68

LAMPIRAN

69

Lampiran 1. Preparasi Larutan Uji

1. Preparasi Larutan Uji Aktivitas Tirosinase

2. Persiapan larutan Uji Inhibisi Tirosinase

Larutan Buffer Fosfat 0,05 M

Larutan L-tirosin

2,655 g Na2HPO4 + 1,33 g NaH2PO4

dilarutkan dengan aquades sampai

500 ml

0,128 g L-tirosin dilarutkan dengan

aquades sampai 100 ml

Larutan Buffer Fosfat 0,1 M Larutan A

31,2g NaH2PO4 dilarutkan dalam

air suling sampai 1000mL

Larutan B

28,4 g NaH2PO4 dilarutkan

dalam air suling sampai 1000mL

Buffer Fosfat 0,1 M

pH 7 (200 ml)

39 ml

61 ml

70

Lampiran 2. Foto Pengambilan dan Preparasi Sampel

Lokasi Pengambilan Sampel

Pengambilan Sampel

Sampel

71

Lampiran 3. Foto Ekstraksi Enzim Tirosinase

Jamur Tiram Penimbangan Bahan

Proses Ekstraksi Proses Penyaringan

72

Lampiran 4. Nilai Absorbansi Ekstrak Enzim Tirosinase

Nilai Absorbansi Jamur Kuping Nilai Absorbansi Jamur Kancing

Nilai Absorbansi Jamur Tiram

73

Lampiran 5. Penghitungan Kurva Standar Mushroom Tyrosinase

L-tirosin = 0,128 gram L-tirosin dalam 100 mL aquades

Berat Molekul = 181.19 g/mol (C9H11NO3)

Berat Jenis = 1,46 g/cm3

Molaritas larutan L-tirosin dalam 100 mL air =

= 15,885 mol/mL

*Jamur Kancing (Konsentrasi 0,25 mL sampel)

=

=

=

= 0,0013 U/mL

*Jamur Kancing (Konsentrasi 0,5 mL sampel)

=

=

=

= 0,0026 U/mL

*Jamur Kancing (Konsentrasi 1 mL sampel)

=

=

=

= 0,0023 U/mL

74

Lampiran 5. Penghitungan Kurva Standar Mushroom Tyrosinase

*Jamur Kancing (Konsentrasi 2 mL sampel)

=

=

=

= 0,0019 U/mL

*Jamur Tiram (Konsentrasi 0,25 mL sampel)

=

=

=

= 0,0062 U/mL

*Jamur Tiram (Konsentrasi 0,5 mL sampel)

=

=

=

= 0,0062 U/mL

75

Lampiran 5. Penghitungan Kurva Standar Mushroom Tyrosinase

*Jamur Tiram (Konsentrasi 1 mL sampel)

=

=

=

= 0,0051 U/mL

*Jamur Tiram (Konsentrasi 2 mL sampel)

=

=

=

= 0,0047 U/mL

*Jamur Kuping (Konsentrasi 0,25 mL sampel)

=

=

=

= 0,0026 U/mL

*Jamur Kuping (Konsentrasi 0,5 mL sampel)

=

76

=

=

= 0,0029 U/mL

Lampiran 5. Penghitungan Kurva Standar Mushroom Tyrosinase

*Jamur Kuping (Konsentrasi 1 mL sampel)

=

=

=

= 0,0031 U/mL

*Jamur Kuping (Konsentrasi 2 mL sampel)

=

=

=

= 0,0023 U/mL

77

Lampiran 6. Kurva Standar Mushroom Tyrosinase

78

Lampiran 7. Penghitungan Nilai Aktivitas Unit Mushroom Tyrosinase

Penghitungan nilai aktivitas unit didapat dari persamaan kurva standar Mushroom

Tyrosinase (Lampiran 6) dengan nilai x adalah nilai absorbansi jamur (Lampiran

3) yang digunakan untuk melakukan uji inhibisi enzim tirosinase.

*Jamur Kancing

y = 0.00015x + 0.00165

y = (0,00015 x 0,037) + 0,0025

y = 0,0025 U/mL

*Jamur Tiram

y = -0.00056x + 0.00695

y = (-0,00006 x 0,646) + 0,0076

y = 0,0066 U/mL

*Jamur Kuping

y = -0.00007x + 0.00290

y = (-0,00034 x 0,126) + 0,00395

y = 0,0039 U/mL

79

Lampiran 8. Hasil Uji Inhibisi dengan Waktu Inkubasi ± 1,5 jam

Sargassum Crassifolium metanol

Konsentrasi

Nilai

Absorbansi % Inhibisi

Blanko 0.112

250 0.076 32.14285714

500 0.085 24.10714286

1000 0.079 29.46428571

2000 0.091 18.75

Sargassum crassifolium etil asetat

Konsentrasi

Nilai

Absorbansi % Inhibisi

Blanko 0.112

250 0.076 32.14285714

500 0.085 24.10714286

1000 0.079 29.46428571

2000 0.091 18.75

Gracilaria coronopifolia metanol

Konsentrasi

Nilai

Absorbansi % Inhibisi

Blanko 0.109

250 0.089 18.34862385

500 0.085 22.01834862

1000 0.085 22.01834862

2000 0.085 22.01834862

Gracilaria coronopifolia etil asetat

Konsentrasi

Nilai

Absorbansi % Inhibisi

Blanko 0.112

250 0.081 27.67857143

500 0.092 17.85714286

1000 0.088 21.42857143

2000 0.101 9.821428571

Daun Carica papaya metanol

Konsentrasi

Nilai

Absorbansi % Inhibisi

Blanko 0.112

250 0.081 27.67857143

500 0.084 25

1000 0.099 11.60714286

2000 0.123 -9.821428571

59

Daun Carica papaya etil asetat

Konsentrasi

Nilai

Absorbansi % Inhibisi

Blanko 0.111

250 0.075 32.43243243

500 0.178 -60.36036036

1000 0.094 15.31531532

2000 0.131 -18.01801802

Hidroquinon

Konsentrasi

Nilai

Absorbansi % Inhibisi

Blanko 0.111

250 0.115 -3.60360360

500 0.105 5.405405405

1000 0.095 14.41441441

2000 0.127 -14.4144144

Lampiran 9. Hasil Uji Inhibisi dengan Waktu Inkubasi ± 24 jam

S.crassifolium Metanol

Konsentrasi (µg/mL)

Blanko 10 25 50 100 200 250 500 1000

P 1 1.84 1.784 1.795 1.809 1.635 1.391 1.623 1.190 1.585

P2 1.837 1.764 1.78 1.767 1.694 1.433 1.615 1.83 1.628

Rata-rata 1.8385 1.774 1.787 1.788 1.664 1.412 1.619 1.5101 1.6065

% Inhibisi 3.508 2.774 2.746 9.464 23.198 11.939 17.862 12.618

S.crassifolium Etil Asetat

Konsentrasi (µg/mL)

Blanko 10 25 50 100 200 250 500 1000

P1 0.684 0.148 0.139 0.287 0.111 0.302 0.131 0.186 0.114

P2 0.689 0.132 0.222 0.247 0.151 0.137 0.121 0.111 0.46

Rata-rata 0.686 0.14 0.180 0.267 0.131 0.2195 0.126 0.148 0.287

%Inhibisi

79.606 73.707 61.107 80.917 68.026 81.646 78.368 58.193

G.coronopifolia Metanol

Konsentrasi (µg/mL)

Blanko 10 25 50 100 200 250 500 1000

P1 0.704 1.754 1.817 1.77 1.752 1.457 1.534 1.278

P2 0.708 1.818 1.815 1.798 1.708 1.134 1.372 1.521 1.771

Rata-rata 0.706 1.786 1.816 1.784 1.73 1.2955 1.453 1.3995 1.771

80

%Inhibisi

-152.9 -157.2 -152.6 -145.0 -83.4 -105.8 -98.2 -150.8

G.coronopifolia Etil Asetat

Konsentrasi (µg/mL)

Blanko 10 25 50 100 200 250 500 1000

P1 0.687 0.256 0.246 0.245 0.262 0.361 0.331 0.366 0.421

P2 0.689 0.234 0.264 0.258 0.283 0.342 0.362 0.401 0.411

Rata-rata 0.688 0.245 0.255 0.2515 0.2725 0.3515 0.3465 0.3835 0.416

%Inhibisi

64.389 62.936 63.444 60.392 48.909 49.636 44.258 39.534

Lampiran 9. Hasil Uji Inhibisi dengan Waktu Inkubasi ± 24 jam

Daun Carica papaya Metanol

Konsentrasi (µg/mL)

Blanko 10 25 50 100 200 250 500 1000

P1 1.368 1.225 1.496 1.535 1.323 1.413 1.334 1.477 1.356

P2 1.368 1.306 1.438 1.461 1.329 1.378 1.436 1.493 1.35

Rata-rata 1.368 1.265 1.467 1.498 1.326 1.3955 1.385 1.485 1.353

%Inhibisi

7.492 -7.236 -9.50 3.070 -2.010 -1.242 -8.552 1.096

Daun Carica papaya Etil Asetat

Konsentrasi (µg/mL)

A 10 25 50 100 200 250 500 1000

P1 0.693 0.11 0.083 0.081 1.334 1.583 1.408 1.55 1.217

P2 0.689 0.113 0.109 0.074 0.086 1.234 1.356 1.246 1.345

Rata-rata 0.691 0.111 0.096 0.077 0.71 1.4085 1.382 1.398 1.281

%Inhibisi

83.863 86.10 88.78 -2.74 -103.8 -100 -102.3 -85.38

Hidroquinon

Konsentrasi (µg/mL)

Blanko 10 25 50 100 200 250 500 1000

81

P1 0.651 0.207 0.174 0.13 0.135 0.156 0.157 0.206 0.319

P2 0.652 0.221 0.176 0.134 0.134 0.149 0.168 0.224 0.345

Rata-rata 0.6515 0.214 0.175 0.132 0.1345 0.1525 0.1625 0.215 0.332

%Inhibisi

67.15 73.13 79.73 79.35 76.59 75.05 66.99 49.04

Lampiran 10. Tabel Nutrisi pada Jamur

Nutritional properties (g/100g dw) of culinary mushroom

Mushroom Protein Fat Poly-

unsaturated

fat

Total

unsturated

fat

Saturated

fat

Carbohydrate

A.bisporus

portobello 33,44 3,10 1,43 1,46 0,30 47,38

A.bisporus

Crimnii 33,48 2,39 0,41 0,44 0,26 24,27

Lentinus

Edoles

Shittake

32,93 3,73 1,30 1,36 0,22 31,80

Pleorotus

ostreatus

Pearl oyster

27,25 2,75 1,16 1,32 0,20 35,31

Pleoratus

pulmonarius

Phoenix

oyster

19,23 2,70 0,53 0,62 0,11 51,60

Sumber : Stamets (2005) dalan Rai dan Arumugunathan (2008)

Nutritional properties of culinary mushroom

Mushroom Sugar

(g/

Calori

es

Calcium

(mg/

Iron

(mg/

Potassi

um

Copper

(mg/100

Sodium

(mg/100

Seleniu

m (mg/

82

100g) 100g) 100g) (mg/

100g)

g) g) 100 g)

A.bisporus

portobello 22,70 355 23 2,1 4500 4,33 52 0,415

A.bisporus

Crimnii 21,90 340 9 4,8 4800 20,80 3 0,066

Lentinus

Edoles

Shittake

15,80 356 23 5,5 2700 1,23 18 0,076

Pleorotus

ostreatus

Pearl

oyster

22,30 360 20 9,1 2700 1,69 48 0,035

P.pulmon

arius

Phoenix

oyster

11,80 355 9 6,5 2600 1,03 16 0,09

Sumber : Stamets (2005) dalan Rai dan Arumugunathan (2008)

Lampiran 11. Pembuatan Larutan Stok dan Pengenceran untuk Waktu

Inkubasi ± 1, 5 jam

= 20 mg = 0.02 g

= ekstrak 0.02 g dilarutkan hingga 10 mL

*Konsentrasi 1000 µg/mL (1000 µg/mL = 1 ppm)

V1 x M1 = V2 x M2

5 mL x 1 = V2 x 2

V2 = 2,5 mL

2,5 mL dari larutan stok 2000 µg/mL ditambah aquades hingga volume 5 mL

*Konsentrasi 500 µg/mL

V1 x M1 = V2 x M2

5 mL x 0.5 = V2 x 2

V2 = 1,25 mL

1,25 mL dari larutan stok 2000 µg/mL ditambah aquades hingga volume 5 mL

83

*Konsentrasi 250 µg/mL

V1 x M1 = V2 x M2

5 mL x 0.25 = V2 x 2

V2 = 0,625 mL

0,525 mL dari larutan stok 2000 µg/mL ditambah aquades hingga volume 5 mL

Lampiran 11. Pembuatan Larutan Stok dan Pengenceran untuk Waktu

Inkubasi ± 1, 5 jam

= 20 mg = 0.002 g

= ekstrak 0.002 g dilarutkan hingga 20 mL

*Konsentrasi 50 µg/mL

V1 x M1 = V2 x M2

5 mL x 0.05 = V2 x 0,1

V2 = 2,5 mL

2,5 mL dari larutan stok 100 µg/mL ditambah aquades hingga volume 5 mL

84

Lampiran 12. Pembuatan Larutan Stok dan Pengenceran untuk Waktu

Inkubasi ± 24 jam

= 10 mg = 0.001 g

= ekstrak 0.001 g dilarutkan hingga 10 mL

*Konsentrasi 500 µg/mL

V1 x M1 = V2 x M2

5 mL x 0.5 = V2 x 1

V2 = 2,5 mL

2,5 mL dari larutan stok 1000 µg/mL ditambah aquades hingga volume 5 mL

*Konsentrasi 250 µg/mL

V1 x M1 = V2 x M2

5 mL x 0.25 = V2 x 1

V2 = 1,25 mL

1,25 mL dari larutan stok 1000 µg/mL ditambah aquades hingga volume 5 mL

85

*Konsentrasi 200 µg/mL

V1 x M1 = V2 x M2

5 mL x 0.2 = V2 x 1

V2 = 1 mL

1 mL dari larutan stok 1000 µg/mL ditambah aquades hingga volume 5 mL

*Konsentrasi 100 µg/mL

V1 x M1 = V2 x M2

5 mL x 0.1 = V2 x 1

V2 = 0,5 mL

0,5 mL dari larutan stok 1000 µg/mL ditambah aquades hingga volume 5 mL

Lampiran 12. Pembuatan Larutan Stok dan Pengenceran untuk Waktu

Inkubasi ± 24 jam

*Konsentrasi 50 µg/mL

V1 x M1 = V2 x M2

5 mL x 0.05 = V2 x 1

V2 = 0,25 mL

0,25 mL dari larutan stok 1000 µg/mL ditambah aquades hingga volume 5 mL

*Konsentrasi 25 µg/mL

V1 x M1 = V2 x M2

5 mL x 0.025= V2 x 1

V2 = 0,125 mL

1,25 mL dari larutan stok 1000 µg/mL ditambah aquades hingga volume 5 mL

*Konsentrasi 10 µg/mL

V1 x M1 = V2 x M2

86

5 mL x 0.001= V2 x 1

V2 = 0,05 mL

0,05 mL dari larutan stok 1000 µg/mL ditambah aquades hingga volume 5 mL

Lampiran 13. Nilai Inhibisi Sampel dan Kontrol Positif

Waktu Inkubasi ± 1,5 jam

Konsentrasi

Sampel 50 100 250 500 1000 2000

S. Metanol 24.96185065 46.15384615 32.14286 24.10714 29.46429 18.75

S. Etil asetat 0 2.978491071 32.14286 24.10714 29.46429 18.75

G. Metanol 23.01918265 34.49028036 18.34862 22.01835 22.01835 22.01835

G. Etil asetat 0 0 27.67857 17.85714 21.42857 9.821429

P. Metanol 26.13636364 18.18181818 27.67857 25 11.60714 0

P. Etil asetat 0 14.61916462 32.43243 0 15.31532 0

Hidroquinon 1.221319221 3.256851257 0 5.405405 14.41441 0

Waktu Inkubasi ± 24 jam

Konsentrasi (µg/mL)

Sampel 10 25 50 100 200 250 500 1000

Hidroquinon 67.1527 73.1389 79.7390 79.3553 76.5924 75.05756 66.9992 49.0406

SE 79.6067 73.7072 61.1070 80.9177 68.0262 81.64603 78.3685 58.1937

SM 3.50829 2.77400 2.74680 9.46423 23.1982 11.93908 17.8623 12.6189

CE 83.8639 86.1070 88.7843 0 0 0 0 0

87

CM 7.49269 0 0 3.0701 0 0 0 1.0964

GE 64.3895 62.9360 63.4447 60.3924 48.9098 49.63663 44.2587 39.5348

GM 0 0 0 0 0 0 0 0

Lampiran 14. Grafik Linier dan Perhitungan IC50

Sampel : Ekstrak Metanol S.crassifolium

Absorbansi

Rata-rata

Konsentrasi

Sampel

(µg/mL)

%

Inhibisi

0 0 0

1.774 10 3.508

1.7875 25 2.774

1.788 50 2.746

1.6645 100 9.464

1.412 200 23.198

1.619 250 11.939

1.5101 500 17.862

1.6065 1000 12.618

y = 2,20527x + 1,68089

50 – 1,68089 = 2,14908 x

48,31911 / 2,14908 = x

x = 22,484 µg/mL

88

Sampel : Ekstrak Etil asetat S.crassifolium

Absorbansi

Rata-rata

Konsentrasi

Sampel

(µg/mL)

%

Inhibisi

0 0 0

0.14 10 79.607

0.1805 25 73.707

0.267 50 61.107

0.131 100 80.918

0.2195 200 68.026

0.126 250 81.646

0.1485 500 78.369

0.287 1000 58.194

y = 4,19765x + 43,63108

50 – 43,63108 = 4,19765

6,36892 / 4,19765 = x

x = 1,517 µg/mL

Lampiran 14. Grafik Linier dan Perhitungan IC50

Sampel : Ekstrak Metanol G.coronopifolia

Absorbansi

Rata-rata

Konsentrasi

Sampel

(µg/mL)

%

Inhibisi

0 0 0

1.786 10 -152.975

1.816 25 -157.224

1.784 50 -152.691

1.73 100 -145.043

1.2955 200 -83.499

1.453 250 -105.807

1.3995 500 -98.23

1.771 1000 -150.85

y = -4,45232x – 93,99608

50 + 93,99608 = -4,45232x

143,99608 / -4,45232 = x

x = -32,342 µg/mL

89

Sampel : Ekstrak Etil Asetat G.coronopifolia

Absorbansi

Rata-rata

Konsentrasi

Sampel

(µg/mL)

%

Inhibisi

0 0 0

0.245 10 64.39

0.255 25 62.936

0.2515 50 63.445

0.2725 100 60.392

0.3515 200 48.91

0.3465 250 49.637

0.3835 500 44.259

0.416 1000 39.535

y = 0,94357x + 43,44928

50 – 43,44928 = 0,94357x

6,55072 / 0,94357 = x

x = 6,942 µg/mL

Lampiran 14. Grafik Linier dan Perhitungan IC50

Kontrol Positif : Ekstrak Metanol Daun Carica papaya

Absorbansi

Rata-rata

Konsentrasi

Sampel

(µg/mL)

%

Inhibisi

0 0 0

1.786 10 -152.975

1.816 25 -157.224

1.784 50 -152.691

1.73 100 -145.042

1.2955 200 -83.499

1.453 250 -105.807

1.3995 500 -98.23

1.771 1000 -150.85

y = -4,45232x – 93,99597

50 + 93,99597 = -4,45232x

143,9957 / -4,45232 = x

x = -32,342 µg/mL

90

Kontrol Positif : Ekstrak Etil Asetat Daun Carica papaya

Absorbansi

Rata-rata

Konsentrasi

Sampel

(µg/mL)

%

Inhibisi

0 0 0

0.1115 10 83.864

0.096 25 86.107

0.0775 50 88.784

0.71 100 -2.75

1.4085 200 -103.835

1.382 250 -100

1.398 500 -102.315

1.281 1000 -85.384

y = -24,41510x + 107,01672

50 – 107,01672 = -24,41510x

-57,01672 / -24,41510 = x

x = 2,335 µg/mL

Lampiran 14. Grafik Linier dan Perhitungan IC50

Kontrol Positif : Hidroquinon

Absorbansi

Rata-rata

Konsentrasi

Sampel

(µg/mL)

%

Inhibisi

0 0 0

0.214 10 67.153

0.175 25 73.139

0.132 50 79.739

0.1345 100 79.355

0.1525 200 76.592

0.1625 250 75.058

0.215 500 66.999

0.332 1000 49.041

y = 3,27322x + 46,64236

50 – 46,64236 = 3,27322x

3,35764 / 3,27322 = x

x = 1,026 µg/mL