metode dasar mikrobiologi

8/18/2019 Metode Dasar Mikrobiologi

1/29

METODE / TEKNIKDASAR MIKROBIOLOGI

TEKNIK MEMPEROLEHMIKROORGANISME (CULTURABLE

MICROORGANISM)

TEKNIK MELIHATMIKROORGANISME

TEKNIK PENYIMPANAN MIKROORGANISME

http://d/UPN/Penyimpanan.pptxhttp://d/UPN/Penyimpanan.pptxhttp://d/UPN/Penyimpanan.pptx


2/29

Teknik Inokulai

TEKNIK MEMPEROLEHMIKROORGANISME

(CULTURABLEMICROORGANISM)



Inokulasi mikroba umumnya menggunakan alatyang disebut sebagai jarum ose yang berfungsi

menginokulasi kultur mikrobia serta memindahkansuatu kultur mikroba (koloni) pada media satu kemedia lainnya.Inokulasi jamur menggunakan jarum ose bentuk batang.

Inokulasi bakteri menggunakan jarum ose bentuk bulat.

Ada beberapa metode yang digunakan untukmengisolasi biakan murni ataupun inokulasi

mikroba antara lain



3/29

Teknik Inokulai





1. Metode gores / Streak plate

Teknik ini lebih menguntungkan jika ditinjaudari sudut ekonomi dan waktu, tetapimemerlukan keterampilan-keterampilan yangdiperoleh dengan latihan



4/29

Teknik Inokulai







5/29

Teknik Inokulai





2. Metode tebar / spread plateSetetes inokolum diletakan dalam

sebuah medium agar nutrien dalamcaan petridish dan denganmenggunakan batang kaca yangbengkok dan steril diratakan



6/29

Teknik Inokulai





3. Metode tuang / pour plateIsolasi menggunakan media air dengan ara

pengeneran. !asar melakukan pengeneran adalahpenurunan jumlah mikroorganisme sehingga padasuatu saat hanya ditemukan satu sel di dalam tabung.



7/29

Teknik Inokulai





". Metode tusuk Metode tusuk yaitu dengan dengan ara meneteskan

atau menusukan ujung jarum ose yang didalamnyaterdapat inokolum, kemudian dimasukkan ke dalammedia.

.



8/29

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e





1. Mikroskopi.



9/29

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e





5µ

m

5

µm

10µm

10µm

cd

a b

10µm

5

µm



10/29

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e





3. Mikroskop #letron

http://var/www/apps/conversion/tmp/scratch_3/Penyimpanan.pptxhttp://var/www/apps/conversion/tmp/scratch_3/Penyimpanan.pptxhttp://var/www/apps/conversion/tmp/scratch_3/Penyimpanan.pptx


11/29

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e





5µ

m10µm

2.5

µm

5 µm

ab

c d

2.5 µm

5 µm

10 µm2.5 µm



12/29

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e





Tujuan pewarnaan terhadap mikroorganisme ialah untuk $1. Mempermudah melihat bentuk jasad, baik bakteri, ragi,

maupun %ungi.&. Memperjelas ukuran dan bentuk jasad3. Melihat struktur luar dan kalau memungkinkan struktur

dalam jasad.". Melihat reaksi jasad terhadap pewarna yang diberikan

sehingga si%at-si%at %isik dan kimia dapat diketahui.

'angkah-langkah utama teknik pewarnaan1. (embuatan olesan bakteri, olesan bakteri tidak boleh terlalu

tebal atau tipis&. )iksasi, dapat dilakukan seara pemanasan atau dengan

aplikasi bahan kimia seperti sabun, %ormalin, %enol.3. *plikasi +at warna $ tunggal, atau lebih dari 1 +at warna



13/29

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e





Me"o&e Pe'a#naan Se&e#!ana / Konenional

Berbagai macam tipe morfologi bakteri (kokus, basil, spirilum,

dan sebagainya) dapat dibedakan dengan menggunakan

pewarna sederana. !stila "pewarna sederana" dapat

diartikan dalam mewarnai sel#sel bakteri anya digunakan satu

macam $at warna sa%a (&upte, 1''0)

ewarnaan sederana yaitu pewarnaan dengan menggunakansatumacam $at warna dengan tu%uan anya untuk meliat

bentuk sel bakteri dan untuk mengetaui morfologi dan susunan

selnya . pewarnaan ini dapat menggunakan pewarnaan basa

pasda umumnya antara lain kristal iolet , metylen blue , karbol ,

fucsin , dan safranin (lay ,1''*.



14/29

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e





*lat ahan1. elas preparat 1. akteri #sherihia oli&. arum ose &. akteri baillus subtili3. 'abeling 3. *0uades". Mikroskop ". Methylen blue. unsen . Tissue2. (ipet 2. *lkohol

. Tabung . *ir mengali4. 5ak tabung



15/29

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e





1. Bersikan preparat glass dengan alkool +0 kemudian di

fiksasi di atas bunsen

2. Beri label pada bagian bawa preparat glass-. i%arkan %arum ose kemudian dicelupkan ke auades dan

teteskan - ose auades pada preparat glass menggunakan

%arum ose

*. i%arkan lagi %arum ose dan diambil bakteri dari media dengan

cara aseptik lalu diratakkan di atas preparat glass

5. /eringkan

. eteskan larutan $at warna metylen blue sebanyak 1 atau 2tetes

+. /eringkan selama 1 menit

. 3uci dengan air mengalir

'. /eringkan preparat dengan dianginkan, dan

10. 4mati dibawa mikroskop karakteristik dan bentuk bakteri



16/29

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e







17/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e

Pewarnaan Gram- (ewarnaan gram positi% atau negati% 9kimia dan %isik.

-(enemunya, ilmuwan !enmark :ans ;hristian ram9143


18/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e

!alam pewarnaan gram diperlukan empat reagen yaitu$

1. >at warna utama 9?iolet kristal&. Mordan 9larutan Iodin yaitu senyawa yang

digunakan untuk mengintensi%kan warna utama.3. (enui / peluntur +at warna 9alohol / aseton yaitu

sol?en organi yang digunakan uantuk melunturkan+at warna utama.

". >at warna kedua / at penutup 9sa%ranin digunakanuntuk mewarnai kembali sel-sel yang telahkehilangan at utama setelah perlakuan dengaalohol.



19/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e

(engeatan gram dilakukan dalam " tahap yaitu1. (emberian at warna utama 9airan kristal ?iolet

berwarna ungu.&. (engintesi%an at utama dengan penambahan larutanmordan 7.3. (enuian 9dekolarisasi dengan larutan alkoholasam.". (emberian at lawan yaitu at warna sa%ranin



20/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e

akteri ram-negati% adalah bakteri yang tidakmempertahankan +at warna metil ungu pada metode

pewarnaan ram.

akteri gram-positi% akan mempertahankan +at warnametil ungu gelap setelah diui dengan alkohol,sementara bakteri gram-negati% tidak



21/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e

- Ciri-ciri bakteri gram negatif yaitu:1. Struktur dinding selnya tipis, sekitar 1@ < 1 mm,

&. !inding selnya mengandung lemak lebih banyak 911-&&A, peptidoglikan terdapat didalam lapisan kaku,sebelah dalam dengan jumlah sedikit B 1@A dari berat kering, tidak mengandung asam tekoat.

Ciri-ciri bakteri gram positif yaitu:

3. Struktur dinding selnya tebal, sekitar 1-4@ nm,". !inding selnya mengandung lipid yang lebih normal

91-"A, peptidoglikan ada yang sebagai lapisantunggal. 7omponen utama merupakan lebih dari@A berat ringan. Mengandung asam tekoat.

Pewarnaan Gram



22/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Meli!a"

Mik#oo#$ani%e

Gram posii! Gram ne"ai!



23/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Pe#!i"un$an

Mik#oo#$ani%e

ertumbuan mikroorganisme dapat diukur dengan

dua cara yaitu secara langsung dan tidak lansung.

engukuran pertumbuan mikroorganisme secara

langsung dapat dilakukan dengan beberapa cara

yaitu



24/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Pe#!i"un$an

Mik#oo#$ani%e

a. Metode 'empeng 9The Viable Plate Count .- dibuat seri pengeneran suspensi bakteri

- umlah koloni berkisar antara 3@-3@@ dan ada juga yang menyebutkan &-&@ koloni per awan.- ika lebih 3@@ koloni, T8T; 9too numerous to

count atau TC! 9terlalu banyak untuk dihitung,dan

- jika kurang 3@, disebut T)T; 9too few to count atau TSC! 9terlalu sedikit untuk dihitung.

- 7elemahannya, membutuhkan waktu yang lama- keuntunganya adalah sederhana, mudah dan

sensiti?e karena menggunakan oloni ountersebagai alat hitung dan dapat digunkan untuk

menghitung mikroorganisme pada sampelmakanan, air, ataupun tanah.



25/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Pe#!i"un$an

Mik#oo#$ani%e

b. (engukuran menggunakan bilik hitung9 ounting hamber *tau metode langsung ( Direct Count Procedure ) . -- bateri digunakan #i$i% &i'n" Pero!!Ha'sser,- jamur digunakan :emositometer.7euntungan menggunakan metode ini adalah

mudah, murah dan epat, serta bisa diperolehin%ormasi tentang ukuran dan mor%ologimikroorganisme.7erugiannya adalah populasi mikroorganisme yangdigunakan harus banyak 9 minimum berkisar1@2 ;)C / ml.



26/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Pe#!i"un$an

Mik#oo#$ani%e

. (engukuran menggunakan #letroni ounter (ada pengukuran ini suspensimikroorganisme dialirkan melalui lubang keil9 oriie dengan bantuan aliran listrik



27/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Pe#!i"un$an

Mik#oo#$ani%e

d. (engukuran dengan Metode *ngka (alingMungkin/*(M 9 ost Probable !umber Procedure"P! .Metode angka paling mungkin adalah suatu metodestatistik berbasis teori probabilitas/kemungkinan.Teknik memperkirakan jumlah mikroorganisme ?iabel dalam suatu sampel/ontoh. Teknik M(8didasarkan pada statistik kemungkinan9probabilitas dan hasil analisis M(8 searalangsung berkaitan dengan %rekuensi/banyaknya serihasil pengujian yang positi% 9sampel menunjukkanadanya pertumbuhan mikroorganisme



28/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Pe#!i"un$an

Mik#oo#$ani%e

%. (engukuran kekeruhan / turbiditry akteri yang bermultiplikasi pada media air akanmenyebabkan media menjadi keruh. *lat yangdigunakan untuk pengukuran adalahspektro%otometer atau kolorimeter dengan aramembandingkan densitas opti antara media tanpapertumbuhan bakteri dan media denganpertumbuhan bakteri



29/29





M#T6!# / T#78I7 !*S*5MI756I6'6I

Teknik Pe#!i"un$an

Mik#oo#$ani%e

Rumus Untuk menghitung jumlah koloni

)]()21,0()11[( d x xn xn

C N

+=

∑

metode dasar mikrobiologi

Documents