Prinsip Dasar Uji Widal:Uji aglutinasi Antigen adalah suspensi kuman Salmonella (tidak larut) yang direaksikan dengan antibodi spesifik terhadap kuman tersebut yang ada di dalam serum penderita.

1

Cara Uji WidalAda dua cara: 1. Tes slide 2. Tes Tabung

2

Tes SlideUji penyaring: Pada gelas objek: 2 tts serum penderita + 2 tts suspensi antigen, campur dengan gelas pengaduk, gerakkan gelas objek dengan gerakan memutar perlahan 5 menit, suhu kamar, aglutinasi dilihat dengan bantuan lampu neon atau cahaya matahari dekat jendela kaca.Uji titrasi: Serum penderita diencerkan serial3

Contoh pengenceran serial yang digunakan saat praktikum Perbandingan

Titer1:20 1:40 1:80 1:160 1:320

Serum (l) 25 25 25 25 50

Antigen (l) 40 20 10 5 54

Tes TabungBahan : Serum penderita

Alat

: 1. Rak kecil berlubang 24 dan tabung venoject 3 ml. 2. Pipet serologi 1 ml dengan skala 0,01 ml. 3. Mikropipet 50L. 4. Inkubator.

5

Reagen : Antigen Widal O = antigen Salmonella typhi (somatik) H = antigen Salmonella typhi (flagelar) A = antigen Salmonella paratyphi A (flagelar) B = antigen Salmonella paratyphi B (flagelar)6

Cara kerjaLakukan pengenceran serum (lihat diagram berikut) Tambahkan antigen 0,25 ml pada tiap tabung Campur dengan cara menggoyang rak 34x Inkubasi pada suhu 37C selama 24 jam Lihat adanya aglutinasi pada dasar tabung dengan bantuan cermin (Widal reader)7

Cara membaca aglutinasi Pola sedimen di dasar tabung, lihat diatas cermin cekung. Negatif: sedimen bulat, tepi halus. Positif: sedimen melebar ke tepi dengan pola ireguler. Setelah dilihat, goyangkan tabung: aglutinin H : agregat flokuler, mudah pecah aglutinin O : agregat granuler dan halus8

KontrolKontrol Positif Uji Widal dilakukan terhadap serum yang mengandung aglutinin dengan titer >1:160 Dalam 1 rak, dikerjakan bersama beberapa rak yang berisi serum penderita

Kontrol Negatif 4 tabung berisi 0,25 ml PZ dan 0,25 ml antigen (O, H, A dan B)9

InterpretasiKriteria diagnostik untuk demam tifoid: bila titer dari aglutinin O saja atau dan H 2 kali batas atas titer normalnya, Aglutinin O: 1:80 Aglutinin H: 1:40 Aglutinin A: 1:40 Aglutinin B: 1:80 atau bila dalam jangka waktu 5-7 hari terjadi kenaikan titer aglutinin sebesar 4 kali.10

Laboratorium Mikrobiologi Patologi KlinikCut off: anak-anak (1-13 th) : 1:80 dewasa : 1:160 Contoh cara penulisan: Titer 1:160 kemungkinan demam tifoid, paratifoid tidak dapat disingkirkan. Titer >1:160 hasil titer O, H lebih tinggi dari batas normal di laboratorium kami.11

Hasil NegatifTidak ada infeksi S. typhi Dalam status carrier Antigen bakteri belum adekuat merangsang pembentukan antibodi Kesulitan teknis atau kesalahan dalam melakukan uji Widal Pengobatan dengan antibiotika sebelumnya Variasi dalam persiapan antigen12

Hasil PositifMenderita demam tifoid Imunisasi dengan antigen Salmonella Reaksi silang dengan Salmonella nontifoid Variasi dan standarisasi yang kurang, dalam persiapan antigen Infeksi dengan malaria atau enterobacter lain Penyakit lain, seperti dengue13

Kelemahan Uji WidalAntigen: strain bukan dari daerah yang bersangkutan, kekeruhan suspensi yang kurang standarisasi. Kadar aglutinin terlalu tinggi: fenomena prozone negatif semu Cara pembacaan: subjektif Aglutinat tidak berwarna: menyulitkan pembacaan14

15

Salmonella-Shigella (SS) agar Media agar selektif untuk subkultur kuman Salmonella dan Shigella. Buatan OXOID: Lab-Lemco 5g, Pepton 5g, Laktose 5g, garam empedu 8,5g, natrium sitrat 10g, natrium tiosulfat 8,5g, ferri sitrat 1g, brilliant green 0,000333g, neutral red 0,025g, agar 12g, ditambah air suling sampai 1 liter. pH media 7,3.

16

Media Triple Sugar Iron (TSI) Untuk identifikasi kuman patogen enterik Gram negatif berdasarkan kemampuan kuman: meragi laktosa, glukosa dan sukrosa

dengan pembentukan asam dan gas, memproduksi hidrogen sulfida.

17

Media Lysine Indole Motility (LIM) Media untuk reaksi biokimia, untuk melihat: Dekarboksilasi lysine Motilitas kuman Melakukan tes Indol dengan reagen Kovac

Reagen Kovac diteteskan pada media LIM setelah inkubasi 24 jam.

18

Media Simmons Citrate (SC) Menentukan karakteristik Enterobacteriaceae dengan cara mendeteksi pemakaian sitrat.

19

Mueller Hinton agar Beef, infusion from Peptone Starch Agar pH = 7,4 300g 17,5g 1,5g 17g

Untuk Tes Kepekaan Antibiotika

20

Pewarnaan Gram (Bailey/Scott) Hapusan kuman difiksasi di atas api Banjiri gelas objek dengan cat kristal violet, 10 detik. Buang cat, bersihkan dengan larutan iodine. Banjiri dengan larutan iodine 10 detik. Cuci dengan air mengalir. Hilangkan warna dengan larutan alkohol-aseton 10-20 detik. Counterstain dengan safranin 10 detik. Cuci dengan air, keringkan diantara dua kertas bersih.21

Standar Nefelometer Mc FarlandNo tab Barium Klorida (ml) Asam sulfur (ml) Densitas (x108 /ml) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

0,1

0,2

0,3

0,4

0,5

0,6

0,7

0,8

0,9

1

9,9

9,8

9,7

9,6

9,5

9,4

9,3

9,2

9,1

9

3

6

9

12

15

18

21

24

27

30

22