AbstrakUji aktivitas protease bertujuan untuk melihat ada atau tidaknya aktivitas protease dari setiap fraksi protein. Protease mendegradasi protein menjadi molekul yang lebih sederhana. Pengukuran aktivitas protease menggunakan metode Bergmeyer & Grassl. Prinsipnya adalah kasein sebagai substrat akan dihidrolisis oleh protease menjadi peptida dan asam amino. Penambahan TCA menyebabkan produk yang mengandung peptida dan asam amino akan larut dalam TCA, sedangkan protein yang tidak terhidrolisis akan mengendap. Adapun pengukurannya dilakukan dengan menghitung absorbansi dari masing-masing fraksi dengan variasi suhu dan pH menggunakan alat HPLC.Kata Kunci: Protease, Metode Bergmeyer & Grassl, Kasein, TCAAbstractProtease activity test aimed to see whether or not the protease activity of each protein fraction. Protease degrades proteins into simpler molecules. Measurement of protease activity using methods Bergmeyer & Grassl . The principle is casein as a substrate to be hydrolysed by protease into peptides and amino acids. The addition of TCA causes products containing peptides and amino acids will dissolve in the TCA, while the non-hydrolyzed protein would precipitate. The absorbances of the fractions with pH and temperature variation then measured by HPLC instrument.Keywords: Proteases, Bergmeyer & Grassl Method, Casein, TCA

Metode AlatBeaker Glass, High Performance Liquid Chromatography (HPLC), Inkubator, Labu Ukur, Mikropipet, Pipet Volume, Tabung Reaksi.BahanAquades, Kasein, Fraksi Protein, Tri kloroasetat (TCA).

Pembuatan Kurva Standar Kasein 50 mg kasein dilarutkan dengan aquades dalam labu ukur 100 mL. dilakukan pengenceran, hingga diperoleh larutan kasein standar dengan konsentrasi 4, 8, 12, 16, dan 20 mg/100 mL. Kemudian, 0,6 mL diambil dari setiap larutan dan ditambahkan 5 mL larutan TCA 3,5%. Kontrol dibuat dari 0,6 mL aquades ditambah 5 mL larutan TCA 3,5%. Absorbansi setiap larutan diukur dengan HPLC pada 275 nm. Kurva standar yang menunjukkan hubungan antara kadar kasein dan absorbansi dibuat.Uji Aktivitas Lipase Pada Variasi SuhuTabung sampel berisi 0,1 mL substrat kasein 0,5% disiapkan. Tabung kontrol berisi 0,12 mL aquades disiapkan. Semua tabung diinkubasi selama 5 menit pada suhu 37,57C. Kemudian, 0,02 mL fraksi protein ditambahkan. Inkubasi dilanjutkan selama 30 menit pada suhu 37, 57C. Larutan TCA 0,1 mL 3,5% pada semua tabung. Sentrifugasi pada kecepatan 6000 G dan suhu 4 C selama 10 menit. Filtrat diambil dan diukur absorbansi produk hasil reaksi pada 280 nm. 1 unit aktivitas enzim kaseinolitik didefinisikan sebagai jumlah enzim yang menghasilkan 1 g tirosin pada kondisi standar.

Uji Aktivitas Lipase Pada Variasi PhTabung sampel berisi 0,1 mL substrat kasein 0,5% disiapkan. Tabung kontrol berisi 0,02 mL aquades disiapkan. Semua tabung diinkubasi selama 5 menit pada suhu 37 C. Kemudian, 0,02 mL fraksi protein tambahkan pada masing-masing tabung sampel. Lalu, 0,28 mL larutan dapar pH 3,5 dan 7,5 ditambahkan. Inkubasi dilanjutkan selama 30 menit pada suhu 37 C. Larutan TCA 1 mL 3,5% ditambahkan pada semua tabung. Sentrifugasi pada kecepatan 6000 G dan suhu 4C selama 10 menit. . Filtrat diambil dan diukur absorbansi produk hasil reaksi pada 280 nm. 1 unit aktivitas enzim kaseinolitik didefinisikan sebagai jumlah enzim yang menghasilkan 1 g tirosin pada kondisi standar.