berwarna kuning beninglapisan tengah : coklat mudalapisan bawah : berwarna bening Terasa panas

3. Tabung III: 2 ml Di panaskan + 4 ml colour reagen Panaskan + 3 ml asam sulfat, dikocok Warna awal bening dipanaskan : bening larutan berwarna kuning bening kuning bening terbentuk 3 lapisan : lapisan atas : berwarna kuning beninglapisan tengah : coklat bawah : berwarna bening. Terasa panas

Ketiga tabung didiamkan dalam ruang gelap selama 30 menit.

Diencerkan 10 kaliSetelah didiamkan selama 30 menit diruang gelap:

Tabung I : kuning keruhTabung II : kuning keruhTabung III : putih keruh

Lebih encer

Diukur A dengan spektrofotometer UV-Vis pada = 560 nmSetelah diukur dengan UV-Vis:

Tabung I: 0,12Tabung II: 0,24Tabung III: 0,32

F. ANALISIS DATA1. Persamaan Reaksi

2. PerhitunganDiketahui : - Konsentrasi standar = 0,05 mg/ml - Konsentrasi kolesterol dalam standarV1 = 0,5 mlV2 = 1 mlV3 = 2 ml Ditanya : Kadar masing-masing kolesterol Jawab: a. Kadar 1 = V x kadar kolesterol standar = 0,5 ml x 0,05 mg/ml = 0,025 mg

b. Kadar 2 = V x kadar kolesterol standar = 1,0 ml x 0,05 mg/ml = 0,05 mg

c. Kadar 3 = V x kadar kolesterol standar = 2,0 ml x 0,05 mg/ml = 0,1 mg

Pengenceran a. M1 x V1 = M2 x V2 M2 = = = 0,0025 mg b. M1 x V1 = M2 x V2 M2 = = = 0,005 mg c. M1 x V1 = M2 x V2 M2 = = = 0,01 mg

Tabel analog hubungan antara massa kolesterol dengan absorbansinya:

KonsentrasiAbsorbansi

0,00250,12

0,0050,24

0,010,32

Kurva Kalibrasi

Dari kurva, diperoleh persamaan y = 35.81x + 0Penentuan kadar kolesterol dalam serumy= 35,81x + 00,25= 35,81x x= 0,0069 mg/ml , setelah pengenceran 10 mlJadi kadar kolesterol dalam serum adalah M1 x V1 = M2 x V2 M1 x 1 ml = 0,0069 mg/ml x 10 ml M1 = 0,069 mg dalam 0,1 ml sampel yang digunakan

G. PEMBAHASANPraktikum kali ini bertujuan untuk menentukan kadar kolesterol total dalam serum rendah dan serum tinggi. Cholesterol adalah lipid yang terdapat pada membarane sel pada jaringan hewan, dan ditransformasikan ke plasma darah pada hewan tersebut. Sebagian besar cholesterol di dalam tubuh kita disintesa oleh tubuh dan juga diambil dari sumber makanan. Cholesterol memainkan peranan penting dalam proses biokimia misalnya sebagai komponen membrane sel dan sintesa berbagai hormone steroid. Karena cholesterol tidak larut dalam darah, maka ditransformasikan dalm sistem sirkulasi lipoprotein (Sudarma, 2014: 73).Kolesterol dalam jumlah yang sedikit pada tubuh diperlukan untuk proses-proses tertentu bagi kelangsungan hidup. Akan tetapi, kalau jumlahnya berlebihan maka kolesterol akan membuat darah menjadi lebih kental, lebih berlemak sehingga mengancam bagi kelancaran peredaran darah apalagi jika sudah menempel di dinding pembuluh darah atau mengendap membuat sumbatan pada pembuluh darah kecil. Kadar kolesterol total yang dianggap ideal adalah dibawah 200 mg/dL.Metode yang digunakan dalam percobaan ini adalah reaksi Lieberman-Burchard. Adapun kelebihan reaksi Lieberman-Burchard adalah reaksinya berjalan cepat, reagen bersifat stabil, realtif mudah, sensitivitas cukup tinggi dan tidak terganggu oleh hormon steroid. Dilakukannya penentuan kadar kolesterol ini sangatlah berguna dalam bidang klinis yaitu untuk keperluan diagnosa gangguan metabolik lipid, seperti penyakit jantung maupun diabetes melitus.Secara umum, kimia sterol dalam jumlah besar barkaitan dengan pengetahuan mengenai sifat kimia, sintesis kimia dan analisis sterol. Saat ini penelitian juga mencakup mengenai penetapan kadar kolesterol dalam sampel minyak nabati menggunakan spektoskopi UV-vis dengan metode Liebermann-Burchard. Uji Liebermann-Burchard merupakan uji kolorimetri untuk mendeteksi adanya kolesterol, dimana uji ini memberikan hasil warna hijau tua. Pembentukan warna hijau atau hijau kebiruan setelah beberapa menit menandakan hasil yang positif. Perubahan warna ini dikarenakan adanya gugus hidroksi (-OH) pada kolesterol yang bereaksi dengan reagent dan meningkatkan konjugasi dari ring yang jenuh. Dalam reaksi ini, asetat anhidrida yang ada di dalam Reagen Liebermann bereaksi dengan kolesterol yang memberikan warna hijau , dan absrobansi dapat ditentukan dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada 640 nm. Prinsip reaksi dalam mekanisme reaksi uji kolesterol ini adalah kondensasi atau pelepasan H2O dan penggabungan dengan karbokation. Reaksi ini diawali dengan proses asetilasi gugus hidroksil menggunakan asam asetat anhidrida. Gugus asetil yang merupakan gugus pergi yang baik akan lepas, sehingga terbentuk ikatan rangkap. Selanjutnya terjadi pelepasan gugus hidrogen beserta elektronnya, mengakibatkan ikatan rangkap berpindah. Senyawa ini mengalami resonansi yang bertindak sebagai elektrofil atau karbokation. Serangan karbokation menyebabkan adisi elektrofilik, diikuti pelepasan hidrogen. Kemudian gugus hidrogen beserta elektronnya dilepas, akibatnya senyawa mengalami perpanjangan konjugasi yang memperlihatkan munculnya warna hijau tua.Penentuan kadar kolesterol ini terdiri atas 2 percobaan yaitu, uji sampel dan pembuatan larutan standar untuk kurva kalibrasi. Pada percobaan pertama yaitu uji sampel. Sampel ditambahkan dengan alkohol absolut yang berfungsi sebagai pelarut polar, dimana berdasarkan hasil pengamatan larutan agak keruh dan terbentuk gumpalan/endapan putih. Terbentuknya gumpalan dan larutan agak keruh menunjukkan bahwa komponen dalam serum yang bersifat polar akan larut dalam alkohol atau terpisah dengan serum yang ditunjukkan oleh terbentuknya koagulan/endapan putih dan setelah dikocok larutan menjadi jernih dan endapan putih tetap terbentuk. Alkohol absolute merupakan alkohol yang mendekati alkohol murni dan bersifat anhydrous dan merupakan pelarut yang bersifat polar. Kolesterol dan derivatnya, tidak larut dalam air tetapi larut dalam minyak dan alkohol panas, sehingga dimasukkan dalam golongan lipid (lemak). Pada proses selanjutnya ke dalam campuran ditambahkan dengan pertoleum benzen yang merupakan pelarut nonpolar (campuran dari n-heksan, heptana dan propana). Penambahan petroleum benzen ini bertujuan untuk melarutkan kolesterol yang terdapat dalam serum karena kolesterol merupakan senyawa yang tidak larut dalam air tetapi larut dalam minyak atau alcohol. Diaman terbentuk dua lapisan yaitu lapisan atas merupakan petroleum benzene dan lapisan bawah campuran alcohol + serum kolesterol. Kemudian dilakukan homogenisasi menggunakan sentrifugas dan tidak terjadi perubahan. Kemudian kedalam larutan ditambahkan aquades yang bertujuan untuk memisahkan lapisan kolesterol dengan komponen lain karena kolesterol cenderung bersifat sedikit polar bila dilihat dari gugus fungsi OH-nya. Terbentuk 3 lapisan yaitu, lapisan atas bening serta tabung terasa panas, lapsan tengah terdapat endapan putih, dan lapisan bawah putih keruh tabung terasa dingin. Setelah itu di kocok, adapun tujuan dilakukannya pengocokan atau vortex mixer adalah agar fase 2 pelarut tersebut terpisah sempurna. Berdasarkan hasil pengamatan, tidak terjadi perubahan namun pada lapisan bawah yang semula keruh menjadi bening setelah pengocokan.. Terbentuknya larutan berwarna bening dengan sedikit endapan putih, endapan yang terbentuk tidak seperti koagulan pada penambahan alkohol, yang menunjukkan bahwa serum yang mengandung senyawa dengan sifat nonpolar telah terlarutkan dalam pelarut organik tersebut. Jika ditinjau dari sifat fisik larutan yang berwarna bening, menunjukkan bahwa senyawa yang terlarut dalam pertoleum benzen ini merupakan kolesterol. Penggunaan petroleum benzen sebagai pelarut dikarenakan meskipun kolesterol memiliki gugus fungsi yang bersifat polar (gugus OH), karena pengaruh dari ring yang cukup panjang (yang lebih nonpolar) dari kolesterol, menyebabkan sifat dari senyawa ini menjadi nonpolar. Proses selanjutnya adalah lapisan atas (larutan bening) pada campuran tersebut dipisahkan dan kemudian dilakukan penguapan pada suhu 80C dengan tujuan meningkatkan konsentrasi dari kolesterol yang ada, serta untuk mengurangi atau menguapkan senyawa selain kolesterol yang bersifat polar karena pelarut (alcohol absolute dan dietil eter) mempunyai titik didih pada kisaran suhu tersebut sehingga pelarut akan menguap dan yang tersisa hanya kolesterol yang akan diuji warnanya. Proses selanjutnya adalah dilakukan penambahan colour reagen yang merupakan FeCl3.6H2O mg/mL dalam asam asetat glacial dengan tujuan memberi warna pada larutan tersebut sehingga dapat dengan mudah dideteksi oleh UV-Vis, karena pada dasarnya kolesterol yang diuji tidak berwarna, sehingga tidak dapat terdeteksi oleh spektrofotometer UV-Vis yang dasarnya mengidentifikasi/ menentukan absorbansi untuk senyawa berwarna, dimana larutan yang awalnya bening menjadi kuning bening setalah ditambahkan colour reagen. Untuk mengoptimalkan terbentuknya kompleks warna atau pengikatan kolesterol oleh colour reagent, maka dilakukan penambahan H2SO4. Berdasarkan hasil pengamatan, terbentuk 3 lapisan warna: lapisan atas berwarna kuning, lapisan tengah putih dan lapisan bawah bening. Perubahan warna terjadi karena adanya kesetimbangan pada kompleks warna tersebut. Kemudian larutan didiamkan ditempat gelap selama 30 menit. Hal ini dikarenakan kolesterol dapat menyerap cahaya dan dapat mempengaruhi serapan cahaya pada saat pengukuran sehingga akan mempengaruhi hasil pengukuran. Selanjutnya, larutan diencerkan 10 kali untuk menurunkan konsentrasi dari kolesterol. Dari hasil analisis data, nilai kadar kolesterol dalam serum kolesterol diperoleh sebesar 0,069 mg/ml. Namun, jika ditinjau dari kadar total kolesterol dalam serum tersebut, maka kadar koleterolnya tergolong rendah karena kadarnya kurang dari kadar kolesterol standar yang ada dalam tubuh. Dimana kadar koleterol dalam darah manusia berkisar antara 150-200 mg/dL (per 100 mL) sehingga nilai kadar kolesterol pada hasil pengamatan lebih rendah daripada kadar normal kolesterol dalam darah.Untuk mengukur absorbansi (A) digunakan alat spekrtofotometer. Spektrofotometer sesuai dengan namanya adalah alat yang terdiri dari spectrometer dan fotometer. Spektrometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu dan fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya yang di transmisikan atau yang di absorpsi. Spektrofotometer bekerja berdasarkan penyerapan sinar yang dihasilkan oleh sampel yang bewarna pada panjang gelombang tertentu. Spektrofotometer dapat mengidentifikasi logam yang ada dalam sampel bila sampel itu bewarna, namum sulit diidentifikasi pada sampel yang tidak menghasilkan perubahan warna atau kadar logam dalam sampel sangat kecil sekali. Dilakukan pengukuran menggunakan spektrofometer dengan pengukuran absorban pada =560, karena pada panjang gelombang tersebut diperoleh absorban yang stabil. Absorbansi sampel kolesterol (yang sudah diencerkan) setelah diukur adalah 0,25; dan absorban blanko sebesar 0,07.Percobaan kedua adalah kurva kalibrasi. Kalibrasi merupakan proses verifikasi bahwa suatu akurasi alat ukur sesuai dengan rancangannya. Kalibrasi biasa dilakukan dengan membandingkan suatu standar yang terhubung dengan standar nasional maupun internasional dan bahan-bahan acuan tersertifikasi. Kalibrasi, pada umumnya, merupakan proses untuk menyesuaikan keluaran atau indikasi dari suatu perangkat pengukuran agar sesuai dengan besaran dari standar yang digunakan dalam akurasi tertentu. Pada 3 tabung reaksi masing-masing dimasukkan 0,5 ml, 1,0 ml, dan 2,0 ml larutan konsentrasi standar. Larutan ini berwarna bening. Penambahan bahan-bahan seperti colour reagent dan lain-lain pada percobaan ke dua ini memiliki fungsi dan tujuan yang sama pada uji sampel di atas. Pada penambahan colour reagen larutan menjadi kuning bening. Dan setelah ditambahkan asam sulfat terbentuk 3 lapisan yaitu lapisan atas berwarna kuning bening, lapisan tengah kuning keruh dan lapisan bawah bening, namun pada tabung 2 dan 3 pada lapisan tengahnya berwarna coklat muda dan coklat. Setelah didiamkan pada ruang gelap tabung 1 dan 2 menjadi kuning keruh dan tabung 3 putih keruh. Didiamkan pada ruang gelap karena kolesterol dapat menyerap cahaya dan dapat mempengaruhi serapan cahaya pada saat pengukuran sehingga akan mempengaruhi hasil pengukuran. Selanjutnya, larutan diencerkan 10 kali untuk menurunkan konsentrasi dari kolesterol. Dilakukan pengukuran menggunakan spektrofometer UV-Vis dengan pengukuran absorban pada =560, karena pada panjang gelombang tersebut diperoleh absorban yang stabil. Berdasarkan percobaan, absorbansi pada massa 0,0025 ; 0,005 dan 0,01 secara berurutan yaitu 0,12 A; 0,24 A; dan 0,32 A.

H. KESIMPULANBerdasarkan percobaan yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa nilai kadar kolesterol diperoleh sebesar 0,069 mg/ml. Untuk mengukur absorbansi (A) digunakan alat spekrtofotometer UV-Vis. Absorbansi pada massa 0,0025 mg ; 0,005 mg dan 0,01 mg secara berurutan yaitu 0,21 A; 0,24 A; dan 0,32 A. Dan untuk sampel diperoleh nilai absorbansi sebesar 0,25 A.

DAFTAR PUSTAKA

Atinafu, Dimberu G., dan Belete Bedemo. 2011. Estimation of Total Free Fatty Acid and Cholesterol Content in Some Commercial Edible Oils in Ethiopia Bahir Dar. Etiopia: Bahir Dar University.Muharrami, Laila Khamsatul. 2011. Penentuan Kadar Kolesterol dengan Metode Kromatografi Gas. Bangkalan: Universitas Trunojoyo Madura.Nair, Vijay Mala (Grover), dan Roopalatha U C. 2013. Phytochemical Analysis of Successive Reextracts of the Leaves of Moringa Oleifera lam. India. Mangalore University.Poedjadi, Anna. 2007. Dasar-Dasar Biokimia. Jakarta: UI-Press.Siadi, K. 2012. Ekstrak Bungkil Biji Jarak Pagar (Jatropha curcas) sebagai Biopestisida yang Efektif dengan Penambahan Larutan NaCl. Semarang: Universitas Negeri Semarang.Sudarma, I Made. 2014. Kimia Bahan Alam (Ekstraksi, Isolasi, dan Transformasi). Mataram: Universitas Mataram.Wilbraham.1992. Kimia Organik dan Hayati.Bandung : ITB.

LAPORAN PRAKTIKUMBIOKIMIA 2ACARA 2PENETAPAN KADAR KOLESTEROL

DISUSUN OLEHHUJANI OLTANTIAG1C 012 013

PROGRAM STUDI KIMIAFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAMUNIVERSITAS MATARAM2015