Metoda Pemeriksaan Hba1c Dan Prinsipnya Pada BM6010/C

Pada tahun 1949, Pauling dkk memperkenalkan adanya heterogenitas pada molekul hemoglobin

berdasarkan kemampuan migrasi molekul hemoglobin secara elektris. Adanya teknologi migrasi ini

menyebabkan diperkenalkannya teknik ion-exchange chromatography sehingga pada tahun 1955

Kunkel dan Wallenius menggunakan teknik tersebut untuk mendapatkan komponen minor pada

hemoglobin orang dewasa sehat. Studi lebih lanjut didapat bahwa hemoglobin tersebut mampu

dipisahkan lagi menjadi beberapa subfraksi, di antaranya HbA1a, HbA1b,HbA1c,HbA1d, dan HbA1e

tergantung dari komponen yang ingin diekstraksi (eluted). Berdasarkan kecepatan ekstraksi tersebut,

ditemukan adanya komponen yang bermigrasi dengan cepat sehingga dinamakan sebagai fast

hemoglobin yang pada saat itu dinamakan sebagai HbA0. Namun pada tahun 1969, Rahbar dkk berhasil

memperlihatkan bahwa fast hemoglobin ini meningkat pada eritrosit penderita diabetik.

Pada tahun 1971, Trivelli dkk menyatakan adanya hubungan antara fast hemoglobin dengan komplikasi

penderita diabetik. Komponen fast hemoglobin ini dikenal sebagai nonglycated hemoglobin yang

kemudian pada akhirnya ditemukan adanya komponen glycated hemoglobin yang dikenal sebagai

HbA1c. Sejak tahun 1970-an, HbA1c sudah digunakan sebagai parameter untuk monitoring metabolisme

glukosa pada penderita diabetik. Kadar HbA1c selalu dilaporkan dalam bentuk rasio antara HbA1c

dengan hemoglobin total untuk meminimalisir variasi inter- dan intra-individual. 1

Glikohemoglobin (GHb) atau HbA1c merupakan petanda penting dalam mendiagnosis dan memantau

pengobatan pada penderita diabetik. Pada masa kini banyak metoda yang digunakan dalam

menentukan kadar HbA1c, yang utama adalah teknik High Performance Liquid Chromatography (HPLC)

dan immunoassay. Metoda HPLC mampu mendeteksi hemoglobin abnormal dan memiliki

reprodusibilitas yang baik dengan CV < 1%, namun kelemahan metoda ini adalah memerlukan alat yang

khusus, tenaga yang ahli, dan waktu yang lama sehingga tidak bisa digunakan di rumah sakit dengan

sampel pemeriksaan HbA1c yang banyak. Sebaliknya metoda immunoassay dapat digunakan pada

instrument otomatik, tidak memerlukan tenaga ahli serta hemat waktu namun kekurangannya

pengukuran glikohemoglobin dan hemoglobin total mesti terpisah dan reprodusibilitas tidak sebaik

metoda HPLC dengan CV sekitar 3-5%. Selain itu kurva kalibrasi tidak stabil untuk 24 jam sehingga perlu

dikalibrasi lagi. Oleh sebab itu dikembangkan teknologi enzimatik.2

Metoda enzimatik berkembang sejak tahun 2000-an. PT Sysmex Indonesia memperkenalkan teknologi

enzimatik pemeriksaan HbA1c menggunakan instrument otomatik BM6010/C. Reaksi diawali dengan

pengukuran kadar hemoglobin total pada panjang gelombang 600 nm, dengan cara melisiskan eritrosit

kemudian rantai fruktosil dipeptida dillepaskan dari gugus amino N-terminal rantai beta HbA1c

menggunakan protease. Kadar hemoglobin total sebanding dengan kadar fruktosil dipeptida yang

dilepaskan. Pada reaksi kedua, mencari kadar glikoHb, maka fruktosil dipeptida akan bereaksi dengan

fruktosil peptida oksidase menghasilkan hidrogen peroksida. Hidrogen peroksida akan menyebabkan

garam natrium fenotiazin 10-(carboxymethylaminocarbonyl)-3 dan 7-bis (dimethylamino) membentuk

substansi warna. Adanya enzim peroksidase akan bereaksi dengan substansi warna tersebut sehingga

menyebabkan kompleks warna yang diukur serapannya pada panjang gelombang 700 nm. 4

Skema pemeriksaan HbA1c

Gambar 1. Skema pemeriksaan HbA1c

Teknologi enzimatik BM6010/C memiliki korelasi yang sangat baik dibandingkan teknik HPLC dengan

koefisien korelasi sebesar 0,98 dan memiliki CV < 1% dalam menentukan kadar HbA1c (Gambar 2).

Gambar 2. Korelasi teknologi enzimatik BM6010/C dengan teknik HPLC

Pada panduan WHO 2011 tentang Use of Glycated Haemoglobin (HbA1c) in the Diagnosis of Diabetes

Mellitus beberapa pernyataan yang dapat dijalankan, di antaranya adalah:

- Kadar HbA1c harus diukur menggunakan sampel darah vena

- Pemeriksaan point of care testing (POCT) pemeriksaan HbA1c tidak boleh digunakan untuk

mendiagnosis Diabetes Melitus (DM) kecuali terbukti bahwa kualitas kontrol internal maupun

eksternal sesuai dengan metoda standar

- Pemakaian POCT mesti dikonfirmasi dengan pemeriksaan darah vena. 3

Oleh sebab itu teknologi pemeriksaan HbA1c dengan metoda enzimatik dianggap mampu menjawab

permasalahan di atas dengan adanya instrument BM6010/C.

Referensi

1. Weykamp C, John WG, Mosca A. A Review of the Challenge in Measuring Hemoglobin A1c. J Diabet

Sci Technol. 2009;3(3):439-45

2. Sakurabayashi I, Watano T, Yonehara S, Ishimaru K, et al. New Enzymatic Assay for

Glycohemoglobin. Clin Chemis. 2003;49(2):269-74

3. World Health Organization. Use of Glycated Haemoglobin (HbA1c) in the Diagnosis of Diabetes

Mellitus. In Abbreviated Report of a WHO Consultation.2011; 1-25.

4. Sysmex Corporation. Clinical Chemistry Data Sheet BM6010/C HbA1c. 2011