PRODUKSI ANTIBODI POLIKLONAL ANTI H5N1 PADA MARMOT (Cavia porcellus) YANG DIVAKSINASI DENGAN

VAKSIN AVIAN INFLUENZA H5N1 DAN H5N2

KUNTO WIDYASMORO

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR 2007

PRODUKSI ANTIBODI POLIKLONAL ANTI H5N1 PADA MARMOT (Cavia porcellus) YANG DIVAKSINASI DENGAN

VAKSIN AVIAN INFLUENZA H5N1 DAN H5N2

KUNTO WIDYASMORO

B04103169

Skripsi sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Kedokteran Hewan pada Fakultas Kedokteran Hewan

Institut Pertanian Bogor

FAKULTAS KEDOKTERAN HEWAN

INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR

2007

Judul Penelitian : Produksi Antibodi Poliklonal Anti H5N1 pada Marmot (Cavia porcellus) yang Divaksinasi dengan Vaksin Avian Influenza H5N1 dan H5N2

Nama : Kunto Widyasmoro

NRP : B04103169

Disetujui

Dr. Drh. Sri Murtini, M.Si. Drh. Okti Nadia Poetri, M.Si.

Pembimbing I Pembimbing II

Diketahui

Dr. Drh. I Wayan Teguh Wibawan, M.S.

Wakil Dekan Fakutas Kedokteran Hewan

Institut Pertanian Bogor

Tanggal Lulus : 7 September 2007

ABSTRACT KUNTO WIDYASMORO. Production of Poliklonal Antibody Anti H5N1 in Guinea Pig (Cavia porcellus) which were Vaccinated with Avian Influenza Vaccine of H5N1 and H5N2. Supervised by SRI MURTINI and OKTI NADIA POETRI.

The aim of this research was to know the method of polyclonal antibody anti H5N1 production in guinea pigs (Cavia porcellus). Eight adult male guinea pigs were devided into two treatment groups, first group were vaccinated with avian infuenza vaccine of H5N1 subtype, and the second group were vaccinated with avian influenza vaccine of H5N2 subtype. Vaccination was done in three times with a month interval and subcutaneous route (SC). The sample of sera were taken two week after the second vaccination and one week after the third vaccination, and then it were examined by HI test against the H5N1 antigen. After its obtain enough antibody, animals were vaccinated with antigen without adjuvan intravenously. A week later, the sample of sera were taken and examined with HI test and AGP test against the H5N1 antigen. The result of the three HI test shown that the vaccination with H5N1 vaccine could induce the production of antibody and the highest titer was reached in one week after vaccination with antigen without adjuvan, that is 28,75, and the lowest was in one week after the third vaccination, that is 25,75. Animals which were vaccinated with H5N2 vaccine were able to produce antibody against H5N2 in two week after the second vaccination and the titer is 27,5. The antibody could react against the H5N1 antigen in the first, second, and third HI test, and showing the highest titer in one week after vaccination with antigen without adjuvan, that is 26,75. The result of AGP test shown that the antibody were resulted from the two subtypes of vaccine fit against the H5N1 antigen.

ABSTRAK

KUNTO WIDYASMORO. Produksi Antibodi Poliklonal Anti H5N1 pada Marmot (Cavia porcellus) yang Divaksinasi dengan Vaksin Avian Influenza H5N1 dan H5N2. Dibawah bimbingan SRI MURTINI dan OKTI NADIA POETRI.

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui metode produksi antibodi poliklonal anti H5N1 pada Marmot (Cavia porcellus). Delapan ekor Marmot (Cavia porcellus) jantan dewasa dibagi menjadi dua kelompok perlakuan, Kelompok pertama divaksinasi dengan menggunakan vaksin AI H5N1, dan kelompok ke dua dengan vaksin AI H5N2. Vaksin yang digunakan adalah vaksin inaktif dengan adjuvan. Vaksinasi dilakukan sebanyak tiga kali dengan interval masing-masing satu bulan rute subkutan (SC). Sampel serum diambil dua minggu setelah vaksinasi ke dua dan satu minggu setelah vaksinasi ke tiga, selanjutnya diuji dengan uji HI terhadap antigen H5N1. Setelah diperoleh antibodi yang cukup, hewan kembali divaksinasi dengan antigen tanpa adjuvan melalui rute intravena (IV). Setelah satu minggu sampel serum diambil dan diuji dengan uji HI dan uji AGP terhadap antigen H5N1. Hasil ketiga kali uji HI menunjukkan bahwa vaksinasi dengan vaksin H5N1 dapat menginduksi produksi antibodi dan titer tertinggi dicapai pada satu minggu setelah vaksinasi dengan antigen tanpa adjuvan, yaitu 28,75, dan terendah pada satu minggu setelah vaksinasi ke tiga, yaitu 25,75. Vaksinasi dengan vaksin H5N2 telah menghasilkan antibodi yang tinggi terhadap H5N2 pada dua minggu setelah vaksinasi ke dua, yaitu 27,5. Antibodi tersebut dapat bereaksi terhadap antigen H5N1 pada uji I, II, dan III dan menunjukkan titer tertinggi sebesar 26,75 pada satu minggu setelah vaksinasi dengan antigen tanpa adjuvan. Hasil uji AGP menunjukkan bahwa antibodi yang dihasilkan dari kedua vaksin tersebut memiliki kesesuaian yang tinggi dengan antigen H5N1.

KATA PENGANTAR

Bismillahirrahmaanirraahiim.

Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah

memberikan rahmat, nikmat, dan karunia-Nya yang tak terhingga sehingga

penulis mampu menyelesaikan skripsi ini yang berjudul Produksi Antibodi

Poliklonal Anti Virus Avian Influenza H5N1 pada Marmot (Cavia porcellus)

yang Divaksinasi dengan Vaksin Avian Influenza Inaktif H5N1 dan H5N2.

Shalawat dan salam semoga selalu tercurahkan kepada junjungan kita, Suri

tauladan kita, panglima perang kita Nabi besar Muhammad SAW, kepada

keluarga, sahabat, dan Umatnya yang Insya Allah tetap dan selalu istiqomah di

jalannya hingga yaumul akhir, Amien.

Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Kedokteran Hewan, Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian

Bogor. Disamping itu penulisan skripsi ini bertujuan untuk memberikan suatu

sumbangsih bagi kemajuan dunia peternakan dan kesehatan hewan.

Penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada semua

pihak yang turut membantu dalam penulisan skripsi ini, yaitu : Ayahanda

Suharjono dan Ibunda Sukaryati yang telah mencurahkan perhatian, pengorbanan

dan kasih sayang yang teramat sangat besar kepada penulis, Dr. drh. Sri Murtini

M.Si. selaku dosen pembimbing skripsi pertama dan drh. Okti Nadia Poetri M.Si.

selaku dosen pembimbing kedua, yang telah memberikan bimbingan dan

pengarahan yang amat sangat berguna sehingga skripsi ini dapat diselesaikan, Dr.

Drh. Retno D. Soejoedono M.S. dan Drh Titik Sinartatie M.S. atas segala

masukan dan arahannya, Dr. Ir. Dewi Apri Astuti MS. dan Dr. drh. Damiana R.E.

M.S. selaku pembimbing akademik atas bimbingan, arahan, dukungan dan segala

bantuannya selama penulis menjalani kegiatan akademik sampai terselesainya

tugas akhir ini, Dyan Wahyu Wibowo S.T., saudara penulis satu-satunya, atas

dukungan, doa, dan pengorbanannya, Fanny atas segala dukungan dan doanya,

Teman-teman satu laboratorium (Isaias dan Ani) atas segala bantuan dan

kebersamaannya selama penyelesaian tugas akhir ini, Teman-teman Cendana 9

(Yunus, Bangkit, Mas Harry, Dedi) atas segala bantuan, kebersamaan, dan

kesediaannya untuk berbagi, Teman-teman seperjuangan FKH 40 khususnya Nita,

Cepi, Aji, Laksana, Bheta, Irfan, Sabto, Dewilis, terima kasih untuk kebersamaan

dan kekeluargaan dan bantuan yang diberikan selama ini, Ibu Emir Siregar, atas

segala bantuannya, juga tidak lupa kepada Pak Supri, Pak Nur, Pak Lukman, Mas

Wahyu atas bantuan yang telah diberikan dan kepada pihak yang terlibat secara

langsung atau pun tidak langsung dalam penyusunan skripsi ini. Terakhir penulis

ucapkan terima kasih kepada seluruh civitas akademika Fakultas Kedokteran

Hewan IPB. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi ilmu pengetahuan

Indonesia.

Penulis sangat menyadari bahwa karya kecil ini jauh dari kata sempurna,

karena itu penulis sangat mengharapkan kritik dan saran yang sifatnya

membangun untuk lebih menyempurnakan skrisi ini. Penulis berharap karya

ilmiah ini dapat bermanfaat bagi dunia peternakan dan kesehatan hewan serta

kemajuan ilmu pengetahuan.

Bogor, September 2007

Penulis

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Bantul pada tanggal 15 Mei 1984 dari pasangan

Bapak Suharjono dan Ibu Sukaryati. Penulis merupakan anak ke dua dari dua

bersaudara.

Riwayat pendidikan penulis dimulai pada saat penulis terdaftar sebagai

salah satu siswa di Sekolah Dasar Negeri Puron Srandakan Bantul sampai dengan

tahun 1996. Kemudian penulis melanjutkan pendidikannya pada Sekolah

Lanjutan Tingkat Pertama Negeri 1 Sanden Bantul dan lulus pada tahun 1999.

Penulis kemudian melanjutkan pendidikan di Sekolah Menengah Umum Negeri 8

Yogyakarta dan lulus pada tahun 2002.

Penulis diterima di Institut Pertanian Bogor (IPB) melalui Seleksi

Penerimaan Mahasiswa Baru (SPMB) pada tahun 2003. Penulis terdaftar sebagai

salah satu mahasiswa program studi Kedokteran Hewan, Fakultas Kedokteran

Hewan, Institut Pertanian Bogor.

Selama menjalani masa perkuliahan, penulis aktif di berbagai kegiatan

dalam lingkungan Fakultas Kedokteran Hewan. Penulis Juga aktif dalam berbagai

kegiatan bakti dan pengabdian masyarakat yang diselenggarakan oleh FKH IPB.

DAFTAR ISI Halaman KATA PENGANTAR ................................................................................... i

RIWAYAT HIDUP ...................................................................................... iii

DAFTAR ISI .................................................................................................. iv

DAFTAR TABEL ...................................................................................... vi

DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... vii

DAFTAR LAMPIRAN.................................................................................... viii

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang .......................................................................... 1

1.2 Tujuan ...................................................................................... 3

1.3 Manfaat ...................................................................................... 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Avian Influenza .......................................................................... 4

2.1.1 Diagnosa Avian Influenza .................................................. 5

2.1.2 Vaksinasi Avian influenza .................................................. 6

2.2 Marmot (Cavia Porcellus) .................................................. 7

2.2.1 Sejarah Marmot .............................................................. 7

2.2.2 Klasifikasi Ilmiah Marmot ................................................... 8

2.2.3 Karakteristik Fisik ............................................................... 8

2.2.4 Kebutuhan Pakan ............................................................... 9

2.2.5 Tingkah Laku/Kebiasaan Hidup Marmot ........................... 9

2.2.6 Nilai Fisiologis Marmot ................................................... 10

2.2.7 Habitat ........................................................................... 10

2.2.8 Kepentingan Untuk Manusia ....................................... 11

2.3 Antibodi ....................................................................................... 11

2.3.1 Antibodi Poliklonal ............................................................... 13

2.3.2 Produksi Antibodi Poliklonal ....................................... 13

BAB III MATERI DAN METODE

3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan ................................................... 17

3.2 Hewan Percobaan ........................................................................... 17

3.3 Alat dan Bahan ........................................................................... 17

3.4 Metode Penelitian .......................................................................... 17

3.4.1 Persiapan Kandang dan Hewan Percobaan ....................... 17

3.4.2 Vaksinasi .......................................................................... 18

3.4.3 Pengambilan Darah dan Pemisahan Serum ....................... 18

3.3.4 Pengujian Serum .............................................................. 19

Prosedur Uji Hemaglutinasi Inhibisi ................................ 19

Prosedur Uji Agar Gel Presipitas ...................................... 21

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Uji Hemaglutinasi Inhibisi ........................................................ 23

4.2 Uji Agar Gel Presipitasi .............................................................. 27

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan ................................................................................ 29

5.2 Saran ...................................................................................... 29

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................... 30

LAMPIRAN .................................................................................................. 34

DAFTAR TABEL

Halaman

1 Nilai Fisiologis Marmot ............................................................................... 10

2 Konsentrasi Imunoglobulin Serum pada Hewan Piara dan Manusia .......... 15

3 Jumlah Antibodi Berdasarkan Uji Imunologis ........................................... 16

4 Hasil Uji HI (Titer Antibodi) terhadap Antigen Virus H5N1 pada Kedua Kelompok Perlakuan ............................................................. 23

5 Jadwal Kegiatan Penelitian ......................................................................... 34

DAFTAR GAMBAR

Halaman

1 Marmot ...................................................................................................... 9

2 Kandang pemeliharaan marmot .................................................................. 18

3 Grafik hasil rata-rata uji HI serum I, II, III ................................................ 24

4 Foto hasil uji AGP serum III pada kelompok marmot yang divaksinasi dengan vaksin H5N1 ...................................................... 27

5 Foto hasil uji AGP serum III pada kelompok marmot yang divaksinasi dengan vaksin H5N2 ...................................................... 28

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

I Jadwal kegiatan penelitian ........................................................................ 34

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Flu burung atau avian influenza (AI) terutama highly pathogenic avian

influenza (HPAI) adalah salah satu penyakit yang berbahaya. Selain menyebabkan

angka mortalitas yang tinggi pada unggas, penyakit ini juga telah terbukti dapat

menular pada manusia (zoonosis). Wabah avian influenza pada unggas secara

keseluruhan dapat mengakibatkan kehancuran bagi industri ternak unggas di

wilayah yang terserang (Harder dan Werner 2005). Tercatat di Hongkong pada

tahun 1997, galur H5N1 dari virus avian influenza selain menyebabkan epidemi

pada unggas, juga telah menyebabkan penyakit pernafasan berat terhadap 18

orang, enam diantaranya tewas (Rahardjo 2004).

Munculnya wabah avian influenza di Indonesia dinyatakan oleh

pemerintah pada tanggal 25 Januari 2004 (Rahardjo 2004). Penyebab penyakit

influenza unggas tersebut telah berhasil diisolasi dan dikarakterisasi secara

lengkap oleh Balai Penelitian Veteriner melalui penelitian Wiyono et al. (2004),

Damayanti et al. (2004) dan Dharmayanti et al. (2004), adalah virus influenza A

dengan subtipe H5N1 (Indriani et al. 2004). Berdasarkan informasi dari Direktorat

Kesehatan Hewan (2004) wabah AI H5N1 HPAI telah mengakibatkan kematian

ayam tidak kurang dari 7.650.849 ekor, serta dimusnahkan dengan cara

depopulasi terseleksi sekitar 2.798.639 ekor ayam (Indriani et al. 2005). Kasus

pada manusia berdasarkan informasi dari Depkes RI sampai dengan 6 September

2007 di Indonesia telah mencapai 106 kasus dengan 85 orang diantaranya

meninggal (Suprayogi dan Satrija 2007).

Pemerintah melalui Direktorat Kesehatan Hewan telah menetapkan

sembilan langkah strategi untuk mengendalikan infeksi HPAI, yaitu (1)

Biosekuriti, (2) Vaksinasi, (3) Depopulasi terseleksi di daerah tertular, (4)

Pengendalian lalu lintas unggas, (5) Surveilen dan penelusuran, (6) Pengisian

kandang kembali (7) Stamping out unggas di daerah tertular baru, (8) Peningkatan

kesadaran masyarakat, (9) Serta monitoring dan evaluasi (Indriani et al. 2005).

Namun sebelum langkah-langkah pengendalian tersebut dilakukan,

diperlukan suatu langkah diagnosa yang tepat, untuk menentukan bahwa wabah

penyakit yang muncul memang benar-benar wabah penyakit avian influenza, serta

untuk mengetahui strain atau subtipe virusnya. Diagnosa penyakit avian influenza

meliputi diagnosa klinis, yaitu dengan melihat gejala klinis yang muncul dan

diagnosa laboratorium, untuk mengidentifikasi agen (virus) yang menyebabkan

wabah. Kedua diagnosa tersebut bersifat saling melengkapi dan saling

mendukung, akan tetapi diagnosa laboratorium memiliki peranan yang lebih

penting, sebab berdasarkan hasil diagnosa laboratorium ini dapat diketahui secara

pasti jenis penyakit yang sedang muncul. Menurut Davis et al. (1980), diagnosa

laboratorium berguna untuk menentukan keberadaan agen dalam komunitas untuk

menentukan tipe spesifiknya dan untuk menyelesaikan studi epidemiologi.

Dalam diagnosa laboratorium penyakit avian influenza, uji serologis

merupakan uji yang sering digunakan, uji ini dilakukan untuk mengidentifikasi

isolat virus guna mengetahui strain atau subtipe virus yang telah diisolasi dari

lapangan. Suatu laboratorium harus memiliki antisera (antibodi) standar yang

dipersiapkan untuk melawan antigen yang diisolasi dari setiap hemaglutinin dan

neuraminidase yang dapat digunakan dalam uji imunodifusi untuk menentukan

subtipe virus (OIE 2007). Antisera standar juga digunakan dalam uji-uji serologis

yang lain untuk mengidentifikasi isolat virus diantaranya dengan uji

imunohistokimia.

Antibodi poliklonal atau antiserum poliklonal standar untuk avian

influenza dapat diperoleh dengan cara melakukan vaksinasi avian influenza pada

hewan coba. Antibodi poliklonal adalah antibodi yang secara khas dihasilkan dari

imunisasi pada hewan yang sesuai, dan hewan yang sering digunakan untuk

menghasilkan antibodi poliklonal antara lain adalah marmot (Cavia porcellus)

(Wikipedia1 2007). Penggunaan marmot (Cavia porcellus) dalam memproduksi

antibodi poliklonal untuk membuat antisera standar avian influenza memiliki

banyak keuntungan. Selain dapat menghasilkan antibodi poliklonal dengan cukup

baik, marmot adalah hewan yang memiliki ukuran tubuh yang relatif kecil,

sehingga murah dan mudah dalam pemeliharaannya. Marmot juga mudah

dihandel dan tidak menggigit sehingga akan mempermudah proses pengambilan

darah (serum).

1.2 Tujuan Penelitian

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui metode produksi antibodi

poliklonal anti virus avian influenza (H5N1 dan H5N2) pada marmot (Cavia

porcellus) guna mendapatkan antisera standar untuk Avian Influenza (H5N1).

1.3 Manfaat Penelitian

Penelitian diharapkan dapat memberikan informasi tentang produksi

antibodi poliklonal yang dihasilkan dari masing-masing vaksinasi menggunakan

vaksin AI subtipe H5N1 dan H5N2, sehingga nantinya diketahui jenis subtipe

vaksin yang paling efektif dalam memproduksi antisera terhadap virus AI H5N1

sebagai penyebab wabah flu burung di indonesia.

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Avian Influenza (AI)

Flu burung atau avian influenza (AI) adalah penyakit menular yang

disebabkan oleh virus influenza tipe A dengan diameter 90-120 nanometer

(Soejoedono dan Handharyani 2005). Menurut Patu (2007), penyakit influenza

pada unggas (avian influenza/AI) atau flu burung adalah penyakit yang

disebabkan oleh virus influenza tipe A dari family Orthomyxomiridae, yang dapat

menimbulkan gejala gangguan pernafasan pada unggas, dari ringan (low

pathogenic) sampai pada yang bersifat fatal (highly pathogenic).

Avian influenza terbagi atas highly pathogenic avian influenza (HPAI) dan

low pathogenic avian influenza (LPAI). Penyakit HPAI ini terdaftar sebagai

penyakit daftar A pada OIE manual (Damayanti et al. 2005). Dan menurut

CIDRAP (2007), OIE mengklasifikasikan avian influenza sebagai HPAI atau

LPAI berdasarkan kriteria berikut :

1. Virus HPAI memiliki intravenous pathogenicity index (IVPI) pada ayam

berumur 6 minggu lebih besar dari 1,2, atau sebagai alternatif,

menyebabkan mortalitas paling tidak 75 % pada ayam berumur empat

sampai delapan minggu yang diinfeksi secara intravena. Virus H5 dan H7

yang tidak mempunyai IVPI lebih besar dari 1,2, atau menyebabkan

mortalitas kurang dari 75 % pada uji letalitas, harus dirunut untuk

mengetahui urutan asam amino dasar yang ada pada tempat pembelahan

molekul hemaglutinin, jika motif asam amino sama dengan yang teramati

pada isolat HPAI yang lain, isolat yang diuji harus dipertimbangkan

sebagai HPAI.

2. LPAI adalah semua virus infuenza A subtipe H5 dan H7 yang bukan

HPAI.

Avian influenza yang harus dilaporkan didefinisikan oleh OIE sebagai

infeksi pada unggas yang disebabkan oleh virus avian infuenza subtipe H5 dan H7

atau oleh virus avian influenza manapun dengan intravenous pathogenicity index

(IVPI) lebih besar dari 1,2 atau menunjukkan mortalitas lebih dari 75 % (CIDRAP

2007).

Virus influenza merupakan nama generik dalam keluarga

Orthomyxoviridae dan diklasifikasikan dalam tipe A, B atau C berdasarkan

perbedaan sifat antigenik dari nucleoprotein dan matrix proteinnya (Harder dan

Werner 2005). Virus influenza A menginfeksi burung, kuda, babi, mink, anjing

laut, dan ikan paus, dan juga manusia; virus infuenza B hanya patogen pada

manusia. Virus influenza A dari babi atau burung dan manusia mengalami

penataan kembali genetiknya pada manusia, babi, atau unggas untuk

menghasilkan subtipe baru (perubahan antigenik), yang menyebabkan pandemik

influenza pada manusia (Fenner et al. 1995).

Determinan antigenik utama dari virus influensa A dan B adalah

glikoprotein transmembran hemaglutinin (H atau HA) dan neuroaminidase (N

atau NA), yang mampu memicu terjadinya respon imun dan respon yang spesifik

terhadap subtipe virus (Harder dan Werner 2005). Sampai saat ini berdasarkan

struktur HA terdapat 16 subtipe (varian), H1-H16 dan berdasarkan NA terdapat 9

subtipe, N1-N9 (OIE 2005). Dengan demikian virus influenza mempunyai 144

subtipe kemungkinan.

Frekuensi variasi antigenik diantara virus avian influenza yang tinggi

terjadi dalam dua cara, drift dan shift (Calnek 1997). Pada antigenic drift terjadi

perubahan asam amino yang minimal pada protein HA dan NA virus, namun tidak

menyebabkan terbentuknya virus subtipe baru, tetapi bisa menyebabkan epidemik.

Antigenic shift adalah perubahan yang mendadak dimana seluruh RNA virus

diganti oleh RNA baru, sehingga terbentuk virus subtipe baru (Rahardjo 2004).

2.1.1 Diagnosa Avian Influenza

Diagnosa penyakit flu burung menurut Ditjennak (2005) adalah sebagai

berikut :

1. Diagnosa lapangan dengan melihat gejala klinis, yaitu : jengger, pial, kulit

perut yang tidak ditutupi bulu berwarna biru keunguan (sianosis); kadang-

kadang ada cairan dari mata dan hidung; pembengkakan di daerah muka

dan kepala; pendarahan di bawah kulit (sub kutan); pendarahan titik

(ptekie) pada daerah dada, kaki, dan telapak kaki; kematian tinggi.

2. Jika dilakukan bedah bangkai akan tampak : pendarahan subkutan, bintik-

bintik pendarahan pada otot dan jaringan lemak; pendarahan pada organ

trakhea, pankreas, dan peradangan pada usus, hati dan limpa; bintik-bintik

pendarahan merata pada ovarium, serta pendarahan pada kaki yang sering

diikuti edema.

3. Diagnosa Laboratorium

Sampel diambil dari unggas hidup, unggas yang memperlihatkan gejala

klinis dan unggas yang mati. Preparat ulas/sampel swab kloaka, trakhea,

atau feses segar dan serum diambil dari unggas yang masih hidup. Dari

unggas yang mati, dilakukan pemeriksaan jaringan saluran pencernaan

(proventrikulus, intestinum, caeca tonsil) dan jaringan saluran pernafasan

(trakhea dan paru-paru). Pengiriman sampel harus dijaga dalam keadaan

dingin (tidak beku) dan dikirimkan ke Balai Besar Veteriner (BBVet),

Balai Penyidikan dan Pengujian Veteriner (BPPV) Regional terdekat dan

Balai Penelitian Veteriner (Balitvet).

Menurut OIE (2005), teknik diagnostik untuk avian influenza meliputi,

identifikasi agen, penilaian patogenisitas, uji serologis, serta pengembangan

diagnostik melalui deteksi antigen dan deteksi RNA secara langsung.

2.1.2 Vaksinasi Avian Influenza

Pemberian vaksin avian influenza tidak hanya bertujuan untuk

memberikan perlindungan secara individual atau kelompok terhadap infeksi baru,

tetapi juga untuk mengurangi ekskresi virus yang menginfeksi (Indriani et al.

2005). Vaksinasi juga dapat digunakan baik sebagai alat untuk mendukung

pemberantasan atau sebagai alat untuk mengendalikan penyakit dan mengurangi

beban yang diakibatkan oleh virus di lingkungan (FAO 2004 dalam CIDRAP

2007).

Tiga bidang kategori strategi vaksinasi flu burung menurut FAO (2004)

dalam CIDRAP (2007) adalah sebagai berikut :

1. Vaksinasi dalam respon terhadap out break menggunakan pendekatan ring

vaksinasi atau vaksinasi yang hanya didisain untuk unggas beresiko tinggi,

pendekatan ini digunakan dan diikuti dengan culling unggas terinfeksi.

2. Vaksinasi dalam respon terhadap trigger, misalnya informasi survailen

membuktikan bahwa HPAI telah masuk ke dalam suatu wilayah,

pendekatan ini dapat dilakukan dalam situasi dengan potensi untuk

meningkatkan biosekuriti terbatas.

3. Vaksinasi dasar awal, misalnya vaksinasi unggas selama pengisian

kembali pada farm dalam area yang sebelumnya terinfeksi.

Menurut Direktorat Kesehatan Hewan (2005) pelaksanaan vaksinasi yang

efektif untuk flu burung adalah dengan menggunakan vaksin inaktif. Ada dua

jenis yaitu : vaksin inaktif homolog (galur vaksin yang digunakan sama dengan

galur yang ada di lapangan, misalnya H5N1) dan vaksin inaktif heterolog (galur

vaksin yang digunakan memiliki antigen H (Hemaglutinin) yang sama dengan

kasus di lapangan, tetapi antigen N (Neuraminidase) yang berbeda, misalnya

H5N2).

Aspek positif dari vaksin inaktif adalah proteksi klinis yang luas, dapat

dipergunakan untuk semua spesies unggas, aman, yaitu standar vaksin mudah

dikontrol, serta tidak direkomendasikan untuk unggas sebelum umur 8-10 hari.

Aspek negatifnya konsentrasi HA tidak terstandarisasi, beresiko bila

menggunakan high pathogenic, diperlukan booster, dan pengawasan yang lebih

kompleks dengan antibodi berbeda-beda untuk AGPT, HA dan ELISA (Rahardjo

2004)

2.2 Marmot (Cavia porcellus)

2.2.1 Sejarah Marmot

Ketika orang Eropa pertama kali datang di Amerika Selatan, mereka

menemukan marmot yang berasal dari barat daya Venezuela, dipelihara sebagai

hewan domestikasi oleh orang yang tinggal di daearah ini. Selanjutnya pedagang

membawa Cavia porcellus ke Eropa. Orang Eropa memberi nama guinea pig

karena mereka percaya bahwa hewan ini berasal dari Guinea. Spesies ini tidak

ditemukan di alam liar, marmot yang telah didomestikasi sekarang ditemukan di

seluruh dunia dalam keadaan dipelihara (Schober 1999). Dalam Wikipedia2

(2007), nama Cavia porcellus berasal dari bahasa latin, dengan porcellus adalah

babi kecil. Cavia adalah bahasa latin baru yang di peroleh dari cabiai, nama

binatang dalam bahasa suku Galibi penduduk asli Guyana Perancis. Cabiai

mungkin adalah adaptasi dari bahasa Portugis avia (savia) yang diturunkan dari

kata Tupi sauja, yang berarti tikus

2.2.2 Klasifikasi Marmot

Menurut Schober (1999) dan Wikipedia2 (2007), klasifikasi ilmiah marmot

adalah sebagai berikut

Kingdom : Animalia

Phylum : Chordata

Subphylum : Vertebrata

Class : Mammalia

Order : Rodentia

Suborder : Hystricomorpha

Family : Caviidae

Subfamily : Caviinae

Genus : Cavia

Species : Cavia porcellus

2.2.3 Karakteristik Fisik

Cavia porcellus (Gambar 1) adalah binatang pendek gemuk dengan kaki

pendek. Hewan dewasa panjangnya antara 200 sampai 500 mm. Mantel (rambut)

marmot dapat bervariasi dalam warna, panjang, dan tekstur. Beberapa warna yang

umum adalah putih, hitam, merah, krem, lilac, dan coklat atau beberapa

kombinasi dari warna-warna ini. Marmot tidak mempunyai ekor eksternal,

mempunyai empat jari pada kaki depan dan tiga jari pada kaki belakang, dan

mempunyai kuku yang tajam pada setiap jarinya (Schober 1999). Menurut

Herman (2002), marmot memiliki tubuh yang kuat dan bugar, kepala besar,

telinga dan kaki pendek, ekor sangat kecil, dan ukuran tubuhnya kecil dengan

panjang dari kepala dan badan 225 sampai 355 mm. Marmot betina mempunyai

sepasang mammae.

Gambar 1 Marmot (Cavia porcellus)

Sumber : Wikipedia (2007)

2.2.4 Kebutuhan Pakan

Menurut Herman (2002), kebutuhan pakan marmot yang diperinci oleh

NRC (1998) mencakup energi, asam amino, protein, lemak, mineral, dan vitamin.

Ransum tersebut mempunyai komposisi lebih dari 18 % protein, 3 kkal/gram

energi dapat dicerna, 19 % serat kasar, 0,8-1,0 % kalsium, dan 0,4-0,7 % pospor.

Vitamin C dibutuhkan 200 mg per kilogram ransum.

Marmot memakan sebagian besar jenis sayuran, tetapi mereka memilih

sayur-sayuran berdaun hijau seperti pucuk wortel dan selada. Seperti halnya

manusia, marmot kekurangan kemampuan untuk mensintesis vitamin C, karena

itu mereka harus mendapatkan banyak vitamin C dalam dietnya, jika kekurangan

maka hewan akan mengalami penyakit kulit (Schober 1999).

2.2.5 Tingkah Laku/Kebiasaan Hidup Marmot

Marmot adalah hewan yang sangat bersosial, yang memilih hidup dalam

kelompok terdiri dari lima sampai sepuluh ekor. Kadang-kadang kelompok-

kelompok ini bergabung untuk membentuk satu koloni. Marmot adalah hewan

yang menampilkan berbagai suara dengan beberapa tipe vokalisasi yang lantang.

Marmot merupakan hewan peliharaan yang baik, terutama untuk anak-anak,

karena tipikalnya tidak menggigit, bahkan ketika dihandel dengan tidak baik

(Schober 1999). Marmot dapat mempelajari jalur komplek menuju makanan,

hewan ini dapat mengingat dengan akurat jalur yang dipelajari untuk jangka

waktu berbulan-bulan (Wikipedia2 2007).

2.2.6 Nilai Fisiologis Marmot

Nilai fisiologis marmot menurut Malole dan Pramono (1989) tersaji pada

Tabel 1.

Tabel 1 Nilai Fisiologis Marmot (Malole dan Pramono 1989)

Aspek fisiologis Nilai

Berat badan dewasa

Luas permukaan tubuh

Temperatur tubuh

Harapan hidup

Konsumsi makanan

Konsumsi Air

Frekuensi denyut jantung

Frekuensi respirasi

Penggunaan oksigen

Volume darah

Serum protein

Albumin

Globulin

Serum glukosa

Serum lipid

Kalsium dalam serum

Fosfat dalam serum

900-1200 g (jantan), 700-900 g (betina)

- 400 g : 564 cm2

- 850 g : 720 cm2

37.2-39.5 C

4-5 tahun

6 g/100 g/ hari

10 ml/100 g/hari

230-380 kali per menit

42-104 kali per menit

0,76-0,83 ml/g/jam

67-92 ml/kg

4,6-6,2 g/dl

2,1-3,9 g/dl

1,7-2,6 g/dl

60-125 g/dl

95-240 mg/dl

3,0-7,6 mg/dl

5,3-12 mg/dl

2.2.7 Habitat

Cavia porcellus secara alami tidak ditemukan di alam liar, hewan ini

merupakan turunan dari beberapa spesies cavia yang terkait dekat, seperti Cavia

aperea, Cavia fulgida, dan Cavia ischudii yang secara umum masih ditemukan di

beberapa wilayah di Amerika Selatan (Wikipedia2 2007). Sebagai hewan

kesayangan marmot secara normal dipelihara dalam sangkar atau akuarium

dengan serutan kayu sebagai tempat tidur. Di Amerika Selatan marmot digunakan

sebagai sumber makanan. Marmot dapat dipelihara dalam pondok khusus atau

dibiarkan bebas berlari dan mengais-ngais (Schober 1999). Sedangkan menurut

Herman (2002), habitat marmot meliputi daerah berbatu-batu, savana, tepi hutan,

dan rawa-rawa. Markas hidupnya di daerah kering dengan rumput yang kasar dan

semak yang tersebar.

2.2.8 Kepentingan untuk Manusia

Marmot telah digunakan sebagai sumber makanan selama ratusan tahun di

negara Ekuador, Peru, dan Bolivia. Marmot juga telah menjadi sumber tak ternilai

dalam penelitian laboratorium dimana mereka digunakan dalam bidang nutrisi,

patologi, toksikologi, isolasi bakteri, dan produksi serum (Schober 1999). Marmot

digunakan untuk berbagai penelitian dan diagnosa, antara lain anafilaksis,

hipervitaminosis vitamin D, ketoasidosis, optik neuropathi, amoebiasis, scrobutus,

leukemia, ulceratif colitis, penyakit menular, imunologi, fungsi pendengaran,

berbagai aspek nutirisi dan lainnya (Malole dan Pramono 1989)

Marmot (disebut cuy, cuye, curi) awalnya didomestikasi untuk dagingnya

di Andes. Secara tradisi hewan ini dipesan untuk daging seremonial, tetapi sejak

1960-an hewan ini menjadi lebih dari makanan pokok. Ini berlanjut menjadi

bagian utama dari diet di Peru dan Bolivia, terutama di dataran tinggi Gunung

Andes, hewan ini juga dikonsumsi di beberapa daerah di Ekuador dan Columbia

(Wikipedia2 2007).

2.3 Antibodi

Antibodi adalah molekul protein yang dihasilkan oleh sel plasma sebagai

akibat interaksi antara sel limfosit B peka antigen dan antigen khusus (Tizard

1982). Antibodi adalah suatu protein yang dihasilkan oleh suatu sel dalam tubuh

kita (sel limfosit B) sebagai respon terhadap adanya antigen yang masuk ke dalam

tubuh. Antigen adalah senyawa kimia, zat asing atau mikroba yang asing bagi

tubuh dan mampu membangkitkan respon kekebalan.

Antibodi mempunyai ciri khas, yaitu spesifik terhadap jenis tertentu dari

antigen. Ribuan atau jutaan jenis antigen yang masuk akan merangsang

terbentuknya ribuan atau jutaan jenis antibodi. Setiap detik sekitar 2000 molekul

antibodi diproduksi oleh sel limfosit B (Anonimus 2007). Antibodi memiliki

kemampuan berikatan khusus dengan antigen serta mempercepat penghancuran

dan penyingkirannya (Tizard 1987). Pengikatan oleh antibodi akan

menginaktifkan virus, kuman dan mikroorganisme lain untuk melekat pada sel

jaringan tubuh yang dituju, dan di luar tubuh antibodi juga dapat berikatan dengan

antigen yang sesuai, sehingga reaksi antigen antibodi ini dapat digunakan dalam

pembuatan diagnosa untuk mendeteksi adanya antigen spesifik (Mulyanto 1994).

Antibodi beredar dalam darah dan cairan tubuh lainnya (Mulyanto 1994).

Antibodi terdapat dalam konsentrasi tertinggi dan mudah diperoleh dalam jumlah

banyak untuk analisis dalam serum darah. Molekul antibodi adalah globulin,

umumnya dikenal sebagai imunoglobulin (yang dapat disingkat menjadi Ig).

Istilah imunoglobulin dipakai untuk menggambarkan semua protein yang

mempunyai aktivitas antibodi maupun beberapa protein yang mempunyai struktur

imunoglobulin yang khas tetapi tak memiliki aktivitas antibodi (Tizard 1987).

Menurut Outteridge (1985), terdapat tiga teori pembentukan antibodi,

yaitu :

1. Hipotesis Ehrlichs Side-Chain

Teori seleksi awal tentang pembentukan antibodi diusulkan oleh Paul

Ehrlich (1900), teori tersebut menyatakan bahwa molekul toksin (antigen)

berkombinasi dengan side-Chain atau molekul antitoksin pada permukaan sel

dan merangsang sel untuk menghasilkan lebih banyak side-chains, yang

muncul dalam serum sebagai antibodi antitoksin. Gagasan awal ini tidak

dibuang jauh dalam konsep modern tentang pembentukan antibodi, tetapi

kemudian gagasan ini tidak diterima karena kerja dari Landsteiner yang

mendemonstrasikan pembentukan antibodi melawan material non-biologis

seperti kelompok dinitrophenyl (DNP).

2. Hipotesis Pauling-Haurowitz Template (1935-1955)

Teori template mengusulkan bahwa antigen memerintahkan sel untuk

memproduksi antibodi spesifik dengan membuat ?-globulin non-spesifik

disekitar faktor penentu antigenik. Hal ini diusulkan terjadi selama sintesis

protein, tetapi berbagai kesulitan ditemui dalam menjelaskan bagaimana ?-

globulin diinstruksi oleh antigen yang tidak dapat memperoleh akses ke

bagian dalam dari sel, seperti bakteri. Berbagai hipotesa diajukan seperti,

pemrosesan antigen oleh makrofag untuk memproduksi fragmen kecil yang

memperoleh akses ke limfosit. Namun berbagai kesulitan ditemui ketika

dinilai bahwa urutan asam amino primer dari antibodi mendeterminasikan

struktur proteinnya. Bahkan secara lengkap antibodi dibeberkan dapat dibuat

berlipat ganda dalam keadaan tanpa antigen.

3. Teori Seleksi Klonal (1988-Saat ini)

Teori pembentukan antibodi yang terpilih dikemukakan oleh Jerne (1955).

Teori ini mengusulkan bahwa reseptor untuk antigen dihasilkan dalam sel

dalam keadaan tanpa antigen. Ide ini dikembangkan oleh Burnet (1957), yang

mengusulkan bahwa sel ini sebelum meninggalkan reseptor secara selektif

dirangsang oleh antigen spesifik untuk membelah dan berproliferasi menjadi

klon sel pembentuk antibodi spesifik. Hal ini menjadi hipotesis seleksi klonal.

Dalam terminologi modern, terdapat reseptor pada sel B yang terpilih oleh

antigen, dan ini berarti bahwa setiap sel B ditugaskan untuk memproduksi

antibodi yang sama yang hadir pada membran sel.

2.3.1 Antibodi Poliklonal

Antibodi serum adalah antibodi poliklonal, karena antibodi ini dihasilkan

oleh turunan dari beberapa sel B yang mengenali epitop berbeda pada antigen

yang sama (Decker 2006). Antibodi poliklonal dihasilkan dengan cara

menyuntikkan antigen ke dalam tubuh hewan lalu memurnikan antibodi dari

serum darah. Antibodi ini umumnya bereaksi dengan banyak epitop sehingga

kurang spesifik dibandingkan dengan antibodi monoklonal (Siagian 2002).

2.3.2 Produksi Antibodi Poliklonal

Antibodi spesifik dapat dibuat secara alamiah atau secara buatan melalui

hibridoma. Pembuatan antibodi secara alamiah dilakukan dengan imunisasi pada

hewan, yaitu dengan menyuntikkan antigen yang kita inginkan. Sistem kekebalan

tubuh akan mengenali dan bereaksi terhadap antigen. Sel limfosit yang

bersangkutan kemudian memperbanyak diri dan berkembang menjadi sel plasma

yang menghasilkan antibodi. Dalam hal ini antibodi yang terbentuk merupakan

antibodi poliklonal dengan komposisi bervariasi dalam serum, baik sebagai akibat

imunisasi berulang, maupun akibat variasi yang terjadi selama reaksi kekebalan

(Mulyanto 1994).

Hewan yang sering digunakan untuk produksi antibodi poliklonal antara

lain, ayam, domba, marmot, hamster, kuda, tikus, dan kambing. Pemilihan hewan

harus berdasarkan pada : 1) Jumlah antibodi yang dibutuhkan, 2) Hubungan antara

donor antigen dan resipien penghasil antibodi (secara umum hubungan filogenetik

yang lebih jauh, mempunyai potensi yang lebih baik untuk respon antibodi titer

tinggi), 3) Karakteristik penting antibodi yang akan dibuat (Wikipedia1 2007).

Beberapa manfaat antibodi poliklonal menurut Anonimus (2007) antara

lain : 1) Antibodi poliklonal sering mengenali banyak epitop, membuat antibodi

ini lebih toleran terhadap perubahan kecil di alam dari antigen. Antibodi

poliklonal sering menjadi pilihan untuk deteksi protein terdenaturasi, 2) Antibodi

poliklonal dapat dihasilkan pada berbagai spesies, antara lain kelinci, domba,

kambing, ayam dll, memberikan pengguna banyak pilihan dalam design

eksperimen, 3) Antibodi poliklonal kadang-kadang digunakan ketika antigen

alami pada spesies tak teruji tidak diketahui, 4) Antibodi poliklonal memiliki

sasaran banyak epitop, dan secara umum memberikan deteksi yang kuat.

Imunoglobulin G, IgG adalah kelas imunoglobulin yang terdapat dalam

konsentrasi tinggi dalam serum darah serta memainkan peran utama dalam

mekanisme tanggap kebal yang diperantarai oleh antibodi. Karena ukurannya

yang relatif kecil maka zat itu lebih mudah keluar dari pembuluh darah

dibandingkan molekul imunoglobulin yang lain, dan karena itu cepat mengambil

peran utama dalam mekanisme pertahanan pada ruang jaringan dan permukaan

tubuh. IgG dapat melakukan opsonisasi, aglutinasi dan presipitasi antigen, tetapi

hanya dapat mengaktivasi kaskade komplemen bila telah terkumpul cukup banyak

molekul dalam konfigurasi yang tepat pada permukaan antigen (Tizard 1987).

Konsentrasi Imunoglobulin serum pada hewan piara dan manusia ditunjukkan

pada Tabel 2.

Tabel 2 Konsentrasi Imunoglobulin Serum pada Hewan Piara dan Manusia (Tizard 1987)

Spesies Tingkat Imunoglobulin (mg/100 ml)

IgG IgM IgA IgG (T) IgG (B) IgE

Kuda

Sapi

Domba

Babi

Anjing

Ayam

Manusia

1000-1500

1700-2700

1700-2000

1700-2000

1000-2000

300-700

800-1600

100-200

250-400

150-250

100-500

70-270

120-250

50-200

60-350

10-50

10-50

50-500

20-150

30-60

150-400

100-1500

-

-

-

-

-

-

10-100

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

2.3-42

-

0.002-0.05

Uji yang mengukur tanggap kebal humoral terbagi dalam tiga kategori

yaitu : Yang paling peka (dari segi jumlah antibodi yang dapat ditemukan) adalah

1) Uji pengikatan primer, yang mengukur langsung interaksi antara antigen

dengan antibodi. Sebaliknya, 2) Uji pengikatan sekunder mengukur akibat

pembentukan imunokompleks in vitro. Karena itu secara teoritis uji ini kurang

peka daripada uji pengikatan primer, tetapi sangat mudah untuk dilakukan. 3) Uji

tersier mengukur akibat tanggap kebal in vivo. Dalam menentukan efek protektif

suatu antibodi pada hewan, uji tersier tidak hanya mengukur kombinasi antara

antigen dan antibodi tetapi juga kemampuan opsonisasi kompleks ini maupun

kemampuan fagositosis dan penghancuran sel sistem fagositik mononuklir (Tizard

1987). Jumlah antibodi terkecil yang dapat ditemukan dengan uji imunologis

terpilih ditunjukkan pada Tabel 3.

Tabel 3 Jumlah Antibodi Berdasarkan Uji Imunologis (Tizard 1987)

Uji g protein/ml

Uji Pengikatan Primer

Elisa

Uji kadar radioimun kompetitif

Uji Pengikatan Sekunder

Uji cincin

Presipitasi Gel

Aglutinasi bakteri

Hemaglutinasi pasir

Penghambatan hemaglutinasi

Uji pengikatan komplemen

Netralisasi virus

Aktifitas bakterisidal

Netralisasi antitoksin

Uji Tersier (In Vivo)

Anafilaksis kulit pasif

0,0005

0,00005

18

30

0,05

0,01

0,005

0,05

0,00005

0.00005

0,06

0,02

BAB III MATERI DAN METODE

3.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan

Penelitian ini dilaksanakan mulai bulan Februari 2007 sampai bulan Mei

2007, bertempat di Laboratorium Imunologi Veteriner Departemen Ilmu Penyakit

Hewan dan Kesehatan Masyarakat Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Institut

Pertanian Bogor.

3.2 Hewan Percobaan

Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian ini adalah delapan

ekor marmut (Cavia Porcellus) dewasa yang dipelihara di Kandang Rawat Inap

Rumah Sakit Hewan (RSH) Institut Pertanian Bogor. Marmut tersebut berasal dari

PT Biofarma.

3.3 Alat dan Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain, pakan

marmot (pelet), kapas, alkohol 70 %, vaksin AI inaktif subtipe H5N1 dan H5N2

dengan minyak adjuvan, serum darah marmot, suspensi antigen virus standar AI

H5N1 (4HAU), suspensi sel darah merah 0,5 %, NaCl fisiologis (0,85 %),

polyethilen glycol 6000, agarose, Na azide, PBS, dan akuades. Alat-alat yang

digunakan antara lain, kandang pemeliharaan marmot, spuit 1 ml, spuit 3 ml,

microtube, microplate, mikro pipet, erlenmeyer, gelas obyek, puncher,

mikrowave, neraca, dan pipet Mohr.

3.4 Metode Penelitian

3.4.1 Persiapan Kandang dan Pakan Hewan Percobaan

Delapan ekor marmot ditempatkan pada dua buah kandang (kandang A,

disebut kelompok A dan kandang B, disebut kelompok B), sehingga masing-

masing kandang berisi empat ekor. Kemudian masing-masing kandang diberi

identitas sesuai dengan perlakuan yang akan diberikan, Air minum diberikan

secara ad libitum, sedangkan pakan yang diberikan adalah konsentrat pakan ikan

yang dikombinasi dengan hijauan. Kandang dilengkapi dengan alas yang

berfungsi untuk menampung feses dan urin. Setiap hari alas tersebut dibersihkan

untuk menjaga kebersihan, sehingga kesehatan marmot terjaga dan marmot

merasa nyaman. Kandang pemeliharaan marmot ditunjukkan pada Gambar 2.

Gambar 2 Kandang pemeliharaan marmot.

3.4.2 Vaksinasi

Marmot kelompok A divaksinasi dengan vaksin AI subtipe H5N1 dan

marmot kelompok B divaksinasi dengan vaksin AI subtipe H5N2. Kedua vaksin

yang digunakan tersebut adalah vaksin inaktif dalam adjuvan. Vaksin tersebut

diberikan dengan dosis 1 ml secara subkutan. Vaksinasi dilakukan sebanyak tiga

kali dengan interval masing-masing satu bulan. Setelah diperoleh titer antibodi

yang cukup, hewan divaksinasi kembali dengan antigen tanpa adjuvan melalui

rute intravena (IV) dengan dosis 0,1 ml.

3.4.3 Pengambilan Darah dan Pemisahan Serum

Pengambilan darah dilakukan dua minggu setelah vaksinasi kedua, satu

minggu setelah vaksinasi ketiga dan satu minggu setelah vaksinasi dengan antigen

tanpa ajuvan. Pengambilan darah dilakukan melalui vena auricularis di daerah

telinga. Karena vena tersebut ukurannya sangat kecil, sehingga jarum suntik tidak

cukup untuk masuk ke dalamnya, maka pengambilan darah dilakukan dengan cara

menusuk vena tersebut dengan jarum suntik, kemudian darah yang keluar dihisap

dengan spoit 3 ml, sampai didapat darah sebanyak satu sampai dua ml. Spoit

tersebut kemudian ditutup kembali dan diberi tanda sesuai jenis vaksin yang

digunakan.

Setelah didapat cukup darah, spoit ditarik sampai ma ksimal, dan

diletakkan dengan posisi miring. Hal ini bertujuan untuk memperbesar luas

permukaan darah, sehingga serum akan lebih mudah keluar. Selanjutnya serum ini

disimpan dalam refrigerator pada suhu 4 oC selama 24 jam, kemudian serum

dipisahkan dengan mengambil cairan bening yang telah memisah. Serum ini

kemudian dimasukkan ke dalam microtube dan diberi tanda sesuai dengan jenis

vaksin yang digunakan. Apabila serum yang didapat warnanya masih merah,

maka harus disentrifugasi sampai didapat serum yang benar-benar jernih dan tidak

lagi berwarna merah.

Serum yang diperoleh dari pengambilan darah pertama (dua minggu

setelah vaksinasi ke dua) selanjutnya disebut serum I, serum dari pengambilan

darah ke dua (satu minggu setelah vaksinasi ke tiga) disebut serum II, dan serum

dari pengambilan darah terakhir (satu minggu setelah vaksinasi dengan antigen

tanpa adjuvan) disebut serum III.

3.4.4 Pengujian Serum

Serum yang telah didapat harus segera diuji, apabila digunakan pada lain

waktu, harus disimpan dalam freezer. Uji yang dilakukan terhadap serum ini

adalah untuk mengukur titer antibodi terhadap antigen virus AI H5N1, yaitu

dengan uji hemaglutinasi inhibisi (HI). Dan untuk menguji tingkat kehomologan

antibodi dalam serum tersebut terhadap antigen AI H5N1, yaitu dengan uji agar

gel presipitasi (AGP).

A. Prosedur Uji Hemaglutinasi inhibisi (HI)

Uji HI yang dilakukan dalam penelitian ini menggunakan metode beta

dan mikrotitrasi, dengan urutan sebagai berikut :

1. Sebanyak 25 l NaCl fisiologis (0,85 %) dimasukkan kedalam lubang-

lubang microplate yang terdiri dari 96 lubang dengan menggunakan

mikropipet.

2. Pada jajaran lubang pertama ditambahkan 25 l serum-serum yang akan

diuji dan serum positif sebagai kontrol (positif) kemudian dilakukan

pengenceran serial kelipatan dua dari lubang pertama hingga lubang ke

sebelas, sedangkan lubang ke dua belas dipergunakan sebagai kontrol sel

darah merah.

3. Sebanyak 25 l antigen virus AI sebesar 4 HAU ditambahkan pada setiap

lubang, kecuali lubang ke dua belas ditambah dengan 25 l NaCl fisiologis

dan selanjutnya dicampur dengan cara menggoyang-goyangkan secara

perlahan selama 30 detik kemudian didiamkan selama 30 menit pada suhu

ruang.

4. Sebanyak 25 l suspensi sel darah merah (SDM) ayam 0,5 % ditambahkan

ke dalam setiap lubang, kemudian dicampur kembali dan didiamkan

selama 30 menit pada suhu ruang.

Interpretasi hasil titer HI ditunjukkan pada pengenceran serum tertinggi yang

masih memberikan hambatan (inhibisi) pada antigen 4 HAU. Inhibisi

ditetapkan dengan melakukan pengamatan sel darah merah (SDM) pada

lubang-lubang cawan mikro, bila cawan mikro dimiringkan terlihat SDM

membentuk tetesan air mata serupa dengan SDM kontrol.

Rataan titer antibodi hasil uji HI dihitung dengan menggunakan

Geometric Mean Titer (GMT), dengan rumus :

Log2 GMT = (Log2 t1)(S1) + (Log2 t2)(S2) + ... + (Log2 tn)(Sn)

N

Keterangan :

N = Jumlah contoh serum yang diamati

t = Titer antibodi pada pengenceran tertinggi yang masih

dapat menghambat aglutinasi sel darah merah

S = Jumlah contoh serum yang bertiter t

n = Sampel ke-n

B. Prosedur Uji Agar Gel Presipitasi (AGP)

Prosedur uji Agar Gel Presipitasi adalah sebagai berikut :

1. Pertama-tama disiapkan bahan-bahan agar sebagai berikut : agarose 0,4 g,

polietilen glikol 6000 1,2 g, Na azide 0,01 g, 25 ml akuades, dan 25 ml

PBS.

2. Semua bahan-bahan tersebut kemudian dimasukkan ke dalam Erlenmeyer

yang tahan panas lalu dipanaskan dengan mikrowave pada suhu 100 oC

sampai mendidih dan semua bahan tersebut benar-benar homogen, yang

ditandai dengan warnanya yang jernih sempurna.

3. Kemudian disiapkan gelas obyek secukupnya, dan dengan menggunakan

pipet mohr, bahan agar yang telah dipanaskan (masih dalam keadaan

panas) dihisap sebanyak 4 ml, lalu dituang secara hati-hati di atas gelas

obyek. Langkah ini diulangi dengan gelas obyek baru, sampai semua

bahan agar habis, kemudian ditunggu sampai bahan agar pada obyek gelas

tersebut memadat.

4. Setelah agar memadat, selanjutnya dibuat lubang-lubang pada agar

tersebut dengan menggunakan cetakan (puncher) yang terdiri dari tujuh

lubang berbentuk heksagonal, dalam satu gelas obyek dapat dibuat dua

heksagonal.

5. Selanjutnya disiapkan serum yang akan diuji dan suspensi antigen virus AI

H5N1.

6. Suspensi antigen dimasukkan ke dalam lubang di bagian tengah

heksagonal sebanyak 25 l, dan serum yang akan diuji dimasukkan ke

dalam lubang-lubang pada sudut heksagonal sebanyak 25 l.

7. Masing-masing gelas obyek ditandai, dicatat, dan digambar untuk

keperluan identifikasi.

8. Agar tersebut kemudian diinkubasi selama 24-48 jam pada tempat yang

lembab dan suhu ruang. Sebagai inkubator dapat digunakan kotak plastik

bertutup, dimana didalamnya diletakkan tisu yang telah dibasahi dengan

akuades, dan sterofoam sebagai alas agar diletakkan d atas tisu tersebut.

9. Setelah 24-48 jam hasil uji AGPT dapat dibaca, hasil positif ditunjukkan

dengan adanya garis putih (garis presipitasi) yang terbentuk diantara

lubang yang berisi antigen dan antibodi (serum), dan hasil positif

menunjukkan bahwa antigen dan antibodi dalam serum yang diuji tersebut

homolog.

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Uji Hemaglutinasi Inhibisi (HI)

Uji HI serum I terhadap antigen H5N1 menunjukkan bahwa pada dua

minggu setelah vaksinasi ke dua telah dapat dideteksi terbentuknya antibodi pada

hewan yang divaksinasi (Tabel 4). Rata-rata titer antibodi yang terukur sebesar

26,75 pada kelompok yang divaksinasi dengan vaksin H5N1, dan 21,5 pada

kelompok yang divaksinasi dengan vaksin H5N2. Titer antibodi pada kelompok

marmot yang divaksinasi dengan vaksin H5N2 menunjukkan adanya peningkatan

menjadi sebesar 23 setelah vaksinasi ke dua. Namun pada kelompok marmot yang

divaksinasi dengan vaksin H5N1 justru mengalami penurunan menjadi 25,75. Pada

akhir pengamatan produksi antibodi mencapai puncaknya, yaitu 28,75 pada

kelompok marmot yang divaksinasi dengan vaksin H5N1 dan 26,75 pada kelompok

marmot yang divaksinasi dengan vaksin H5N2.

Tabel 4 Hasil Uji Hemaglutinasi Inhibisi (Titer Antibodi) terhadap Antigen Virus H5N1 pada Kedua Kelompok Perlakuan.

Kelompok

Hewan

Sampel Titer Antibodi pada Uji HI ke-

(log 2)

I II III

Vaksin H5N1

Vaksin H5N2

A

B

C

D

Rata-rata

A

B

C

D

Rata-rata

9

7

6

5

6,75

1

2

-

-

1,5

6

6

5

6

5,75

4

2

3

3

3

11

7

8

9

8,75

7

7

7

6

6,75

Uji HI ke tiga dilakukan terhadap serum yang diambil pada satu minggu

setelah vaksinasi dengan antigen H5N1 dan H5N2 inaktif tanpa adjuvan.

Penyuntikan antigen tanpa adjuvan dengan rute intravena ini bertujuan untuk

menggertak produksi antibodi guna mendapatkan titer antibodi yang setinggi-

tingginya, yang selanjutnya akan dimurnikan untuk digunakan dalam penelitian

lebih lanjut.

Hasil rata-rata uji HI pertama, kedua, dan ketiga terhadap antigen H5N1,

memperlihatkan bahwa kelompok marmot yang divaksinasi dengan vaksin H5N1

memperlihatkan respon produksi antibodi yang lebih baik dibandingkan dengan

kelompok yang divaksinasi dengan vaksin H5N2, dengan capaian titer antibodi

akhirnya sebesar 28,75, yang dicapai pada satu minggu setelah penyuntikan antigen

virus H5N1 secara intravena. Sementara itu kelompok marmot yang divaksinasi

dengan vaksin H5N2 memperlihatkan produksi antibodi yang lebih rendah,

dengan capaian titer tertinggi sebesar 26,75 , yang dicapai pada satu minggu setelah

penyuntikan antigen virus H5N2 secara langsung (intravena). Hasil rata-rata dari

ketiga kali uji HI terhadap antigen H5N1, secara umum memperlihatkan adanya

peningkatan produksi antibodi dari kedua jenis vaksin yang digunakan pada tiap

periode vaksinasi, walaupun pada kelompok marmot yang divaksinasi dengan

vaksin H5N1 terjadi sedikit penurunan produksi antibodi dari hasil vaksinasi ke

dua. Rata-rata hasil uji HI pertama, ke dua, dan ke tiga terhadap antigen virus

H5N1 terlihat pada Gambar 1.

0

1

2

34

5

6

7

8

9

10

I II III

Uji HI

Tite

r Antib

odi T

erhad

ap V

irus

H5N

1

(log 2

)

H5N1

H5N2

Gambar 3 Grafik Hasil Rata-Rata uji HI I, II, dan III dari Dua Kelompok Marmot yang Divaksinasi dengan Vaksin H5N1 dan H5N2.

Pada kelompok marmot yang divaksinasi dengan vaksin H5N1 produksi

antibodi sudah mencapai 26,75 pada dua minggu setelah vaksinasi, namun pada

satu minggu setelah vaksinasi ke tiga nilainya turun menjadi 25,75, kemudian pada

satu minggu setelah vaksinasi dengan antigen H5N1 tanpa adjuvan nilainya

kembali naik mencapai 28,75. Penurunan produksi antibodi pada satu minggu

setelah vaksinasi ke tiga terjadi karena pada saat vaksinasi ke tiga tersebut

dilakukan, titer antibodi dalam tubuh marmot masih tinggi. Tingginya titer

antibodi inilah yang justru menyebabkan vaksinasi ke tiga menjadi kurang efektif,

karena titer antibodi yang tinggi akan menetralisasi antigen yang berasal dari

vaksin, sehingga antigen dari vaksin tersebut menjadi tidak efektif dalam

merangsang sistem kekebalan untuk menghasilkan antibodi. Hasil tersebut sesuai

dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Indriani et al. (2005) tentang

pengembangan prototipe vaksin inaktif AI H5N1 isolat lokal. Dari penelitian

tersebut diketahui bahwa vaksinasi yang dilakukan pada ayam yang berumur satu

dan dua minggu ternyata memberikan respon antibodi yang kurang baik. Hal

tersebut disebabkan karena masih adanya pengaruh antibodi maternal (bawaan)

spesifik yang diberikan induknya, dimana antibodi tersebut baru akan sangat

rendah ketika ayam berumur tiga minggu. Indriani et al. (2005) juga menyatakan

bahwa untuk mendapatkan hasil vaksinasi yang baik dan efektif pada ayam, maka

vaksinasi sebaiknya dilakukan pada ayam yang telah berumur tiga minggu,

dimana status antibodinya mendekati nol.

Fakta tersebut menunjukkan bahwa dalam melakukan vaksinasi, terutama

jika akan dilakukan vaksinasi ulang (booster), baik untuk tujuan mendapatkan

antibodi ataupun untuk memberikan proteksi terhadap penyakit pada hewan, perlu

dilakukan kajian untuk menentukan jarak waktu antara vaksinasi satu dengan

vaksinasi berikutnya guna menjamin efektifitas dari suatu tindakan vaksinasi

dengan tetap mempertahankan status protektif (apabila tujuannya untuk

memberikan proteksi) dari antibodi dalam tubuh hewan yang akan divaksinasi.

Antibodi selalu bersifat spesifik terhadap antigen tertentu (Wibawan et al.

2003), demikian juga dalam penelitian ini, vaksinasi dengan vaksin H5N1 akan

menghasilkan antibodi poliklonal terhadap antigen H5N1, dan vaksinasi dengan

vaksin H5N2 akan menghasilkan antibodi poliklonal yang spesifik terhadap

antigen H5N2. Uji HI serum pertama dari kelompok hewan yang divaksinasi

dengan vaksin H5N2 terhadap antigen H5N2 sudah menunjukkan titer antibodi

yang tinggi, yaitu mencapai 29, dengan rata-rata sebesar 27,5. Antibodi yang

dihasilkan dari vaksinasi dengan vaksin H5N2 ini ternyata dapat bereaksi silang

terhadap antigen H5N1, hal ini ditunjukkan dari hasil uji HI serum I terhadap

antigen H5N1 pada kelompok tersebut memberikan hasil positif, dengan nilai

sebesar 21,5. Reaksi silang tersebut terjadi karena antigen yang yang digunakan

dalam vaksin memiliki kesamaan jenis protein H (hemaglutinin) terhadap antigen

yang digunakan dalam uji HI, yaitu H5. Titer antibodi yang teramati pada uji HI

pertama terhadap antigen H5N1 terbilang sangat rendah apabila dibandingkan

dengan hasil uji HI terhadap antigen H5N2. Hal tersebut disebabkan karena

antibodi yang diperoleh dari vaksinasi bukan merupakan antibodi yang spesifik

terhadap H saja, tetapi juga terdapat antibodi terhadap protein N. Menurut Lee et

al. (2006), adanya antibodi homolog terhadap protein N tertentu dapat

menyebabkan terjadinya hambatan steric dalam uji HI, antibodi terhadap protein

N juga dapat berpengaruh secara nonspesifik terhadap protein H yang mendorong

pada penghambatan nonspesifik dan kemungkinan kesalahan identifikasi isolat.

Menurut Asmara (2007) neuraminidase (N) memiliki peranan membantu virus

Avian Influenza untuk berikatan dengan membran sel inang. Sehingga adanya

antibodi homolog terhadap protein N ini akan menyebabkan penurunan

kemampuan virus avian influenza untuk berikatan dengan sel target. Hal inilah

yang menyebabkan terjadinya penurunan titer antibodi dari kelompok marmot

yang divaksinasi dengan vaksin H5N2 pada uji HI terhadap antigen H5N1.

Titer antibodi dari kelompok hewan yang divaksinasi dengan vaksin H5N2

menunjukkan adanya peningkatan pada uji HI ke dua atau satu minggu setelah

vaksinasi ke tiga, menjadi sebesar 23. Pada akhir pengamatan uji HI terhadap

antigen H5N1 dari kelompok hewan yang divaksinasi dengan vaksin H5N2,

diperoleh titer antibodi yang cukup tinggi, yaitu mencapai rata-rata sebesar 26,75,

pada satu minggu setelah vaksinasi dengan antigen tanpa adjuvan. Hal tersebut

menunjukkan bahwa antibodi yang dihasilkan dari vaksinasi dengan vaksin H5N2

dapat digunakan dalam pembuatan antibodi standar untuk H5N1.

4.2 Uji Agar Gel Presipitasi (AGP)

Sementara itu dari hasil uji Agar Gel Presipitasi (AGP) terhadap serum

terakhir (serum III), terlihat bahwa dari kedua kelompok marmot yang

divaksinasi dengan vaksin H5N1 maupun H5N2 mengghasilkan antibodi yang

memiliki kesesuaian yang tinggi terhadap antigen virus H5N1. Hal ini

ditunjukkan dengan terbentuknya garis presipitasi, yang terlihat sebagai garis

buram berwarna putih di antara lubang yang diisi antigen virus H5N1 dan

keempat lubang yang diisi serum uji (Gambar 4 dan Gambar 5) . Garis presipitasi

yang terbentuk merupakan hasil difusi antara antigen (H5N1) dengan antibodi

dalam serum. Namun hasil positif dari agar B (Gambar 3) pada uji tersebut tidak

berarti bahwa antibodi yang dihasilkan dari vaksinasi dengan vaksin H5N2

memang benar-benar homolog terhadap antigen H5N1 (ditinjau dari antigen H

dan N), karena di dalam uji AGP terdapat kemungkinan terjadi reaksi silang

antara antibodi terhadap suatu antigen dengan antigen lain yang berbeda (dalam

hal protein H dan N-nya). Hal tersebut terjadi karena uji AGP atau imunodifusi

dapat mendeteksi adanya antigen nukleokapsid dan matriks yang dimiliki oleh

semua virus AI tipe A (Suwarno et al. 2006). Dari hasil uji AGP tersebut dapat

diketahui bahwa virus AI H5N1 memiliki kesamaan antigen nukleokapsid dan

matriks dengan virus AI H5N2.

Gambar 4 Foto hasil uji AGP serum hasil vaksinasi dengan vaksin H5N1 terhadap antigen virus H5N1; (Ag) Antigen Ai H5N1, (1) Serum H5N1 A, (2) Serum H5N1 B, (3) Serum H5N1 C, (4) Serum H5N1 D.

Ag 4 1

2 3

1 Ag

2

4

3

Gambar 5 Foto hasil uji AGP serum hasil vaksinasi dengan vaksin H5N2 terhadap antigen virus H5N1; (Ag) Antigen Ai H5N1, (a) Serum H5N2 A, (b) Serum H5N2 B, (c) Serum H5N2 C, (d) Serum H5N2 D.

b

Ag d

c c

b

Ag a d a

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa :

1) Produksi antibodi standar anti H5N1 pada marmot (Cavia porcellus) dapat

dilakukan dengan melakukan vaksinasi terhadap marmo t sebanyak tiga

kali dengan interval waktu satu bulan dari masing-masing vaksinasi,

menggunakan vaksin AI inaktif, kemudian menyuntikkan antigen secara

intra vena.

2) Titer antibodi yang diperoleh adalah sebesar 28,75 untuk vaksinasi dengan

menggunakan vaksin H5N1 dan 26,75 untuk vaksinasi dengan

menggunakan vaksin H5N2.

5.2 Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mendapatkan IgG anti H5N1

yang murni agar diperoleh IgG yang lebih spesifik. Untuk mendapatkan respon

produksi antibodi yang baik, sebaiknya vaksinasi dilakukan pada saat titer

antibodi dalam tubuh hewan sedang tidak dalam keadaan tinggi.

DAFTAR PUSTAKA

Anonimus. 2007. Introduction to Antibodies. [27 April 2007]. Asmara W. 2007. Peran Biologi Molekuler dalam Pengendalian Avian Influenza

dan Flu Burung. http://www.komnasfbpi.go.id. [26 Juli 2007]. Akoso BT. 1998. Kesehatan Unggas Panduan Bagi Petugas Teknis, Penyuluh

dan Peternak. Kanisius. Yogyakarta. [CIDRAP]. Center of Infectious Disease Research and Policy. 2007. Avian

Influenza (Bird Flu): Agricultural and Wildlife Considerations. http://www.cidrap.umn.edu. [27 Mei 2007].

Damayanti R, Dharmayanti NLPI, Indriani R, Wiyono A, Adjid RMA. 2005.

Monitoring Kasus Penyakit Avian Influenza Berdasarkan Deteksi Antigen Virus Subtipe H5N1 secara Imunohistokimiawi. J Ilmu Ternak Vet 10:322-330.

Davis DB, Dulbeco R, Elsen HN, Ginsberg HS. 1980. Microbiology. Edisi ke-3.

Harper and Row Publisher. Hangerstown. Dharmayanti NLPI, Indriani R, Damayanti R, Wiyono A, Adjid RMA. 2005.

Karakter Virus Avian Influenza Isolat Lokal Indonesia pada Wabah Gelombang Ke Dua. J Ilmu Ternak Vet 10:217-226.

[Ditkeswan]. Direktorat Kesehatan Hewan. 2005. Pedoman Survailans dan

Monitoring Avian Influenza Di Indonesia. Direktorat Kesehatan Hewan Direktorat Jenderal Peternakan Departemen Pertanian Republik Indonesia. Jakarta.

[Ditjennak]. Direktorat Jenderal Peternakan. 2006. Prosedur Operasi Standar

Pengendalian Avian influenza Di Indonesia. Direktorat Jenderal Peternakan Departemen Pertanian Republik Indonesia. Jakarta.

. [Ditjennak]. Direktorat Jenderal Peternakan. 2005. Bagaimana Terhindar dari Flu

Burung (Avian Influenza). Direktorat Jenderal Peternakan. Jakarta. Decker JM. 2006. Antibody. http://microvet.arizona.edu. [5 Juli 2007]. Fenner FJ, Gibbs EPJ, Murphy FA, Root R, studdert MJ, White DO. 1995.

Virologi Veteriner. Edisi ke-2. Terjemahan oleh Harya Putra. IKIP Semarang Press. Semarang.

Harder TC, Werner O. 2006. Avian Influenza. http://www.influenzareport.ai.htm

[5 Mei 2007].

Herman R. 2002. Marmot : Ternak Sahabat Keluarga Miskin Untuk Sumber Daging. Pustaka Wirausaha Muda. Bogor.

Indriani R, Dharmayanti NLPI, Syafriati T, Wiyono A, Adjid RMA. 2005.

Pengembangan prototipe vaksin inaktif Avian Infuenza (AI) H5N1 Isolat Lokal dan Aplikasinya pada Hewan Coba di Tingkat Laboratorium. J Ilmu Ternak Vet 10:315-321.

Indriani R, Dharmayanti NLPI, Wiyono A, Darminto, Parede L. 2004. Deteksi

Respon Antibodi dengan Uji Hemaglutinasi Inhibisi dan Titer Proteksi terhadap Virus Avian Influenza Subtipe H5N1. J Ilmu Ternak Vet 9:204-209.

Kuby J. 1997. Immunology. Edisi ke-3. W.H. Freeman and Company. New York.

USA. Lee CW, Senne DA, Suarez DL. Develeopment and Application of reference

Antisera against 15 Haemaglutinin Subtypes of Avian Influenza Virus By DNA Vaccination Of Chicken. J Clin and Vaccine Immunol 13:395-402.

Malole, M B. 1987. Virologi. Pusat Antar Universitas Institut Pertanian Bogor

Bekerja Sama Dengan Lembaga Sumber Daya Informasi IPB. Bogor. Malole MB, Pramono CSU. 1989. Penggunaan Hewan-Hewan Percobaan di

Laboratorium. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi Pusat Antar Universitas Institut Pertanian Bogor.

Meijer A, Bosman A, Kamp EEHM, Wilbrink B, Holle Mdrb, Koopman M. 2006.

Measurement of Antibodies to Avian Influenza A (H7N7) in Human By Hemagglutination Inhibition. J Virologycal Methods 132:113-120.

Mulyadi B, Prihatini. 2005. Diagnosis Laboratorik Flu Burung (H5N1). Indones J

Clin Pathol and Med Lab 12 : 71-81. Mulyanto. 1994. Pemanfaatan Hewan Dalam Pembuatan Antibodi Sebagai

Bahan Baku Reagensia Untuk Pemeriksaan Antigen. Pidato Pengukuhan Jabatan Guru Besar pada Fakultas Peternakan Universitas Mataram. Universitas Mataram. Mataram.

[OIE]. World Organization for Animal Health. 2005. Avian Influenza.

http://www.oie.int. [27 Mei 2007]. Outteridge P.M. 1985. Veterinary Immunology. Academic Press. London. Patu I. 2007. Flu Burung Di Indonesia. http://www.infeksi.com. [27 Mei 2007].

Radji M. 2006. Avian Influenza A (H5N1) : Patogenesis, Pencegahan, dan Penyebaran pada Manusia. Majalah Ilmu Kefarmasian 3:55-65.

Rahardjo Y. 2004. Avian Infuenza, Pencegahan, Pengendalian dan

Pemberantasannya. PT. Gallus Indonesia Utama. Jakarta. Schober, M. 1999. Cavia Porcellus. http://animaldiversity.ummz.umich.edu. [07

Juni 2007]. Siagian A. 2002. Keracunan Pangan oleh Mikroba. http://library.usu.ac.id. [27

Mei 2007]. Siregar AA, 1987. Petunjuk Praktikum Virologi dan Serologi. Pusat Antar

Universitas Institut Pertanian Bogor Bekerja Sama Dengan Lembaga Sumber Daya Informasi IPB. Bogor.

Soejoedono RD, Hardharyani E. 2005. Flu Burung, Virus Flu Burung dari

Unggas terbukti Bisa Menular ke Manusia. Jangan Panik, Tetapi Tetap Waspada. Penebar Swadaya. Depok.

Soejoedono RD, Pasaribu FH, Siregar AA, Pamungkas J, Indrawati A, Sunartatie

T, Hidayat R, Poetri ON. 2004. Petunjuk Praktikum Imunologi Veteriner. Laboratorium Imunologi Veteriner Depertemen Ilmu Penyakit Hewan dan Kesehatan Masyarakat Veteriner Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Soeharsono. 2002. Zoonosis Penyakit Menular dari Hewan ke Manusia. Kanisius.

Yogyakarta. Suprayogi A, Satrija F. 2007. Keterkaitan Karakter Mikroklimat Wilayah dengan

Kejadian Penyakit Zoonosis : Flu burung dan Anthraks. Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Stringfellow Dale A. 1983. Virology. The Upjohn Company. Michigan. USA. Suwarno, Rahardjo AP, Fauziah, Srihanto EA. 2006. Karakterisasi Virus Avian

Influenza dengan Uji Serologik dan Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction. Media Kedokteran Hewan 22:74-78.

Sudaryani T. 1994. Teknik Vaksinasi dan Pengendalian Penyakit Ayam. Penebar

Swadaya. Depok. Tizard I. 1987. Veterinary Immunology An Introduction. WB Saunders Company.

Philadelpia. Wagner Joseph E, Manning Patrick J. 1976. The Biology of The Guinea Pig.

Academic Press. London. UK.

Wibawan IWT, Soejoedono RD, Damayanti CS, Tauffani TB. 2003. Diktat Imunologi. Laboratorium Imunologi Depertemen Kitwan dan Kesmavet Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Wikipedia1. 2007. Polyclonal Antibody. http://www.wikipedia.org. [5 April 2007]. Wikipedia2. 2007. Guinea pig. http://www.wikipedia.org. [5 April 2007].

LAMPIRAN

Lampiran 1

JADWAL KEGIATAN PENELITIAN

Rencana pelaksanaan kegiatan penelitian ini adalah sebagai berikut :

Tabel 5. Jadwal Kegiatan Penelitian

No. Kegiatan Bulan I

(Februari

2007)

Minggu ke-

Bulan 2

(Maret

2007)

Minggu ke-

Bulan 3

(April

2007)

Minggu ke

Bulan 4

(Mei 2007)

Minggu ke-

1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4

1. Persiapan x

2. Pengadaptasian

Marmot

x

3. Perlakuan x x x x

4. Pengambilan

Darah, Pemisahan

serum, uji HI, uji

AGP

x x x

5. Penyusunan

Laporan/skripsi

x x x