LEMBAR KERJA PRAKTIKUM PEMERIKSAAN SEROLOGITujuan pemeriksaan Widal : mengetahui adanya antibodi spesifik terhadap bakteri Salmonella TUJUAN PRAKTIKUM : Memahami cara pemeriksaan Widal Memahami cara interprestasi hasil pemeriksaan Widal DASAR TEORI : Pemeriksaan Serologi dilakukan untuk menunjang diagnosis terutama pada kasus penyakit infeksi. Pengamatan yang dapat dilakukan melalui pemeriksaan ini adalah secara in vitro terhadap perubahan kompleks antigen-antibodi (Ag-Ab). Dasar pemeriksaannya adalah proses presipitasi atau aglutinasi atau aktivasi komplemen. Pemeriksaan dapat dilakukan dengan cara Widal dan ELISA (Enzym Linked Immunosorbent Assay). Pemeriksaan Widal Dasar pemeriksaan : Reaksi aglutinasi, yaitu ikatan antigen yang melekat pada permukaan partikel/sel (insoluble) dengan antibodi spesifik yang diamati sebagai gumpalan (clumping). Antigen yang digunakan : Ag O : bagian tertular dari LPS dinding sel - Antigen Somatik - Tahan Panas dan Alkohol Ag H : terdapat pada flagella - Dirusak oleh Panas dan Alkohol ALAT DAN BAHAN Bahan pemeriksaan : serum Tabung reaksi : 10 Pipet volume Mikropipet Slide NaCl 0,9% Water bath Kit pemeriksaan Widal / Micropath antigens (Omega diagnostics)CARA KERJA RAPID SLIDE TEST Siapkan slide yang diberi 3 lingkaran Dengan mikropipet masukkan serum ke dalam masing-masing lingkaran dengan volume berturut-turut : 80 ul, 40 ul, dan 20 ul Tambahkan ke dalam masing-masing serum 1 tetes antigen (pengenceran 1:20, 1:40, dan 1:80) Campurkan dengan cara digoyang-goyangkan selama 1 menit Perhatikan aglutinasi yang terjadi. Setiap sampel yang menunjukkan aglutinasi sebaiknya dikonfirmasi dengan Tube Aglutination Test TUBE AGLUTINATION TEST Siapkan 10 tabung reaksi dan susunlah dalam 1 rak. Beri nomor 1 10 Dengan pipet masukkan 1,9 ml NaCl pada tabung 1 Dengan pipet masukkan 1 ml NaCl pada masing-masing tabung 2-10 Masukkan 0,1 ml serum pada tabung 1 dan campur hingga homogen Ambil 1 ml campuran tabung 1 dan masukkan tabung 2. Tabung 2 dicampur hingga homogen, dan ambil 1 ml untuk dimasukkan tabung 3 , dan seterusnya hingga tabung 9 Ambil 1 ml larutan pada tabung 9 dan dibuang Tambahkan setiap tabung 1 tetes antigen. Dengan demikian didapatkan pengenceran pada tabung 1 9 berturut-turut : 1/20, 1/40, 1/80, 1/160, 1/320, 1/640, 1/1280, 1/2560. Tabung 10 hanya berisi NaCl dan antigen, serta berfungsi sebagai kontrol Campur larutan hingga homogen dan inkubasikan sebagai berikut : - Titrasi O : 50o C selama 4 jam - Titrasi H : 50o C selama 2 jam Pada kontrol antigen harus tidak terdapat aglutinasi Hasil : Adanya aglutinasi menunjukkan adanya antibody12345678INPRESTASI HASIL Titer O yang tinggi (> : 160) atau kenaikan titer menunjukkan infeksi aktif Titer H yang tinggi (> : 160) menunjukkan pernah divaksinasi/pernah terinfeksi HASIL RAPID SLIDE TESTTUBE AGLUTINATION TEST12345678PEMBAHASANKESIMPULANYogyakarta, 24 September 2012 Mengetahui Assisten/Dosen Praktikan()(Armin Sinarta)