pengenalanEquisetum palustre L. adalah obat herbal tradisional dan didistribusikan secara luas di banyak negara dan wilayah di dunia . Ini telah digunakan untuk mengobati berbagai penyakit , seperti ulkus peptikum , wasir , dan masalah kencing . Investigasi kimia menunjukkan komponen aktif utama E. palustre yang flavonoid , alkaloid , minyak andessential yang dimiliki terkenal gastro pelindung efek , antioksidan , antimikroba dan genotoxicity . Dengan diperkenalkannya konsep kimia hijau dalam penelitian ini , pelarut cairan ionik ( ILS ) telah muncul sebagai kelas baru pelarut yang menjanjikan untuk menggantikan pelarut organik yang mudah menguap dalam persiapan sampel .

ILS memiliki banyak keluar sifat berdiri, seperti tekanan diabaikan uap, berbagai cairan lebar, stabilitas termal yang tinggi, viskositas merdu, miscibility dengan air dan pelarut organik, serta kelarutan yang sangat baik dan extractability untuk berbagai senyawa organik. Selain itu, telah tersebar luas digunakan di berbagai bidang kimia seperti kimia organik, kimia analitik, dan kimia obat. Namun, beberapa ILS telah menunjukkan toksisitas berbahaya dan biodegradasi sangat miskin di berbagai penelitian. Apa yang lebih, sintesis ILS juga akan menyebabkan pencemaran lingkungan dan biaya yang lebih tinggi. Oleh karena itu, ILS pengembangan lebih lanjut dan aplikasi dalam industri akan menghadapi tantangan besar. Untuk mengatasi mereka kekurangan ILS, jenis baru dari pelarut dikembangkan, yang bernama pelarut eutektik dalam (DES). Secara umum, DES dibuat dengan mencampur dua atau tiga komponen murah dan aman yang membentuk rendah titik lebur eutektik, mainlydue ke generasi ikatan hidrogen antarmolekul. Dua komponen banyak digunakan dari DESS yang klorida kolin dan betaine hidroklorida, yang dalam mahal, biodegradable dan tidak beracun garam. Mereka dapat membentuk DESS dalam campuran dengan yang lain toksisitas aman atau rendah komponen (donor ikatan hidrogen, HBD), seperti urea, asam karboksilat atau poliol.

DESS tidak hanya memiliki sejumlah besar sifat yang sangat baik dari ILS, tetapi juga menghindari banyak kelemahan. Mereka terkandung banyak keuntungan sebagai pelarut, seperti biaya rendah, inertness kimia dengan air, persiapan mudah dan toksisitas dapat diterima farmasi. DESS secara luas digunakan dalam katalisis, sintesis organik, pembubaran, elektrokimia dan kimia material. Namun demikian, penerapan DESS di pabrik bahan ekstraksi wasrarely. Metode ekstraksi konvensional yang diterapkan untuk mengekstrak senyawa aktif biologis dari bahan tanaman, seperti ekstraksi klasik pemanasan (HE), ekstraksi USG (UEA), ekstraksi fluida superkritis (SFE), dan ekstraksi soxhlet (SE). Namun, metode ini memiliki berbagai kelemahan, seperti jumlah relatif besar pelarut, pelarut organik beracun, serta waktu ekstraksi yang lama. Negatif ekstraksi tekanan kavitasi (NPCE), metode ekstraksi baru, yang dirancang di laboratorium kami dan telah didefinisikan sebagai alat yang optimal untuk ekstraksi efektif senyawa aktif biologis dari bahan tanaman, telah digambarkan dan dilaporkan secara rinci dalam penelitian kami sebelumnya . Aparat NPCE, aliran udara yang terus-menerus diperkenalkan ke dalam sistem yang solid pelarut menghasilkan efek kavitasi intens dan efek pengadukan yang kuat, yang memfasilitasi campuran substrat dan pelarut dan memudahkan perpindahan massa. Karena perpindahan massa yang cepat, hemat waktu dan biaya operasional yang rendah, NPCE adalah metode yang kuat untuk mengekstrak senyawa aktif biologis dari tanaman materials.Up untuk pengetahuan kita, DES-NPCE diaplikasikan untuk mengekstrak komponen aktif belum dilaporkan belum. Dalam studi ini, kami bertujuan untuk mengembangkan metode hijau dan efisien DES-NPCE untuk ekstraksi flavonoid bioaktif dalam E. palustre. Selain itu, pengayaan langsung sembilan flavonoid Target dari larutan ekstraksi DESS dicoba menggunakan resin berpori.

Bahan dan metodeBahanSampel E. palustre dikumpulkan dari Mongolia Otonomi Daerah, Cina, dan dikonfirmasi oleh Profesor Shao-quan Nie dari Laboratorium Kunci Forest Ekologi Tumbuhan, Ministryof Pendidikan, Northeast Kehutanan Universitas, PR China. Sampel dikeringkan sampai berat konstan, bubuk ke dalam ukuran yang seragam oleh adisintegrator (HX-200A, Yongkang Hardware dan Kedokteran Instru-ment Tanaman, Cina), diayak (40 mesh) dan disimpan di tempat teduh.2.2. Bahan kimia dan reagenKolin klorida (> 98,0%), betaine hidroklorida (> 99,0%) werepurchased dari Aladdin Kimia Co, Ltd (Shanghai, Cina) .Glycerol (> 99,0%), 1,3-butanadiol (> 99,0%), 1, 4-butanadiol (> 99,0%) dan etilena glikol (> 99,5%) diperoleh dari Tokyo ChemicalIndustry Co, Ltd (Tokyo, Jepang). HPLC grade metanol dan formicacid diperoleh dari J & K Chemical Ltd (Beijing, Cina) andDima Technology Inc (Muskegon, MI, USA), masing-masing. Deionisedwater untuk HPLC dimurnikan oleh Milli-Q sistem Pemurnian Air (Millipore, Billerica, MA) .Kaempferol-3-O- -d-glucopyranoside-7-O- -d-glucopyranoside (98%, KGG), kaempferol-3-O--d-rutinosida-7-O- -d-glucopyranoside (98%, KRG), luteolin-7-O- -d-glucopyranoside (98%, LG), quercetin- 3-O- -d-glucopyranoside (98%, QG), apigenin-5-O- -d-glucopyranoside (98%, AG), genkwanin-5-O- -d-glucopyranoside (98 %, GG), luteolin (98%, Luth), apigenin (98%, Api), genkwanin (98%, Gen) dipisahkan dan dimurnikan dari E. palustre dalam struktur laboratory.Their kami dikonfirmasi oleh ESI- MS, 1H NMR, spektroskopi NMR and13C dibandingkan dengan data literatur. Data tingkat kemurnian sembilan senyawa yang diperoleh bythe metode normalisasi daerah puncak di HPLC.

analisis HPLCAnalisis HPLC dilakukan pada Agilent 1200 series HPLCsystem ( Agilent , San Jose , CA , USA ) yang dilengkapi dengan sistem pengiriman quaternarysolvent , detektor diode array ( DAD ) dan col - UMN pengontrol suhu . Pemisahan kromatografi wascarried pada kolom Curosil - PFP ( 250 4.6mm id , 5 m , Phe - nomenex , Torrance , CA , USA ) . Suhu kolom disimpan at30C . Program gradien elusi adalah 0,1 % aqueoussolution format asam ( A ) dan metanol ( B ) adalah sebagai berikut : 0-10 menit , 33-33 % B; 10-12 menit , 33-36 % B ; 12-20 menit , 36-36 % B ; 20-22 menit , 36-44 % B ; 22-36 menit , 44-44 % B ; 36-40 menit , 44-51 % B ; 40-48min , 51-75 % B ; 48-55 menit , 75-75 % B. 55-60 menit , 75-100 % B. Aliran ratewas 1.0mL / min , dan volume injeksi adalah 5 L. Detectionwavelength itu 330Nm . Kromatogram yang ditunjukkan pada Gambar . Kemurnian 1. puncak diperiksa oleh menggunakan sistem HPLC - DAD , membandingkan spektra UV setiap puncak dengan orang-orang dari authenticreferences sampel .

MetodologiMetode validasi dilakukan untuk menentukan linearitas, batas deteksi (LOD), batas kuantifikasi (LOQ), akurasi, presisi, dan pemulihan. Kurva kalibrasi dibuat dengan memplot daerah puncak sesuai dengan larutan yang diinjeksikan menggunakan regresi. LOD dan LOQ dapat dicapai dengan cara pengenceran.Bubuk E. Palustre diekstrak menggunakan DES dan dianalisis dibawah tekanan optimal. Dilakukan analisis selama lima hari berturut-turut kemudian dicampur dengan larutan standar yang telah disediakan. Lalu dianalisis kembali dalam tekanan optimal. DESS disiapkan dengan memanaskan klorida atau betaine hidroklorida dan komponen campuran pada suhu 80oC sambil diaduk hingga homogen. Dilakukan proses ekstraksi flavonoid oleh DES-NPCE, mula-mula air dipanaskan lalu sampel di masukkan dalam NPCE. Ditambahkan etanol 80% sebanyak 125 ml lalu disiapkan DES, ketika alat terhubung dengan vakum pompa maka mulailah proses ekstraksi selama 20 menit. Dilakukan dua kali pengulangan.Sampel dimasukkan kedalam labu lalu ditambahkan air. Kemudian campuran larutan diekstraksi dalam penangas ultrasonik selama 20 menit dan dilakukan dua kali pengulangan, solusi ekstraksi dikombinasikan. Dilakukan uji bioaktif dengan kromatografi kolom pada flavonoid yang telah dikemas dengan NKA-9, AB-8, dan HPD-826 resin berpori. Ekstraksi yang diperoleh biarkan mengalir melalui kolom dengan aliran konstan 3 BV/ jam. Kolom kemudia dicuci dengan air dan dielusi dengan 95% aqueosethanol (v/v) pada laju alir 6 BV/ jam. Fraksi etanol dikumpulkan dan dianalisis dengan HPLC. Didapatkan konsentrasinya lalu dikeringkah dibawah vakum. Ekstraksi yang telah ditimbang lalu dihitung apakah sesuai target atau tidak, yaitu terdapat sembilan kandungan flavonoid. Dilakukan analisis statistik. Semua hasil dinyatakan sebagai rata-rata. Signifikansi dilakukan dalam analisis satu arah dan perbedaan yang didapatkan yaitu ATP < 0,05 sehingga dianggap signifikan.

Hasil dan diskusivalidasi metode3.1.1 . Linearitas, batas deteksi ( LOD ) dan batas kuantifikasi ( LOQ )Analisi regresi linear menggunakan metode standar eksternal memberikan persamaan regresi yang sesuai dan parameter karakteristik lain untuk penentuan suatu analisis. Linearitas yang baik dalam setiap analit yaitu r2 > 0,996 . The LODs (S/N= 3) dan LOQs (S/N= 10) untuk analit kurang dari 0,5 dan 1,0 g / mL , masing-masing memiliki metode analisis yang sensitivitasnya tinggi.3.1.2 . Presisi dan pemulihanHasil uji presisi disajikan pada Tabel 2. standar deviasi relatif ( RSDs ) dihitung untuk menilai ketelitian. Nilai RSD antar hari ke hari berbeda, berkisar antara 0,18-0,52% untuk waktu retensi (Rt) dan 2,05-4,45 % untuk daerah puncak (Pa) . Nilai RSD antar hari ke hari berbeda, yaitu berkisar 0,26-0,55 % untuk waktu retensi (Rt) dan 1,93-4,47 % untuk daerah puncak (Pa). Pada Tabel 3, dapat diamati bahwa ke sembilan komponen tersebut berbeda, yaitu antara 97,34 % dan 102,54 % dan nilai RSD kurang dari 4,45 % untuk analit .3.2. Optimasi DES-NPCE3.2.1. Pengaruh berbagai jenis DESSDESS bermanfaat untuk mengekstraksi senyawa sasaran dari sampel matriks. Peningkatan hasil ekstraksi diperoleh dengan mengurangi viskositas karena pelarut lebih rendah viskositasnya dan memiliki penetrasi yang sangat baik dalam matriks sampel. Di sisi lain, senyawa target dapat dilarutkan dengan mudah oleh pelarut dengan polaritas yang sama. Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 2A, ethyleneglycol sebagai HBD menunjukkan hasil ekstraksi yang tinggi. DES dari cholinechloride-etilena glikol menyatakan hasil ekstraksi unggul untuk senyawa polar yang relatif kuat, sementara betaine hidroklorida dan etilena glikol yang dimasukkan kedalam DES menunjukkan hasil ekstraksi yang lebih baik untuk senyawa polar yang relatif lemah. Klorida:betainehydrochloride (1:1) dicampur dengan etilena glycol agar lebih efektif maka dilakukan DES. Dalam pertimbangan komprehensif, DES dengan dua jenis garam amonium bisa memberikan efek ekstraksi lebih tinggi. Mungkin karena dapat berinteraksi kuat dengan ion dan ikatan hidrogen dengan senyawa yang ditargetkan. Menurut hasil diatas, DES-9 kolin klorida/betaine hidroklorida-etilena glikol terpilih sebagai jenis pelarut yang optimal.

3.2.2 . Pengaruh garam untuk rasio HBDDES-9 dengan kolin klorida/betaine hidroklorida-etilena glikol memiliki rasio yang berbeda diuji untuk ekstraksi . Hasilnya disajikan pada Gambar . 2B . Jumlah senyawa target yang diekstraksi secara dramatis meningkat seiring dengan menurunnya kolin klorida/ betaine : hidroklorida-etilena glikol dari 1:1 sampai 1: 2 karena penurunan viskositas dan tegangan permukaan (p