shift a2_kelompok 5_deteksi patogen kulit

8/15/2019 Shift a2_kelompok 5_deteksi Patogen Kulit

1/15

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

SEMESTER GENAP 2015 - 2016

DETEKSI PATOGEN KULIT

Hari / Jam Praktikum : SENIN, 13.00-16.00

Tanggal Praktikum : 23 Mei 2016

Kelompok : 5

Asisten : 1. ABDURAHMAN RIDHO

2. THERESIA RATNADEVI

Anggota Kelompok

NAMA NPM TUGAS

Anisahtul Alawiyah 260110140056 Pembahasan, Simpulan

Chusnul Hayati 260110140057 Alat Bahan, Prosedur,

Data Pengamatan

Iqlima Safitri 260110140058 Pembahasan, Simpulan

Khadijah Asy Syifa 260110140059 Editor, Tujuan+Prinsip,

Teodas

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS PADJADJARAN

JATINANGOR

2016


2/15

I. Tujuan

1.

Untuk mengetahui teknik isolasi bakteri pada kulit.2.

Untuk mengetahui keberadaan bakteri patogen pada kulit.

II. Prinsip

1. Kulit

Kulit adalah organ terbesar tubuh. Beratnya kurang lebih 4,5 kg dan

menutupi area seluas 18 kaki persegi (1,67 m2). Adapun fungsi kulit adalah

untuk perlindugan, pengatur suhu tubuh dan eksrkresi (Sloane, 2003).

2. Bakteri patogen

Bakteri Patogen adalah materi atau organisme yang dapat menyebabkan

penyakit pada inang misalnya bakteri. Bakteri dapat merusak sistem pertahanan

inang dimulai dari permukaan kulit, saluran pencernaan, saluran respirasi, saluran

urogenitalia. Sedangkan Patogenesis sendiri adalah mekanisme infeksi dan

mekanisme perkembangan penyakit. Infeksi merupakan invasi inang oleh mikroba

yang memperbanyak dan berasosiasi dengan jaringan inang. Infeksi berbedadengan penyakit (Pleczar, 1986). Bakteri yang sering ditemukan pada kulit adalah

Staphylococcus aureus dan Cyanobacteri pada jaringan epitel (Irianto, 2006).

3. Teknik Isolasi

Isolasi adalah salah satu cara untuk memisahkan atau memindahkan

mikroba tertentu dari lingkungan, sehingga diperoleh kultur murni atau

biakkan murni. Kultur murni merupakan kultur yang sel-sel mikrobanya

berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal. Beberapa cara yang dilakukan

untuk mengisolasi mikrooraganisme yaitu goresan (streak plate),

taburan/tuang (pour plate), sebar (spread plate), pengenceran (dilution plate)

serta micromanipulator (Pleczar, 2008).


3/15

4. Teknik aseptis

Proses tanpa kontaminasi untuk menjamin preparasi bebas dari

mikroba kontaminan, teknik aseptis digunakan sepanjang percobaan

berlangsung, baik alat, bahan, lingkungan sekitar maupun praktikan (Anton,

2008).

III. Teori Dasar

Infeksi merupakan penyebab utama penyakit di dunia terutama di

daerah tropis, seperti Indonesia. Kasus infeksi disebabkan mikroba patogen

masuk ke dalam jaringan tubuh dan berkembangbiak di dalam jaringan.

Mikroorganisme yang dapat menyebabkan infeksi yaitu bakteri, jamur, virus,

dan parasit (Jawetz, 2004).

Bakteri adalah salah satu golongan organisme prokariotik (tidak

memiliki selubung inti). Bakteri sebagai makhluk hidup tentu memiliki

informasi berupa DNA, tapi tidak terlokalisasi dalam tempat khusus (nukleus)

dan tidak ada membrane inti. Bentuk DNA bakteri adalah sirkuler, panjangdan biasa disebut nukleoi. Pada DNA bakteri tidak mempunyai intron dan

hanya tersusun atas akson saja. Bakteri juga memiliki DNA

ekstrakromosomal yang tergabung menjadi plasmid yang berbentuk kecil dan

sirkuler (Jawetz, 2004).

Salah satu bakteri penyebab infeksi adalah Staphylococcus aureus

yang merupakan patogen utama pada kulit manusia (Harahap, 2002). Hampir

setiap orang pernah mengalami berbagai infeksi Staphylococcus aureus

selama hidupnya, seperti keracunan makanan yang berat atau infeksi kulit

yang kecil. Selain itu, Staphylococcus aureus dapat menimbulkan berbagai

penyakit seperti pneumonia, meningitis, dan endokarditis. Akan tetapi,


4/15

Staphylococcus aureus juga merupakan flora normal pada kulit, mulut, dan

saluran nafas bagian atas (Jawetz, 2004).

Mikroorganisme residen terbanyak dikulit adalah basilus difteroid

aerob dan anaerob (misalnya, Corynebacterium, Propionibakterium);

Staphylococcus epidermidis, kadang S. aureus, dan spesies

Peptostreptococcus); basilus pembentuk spora, aerob, gram positif yang ada di

dalam udara,air dan tanah; Streptococcus alfa hemolitik (Streptococcus

viridian) dan Enterococcus; basilus koliformis gram negative dan asinobacter

(Jawetz, 2004).

Untuk memahami beberapa kelompok organisme, diperlukan

klasifikasi. Tes biokimia, pewarnaan gram, merupakan kriteria yang efektif

untuk klasifikasi. Hasil pewarnaan mencerminkan perbedaan dasar dan

kompleks pada sel bakteri (struktur dinding sel), sehingga dapat membagi

bakteri menjadi 2 kelompok, yaitu bakteri Gram-positif dan bakteri Gram-

negatif (Jawetz, 2004).

Identifikasi bakteri bisa dilakukan secara mikroskopis. Pemeriksaan

langsung digunakan untuk mengamati pergerakan, dan pembelahan secara

biner, mengamati bentuk dan ukuran sel yang alami, yang pada saat

mengalami fiksasi panas serta selama proses pewarnaan mengakibatkan

beberapa perubahan (Irianto, 2006).

Medium pertumbuhan bakteri salah satunya adalah agar darah. Darah

dimasukkan ke dalam medium untuk memperkaya unsur Dalam pembiakan

mikroorganisme terpilih seperti Streptococcus sp. Darah juga akan

memperlihatkan sifat hemolysis yang dimiliki Streptococcus.

a). Gamma hemolisis: tidak terjadi liysis sel darah merah, tidak adanya

perubahan medium di sekitar koloni.

b). Alpha hemolisis: terjadi lisis sel darah merah dengan reduksi hemoglobin

menjadi metahemoglobin menghasilkan lingkaran kehijauan sekitar

pertumbuhan bakteri.


5/15

c). Beta hemolisis: terjadi lisis sel darah merah dilengkapi kerusakan dan

penggunaan hemoglobin oleh mikroorganisme menghasilkan zona bening

sekeliling koloni (Kusnadi, 2003).

Teknik isolasi mikroorganisme adalah suatu usaha untuk

menumbuhkan mikroba diluar dari lingkungan alamiahnya. Pemisahan

mikroorganisme dari lingkungan ini bertujuan untuk memperoleh biakan

bakteri yang sudah tidak bercampur lagi dengan bakteri lainnya dan disebut

biakan murni. Prinsip dari isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis

mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari camouran bermacam-

macam mikroba. Hal ini dapat dilakukan dengan menumbuhkannya dalam

media padat, sel-sel mikroba akan membentuk koloni sel yang tetap pada

tempatnya (Afrianto, 2004).

Dikenal beberapa cara atau metode untuk memperoleh biakan murni

dari suatu biakan campuran. Dua diantaranya yang paling sering digunakan

adalah metode cawan gores dan metode cawan tuang. Yang didasarkan padda

prinsip pengenceran dengan maksud untuk memperoleh spesies individu.

Dengan anggapan bahwa setiap koloni dapat terpisah dari satu jenis sel yang

dapat diamati (Afrianto, 2004).

IV. Alat dan Bahan

4.1 Alat

Cawan Petri Kapas Lidi Steril


6/15

Korek Api Labu Erlenmeyer

Lampu Spirtus

4.2. Bahan

a. Media Agar Darah

b. NaCl Fisiologis

V. Prosedur

Sampel swab dari kulit diambil dengan menggunakan kapas lidi steril

kemudian dimasukkan ke dalam labu Erlenmeyer yang berisi NaCl fisiologis.

Selanjutnya sampel digoreskan pada media agar darah yang telah dibuat.

Pengerjaan dilakukan secara aseptis. Setelah itu diinkubasi selama 18-24 jam

pada suhu 37oC. Setelah 18-24 jam dilakukan pengamatan koloni bakteri pada

media agar darah.


7/15

VI. Data Pengamatan

Letak pengambilan bakteri : Wajah

Gambar 6.1. Bakteri Staphylococcuc epidermidis pada media agar darah hasil

pengamatan

Staphylococcus

epidermidis


8/15

Gambar 6.2. Bakteri Staphylococcuc epidermidis pada media agar darah

Sumber: http://www.bacteriainphotos.com/bacteria-photo-gallery.html #sepidermidis

Gambar 6.3. Bakteri Staphylococcuc aureus pada media agar darah hasil

pengamatan

Staphylococcus

aureus

http://www.bacteriainphotos.com/bacteria-photo-gallery.htmlhttp://www.bacteriainphotos.com/bacteria-photo-gallery.htmlhttp://www.bacteriainphotos.com/bacteria-photo-gallery.htmlhttp://www.bacteriainphotos.com/bacteria-photo-gallery.html


9/15

Gambar 6.4. Bakteri Staphylococcuc aureus pada media agar darah

Sumber: http://www.bacteriainphotos.com/bacteria-photo-gallery.html

#saureus

VII. Pembahasan

Bakteri adalah organisme yang paling banyak jumlahnya dan lebih

tersebar luas dibandingkan makhluk hidup yang lain. Bakteri memiliki ratusan

ribu spesies yang hidup di darat hingga lautan dan pada tempat-tempat yang

ekstrim. Bakteri ada yang menguntungkan tetapi ada pula yang merugikan.

Bakteri memiliki ciri-ciri yang membedakannya dengan mahluk hidup yang

lain. Bakteri adalah organisme uniselluler dan prokariot serta umumnya tidak

memiliki klorofil dan berukuran renik atau mikroskopik.

Mikroorganisme dapat menyebabkan banyak bahaya kerusakan. Hal

itu terlihat dari kemampuannya menginfeksi manusia, hewan, tumbuhan, dan

http://www.bacteriainphotos.com/bacteria-photo-gallery.htmlhttp://www.bacteriainphotos.com/bacteria-photo-gallery.htmlhttp://www.bacteriainphotos.com/bacteria-photo-gallery.htmlhttp://unjabisnis.com/http://unjabisnis.com/http://www.bacteriainphotos.com/bacteria-photo-gallery.html


10/15

menimbulkan penyakit yang berkisar dari infeksi ringan sampai kepada

kematian. Mikroorganisme juga dapat mencemari makanan, dan menimbulkan

perubahan-perubahan kimiawi didalamnya, membuat makanan tersebut tidak

dapat dikomsumsi atau bahkan beracun.

Kulit secara konstan berhubungan dengan bakteri dari udara atau dari

benda-benda, tetapi kebanyakan bakteri ini tidak tumbuh pada kulit karena

kulit tidak sesuai untuk pertumbuhannya.

Persyaratan utama bagi isolasi dan kultivasi fage adalah harus adanya

kondisi optimum untuk pertumbuhan organisme inangnya. Sumber bakteriofage yang paling baik dan paling utama adalah habitat inang. Sebagai

contoh fage koli yang di jumpai di dalam pencernaan dapat diisolasi dari

limbah atau pupuk kandang. Hal ini dilakukan dengan sentifugasi atau filtrasi

bahan sumbrnya dan penambahan kloroform untuk membunuh sel-sel

bakterinya.

Pada uji patogen pada praktikum ini dilakukan dengan cara isolasi dari

beberapa bagian kulit. Cara isolasi bakteri dari kulit dengan cara melakukanSWAB pada daerah tertentu pada kulit. Sebelumnya lidi yang berisi kapas

steril di cuci dengan alcohol dengan tujuan kapas yang digunakan steril.

Setelah itu dicelupkan di dalam NaCl fisiologis. Fungsi NaCl fisiologis adalah

sebagai pengencer dari bakteri.

Larutan garam fisiologi merupakan larutan isotonis yang memiliki

banyak kegunaan dalam bidang medis dan laboratorium, dan umumnya

larutan garam fisiologi memiliki kisaran konsentrasi 0.9% (b/v) NaCl.

Dalam menghitung jumlah mikrob seperti bakteri, perlu dilakukan

pengenceran. Sesuai dengan perhitungan CFU (Colony Forming Unit ) yaitu

30 ≤ jumlah bakteri ≤300. Bila jumlah bakteri < 30 maka tidak dapat dihitung

secara statistik, bila >300 akan sangat sulit untuk dihitung secara manual.

https://id.wikipedia.org/wiki/Medishttps://id.wikipedia.org/wiki/Laboratoriumhttps://id.wikipedia.org/wiki/NaClhttps://id.wikipedia.org/wiki/Bakterihttps://id.wikipedia.org/w/index.php?title=CFU&action=edit&redlink=1https://id.wikipedia.org/wiki/Statistikhttps://id.wikipedia.org/wiki/Statistikhttps://id.wikipedia.org/w/index.php?title=CFU&action=edit&redlink=1https://id.wikipedia.org/wiki/Bakterihttps://id.wikipedia.org/wiki/NaClhttps://id.wikipedia.org/wiki/Laboratoriumhttps://id.wikipedia.org/wiki/Medis


11/15

NaCl fisologis digunakan sebagai pengencer agar suspense sampel

tetap steril dan menghindari adanya kontaminan pada sampel. Selain itu, NaCl

fisiologis juga dapat mempertahankan kondisi pH. Sebagaimana kita ketahui

bahwa pertumbuhan mikroorganisme sangat peka terhadap perubahan pH,

sehingga diperlukan suatu larutan pengencer yang tidak mempengaruhi

kondisi pH.

Setelah itu di goreskan ke dalam media agar darah dengan metode

cawan gores. Digunakan teknik ini karena teknik ini sangat cocok jika

digunakan untuk tujuan isolasi. Prinsip metode ini, yaitu mendapatkan koloni

yang benar-benar terpisah dari koloni yang lain, sehingga mempermudah

prosesisolasi.

Cara ini dilakukan dengan membagi cawan petri menjadi 3-4 bagian.

Ose steril yang telah disiapkan dilekatkan pada sumber isolat, kemudian

menggoreskan ose tersebut pada cawan berisi media steril. Goresan dapat

dilakukan 3-4 kali membentuk garis horisontal di satu sisi cawan. Ose

disterilkan lagi dengan api bunsen, setelah kering ose tersebut digunakAn

untuk menggores goresan sebelumnya pada sisi cawan kedua. Langkah ini

dilanjutkan hingga keempat sisi cawan tergores.

Digunakan media agar darah karena untuk mengetahui bakteri yang

terdapat dalam kulit tersebut dapat menghemolisis darah atau tidak. Hemolisis

adalah kerusakan pada sel darah merah. Setelah digoreskan di dalam media,

diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37oC.

Dilakukan selama 18-24 jam karena pada waktu tersebut

mikroorganisme terdapat dalam fase log atau fase tumbuh yang optimal.

Dilakukan pada suhu 36oC karena pada suhu tersebut merupakan suhu optimal

bakteri tumbuh.


12/15

Dalam pengerjaan praktikum ini dilakukan secara aseptis. Tujuan

dilakukan secara aseptis adalah untuk meminimalisasi kontaminasi dari luar.

Media darah dibuat dari Tryptic Soy Agar atau Columbia Agar base dengan

darah domba 5%. atau bisajuga darah Kelinci atau kuda dapat digunakan

untuk pertumbuhan organisme yang membutuhkan NAD, seperti spesies

Haemophilus. Pengunaan darah manusia tidak disarankan karena

kemungkinan paparan patogen melalui darah manusia seperti HIV atau

hepatitis.

Berdasarkan hasil praktikum diperoleh 2 jenis bakteri setelah

diinkubasi, yaitu bakteri Staphylococcuc aureus dan Staphylococcuc

epidermidis. Staphylococcus aureus berbentuk spheris, dan kadang kala

ramping jika dua sel saling berhimpitan. Diameter sel bervariasi, antara 0,8-1

µm, berkapsul. Staphylococcus aureus adalah bakteri Gram positif,

mempunyai bentuk sel bulat bergerombol seperti buah anggur, kadang terlihat

sel tunggal atau berpasangan, tidak motil, anaerobik fakultatif, menghasilkan

koagulase dan menghasilkan warna biru (violet) pada pewarnaan Gram.

Beberapa biakan yang sudah tua akan kehilangan Gram positifnya, sehingga

dalam pewarnaan akan menghasilkan warna merah.

Staphylococcus aureus adalah bakteri yang tidak membentuk spora

dan tidak dapat lisis oleh pengaruh obat-obat seperti penicillin. Pada biakan

cair sering ditemukan sel tunggal, berpasangan, tetrad dan berbentuk rantai.

Staphylococcus aureus dapat tumbuh pada suhu 15-45oC dan cenderung

bersifat patogen apabila tumbuh pada kondisi aerob atau anaerob pada suhu

35-45oC dengan pH optimum 7,0-7,5 Dinding bakteri.

Staphylococous aureus sebagai Gram positif mengandung lipid 1-4%,

peptidoglikan dan asam teikoat. Peptidoglikan merupakan lapisan tunggal


13/15

sebagai komponen utama yang berjumlah 50% dari berat kering dinding sel

bakteri dan berfungsi menyebabkan kekakuan.

Koloni Staphylococcus aureus tumbuh pada media agar, berbentuk

sirkuler, buram, dan mengkilap dengan tepi koloni. Pada media plat agar

darah (PAD), S. aureus memproduksi pigmen lipochrom yang membuat

koloni tampak berwarna kuning keemasan atau kuning jeruk dan pigmen

kuning ini yang membedakannya dari Staphylococcus epidermitis.

Pada media manitol salt agar (MSA) Staphylococcus

aureus menunjukkan pertumbuhan koloni berwarna kuning dikelilingi zona berwarna kuning karena memfermentasi manitol. Jika bakteri tidak mampu

memfermentasi manitol akan tampak zona merah muda. Beberapa

karakter Staphylococcus aureus terlihat pada table di bawah ini

Pada media biakan sel tampak bergerombol tidak teratur. Ketika plat

agar diinkubasi secara anaerob, pertumbuhan Staphylococcus aureus menuju

ke permukaan media, sehingga koloni menjadi cembung dan rata. Di kulit


14/15

bakteri ini dapat menyebabkan beberapa penyakit jerawat, bisul, karbunkel,

pyelitis dan cystitis.

VIII. Simpulan

1. Teknik isolasi bakteri pada kulit di praktikum ini dilakukan dengan cara

melakukan SWAB pada daerah tertentu pada kulit kemudian diuji

menggunakan media agar darah.

2. Diketahui keberadaan bakteri patogen pada kulit di bagian wajah pada

praktikum ini adalah Staphylococcus aureus dan Staphylococcus

epidermidis.


15/15

DAFTAR PUSTAKA

Afrianto, L. 2004. Menghitung Mikroba Pada Bahan Makanan, Cakrawala(Suplemen pikiran rakyat untuk iptek). Bandung: Farmasi FMIPA ITB.

Anton, W. 2008. Mikrobiologi Umum. Malang : Universitas Brawijaya.

Irianto, K. 2006. Mikrobiologi: Menguak Dunia Mikroorganisme Jilid 2. Bandung :

CV. Yrama Widya.

Jawetz, Melnick, dan Adelberg ’ s. 2004. Mikrobiologi Kedokteran, Ed 23.

Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.

Kusnadi, dkk. 2003. MIKROBIOLOGI, COMMON TEXTBOOK (EDISI REVISI),

JICA. Bandung: FMIPA Universitas Pendidikan Indonesia.

Pelczar, J M dan Chan E C S. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : UI-Press.

Sloane, ethel. 2003. Anatomi dan Fisiologi untuk Pemula. Jakarta : EGC.

shift a2_kelompok 5_deteksi patogen kulit

Documents